Trolox对X射线照射后MOLT-4细胞凋亡蛋白酶-3依赖性凋亡的弱化作用

目的：用人白血病ＭＯＬＴ－４细胞系检测信号转导通路,研究照射后用Ｔｒｏｌｏｘ（一种抑制脂质过氧化作用的抗氧化剂）处理与Ｘ射线诱导的凋亡之间的关系。方法：用ＲＰＭＩ１６４０（含１０％胎牛血清）常规培养ＭＯＬＴ－４细胞,经７．５Ｇｙ（剂量率为１．８Ｇｙ／ｍｉｎ）Ｘ射线照射后用１０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｏｌｏｘ处理５小时,通过台盼蓝排除实验、琼脂糖凝胶电泳及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分别检测细胞存活率,ＤＮＡ片段化,ｐ５３、ＢＣＬ－２、ＢＡＸ的表达,激活的应激蛋白激酶／ｃ－ＪｕｎＮ－末端激酶（ＳＡＰＫ／ＪＮＫ）、凋…     

X射线照射诱导的rec-myc细胞凋亡是有丝分裂后凋亡而且不能通过照射后的时间或姐妹细胞的行为预测

为了确定辐射诱导的凋亡是发生在有丝分裂前还是后,借助定时定格照相显微镜研究了表达人c-myc癌基因的大鼠胚胎细胞rec-myc细胞系。     

大鼠脊髓照射后细胞凋亡及其与细胞增殖的关系

目的:评价大鼠脊髓照射后少突神经胶质细胞凋亡与细胞增殖的关系。方法:选择9～10周龄Fisher雌性大鼠,用氟烷吸入法麻醉,对2cm脊髓胸2～腰2(C2～T2)段行X射线照射。用2、8和22Gy单次剂量或2、8和22Gy初次剂量照射后1～63天间再次给予8Gy照射。大鼠在单次剂量22Gy照射前30分钟和照射后2小时给予腹腔注射环己酰亚胺(2mg/kg),以延迟细胞凋亡的出现。在不同剂量照射后0、4、8、12或24小时杀鼠,心脏用10%福尔马林灌注10分钟,取C2～T2段中部,石蜡包埋,染色,计算细胞凋亡指数和总凋亡产量(TAY,为照射后24小时内总凋亡细胞的百分数)。细胞增殖…     

血管成形术后平滑肌细胞的迁移与基质金属蛋白酶

平滑肌细胞 (ＶＳＭＣ)的迁移是血管成形术后血管再狭窄形成机制中的重要环节之一 ,细胞外基质(ＥＣＭ )的降解是ＶＳＭＣ迁移的前提条件。血管成形术后的ＶＳＭＣ的迁移 ,涉及到细胞外基质的破坏和再修复 ,即结缔组织修复维持细胞外基质的完整性。此过程中蛋白质的合成及缺失依赖于蛋白激酶及其抑制因子作用的程度。实验提示血管壁上存在两个系统 ,相互作用达到内环境的稳定 ,即纤溶酶原系统和基质金属蛋白酶 (ＭＭＰｓ)系统。在ＶＳＭＣ的迁移中作为主要角色———ＭＭＰｓ受到重点关注。本文将对血管成形术后 ,平滑肌细胞的迁移与ＭＭＰ…     

血管紧张素Ⅱ经线粒体途径介导RIN-m细胞凋亡的实验研究

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和氯沙坦对胰岛β细胞的作用及相关分子机制.方法 常规培养大鼠胰岛素瘤RIN-m细胞,分为3组:空白对照组(RPMI 1640培养基常规培养)、AngⅡ组(终浓度100nmol/L AngⅡ处理)、氯沙坦预处理组(终浓度1μmol/L氯沙坦作用15min后再添加终浓度100nmol/L的AngⅡ).按照前述分组处理完毕后继续孵育48h.采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,RT-PCR和Western blotting检测Bcl-2、Bax的mRNA和蛋白表达,分光光度法检测Caspase 3和Caspase9活性.结果 AngⅡ组细胞凋亡率明显高于空白对照组(P<0.001)和氯沙坦预处理组(P<0.001),后两组间比较无显著差异(P>0.05).与空白对照组及氯沙坦预处理组比较,AngⅡ组Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.001),Bax mRNA和蛋白表达显著增加(P<0.001).氯沙坦预处理组Bcl-2、Bax的mRNA和蛋白表达与空白对照组比较无显著差异(P>0.05).AngⅡ组Caspase 3和Caspase 9的活性显著高于空白对照组(P<0.05)及氯沙坦预处理组(P<0.05),后两组间比较无显著差异(P>0.05).结论 AngⅡ可能通过线粒体途径诱导胰岛β细胞凋亡,氯沙坦预处理可部分逆转AngⅡ的这种效应,从而对β细胞发挥保护作用.     

凋亡素的克隆及诱导HeLa细胞凋亡

目的：克隆凋亡素（apoptin)的全长基因,在肿瘤细胞HeLa中表达并诱导其凋亡,方法：从CAV病毒基因组TK5803中通过PCR技术扩增凋亡素基因,直接克隆至真核表达载体pCDNA3.1/His/Topo,序列测定证实其正确性,并克隆至pCIneo真核表达载体构建重组表达载体,采用脂质体转染HeLa细胞,转染3d后Honchest33258染色并于荧光显微镜下观察细胞状态,结果与讨论：核酸序列分析证实所克隆的凋亡基因与文献报道的一致,将其成功克隆至真核表达载体,pCDNA3.1/his/Topo和pCIneo,构建了真重组质粒pCIneo-apoptin和pCDNA3.1/His/Topo-apoptin,转染Hela细胞3d后可见明显的细胞凋亡,而只转染空质粒的对照组则较少,表明凋亡素能够有效地诱导HeLa细胞凋亡,本研究为进一步研究凋亡素诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制打下了基础。     

β照射对NIH3T3细胞中基质金属蛋白酶和糖基转移酶表达的影响及牛磺酸的干预作用

目的观察β射线对NIH3T3成纤维细胞中基质金属蛋白酶2（MMP2）和N-乙酰氨基半乳糖转移酶2（ppGalNAcT2，E．C2．4．1．41）基因mRNA表达的影响，并探讨牛磺酸对β辐射损伤的防护作用。方法以不同剂量的高能电子射线模拟β射线照射NIH3T3细胞，另外在15Gy照射组中提前12h加入不同浓度的牛磺酸（Tau），照后12h收集各组细胞，采用lit—PCR法检测MMP2、ppGalNAcT2在mRNA水平的表达差异。结果β射线照射NIH3T3细胞后MMP2的mRNA表达量增加，且与照射剂量呈正相关，ppGalNAcT2的变化情况正好相反，加入牛磺酸后可以起干预作用。结论5—15Gyβ射线照射对NIH3T3细胞中ppGalNAcT2在mRNA水平的表达有抑制作用，提示ppGalNAcT2可能与细胞的癌变等过程有关，牛磺酸能抑制MMP2的表达，同时促进ppGalNAcT2的表达，因而具有辐射防护作用。     

机械通气对大鼠照射后肺组织及细胞凋亡的影响

目的 通过建立大鼠机械通气及放射性肺损伤动物模型,研究机械通气对放射性肺损伤大鼠肺组织急性炎症、氧化应激及细胞凋亡的影响.方法 40只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,采用随机数字表法分成4组,每组10只,即健康对照组、照射组、通气组和照射后通气组.观测各组肺组织病理改变;凝胶电泳迁移率实验(EMSA)检测肺组织细胞NF-κB的活性;Western blot检测肺细胞核内NF-κB亚基P65蛋白表达水平;采用DNA断端末端标记(TUNEL)法检测肺细胞的凋亡;同时检测肺湿干重比值(W/D)、髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD);检测肺灌洗液中总蛋白、白细胞计数的水平.结果 与健康对照组相比,其余3组急性肺损伤(ALI)评分、W/D比值、MPO活性、总蛋白、白细胞计数、凋亡指数(AI)、肺组织MDA值、NF-κB的活性及P65蛋白的表达均显著性增高,差异有统计学意义(q=0.000 32~0.004 81,P<0.05);而SOD值显著下降(q=0.000 18~0.002 53,P<0.05).与照射组和通气组比较,照射后通气组上述指标显著增高(q=0.004 3~0.022 6,P<0.05);SOD值显著下降(q=0.002 9~0.008 3,P<0.05).结论 放射性肺损伤后大潮气量机械通气比正常单纯大潮气量机械通气产生了更加明显的机械通气肺损伤,表现为渗透性肺水肿、急性炎症反应、氧化应激反应的激活以及广泛的肺细胞凋亡.     

大鼠大脑照射后海马区细胞凋亡与病理形态学变化的研究

目的　了解大鼠大脑受电离辐射后早期海马区细胞凋亡、bcl 2表达和病理形态学变化的情况。方法　用流式细胞仪测定凋亡细胞的比例与bcl 2蛋白的含量 ,用电镜和光镜分别作形态学变化的观察。结果　受 2 0Gy照射后第 1天起海马中就出现了凋亡细胞并逐步增加 ,至照射后3个月时恢复正常 ,而bcl 2蛋白的含量则呈相反的改变。在 3 0Gy照射后 3个月组中有坏死灶的存在 ,而其他组别中可以看到血管、胶质细胞和神经元等组织的形态学异常。结论　大鼠大脑受辐射后早期海马区可发生神经细胞凋亡、bcl 2表达的下降 ,以及各组织成分的病理形态学改变 ,这些变化的程度与照射剂量和观测时间有关。     

2-甲氧基雌二醇对K562细胞L-选择素及其基因表达的影响

目的 观察2-甲氧基雌二醇(2-ME)对慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞L-选择素表达的影响,并通过分析L-选择素与bcr/abl融合基因表达的关系探讨2-ME的作用机制.方法 实验分3组.①对照组:培养基中不含2-ME;②实验组:分别用1、2、4、8、16μmol/L的2-ME处理K562细胞36h,观察各项指标的变化;③阴性对照组:培养基中以无RNase水代替K562细胞.用流式细胞术(FCM)检测K562细胞L-选择素蛋白表达;半定量RT-PCR检测L-选择素mRNA的表达;SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测bcr/abl融合基因的mRNA表达.结果 不同浓度的2-ME与K562细胞作用36h后,L-选择素蛋白及其mRNA的表达量均呈剂量依赖性增加,与对照组比较均有显著性差异(P＜0.05,P＜0.01);L-选择素mRNA与其蛋白表达之间呈正相关(r=0.758,P=0.004).L-选择素mRNA与bcr/abl融合基因mRNA之间呈负相关(r=-0.968,P=0.001).结论 2-ME可能通过抑制K562细胞bcr/abl融合基因的表达,增加L-选择素mRNA及其蛋白表达水平,改善或恢复K562细胞的黏附缺陷.     

2Gy60Coγ射线照射诱导调节性T细胞的辐射凋亡机制

目的 分析2 Gy ⁶⁰Co γ射线照射对小鼠调节性T细胞存活率的影响,并初步探讨Treg细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax与CD39表达之间的关系。方法 用2 Gy ⁶⁰Co γ射线全身照射小鼠,分离胸腺、脾脏中的淋巴细胞,计数细胞数后利用流式细胞仪对Treg细胞亚群的凋亡率、CD39及凋亡相关因子的表达进行分析。结果 受照后Treg细胞较CD4+FOXP3-T细胞的存活率高,胸腺和脾脏中Treg细胞存活率的时间效应关系不同;受照后Treg细胞凋亡率增加,以照后4 d增幅最为显著(t=-3.6、-7.4, P<0.05);受照后胸腺与脾脏中Bax/Bcl-2的比值变化规律不同,前者中该比值增加,以照后4 d增加最为显著(t=-3.4, P<0.05),而脾脏中该比值于照后4 d减小(t=2.4, P<0.05);受照后4 d胸腺Treg细胞中CD39表达上调(t=-6.6, P<0.05),而脾脏中表达下调(t=2.6, P<0.05)。结论 受照后Treg细胞凋亡率、Bax/Bcl-2比值的变化规律与CD39的表达规律基本一致。     

荧光定量分析miR-376b在UVB照射的人角质细胞中的差异表达

microRNA(miRNA)可通过对目标mRNA的抑制发挥重要的调节作用,参与如调节细胞周期、信号转导、细胞凋亡和细胞增殖分化等多种生物学过程[1-3].该研究检测了紫外线B(ultraviolet B, UVB)照射后人角质细胞HaCaT中miR-376b的表达情况,旨在对miR-376b是否参与UVB诱导的人角质细胞的损伤机制进行初步探讨.     

脂联素对血管紧张素Ⅱ介导的心肌细胞凋亡的干预作用

目的 探讨脂联素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的干预作用及其机制.方法 体外培养乳鼠心肌细胞,采用α-肌动蛋白免疫荧光法进行细胞鉴定.将心肌细胞分为3组:对照组、AngⅡ组、AngⅡ+脂联素组,分别采用流式细胞术检测心肌细胞的凋亡状态及细胞内活性氧(ROS)水平,Western blotting检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2的表达变化.结果 1μmol/L AngⅡ可明显诱导乳鼠心肌细胞凋亡,凋亡率达26.0%,伴有Bax蛋白表达增加、Bcl-2蛋白表达减少以及ROS水平增高(P<0.05);加入30mg/L的脂联素后可明显抑制细胞凋亡的发生,凋亡率降至8.0%左右,同时伴有Bax表达减少,Bcl-2的表达增加以及ROS水平的降低(P<0.05).结论 脂联素可减轻AngⅡ导致的心肌细胞凋亡,这一作用可能是通过增加心肌细胞Bax和ROS的表达,减少Bcl-2的表达来实现的.     

大鼠弥漫性脑损伤后组织金属蛋白酶抑制剂-1的表达与神经元凋亡的关系

组织金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)是基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的特异性抑制剂.已有研究证实,MMP-9和TIMP-1之间的平衡参与细胞外基质的重塑,与骨关节炎、血管形成、肿瘤转移和炎症反应密切相关.笔者用实时荧光定量RT-PCR测定Marmarou弥漫性脑损伤(diffase axonal injury,DAI)模型~([1])中TIMP-1mRNA的表达变化并观察皮层神经元凋亡的变化,探讨在DAI后继发脑损伤中的作用.     

高压氧对缺氧缺血新生大鼠脑组织存活素及细胞凋亡蛋白酶-3表达的影响

目的 观察高压氧(HBO)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxia-ischemia brain damage,HIBD)后脑组织存活素(survivin)及细胞凋亡蛋白酶-3(caspase-3)表达的影响,并探讨其保护机制.方法 144只7 d龄SD大鼠随机分为对照组(n=16)、新生HIBD组(n=64)及HBO治疗组(n=64).采用经典的Rice法制作缺氧缺血性脑损伤模型,应用Epics XL流式细胞仪检测细胞凋亡情况,并应用免疫组织化学法检测Survivin和Caspase-3表达变化.结果 与对照组相比,HIBD组细胞凋亡率及Survivin、Caspase-3表达水平明显升高,组间比较差异有统计学意义(P<0.05).通过相关性分析,HBO治疗可促进存活素表达,其表达水平和caspase-3表达负相关.结论 HBO可能通过增加抗凋亡因子Survivin表达来抑制Caspase-3激活,减少缺氧缺血性脑损伤后细胞凋亡,发挥神经保护作用.     

UV-C照射诱导体外血管平滑肌细胞凋亡模型的建立

应用常规细胞培养超净台紫外消毒灯(220Ｗ,220Ｖ,50Ｈｚ)发射的ＵＶＣ波段的紫外光源(254ｎｍ),垂直照射距离其10ｃｍ处的大鼠主动脉平滑肌细胞(ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌｓ,ＳＭＣｓ),发现经照射后细胞出现典型的凋亡形态学改变,如细胞变圆、染色质浓缩、细胞膜出泡、出现凋亡小体等;细胞面积、核面积及核/胞面积比均显著降低;且提取细胞ＤＮＡ的琼脂糖凝胶电泳呈现梯状图谱。从形态学和生化指标方面证明了ＵＶＣ照射可诱导体外血管ＳＭＣｓ凋亡。此方法可作为进一步研究ＳＭＣｓ凋亡的内在调控机制的一个简便、稳定、可靠的模型。…