巴戟天药物血清对成骨细胞生物学特性的影响

目的:通过观察巴戟天药物血清对体外培养成骨细胞(OB)增殖及其活性的影响,探讨巴戟天壮骨作用的实质。方法:取新生SD大鼠头盖骨提取成骨细胞,给巴戟天药物血清,测定巴戟天对成骨细胞(OB)增殖、分泌碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OC)及转化生长因子(TGF-β1)的影响。结果:巴戟天醇提物及巴戟天正丁醇部位能显著刺激OB增殖;巴戟天中正丁醇部位低剂量组可促进分化中的OB分泌ALP和OC,并可促进OB表达TGF-β1。结论:巴戟天中正丁醇部位低剂量组能够促进OB分泌碱性磷酸酶、表达TGF-β1mRNA,从而促进骨的生长。     

左归丸含药血清对成骨细胞分泌骨钙素的影响

目的：通过观察左归丸含药血清对成骨细胞分泌骨钙素（OC）的影响，探讨其治疗骨质疏松症的作用机制。方法：体外分离、培养成骨细胞，实验分为2组：成骨细胞（OB）＋正常血清组、OB＋左归丸含药血清组。采用放射免疫法，检测成骨细胞分泌OC的变化。结果：OB＋左归丸含药血清组与OB＋正常血清组相比，OB分泌OC的量显著增多，有统计学意义（P〈0.01）。结论：左归丸含药血清能促进成骨细胞分泌OC是其防治骨质疏松症的机制之一。     

人松质骨成骨细胞的培养

以成年老年人股骨颈部松质骨为材料,采用酶法建立人成骨细胞体外模型,结果示：（１）来源于松质骨的成骨细胞早期以多角形、梭形为主,后期以梭形为主;（２）成骨细胞早期有黑色颗粒分泌,２ 周后出现黑色结节;（３）骨钙素的分泌以第１４ 天左右达到最高,以后则递减。本法有取材方便,可得到大量、纯化的成骨细胞的优点。     

丹参对人成骨细胞骨钙素生成及钙离子浓度的影响

目的:研究丹参对于人成骨细胞骨钙素生成及细胞内钙离子浓度的影响.方法:用48孔培养板培养人成骨细胞(hFOB 1.19),分为5个实验组和1个对照组,细胞培养2 d后,实验组分别加入0.05%,0.1%,0.15%,0.2%,0.25%的丹参注射液,对照组不加丹参,再培养3 d后用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各孔培养液中的BGP(Bone Gla Protein,osteocalcin)含量.将人成骨细胞分种于15个培养瓶中,各组5瓶,实验组分为低浓度组和高浓度组,培养3 d后,实验组中分别加入0.1%,0.15%的丹参注射液,对照组不加丹参,再次培养3 d后,用钙离子荧光探针Fluo-3/AM标记后,采用流式细胞术检测人成骨细胞中钙离子的浓度.结果:用不同浓度丹参干预后人成骨细胞BGP的生成量高于对照组(P<0.01),0.15%的丹参浓度作用最强,同样实验组加入不同浓度丹参注射液后人成骨细胞中的钙离子浓度明显高于对照组(P<0.01),也成剂量依赖性.结论:丹参能促进人成骨细胞生成骨钙素,并使细胞内钙离子浓度升高,说明丹参能促进人成骨细胞成熟并提高其活性,从而证明丹参有促进骨形成的能力.     

健骨颗粒对成骨细胞分化的影响

目的:观察健骨颗粒对成骨细胞分化过程的影响。方法:取第3代SD大鼠颅骨成骨细胞,生理盐水血清组加入生理盐水血清;含药血清组加入最佳浓度的健骨颗粒颗粒含药血清;MTT法检测最佳含药血清浓度;运用采用ELISA法检测成骨细胞OCN的表达,采用比色法测羟脯氨酸(HYP)、碱性磷酸酶(AKP),实时荧光定量PCR-SYBR GREEN法检测核心结合因子(Cbfα1)、I型胶原(Col I)、成骨转录因子(OSX)mRNA的表达。取第4代细胞采用茜素红染色法染色矿化结节。结果:MTT法检测显示含药血清最佳浓度为20%;钙化结节观察显示含药20%组最先出现矿化结节,结节数量增多;含药血清组细胞液内OCN、AKP和HYP含量高于生理盐水血清组(P0.05);Real-time PCR检测结果显示含药血清组Cbfα1、ColⅠ、OSX基因mRNA的相对表达水平明显高于生理盐水血清组(P0.05)。结论:健骨颗粒含药血清能提高体外培养成骨细胞中矿化结节的数量、AKP、HYP、OCN的含量、ColⅠ、Cbfα1、OSX mRNA的表达,促进成骨细胞增殖,加快细胞分化。     

染料木素对大鼠成骨细胞骨钙素表达的影响

目的:探讨染料木素体外对大鼠成骨细胞骨钙素表达的影响.方法:用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,染料木素以不同浓度加入细胞培养体系,作用不同时间后,用放免法测定细胞骨钙素(BGP)的水平.结果:染料木素在1×10-9mol/L 范围内48h和72h,1×10-8mol/L及1×10-7mol/L 72h提高成骨细胞骨钙素的水平.结论:染料木素体外能提高成骨细胞骨钙素的表达.     

补肾中药对成骨细胞作用研究进展

成骨细胞（OB）由间叶质干细胞分化而来,可产生胶原、非胶原性骨基质蛋白（如骨钙素等）和细胞因子（如BMP等）,还可以通过线粒体将钙和敷料运送到钙化部位,促进钙化发生,是参与骨代谢的主要细胞[1]。     

补肾中药对成骨细胞作用研究进展

<正>成骨细胞(OB)由间叶质干细胞分化而来,可产生胶原、非胶原性骨基质蛋白(如骨钙素等)和细胞因子(如BMP等),还可以通过线粒体将钙和敷料运送到钙化部位,促进钙化发生,是参与骨代谢的主要细胞[1]。补肾中药具有促成骨     

芦丁与槲皮素对成骨细胞代谢影响的比较研究

目的:对比研究芦丁(Rutin)与其苷元槲皮素(Quercetin)对成骨细胞形成的影响,以探讨二者防治骨质疏松的作用机理。方法:新生大鼠颅骨分离培养成骨(ROB)细胞,MTT法测定细胞增殖,比色法测定碱性磷酸酶(ALP)活性,茜素红(AR-S)染色法测定矿化结节数,以观察Rutin与Quercetin对ROB细胞骨形成过程中增殖、分化和矿化作用的影响。结果:Quercetin可明显促进ROB细胞的增殖与矿化,故能增强ROB细胞形成活性;Rutin仅能促进ROB细胞增殖,而对矿化作用无影响,却能抑制ROB细胞分化,因而无明显促进骨形成活性。结论:Querce- tin中3-OH形成糖苷(Rutin)后可引起体外培养的成骨细胞活性降低,故含有Rutin的食物或中药防治骨质疏症的机理可能是通过其体内代谢物Quercetin刺激成骨细胞形成而发挥作用的。     

地黄梓醇对原代培养SD乳大鼠成骨细胞成骨活性的影响研究

目的观察不同浓度地黄梓醇对体外培养新生SD大鼠成骨细胞增殖及成骨活性的影响,为地黄防治骨质疏松症提供实验依据。方法体外培养原代新生24 h SD大鼠成骨细胞,细胞传至第5代,分别加入1×10-3,1×10-5,1×10-7,1×10-9mol/L梓醇溶液及生理盐水10μL/孔,继续培养24,48,72 h后,分别检测成骨细胞增殖情况、骨钙素(BGP)及碱性磷酸酶(ALP)活性。结果培养24 h时,1×10-3mol/L梓醇溶液能显著促进成骨细胞增殖(P<0.05);培养48 h时,1×10-3mol/L梓醇溶液促增殖作用最强(P<0.05)。培养48h时,1×10-7mol/L组和1×10-3mol/L组ALP活性显著高于对照组(P均<0.05);培养72 h时,1×10-3mol/L组ALP活性显著增加(P<0.05)。培养48,72 h后,各浓度梓醇溶液组BGP活性均高于对照组(P均<0.05),且1×10-3mol/L组明显高于其他浓度组(P均<0.05)。结论梓醇在1×10-5mol/L和1×10-3mol/L范围对体外培养SD大鼠成骨细胞的增殖、分化及成骨作用相对显著,尤其在1×10-3mol/L浓度下作用最显著,且具有时效及量效关系。     

葛根素对成骨细胞生物学作用的实验研究

目的:观察葛根素对体外培养SD大鼠成骨细胞增殖、分化、矿化的影响。方法:取新生SD大鼠的颅骨,胶原酶法培养成骨细胞。应用MTT法,对硝基苯磷酸盐法(PNPP)及茜素红染色方法观察葛根素对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶活性及矿化结节形成的影响。结果:葛根素具有刺激成骨细胞增殖,提高碱性磷酸酶活性及矿化结节形成数量的作用(P<0.01或P<0.05)。结论:葛根素具有促进成骨细胞的增殖、分化及矿化的作用。     

大豆甙元对大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的 :探讨大豆甙元体外对大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法 :用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞 ,大豆甙元以不同浓度加入细胞培养体系 ,作用不同时间后 ,用动力学法测定细胞内碱性磷酸酶 (ALP)的活性。结果 :大豆甙元在 1× 10 3 mol/L范围内 48h和 72h ,1× 10 5mol/L 96h及 1× 10 7mol/L 72h提高成骨细胞内碱性磷酸酶的活性。结论 :大豆甙元体外能提高成骨细胞内碱性磷酸酶的活性。     

葛根素对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

目的:探讨葛根素体外对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响。方法:用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,葛根素以不同浓度加入细胞培养体系,作用不同时间后,用MTT法检测成骨细胞的增殖情况;用对硝基苯二钠基质动力学法测定细胞内碱性磷酸酶的活性,用改良的Lowry法测蛋白含量。结果:葛根素在1×10-4mol/L~1×10-8mol/L浓度范围内24h,48h促进成骨细胞增殖,在1×10-6mol/L~1×10-8mol/L范围内48h及1×10-8mol/L72h提高成骨细胞内碱性磷酸酶的活性。结论:葛根素体外能促进成骨细胞的增殖与分化。     

淫羊藿苷对人成骨细胞增殖与分化的影响

目的:观察淫羊藿苷对人成骨细胞增殖和分化的影响。方法:将人骨髓基质干细胞定向诱导分化为成骨细胞,取第3,4代细胞,MTT法观察淫羊藿苷对人成骨细胞的增殖作用,碱性磷酸酶(ALP)比活性测定观察淫羊藿苷对人成骨细胞分化的影响,RT-PCR方法检测淫羊藿苷对人成骨细胞 BMP-2 mRNA表达的影响。结果:浓度为20μg·mL^-1的淫羊藿苷能够显著促进人成骨细胞的增殖和分化,且使BMP-2 mRNA的表达升高。结论:淫羊藿苷具有促进人成骨细胞增殖和分化的作用,这一作用可能与其升高人成骨细胞BMP 2 mRNA的表达有关。     

菟丝子总黄酮对成骨细胞骨代谢的影响

目的:探讨菟丝子总黄酮(TFCC)对体外培养大鼠成骨细胞骨代谢的影响。方法:取新生SD大鼠的颅盖骨,采用改良的组织块法培养成骨细胞。应用MTT法、对硝基苯二钠基质动力学法(PNPP),放射免疫法及ELISA法分别测定TFCC0.01,0.1,1,10,100μg.L-1对成骨细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素(BGP)含量及Ⅰ型胶原(COL-I)分泌的影响。结果:TFCC在48 h和72 h能显著促进成骨细胞增殖并提高ALP活性;48 h时TFCC可促进细胞上清液中BGP和COL-I的分泌。结论:TFCC能够明显促进大鼠成骨细胞的增殖与分化,并通过提高COL-I的分泌影响骨代谢。     

黄芪散对高糖作用下成骨细胞相关功能的影响

目的:观察黄芪散含药血清对高糖条件下成骨细胞功能的影响及与糖尿病性骨质疏松发病机制相关基因的影响,探讨黄芪散(HQS)对糖尿病性骨质疏松症的疗效机制。方法:选用健康清洁级5周龄Wistar大鼠10只,随机分为正常组和药物组。制备黄芪散含药血清和空白血清,选用健康清洁级新生大鼠乳鼠4只,体外以酶消化法分离培养新生乳鼠颅骨成骨细胞(Ob),行细胞计数(CCK-8)法测定高糖条件下(25.5 mmol·L~(-1))5%,10%,20%,30%含药血清对细胞增殖的影响,选取增殖活性最佳血清浓度,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测黄芪散对成骨功能相关基因骨桥蛋白(OPN),骨钙素(OC),碱性磷酸酶(ALP)和胰腺-骨骼相关基因骨保护素(OPG),叉头转录因子1(Fox O1)表达的影响。结果:10%和30%血清浓度组细胞增殖较空白组有明显升高(P0.05);20%血清浓度组较空白组有显著升高(P0.01)。与空白组比较,5%浓度条件下,OPN,OPG mRNA表达明显下调(P0.05);10%浓度条件下,OC,ALP,OPN mRNA表达明显上调(P0.05,P0.01);OPG,Fox O1 mRNA较空白组表达显著下调(P0.01)。20%浓度和10%浓度条件差异性一致,OPN,OPG,Fox O1 mRNA影响趋势较10%浓度药物血清组更明显。20%浓度血清条件下,与空白组比较,OC和OPN蛋白表达显著上调(P0.01),OPG蛋白表达显著下调(P0.01)。结论:黄芪散对糖尿病性骨质疏松的疗效机制可能与其促进高糖作用下成骨细胞增殖作用有关,与下调胰腺-骨骼相关基因OPG,Fox O1表达有关。     

女贞子水提液对去卵巢大鼠骨结构和骨代谢的影响研究

目的探讨女贞子水提液对骨质疏松大鼠骨保护作用和骨代谢调节作用。方法用去卵巢方法复制大鼠骨质疏松模型,其中假手术组大鼠仅切除卵巢周围与卵巢体积大小相同的脂肪。实验分为4组:假手术组、模型组、阿伦膦酸钠(0.12 g/kg)组、女贞子水提液(3.5 g/kg)组,每组9只。各组均ig给药,连续12周。实验结束时,用生化法测定血清钙(S-Ca)、血清磷(S-P)、尿钙(U-Ca/Cr)、尿磷(U-P/Cr)及血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(TC)和三酰甘油(TG)的量;用ELISA法测血清I型胶原氨基端前肽(PINP)、I型胶原羧基端肽(CTX-I)、骨钙素(OCN)和尿脱氧吡啶林(DPD)的量;用放免法测定血清碱性磷酸酶(ALP)的活性;分别用骨密度仪、Viva CT和万能试验机评价骨组织结构变化。结果女贞子水提液可以明显抑制去卵巢引起的大鼠体质量上升,升高去卵巢大鼠S-Ca、S-P、HDL-C和PINP量,降低U-Ca/Cr和U-P/Cr水平,降低血清中LDL-C、TC、TG、ALP、OCN和CTX-I水平以及尿中DPD的量(P0.05、0.01)。女贞子水提液可以升高去卵巢大鼠的股骨和椎骨骨密度(BMD),改善股骨的微结构,增加骨强度。结论女贞子水提液能升高去卵巢大鼠的BMD,提高骨强度,其作用机制与调节钙、磷代谢,胶原蛋白和非胶原蛋白代谢有关。