肺泡Ⅱ型TGFβ_1和PDGF基因表达及其在肺纤维化中的意义

目的 :研究转化生长因子 β1(TGFβ1)和血小板源性生长因子 (PDGF)在肺泡Ⅱ型细胞中的表达及其在肺纤维化过程中的意义。方法 :分离培养正常成年大鼠肺泡Ⅱ型细胞 ,建立大鼠矽肺模型 ,用原位杂交和免疫组化技术检测体外培养的和矽肺病变中的肺泡Ⅱ型细胞TGFβ1和PDGF BmRNA和蛋白的表达。结果 :(1)体外培养的肺泡Ⅱ型细胞免疫组化染色TGFβ1强阳性 ,PDGF B弱阳性 ;原位杂交TGFβ1和PDGF BmRNA均为阳性。 (2 )大鼠矽肺实验组增生的肺泡Ⅱ型细胞明显表达TGFβ1和PDGF BmRNA和蛋白 ;对照组仅有部分正常肺泡Ⅱ型细胞TGFβ1mRNA呈弱阳性。结论 :增生的肺泡Ⅱ型细胞有TGFβ1和PDGF B基因表达 ,其在矽肺纤维化病变中可能起重要作用。     

生长因子对成年大鼠肺泡型细胞增生的影响

目的　探讨 EGF、TGFα、TGFβ1、PDGF、b FGF对肺泡 型细胞增生的影响。　方法　在原代培养的成年大鼠肺泡 型细胞中 ,加入不同种类、不同剂量的生长因子 ,作用 48h,测定 3H- Td R掺入、细胞数量和 Ki- 6 7标记指数。　结果　 EGF、TGFα均促进肺泡 型细胞 3H - Td R掺入量、细胞数量及 Ki- 6 7阳性标记率增加 ,TGFα比EGF的作用更强 ;TGFβ1的作用与 EGF、TGFα相反。 EGF、TGFα和 TGFβ1对肺泡 型细胞增生的影响均呈明显量效关系。 PDGF和 b FGF对肺泡 型细胞增生的影响未显示出明确的量效规律。同时或先后加入 TGFα和TGFβ1,肺泡 型细胞的增生反应不同。　结论　 EGF、TGFα和 TGFβ1对培养的成年大鼠肺泡 型细胞增生有明显的调控作用 ;TGFα和 TGFβ1共同作用于细胞时 ,其生物效应与加入不同因子的时序有关。     

胰岛素对高血压大鼠血管平滑肌细胞血小板源生长因子A链和转化生长因子β1表达的影响

探讨胰岛素对体外培养的血管平滑肌细胞（VSMC）增生及其长型血小板源生长因子A（PDGF－A）链和转化生长因子β1（TGFβ1）mRNA表达的影响。结果发现：（1）胰岛素促进自发型高血压大鼠的血管平滑肌细胞（SHR－VSMC）增生,且呈浓度依赖性;而对正常血压的Wistar-kyota大鼠的血管平滑肌细胞（WKY－VSMC）增生无影响。（2）定量RT－PCR分析显示,胰岛素加强WKY－VSMC的TGFβ1mRNA的表达（P＜0．01）。但是减少SHR－VSMC的TGFβ1mRNA的表达（P＜0．001）。（3）胰岛素对二株系VSMC的长型PDGF－A上对表达水平无影响。结果表明,胰岛素选择性地加强SHR－VSMC的增殖,而对WKY－VSMC的增殖无影响。这可能和胰岛素能上调WKY－VSMC自分泌TGFβ1有关;而在SHR－VSMC,此反馈抑制失常,结果SHR－VSMC加速生长。     

IL-4下调COPD肺泡Ⅱ型上皮细胞中COX-2和PDGF的表达

目的：探讨COPD大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（ATⅡ）中环氧合酶-2（COX-2）及血小板源性生长因子（PDGF）的表达及IL-4对其表达的影响。方法：用雄性Wistar大鼠建立吸烟大鼠COPD模型后取整肺做原代培养，培养出肺泡Ⅱ型上皮细胞。随机分为对照组和模型组，并用IL-4干预模型组的肺泡Ⅱ型上皮细胞。用免疫组化法检测细胞爬片COX-2、PDGF-A及PDGF-B的表达。结果：模型组COX-2和PDGF-A、PDGF-B表达明显增高；IL-4干预组表达显著降低。结论：COPD大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞中COX-2和PDGF的表达显著增高，IL-4可降低其表达。     

肺纤维化大鼠中基质金属蛋白酶-2的表达

目的：研究基质金属蛋白酶－2（MMP2）在肺纤维化中的作用。方法：（1）用免疫组织化学方法（ABC法）观察博莱霉素所诱导的实验性大鼠纤维化肺组织内MMP2表达的动态变化;（2）用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）观察博莱霉素所诱导的肺纤维化不同时期间质成纤维细胞MMP2 mRNA的动态变化。（3）用Northern印迹杂交和免疫细胞化学方法观察转化生长因子β1（TGFβ1）对体外培养的大鼠肺成纤维细胞MMP2mRNA和蛋白表达的影响。结果：（1）诱导纤维化组1－7d,病灶内浸润的单核巨噬细胞及肺泡间质细胞数量增多,MMP2免疫组织化学染色阳性,14d以后,阳性单核巨噬细胞减少,用博莱霉素28d时,阳性间质细胞亦减少。（2）博莱霉素作用后1d,肺成纤维细胞MMP2基因转录即明显增强,为对照组的2．05倍,28d时下降。（3）TGFβ1作用后,大鼠肺成纤维细胞MMP2mRNA及其蛋白表达增强。结论：肺组织内MMP2的过度表达,可能是肺纤维化启动的重要原因。     

转化生长因子α,β1对大鼠肺泡Ⅱ型细胞生长的影响

目的 探讨转化生长因子α和β１对肺泡Ⅱ型细胞增生的影响及其作用机制。方法 采用原代培养的成年大鼠肺泡Ⅱ型细胞,加入ＴＧＦα、ＴＧＦβ１作用４８小时,测定肺泡Ⅱ型细＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入量和细胞数量,并用斑点杂交、原位杂交和免疫组化方法检测细胞内细胞周期蛋白Ｄ１、细胞周期依赖性激酶４ ｍＲＮＡ和蛋白的表达。结果 随ＴＧＦα浓度递增,肺泡Ⅱ型细胞＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入量和细胞数量均逐渐增加,呈量效正相关;ＴＧ     

高糖下调大鼠许旺细胞calpainⅡ的表达

目的：观察高糖对体外培养的大鼠许旺细胞calpainⅡ表达的影响。 方法： 体外培养大鼠许旺细胞，用MTT检测许旺细胞的存活力，用原位杂交和免疫细胞化学方法分别测定许旺细胞calpainⅡmRNA和蛋白的表达。 结果： 高糖（50 mmol/L）培养24 h，许旺细胞存活力明显低于对照组（30 mmol/L）（73.95% vs 100%， P＜0.01）。许旺细胞calpainⅡ mRNA阳性颗粒和calpainⅡ蛋白阳性颗粒也明显少于对照组。 结论： 高糖培养下调许旺细胞calpainⅡ表达。     

转化生长因子β及其信号转导分子Smad4在肾小球硬化中的作用研究

目的：探讨转化生长因子β（TGF-β1）及其信号转导分子Smad4在肾小球肾炎中的表达及其意义。 方法： 以20例正常肾组织为对照组,对38例各种不同组织学类型肾小球肾炎的肾活检标本,分别行免疫组化方法观察TGF-β1、Smad4、胶原Ⅰ（collagen type Ⅰ）在肾小球中的染色强度,并对其检测结果作图像分析处理;以体外培养的人系膜细胞为对象，观察TGFβ1对系膜细胞表达Smad4、胶原Ⅰ的影响，Smad4、胶原Ⅰ的基因表达用RT-PCR检测，蛋白表达用Western blotting检测。 结果： 所有增生、硬化病理类型肾炎中病变肾小球TGFβ1、Smad4、胶原Ⅰ蛋白表达均高于对照组（P<0.05）,且TGFβ1、Smad4两者在肾小球中的表达与胶原Ⅰ在肾小球中的堆积呈多重相关（P<0.05）；外源性TGFβ1刺激人肾系膜细胞后，细胞的Smad4基因表达和蛋白表达增高（P<0.05）；胶原Ⅰ的基因表达和蛋白表达也相应增高（P<0.05）。 结论： TGFβ1及其信号转导分子Smad4可能参与病变肾小球ECM的过量堆积，在肾小球硬化过程中起重要作用。     

胰岛素对高血压大鼠血管平滑肌细胞血小板源生长因子A链和转化生长因子β_1表达的影响

探讨胰岛素对体外培养的血管平滑肌细胞 (VSMC)增生及其长型血小板源生长因子A (PDGF A)链和转化生长因子 β1(TGFβ1)mRNA表达的影响。结果发现 :(1)胰岛素促进自发型高血压大鼠的血管平滑肌细胞(SHR -VSMC)增生 ,且呈浓度依赖性 ;而对正常血压的Wistar kyota大鼠的血管平滑肌细胞 (WKY -VSMC)增生无影响。 (2 )定量RT -PCR分析显示 ,胰岛素加强WKY -VSMC的TGFβ1mRNA的表达 (P <0 0 1) ,但是减少SHR -VSMC的TGFβ1mRNA的表达 (P <0 0 0 1)。 (3)胰岛素对二株系VSMC的长型PDGF A链相对表达水平无影响。结果表明 ,胰岛素选择性地加强SHR -VSMC的增殖 ,而对WKY -VSMC的增殖无影响 ,这可能和胰岛素能上调WKY -VSMC自分泌TGFβ1有关 ;而在SHR -VSMC ,此反馈抑制失常 ,结果SHR -VSMC加速生长。     

转化生长因子β1对香烟诱导的大鼠肺泡巨噬细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合酶表达的影响

目的：探讨转化生长因子（TGF）-β1对香烟诱导的大鼠肺泡巨噬细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合酶（γ-GCS）和活化蛋白(AP)-1亚单位c-fos mRNA及其蛋白表达的影响。方法:通过支气管肺泡灌洗获取大鼠肺泡巨噬细胞，随机分为对照组、香烟组和TGF-β1组。TGF-β1组加入终浓度为3 μg/L的TGF-β1,2 h后除对照组外，余2组均加入香烟烟雾提取物,对照组加入磷酸盐缓冲液。分别用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和免疫细胞化学方法检测肺泡巨噬细胞中γ-GCSh(重链亚单位)及c-fos mRNA和蛋白的表达。结果:香烟组γ-GCSh和c-fos mRNA及其蛋白表达水平显著高于对照组(分别P<0.05,P<0.01)。TGF-β1组γ-GCSh mRNA及其蛋白表达水平明显低于香烟组(均P<0.01)；而c-fos mRNA及其蛋白表达水平明显高于香烟组(均P<0.01)。结论:转化生长因子-β1参与香烟所致慢性阻塞性肺疾病肺氧化/抗氧化失衡的发病机制。