黄芪甲苷对人外周血内皮祖细胞体外血管生成能力的影响

目的观察黄芪甲苷对体外培养的人外周血内皮祖细胞（EPCs）数量及增殖、迁移、黏附功能、血管生成能力的影响。方法密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞,FITC标记荆豆凝集素Ⅰ（FITC-UEA-I）、DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白（DiI-acLDL）荧光双染鉴定,流式细胞仪检测细胞表面标志。单个核细胞培养4d后进行实验分组,分为对照组和黄芪甲苷干预组。干预组加入不同浓度的黄芪甲苷（分别为10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL）培养72h。分别采用四氮唑溴盐比色法、改良的Boyden小室和黏附能力测定来观察EPCs的增殖、迁移和黏附能力;体外血管生成试剂盒来观察EPCs体外血管生成能力。结果与正常对照组比较,黄芪甲苷组EPCs数量增加,EPCs的黏附、迁移、增殖和体外血管形成能力增强,且黄芪甲苷20μg/mL时作用最显著。结论黄芪甲苷可增加体外培养的EPCs数量,改善EPCs增殖、迁移、黏附和体外血管生成能力等生物学功能。     

半夏白术天麻汤对原发性高血压的作用机制研究

目的：分析半夏白术天麻汤对痰浊中阻型原发性高血压患者外周血EPCs数量、NO、VAGF的影响。方法：选取2017年1月至2018年5月海南省人民医院收治的痰浊中阻型原发性高血压患者86例作为研究对象,按照随机数字表法随机分为对照组和观察组,每组43例。2组患者均予以高血压常规治疗及运动、日常生活、运动指导,观察组在此基础上再予以注半夏白术天麻汤治疗。对2组患者治疗前、后血压、外周血EPCs数量、增殖细胞、迁移细胞变化情况、外周血EPCs分泌VEGF、NOF功能变化进行比较。评价2组患者临床疗效并比较总有效率,比较2组患者药物不良反应率。结果：治疗后观察组患者血压控制临床总有效率、EPCs数量、增殖细胞、迁移细胞较、NO、VEGF、MDA、SOD的表达均较对照组高（P<0.05）,而观察组治疗后SBP、DBP及治疗期间药物不良反应率均较对照组患者低（P<0.05）。结论：半夏白术天麻汤治疗痰浊中阻型原发性高血压患者可有效提升患者EPCs数量,提升分泌VEGF、NO的能力,促进患者血管内皮功能,提升血压控制疗效,且不增加药物不良反应,具有较高的临床价值。     

脑血康颗粒对脑出血患者外周血内皮祖细胞的影响研究

目的探讨含脑血康颗粒的培养基对脑出血患者外周血中提取的血管内皮祖细胞(EPCs)的数量及功能的影响。方法采用密度梯度离心法分离出脑出血患者外周血的EPCs,加入含脑血康颗粒的相应培养基中,并根据培养基中脑血康颗粒浓度0,10,50,100 mg/mL分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,分别检测培养基孵育7 d后EPCs的数量及细胞功能。结果与正常组相比,脑出血组的外周血EPCs数目及黏附、迁移、增殖及体外血管形成能力均明显降低(P均0.05);与对照组相比,脑血康各组外周血的EPCs增殖能力及黏附、迁移及体外血管形成能力均明显提高(P均0.05)。结论脑血康颗粒能明显增加脑出血患者外周血EPCs的数量,并且改善其功能,增强EPCs的增殖、分化、黏附和迁移能力,能够更快形成血管样结构。     

急性肺损伤患者骨髓内皮祖细胞生物学功能的变化及其意义

目的观察急性肺损伤患者骨髓内皮祖细胞（EPCs）生物学功能的变化。方法选择急性肺损伤患者和正常对照各20例,采用密度梯度离心法从骨髓获取单个核细胞,接种在细胞培养板内,培养7d后对贴壁细胞进行细胞鉴定和部分生物学功能检测。倒置相差显微镜下观察生长情况,采用噻唑蓝比色试验（MTT法）检测EPCs增殖能力,观察EPCs黏附能力、迁移能力和体外血管生成能力。结果急性肺损伤患者骨髓EPCs黏附细胞数增多（P〈O．05）,EPCs增殖能力、迁移能力、体外血管生成能力均较正常对照组增强（P〈O．05）。结论急性肺损伤患者骨髓EPCs的增殖、黏附、迁移和体外血管生成能力增强。骨髓EPCs参与了急性肺损伤发生、发展,其生物学功能可作为一个生物学标志。     

黄连解毒汤对自发性高血压大鼠血压及其内皮祖细胞NO分泌功能的影响

目的:观察黄连解毒汤(HLJDT)对自发性高血压大鼠(SHR)血压及其内皮祖细胞(EPCs)一氧化氮(NO)分泌功能的影响,并探讨其作用机制。方法:60只雄性12周龄SHR随机分为5组,分别为模型组,卡托普利阳性药组,HLJDT低、中、高剂量组,每组12只,12只同周龄雄性WKY大鼠作为正常组。正常组和模型组予生理盐水ig(20 m L·kg~(-1)),其余各组分别给予卡托普利ig(1.35 mg·kg~(-1)),HLJDT低剂量ig(13.5 mg·kg~(-1)),HLJDT中剂量ig(27 mg·kg~(-1)),HLJDT高剂量ig(54mg·kg~(-1)),均1次/d,连续2周。用药前及预处理结束后当天采用BP-6大鼠无创血压测试仪测定各组大鼠尾动脉收缩压,采用密度梯度离心法分离培养骨髓来源的EPCs,经Dil-ac-LDL和FITC-UEA-I双染色鉴定后,分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测法、迁移小室(Transwell)小室、黏附实验及NO检测分析各组EPCs增殖、迁移、黏附能力及NO分泌功能。结果:与正常组比较,模型组SHR血压明显升高,SHR内皮祖细胞数量,增殖能力,迁移能力,黏附能力及NO分泌功能明显降低(P0.01);与模型组比较,HLJDT可以降低SHR血压,HLJDT低、中、高剂量组SHR内皮祖细胞数量,增殖能力,迁移能力,黏附能力及NO分泌功能均有增加(P0.05,P0.01)。结论:HLJDT能降低SHR血压,并且能增加EPCs的数量,提高EPCs的增殖、迁移、黏附能力及NO分泌功能。     

阿魏酸对高糖受损内皮祖细胞生物学功能和分泌SOD的影响

目的 探讨阿魏酸(FA)对高糖诱导损伤的内皮祖细胞(EPCs)生物学功能和超氧化物歧化酶(SOD)的影响.方法 体外分离和培养人脐带血EPCs,通过观察细胞形态、双荧光染色法及免疫荧光细胞化学染色法等技术对培养的EPCs进行鉴定.将鉴定成功的EPCs用30 mmol/L的葡萄糖预处理120 h后,分别在不同浓度梯度FA(0、1、2、4、8、16 mg/L)条件下干预培养,确定FA促高糖受损EPCs增殖的最佳浓度.另将高糖诱导损伤的EPCs随机分为实验组(最佳浓度FA干预)和模型对照组(PBS干预),同时设置正常EPCs对照组(PBS干预).采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、黏附能力测定试验、Matrigel体外成管试验、划痕实验及ELISA法检测FA对细胞增殖、黏附、成血管、迁移能力及对EPCs分泌SOD的影响.结果 FA促高糖受损EPCs增殖的最佳浓度为8 mg/L;与正常组比较,高糖受损EPCs增殖、迁移、黏附及成管能力显著降低(P＜0.05);当用FA干预后,高糖受损EPCs增殖、黏附、迁移及成血管能力显著增强(P＜0.05).ELISA检测发现,与正常组比较,高糖受损EPCs分泌SOD能力显著下降(P＜0.05),而用FA干预后,能部分逆转EPCs分泌SOD能力,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 FA处理能改善高糖受损EPCs生物学功能,但对高糖受损EPCs分泌SOD作用不明显.     

黄芪注射液对外周血内皮祖细胞数量及功能的影响

目的观察黄芪对外周血内皮祖细胞(EPCs)数量、功能及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的影响。方法采用密度梯度离心法从外周血获得单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板上,培养7d后收集贴壁细胞,加入不同浓度黄芪(分别为10,20,50,100g/L)培养24h,同时,对照组与黄芪50g/L组分别培养6,12,24,48h。激光共聚焦显微镜鉴定EPCs,将其在倒置荧光显微镜下计数。然后分别采用MTT比色法、改良的Boyden小室、黏附能力测定实验和体外血管生成试剂盒来观察EPCs的增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管形成能力,免疫印迹杂交法半定量测定iNOS含量。结果黄芪能增加外周血EPCs数量,促进EPCs的增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管形成能力,并随黄芪浓度和作用时间的增加而增加,黄芪还能增加EPCs中iNOS含量。结论黄芪能增加EPCs的数量,促进EPCs的增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管形成能力,这可能与其增加iNOS含量有关。     

黄芪对内皮祖细胞数量与功能及其iNOS的影响

目的:观察黄芪对外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)数量、功能及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的影响。方法:采用密度梯度离心法从人外周血获得单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板上,培养7d后收集贴壁细胞,加入不同浓度黄芪注射液(10、20、50、100g/L)培养24h,同时对照组与黄芪50g/L组分别培养6、12、24、48h。激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-I和Dil-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs,将其在倒置荧光显微镜下计数。然后分别采用MTT比色法、改良的Boyden小室、黏附能力测定实验和体外血管生成试剂盒来观察EPCs的增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管形成能力,免疫印迹杂交法半定量测定iNOS含量。结果:黄芪增加外周血EPCs数量、增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管形成能力,并且其数量、增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管形成能力随黄芪浓度和作用时间的增加而增加,黄芪还增加EPCs中iNOS含量。结论:黄芪增加EPCs的数量、增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管形成能力,与其增加iNOS含量有关。     

黄芪甲苷改善高糖受损内皮祖细胞生物学功能的实验研究

目的:研究黄芪甲苷(Astragaloside IV,AS-IV)干预高糖受损人内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPCs)增殖的最佳浓度,并探讨AS-IV对高糖受损EPCs生物学功能的影响。方法:取足月新生儿脐带血分离、培养并鉴定EPCs,将鉴定成功的EPCs用30 mmol/L的葡萄糖预处理120 h后,随机分为实验组(HG+AS-IV组)和对照组(HG组),同时设置正常组(NC组)。用CCK8检测不同浓度AS-IV(0、25、50、100、200、400 mg/L)干预EPCs 24 h后的增殖情况,绘制增殖曲线,初步得出AS-IV干预高糖受损人EPCs增殖的最佳浓度。进而通过CCK-8增殖实验、黏附能力测定试验、细胞划痕试验及Matrigel体外成血管实验检测最佳浓度的AS-IV对高糖受损EPCs增殖、黏附、迁移和成管功能的影响。结果:AS-IV促高糖受损EPCs增殖的最佳浓度为100 mg/L;与对照组比较,100 mg/L AS-IV干预后的高糖受损EPCs增殖能力、黏附细胞数、细胞迁移率、体外成管数均明显增加,差异均有统计学意义(P1<0.05);同时检测实验组与正常组差异无统计学意义(P2>0.05)。结论:AS-IV可显著改善体外高糖受损的人EPCs的生物学功能,恢复其原有活力并具有介导血管新生的潜能。     

泰山白花丹参提取物对人脐血内皮祖细胞增殖、黏附及分泌NO的影响

目的:观察单味中药泰山白花丹参提取物(SBE)对人脐血内皮祖细胞(EPCs)增殖、黏附及分泌一氧化氮(NO)的影响。方法:采用密度梯度离心法从脐血获得单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板上,培养7d后收集贴壁细胞,加入不同浓度SBE继续培养24h;分别采用MTT比色法、黏附能力测定实验和硝酸还原酶法测定EPCs的增殖、黏附和分泌NO能力。结果:与对照组比较,SBE组EPCs增殖、黏附能力提高,培养上清中NO浓度增加(P<0.05),其作用在一定范围内随SBE浓度增加而增强。结论:白花丹参显著改善EPCs功能,这可能是其内皮保护的新机制。     

黄芪甲苷对内皮祖细胞氧化损伤的影响

目的 观察黄芪甲苷对氧化低密度脂蛋白（oxidative low-density lipoprotein,Ox-LDL）介导的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs)氧化损伤的影响。     

蠲痛饮对子宫内膜异位症大鼠血管内皮生长因子的影响

目的观察蠲痛饮对子宫内膜异位症（EMS）大鼠血管内皮生长因子（VEGF）的影响,并探讨其治疗EMS的作用机理。方法采用自体子宫内膜移植法建立EMS大鼠模型,将60只大鼠随机分为蠲痛饮高、中、低剂量组及丹那唑组、模型组、空白组6组,药物组分别给予蠲痛饮高、中、低剂量（4．29、1．43、0．48g／100g）和丹那唑（2．15mg／100g）灌胃,模型组及空白组按照1mL/（100g·d）给予生理盐水灌胃,观察药物对EMS大鼠血清VEGF的影响。结果丹那唑组和不同剂量蠲痛饮对大鼠异位组织体积大小的影响,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。蠲痛饮高、中剂量降低EMS大鼠血清VEGF的水平,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论蠲痛饮可通过降低EMS大鼠血清VEGF水平,抑制异位组织的血管生成而抑制异位子宫内膜的发展,从而达到治疗EMS的目的。     

麝香保心丸对内皮祖细胞功能及分泌一氧化氮的影响

目的 察麝香保心丸（Shexiang Baoxin Pill）对人外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能及分泌一氧化氮（NO）的影响。     

大鼠血管内皮祖细胞培养及鉴定

目的探索骨髓来源的血管内皮祖细胞的分离培养方法,为缺血性疾病治疗找到新的移植细胞来源。方法采集SD雄性大鼠骨髓细胞,用梯度密度离心法分离单核个细胞,种植于提前包埋了纤维连接蛋白的培养皿中培养,将血管内皮生长因子（VEGF）、重组纤维细胞生长因子（bFGF）和重组上皮生长因子（EGF）作为诱导剂,将72h后贴壁细胞（A组）和非贴壁细胞（B组）分别培养,观察细胞形态的变化以及数量变化,取A组在第14天,应用免疫组化和免疫荧光技术鉴定内皮祖细胞系列标志。结果A组细胞经过体外诱导后大量扩增,在28d时仍有强大扩增的活力,呈铺路石样,而B组细胞短期内可以大量增殖,呈长索样,之后逐渐变少;在细胞迁移实验中,A组细胞可以相互融合形成血管结构,而B组细胞之间则不能融合,随着时间推移,逐渐凋亡;A组经过CD34免疫荧光、CD133、FLK-1免疫组化鉴定呈阳性,并能特异性吸附FITC-UEA-和内吞DIL-Ac-LDL。结论自体骨髓细胞通过贴壁换液后可以分离培养出内皮祖细胞,取贴壁细胞经过体外诱导后大量扩增,并通过表面标记物鉴定可以确认为内皮祖细胞,而非贴壁细胞不能大量增殖,故将贴壁分离方法来筛选内皮祖细胞,此方法简易,并能满足细胞移植的需要,因而,在移植治疗脑缺血引起的内皮损伤应该有较好的临床应用前景。     

丹参素对氧化低密度脂蛋白损伤内皮祖细胞的影响及机制探讨

目的:观察丹参素对氧化低密度脂蛋白(oxidative low density lipopmtein Ox-LDL)损伤后外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能的影响,并探讨其可能的机制.方法:密度梯度离心法获取外周血单个核细胞,通过流式细胞仪鉴定内皮祖细胞.培养7 d后,收集贴壁细胞并随机分为对照组,氧化低密度脂蛋白组(100 mg·L~(-1))及丹参素干预组(氧化低密度脂蛋白100 mg·L~(-1)加丹参素,浓度分为2,10,50 mg·L~(-1)),干预24 h后分别采用MTT比色法、黏附能力测定实验观察EPC的增殖能力、黏附能力.并取各组细胞上清液行超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量检测.结果:氧化低密度脂蛋白损伤后,外周血EPCs的增殖能力、黏附能力显著受损,细胞上清液SOD含量显著下降,MDA含量显著升高;丹参素干预24 h后,显著改善了外周血EPCs的功能,各组SOD含量显著增加,MDA含量显著减少.结论:丹参素对氧化低密度脂蛋白损伤后内皮祖细胞的功能有显著保护作用,其机制可能与抗氧化损伤有关.     

黄芪糖蛋白对佐剂性关节炎大鼠外周血细胞因子及关节滑膜组织形态学的影响

目的探讨黄芪糖蛋白（HQGP）对大鼠佐剂性关节炎（adjuvant arthritis,AA）的治疗作用。方法将雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、雷公藤甲素组及HQGP低、中、高剂量组。于右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂（CFA）建立大鼠AA模型,1周后给予相应的药物干预;2周后观察致炎侧踝关节肿胀程度以及膝关节滑膜组织形态学的影响,并检测各组大鼠外周血血清细胞因子γ-干扰素（IFN-γ）的水平。结果在治疗两周后,雷公藤甲素组与HQGP中、高剂量组大鼠致炎侧踝关节肿胀以及膝关节滑膜组织增生与模型组相比均有明显改善。HQGP高剂量组大鼠外周血血清IFN-γ水平显著升高。结论HQGP在腹腔注射剂量为3.5mg/kg和7.0mg/kg时,均对AA大鼠的关节炎症有显著改善作用;高剂量HQGP对AA大鼠外周血血清IFN-γ水平有升高作用,这说明在改善AA关节炎症的同时,HQGP还可能提高AA大鼠对抗其他感染的能力。     

补肾柔肝活血法对缺血性中风大鼠脑组织中NO、NOS的影响

目的：探讨补肾柔肝活血法对缺血性中风大鼠脑组织中NO、NOS的影响。方法：采用改良的Longa法建立大鼠左侧大脑中动脉梗阻（MCAO）再灌注模型,造模成功后随机分为6组,假手术组、模型组、西药组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组。给予相应药物治疗14 d后测定大鼠脑组织中一氧化氮（NO）及一氧化氮合酶（TNOS与iNOS）水平。结果：①与假手术组比较：模型组大鼠脑组织中NO,TNOS及iNOS的含量明显高于假手术组（P〈0.05）;②与模型组比较：各治疗组的NO、TNOS、iNOS的水平均有所下降,治疗各组脑组织内NO和iNOS水平均极明显低于模型组,有极明显的差异性（P〈0.01）,但中药低剂量组及中药高剂量组脑组织内TNOS水平与模型组无明显差异（P〉0.05）,中药中剂量组和西药组脑组织内的TNOS水平明显低于模型组,有明显差异性（P〈0.05）;③与西药组比较：中药各治疗组脑组织内的NOS水平与西药组无明显差异性（P〉0.05）,中药中剂量组脑组织内的NO水平均明显低于西药组,有明显的差异性（P〈0.05）,但中药高剂量组和中药低剂量组脑组织内的NO水平与西药组比较,差异无显著性（P〉0.05）。结论：补肾柔肝活血法治疗能明显降低大鼠脑组织中NO、NOS水平。     

全真一气汤多糖对慢性心功能不全大鼠血管紧张素Ⅱ和醛固酮的影响

目的观察全真一气汤多糖对慢性心功能不全模型大鼠心功能、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和醛固酮(ALD)的影响。方法应用尾静脉注射阿霉素的方法建立心衰大鼠模型,随机分为模型组、卡托普利组、全真一气汤多糖低、中、高剂量组,并设立空白对照组。分别给药卡托普利2.25 mg/kg;全真一气汤多糖0.3,0.9,2.7 g/kg,空白对照组和模型组给予等体积的蒸馏水,灌胃,1次/d,共4周。观察全真一气汤多糖对模型大鼠心功能,AngⅡ和ALD的影响。结果模型组的LVEDV值(0.60±0.043)mL最高,多糖低、中、高剂量组与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.01);模型组LVEF值(62.25±3.37)%最低,多糖低、中、高剂量组与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);模型组的AngⅡ,ALD水平[(2410.35±96.73)ng/mL,(326.38±12.92)ng/mL]最高,与多糖各剂量组比较差别均有统计学意义(P<0.01)。结论全真一气汤多糖可以改善心衰模型大鼠心功能,降低心衰模型大鼠血清的AngⅡ、ALD水平。     

升陷汤加味方对兔病态窦房结综合征模型心率及窦房结电生理、组织病理的影响※

目的 观察升陷汤加味方对兔病态窦房结综合征模型心率(HR)及窦房结电生理、组织病理的影响,并探讨其作用机制.方法 将30只清洁级健康日本大耳白兔采用随机、平行对照的方法,按随机数字表分为空白对照组、模型组、心宝丸组及中药高、中、低剂量组,每组各6只.空白对照组、模型组分别予蒸馏水15 mL/d,心宝丸组予心宝丸悬浮液0...