一株抗胰腺癌干细胞单克隆抗体的鉴定及功能研究

目的 对一株抗胰腺癌干细胞单克隆抗体（简称：单抗）进行初步鉴定和体外功能研究,为靶向胰腺癌干细胞治疗胰腺癌提供候选单抗药物.方法 应用无血清悬浮培养及PKH26染色确定胰腺癌细胞系PANC-1中肿瘤干细胞的存在.流式细胞术检测PANC-1细胞中有干细胞标志物CD44＋CD24＋的细胞比例.双色细胞免疫荧光检测CD24和单抗15D2识别的抗原蛋白在PANC-1细胞中的表达情况.无血清悬浮培养法观察单抗15D2对PANC-1成球细胞自我更新的影响.CCK-8法检测单抗15D2对PANC-1细胞增殖和耐药的影响.免疫组织化学检测单抗15D2识别的靶抗原在人胰腺癌、癌旁组织中的表达情况.结果 PANC-1细胞能在无血清培养液中存活、增殖并形成细胞球,成球率为（2.5±0.5）％.PANC-1球体细胞中CD44＋ CD24＋细胞的比例较亲本细胞提高了11.4倍,其中CD44＋ CD24＋细胞占CD24＋细胞的97％,在此体系中用CD24作为PANC-1细胞干细胞标志物.细胞免疫荧光结果显示单抗15D2识别的抗原分子在细胞膜上表达,并能与CD24在PANC-1细胞共定位.抗体体外功能研究发现,单抗15D2能显著抑制PANC-1细胞在无血清培养液中成球,抑制率达到22％.同时,单抗15D2联合吉西他滨能显著抑制PANC-1球体细胞的增殖,联合组和对照组IC50分别为0.10、0.39 μmol/L.免疫组织化学检测结果显示,单抗15D2所识别的抗原蛋白在76.9％（11/13）的人胰腺癌组织中表达阳性,而在癌旁组织中表达阳性率仅为10.0％（1/10）,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 抗胰腺癌干细胞单抗15D2体外能够显著抑制胰腺癌干细胞的自我更新和耐药能力,为胰腺癌干细胞的靶向治疗提供有应用价值的候选抗体药物.     

杂交瘤单抗4F11识别CD90+肝癌干细胞并抑制其侵袭【院士点评：靶向CD90+肿瘤干细胞可能治疗肝癌转移】

目的:筛选识别肝癌干细胞的单克隆抗体并研究其体外的抗肿瘤作用,为肝癌干细胞靶向治疗提供候选抗体药物。方法:无血清悬浮培养及PKH26染色分析人肝癌细胞株MHCC97H中是否存在肝癌干细胞。流式细胞术检测MH-CC97H细胞及其成球细胞中7种肿瘤干细胞标志物的表达,以及MHCC97H细胞中肝癌干细胞标志物CD90和不同杂交瘤单抗3G7、4F11、11C9、15B7、15D2识别抗原的共表达情况。无血清悬浮培养法和CCK8法检测单抗4F11对MHCC97H细胞及其成球细胞自我更新和增殖的影响,Transwell实验检测单抗4F11对MHCC97H细胞体外侵袭和迁移的影响。结果:PKH26染色实验显示,MHCC97H细胞球体由单个肝癌干细胞增殖分化形成。MHCC97H细胞球中CD90+MHCC97H细胞比例较亲本MHCC97H细胞显著增加[(18.0±7.5)%vs(2.3±1.0)%,P<0.05]。杂交瘤单抗4F11、3G7、11C9、15B7、15D2均能识别MHCC97H细胞中CD90+MHCC97H细胞,其中单抗4F11对CD90+MHCC97H细胞的识别比例为(47.2±4.4)%,其对MHCC97H成球细胞增殖的抑制率远大于对亲本MHCC97H细胞增殖的抑制率[(29.4±3.8)%vs(12.0±2.2)%,P<0.05]。单抗4F11抑制MHCC97H细胞成球,抑制率达(58.0±20.8)%。单抗4F11能显著抑制MHCC97H细胞体外侵袭和迁移,抑制率分别为(48.6±5.1)%和(47.6±3.6)%。结论:杂交瘤单抗4F11能特异性识别CD90+肝癌干细胞,抑制肝癌细胞的侵袭和迁移,可作为肝癌干细胞靶向治疗的候选抗体药物。     

一株胃癌干细胞功能性单克隆抗体的鉴定及功能研究

[目的]从抗人胃癌干细胞单克隆抗体杂交瘤库中筛选鉴定识别胃癌干细胞的单克隆抗体,并证明其具有抑制胃癌干细胞自我更新能力和侵袭功能的功能性单抗,为靶向人胃癌干细胞治疗胃癌提供有治疗潜能的单抗候选药物。[方法]采用无血清培养、PKH26染色及流式细胞术等方法确定人胃癌细胞系SNU-5中存在肿瘤干细胞,可作为研究抗人胃癌干细胞单抗的细胞模型。应用双色免疫荧光、流式细胞分选等技术分析鉴定单克隆抗体25G5是识别胃癌干细胞的单克隆抗体。用肿瘤干细胞的成球生长实验、Transwell侵袭实验及耐药性实验研究分析25G5单抗对胃癌干细胞功能的影响。[结果]SNU-5细胞在无血清培养基中存活并增殖成球形生长,SNU-5球体细胞中表达胃癌干细胞标志物CD44~+和CD90~+的细胞比例分别为72.4%和8.55%,较亲本细胞分别提高了21.3倍和2.4倍,表明SNU-5中存在有CD44~+、CD90~+的胃癌干细胞。细胞免疫荧光结果显示25G5单抗识别的抗原分子与CD44、CD90胃癌干细胞标志物共染表达于胃癌干细胞膜上。流式细胞术分选的25G5~+细胞的成球率为(21.4±0.3)%,显著高于25G5-细胞(12.3±0.7)%和亲本细胞(16.1±1.0)%。Transwell侵袭实验、细胞耐药性实验和动物体内致瘤实验结果显示25G5~+细胞的侵袭能力和耐药能力也显著高于25G5-细胞和亲本细胞,表明25G5单抗识别的细胞是具有自我更新、高侵袭、高耐药性特征的肿瘤干细胞。体外功能研究发现,单抗25G5能显著抑制SNU-5胃癌细胞在无血清培养液中的成球生长,抑制率可达46.4%,也能显著地抑制SNU-5成球细胞(Sphere细胞)的侵袭,抑制率达58.4%。单抗25G5是一株能显著抑制SNU-5中肿瘤干细胞自我更新和侵袭能力的功能性抗人胃癌干细胞单抗。[结论]单克隆抗体25G5是一株抗胃癌干细胞的功能性单抗,为胃癌干细胞靶向治疗的候选抗体药物。     

靶向胃癌干细胞单克隆抗体2C12的鉴定及功能研究

目的:研究胃癌干细胞的功能性单克隆抗体2C12体外功能实验,为胃癌干细胞的靶向治疗提供候选单抗药物。方法:以胃癌细胞系SNU-5为细胞模型,流式细胞术检测其亲本细胞和通过无血清悬浮培养的球体细胞中2C12+细胞的表达水平,双色细胞免疫荧光检测单抗2C12和CD90识别的抗原在SNU-5细胞中的表达情况。流式细胞术分选SNU-5细胞中2C12+和2C12-细胞,采用无血清悬浮培养成球实验和Transwell小室法分别检测其自我更新能力和侵袭能力。用单抗2C12处理SNU-5的球体细胞后,检测其对SNU-5的球体细胞自我更新能力和侵袭能力的影响。结果:2C12+细胞在SNU-5的球体细胞中的表达水平明显高于亲本细胞。免疫荧光结果显示单抗2C12识别的抗原分子能与CD90在SNU-5细胞上共定位。流式细胞术分选结果表明SNU-5细胞中2C12+细胞成球数明显高于2C12-细胞（103.3±9.07 vs 50.67±5.86）（P<0.01）,侵袭能力也明显较高（209.3±12.9 vs 99.0±3.61）（P<0.01）。对2C12单抗的体外功能研究发现,不同浓度的单抗2C12（0 μg/mL、20 μg/mL、40 μg/mL）能显著抑制SNU-5的球体细胞的成球能力（122.0±5.66、83.0±5.66、59.0±4.24）,抑制率达到31.97%和51.64%,同时侵袭能力也显著降低（178.0±8.49、106.5±5.0、78.0±2.83）,抑制率达到40.17%和56.18%。结论:单抗2C12是一株抗胃癌干细胞的功能性单抗,能够显著抑制胃癌干细胞的干性相关特征,为胃癌干细胞靶向治疗的候选抗体药物。     

抗肝癌干细胞功能性单克隆抗体的研制

摘 要? 目的：研制抗肝癌干细胞的功能性单克隆抗体,为肝癌干细胞的靶向治疗提供候选抗体药物。方法：从人肝癌组织中分离人肝癌干细胞样细胞（human liver cancer stem-like cells, hLCSLCs）,免疫BALB/c裸鼠,采用脾细胞融合法制备大容量单抗库。应用细胞免疫荧光、无血清成球培养、裸鼠皮下成瘤等方法筛选、鉴定特异识别肝癌干细胞的单克隆抗体。流式细胞仪分选hLCSLCs侧群细胞（hLCSLCs side population cells, hLCSLCs-SP）,无血清悬浮培养法和CCK-8法检测杂交瘤单抗对hLCSLC-SP自我更新和增殖能力的影响。结果：细胞融合后获得2 964株杂交瘤克隆,在能与hLCSLCs反应的237株克隆中,有116株单抗能与hLCSLCs的细胞膜结合,其中的33株杂交瘤单抗只与hLCSLC-SP反应（阳性率为2%~5%）、不与非hLCSLC-SP反应。该33株单抗中有6株能与CD133阳性细胞有不同比例的共染,并且与无血清悬浮培养的成球细胞呈阳性反应(阳性率为3%~26%),明显高于hLCSLCs-SP。裸鼠皮下接种1×104个15D2单抗阳性的hLCSLCs,成瘤率为100%。功能性筛选实验发现,6株单抗中的4株能显著抑制hLCSLC-SP的增殖和成球生长,其抑制率分别为24%~42%和13%~50%。结论：采用自建的大容量单克隆抗体库技术,筛选获得了4株特异性识别hLCSLC-SP的功能性单抗,为肝癌干细胞的抗体靶向治疗奠定了基础。     

肿瘤干细胞多靶点联合治疗效果分析

[目的]探讨有效的肿瘤生物治疗新思路,用肝癌细胞系Bel7402-V3为细胞模型检测联合单克隆抗体9A9和15D2对其干性功能（自我更新、侵袭和耐药）的影响。[方法]采用活细胞流式免疫荧光术检测单独抗体、联合抗体与肿瘤干细胞标志物ESA在Bel7402-V3亲本及sphere细胞中的表达;甲基纤维素成球实验和Transwell小室侵袭实验分别检测抗体对Bel7402-V3亲本细胞成球能力和侵袭能力的影响;CCK8法及IC50法检测联合抗体对Bel7402-V3亲本细胞耐药能力的影响。[结果]流式荧光结果显示：标志物ESA、单抗15D2、单抗9A9所识别的细胞比例在Bel7402-V3 sphere细胞中比在亲本细胞中分别富集了2.6倍、4.1倍、2.0倍;在Bel7402-V3亲本和sphere细胞中,联合单抗与标志物共染比例（9A9＋15D2与ESA）大于单抗分别与标志物共染比例之和[（9A9＋ESA）＋（15D2＋ESA）];单抗9A9与15D2联合时对Bel7402-V3亲本细胞的成球抑制率和侵袭抑制率均明显高于等浓度的单种单抗对Bel7402-V3亲本细胞的功能抑制;经联合单抗处理的Bel7402-V3亲本细胞耐药能力较经等浓度单种单抗处理的细胞耐药能力显著降低[9A9＋15D2：IC50为0.32μg/ml,9A9：IC50为0.58μg/ml,15D2：IC50为0.56μg/ml。[结论]肿瘤干细胞中存在不同亚群,其在不同的信号通路或基因水平上发挥了不同的作用。联合多靶点的抗体治疗能显著提高疗效。     

肝癌干细胞抗体靶向治疗的实验

目的研究抗人肝癌干细胞鼠单抗15B7的生物学特征、体内外功能,探讨靶向肝癌干细胞是否能够有效抑制肝癌移植瘤复发、自发性肺转移以及延长荷瘤小鼠的生存期。方法采用双色免疫荧光、双色流式细胞技术、皮下成瘤实验,检测、鉴定15B7单克隆抗体能够识别肝癌干细胞(hepatocellular carcinomacancer stem cells, HCC-CSC)。从人肝癌细胞系BEL7402中以流式细胞仪分选具有CD133+或ESA+表型的细胞。在此基础上采用CCK-8细胞增殖实验、侵袭实验、迁移实验等检测分析15B7单抗对CD133+表型的细胞增殖、侵袭、迁移的作用以及对细胞周期的影响。裸鼠体内治疗实验研究15B7单抗对BEL7402移植瘤生长的抑制作用。以Western blot方法鉴定该功能性单抗的抗原。结果双色免疫荧光和双色流式检测显示15B7单抗能与HCC-CSC的标志物ESA、CD133共染;流式分选15B7+或ESA+或CD133+的细胞在体外无血清培养条件下有良好的成球生长能力;流式分选的15B7+细胞裸鼠皮下接种1×104个/只,2月可形成肿瘤,以上实验证明15B7单抗是抗肝癌干细胞的单抗。体外功能实验结果显示15B7单抗能够抑制CD133+细胞的增殖、迁移、侵袭,抑制率分别达13.8%、157%和30.9%,同时还能诱导CD133+细胞发生G1期阻滞。体内治疗实验研究结果表明15B7单抗能明显抑制裸鼠肝癌移植瘤生长,抑制率可达60.5%。Western blot显示15B7单抗识别HCC-CSC表达的抗原蛋白相对分子质量约50 kD。结论15B7单抗能明显抑制裸鼠体内人肝移植瘤的生长,为肝癌干细胞的靶向治疗提供有重要应用价值的候选抗体药物。     

抗胃癌干细胞单克隆抗体的筛选鉴定及功能研究

目的:筛选鉴定靶向胃癌干细胞的功能性单克隆抗体,为胃癌干细胞靶向治疗提供抗体候选药物。方法:以胃癌细胞系BGC-823为模型,采用流式细胞术分选CD44+细胞后检测其自我更新和致瘤能力。双色细胞免疫荧光检测单抗11H5和CD44在BGC-823细胞中的表达情况。流式细胞术分选11H5+细胞后检测其自我更新能力、细胞增殖和耐药能力。结果:流式细胞术分选CD44+细胞成球率明显高于CD44-细胞［（27.2±1.6）% vs （12.9±1.2）%］（P<0.01）,CD44+细胞的致瘤性比CD44-细胞至少高100倍。细胞免疫荧光结果显示单抗11H5识别的抗原能与CD44在BGC-823细胞上共定位。流式细胞术分选11H5+细胞体外成球率明显高于11H5-细胞［（21.4±2.0）% vs （6.2±1.0）%］（P<0.01）,耐药性也明显高于11H5-细胞(IC50值:0.986 μmol/L vs 0.315 μmol/L)。抗体体外功能研究发现,单抗11H5能显著抑制BGC-823细胞成球,抑制率达到47.9%。单抗11H5能抑制其sphere细胞的增殖,抑制率为44.9%（P<0.05）。经单抗11H5作用的耐药能力显著降低(IC50值:0.52 μg/ml vs 0.64 μg/ml)。结论:单克隆抗体11H5是一株抗胃癌干细胞的功能性单抗,为胃癌干细胞靶向治疗的候选抗体药物。     

采用肝癌球体细胞筛选鉴定识别肝癌干细胞的单抗

目的 采用肝癌球体细胞筛选鉴定识别肝癌干细胞的单抗,为靶向肿瘤干细胞治疗肝癌提供候选治疗单抗。方法 采用无血清悬浮培养的方法富集培养肝癌干细胞。通过细胞免疫荧光、顺铂耐药实验、Real-time PCR、裸鼠皮下成瘤实验等方法筛选、鉴定抗肝癌干细胞单抗。采用免疫组织化学的方法鉴定单抗识别的抗原在肝癌组织中的表达情况。质谱鉴定抗原。结果 MHCC97L细胞能在无血清悬浮培养条件下形成细胞球,并能被PKH26染料标记。流式细胞检测发现MHCC97L球体细胞中CD90表达比例较亲本细胞提高了3.4倍。无血清成球抑制实验获得6株显著抑制MHCC97L细胞在无血清成球的单抗,抑制率分别为54.67%,50.33%,45.73%,42.26%,39.11%,37.63%。细胞免疫荧光结果显示单抗28C10和CD90在MHCC97L细胞中能共定位。Real-Time PCR检测结果显示MHCC97L 28C10⁺细胞Sox-2和Oct-4表达显著高于MHCC97L 28C10^-细胞。流式细胞检测,在MHCC97L及其sphere细胞中28C10⁺细胞比例分别为7.98%和10.7%,28C10⁺细胞比例提高了1.34倍。流式细胞术分选获得的28C10⁺细胞的体外成球能力、侵袭能力显著高于28C10^-细胞。CCK-8法检测结果显示28C10⁺细胞较28C10^-细胞显示出对化疗药物顺铂的耐药,IC₅₀分别为1.96 μg/mL和1.16 μg/mL。裸鼠致瘤实验结果显示,28C10⁺细胞裸鼠皮下接种2×10⁴ cells/只,2个月可形成肿瘤,成瘤率为40%。另外1只未形成肿瘤的裸鼠形成了肺部转移灶(1/5)。免疫组化检测显示单抗28C10的靶抗原阳性率为72.0%(77/107),而在癌旁组织中低表达,差异有统计学意义。质谱结果显示28C10识别的抗原为HSP90α。结论 采用MHCC97L球体细胞模型成功鉴定一株特异识别肝癌干细胞的单抗,为靶向肝癌干细胞的抗体治疗奠定基础。     

人恶性胶质瘤干细胞的分离与鉴定

目的:从人恶性胶质瘤中分离并鉴定胶质瘤干细胞。方法:采用神经干细胞无血清培养方法,分离胶质瘤干细胞,免疫细胞化学法、有限梯度稀释实验、二代球体形成分析、流式细胞分析等方法对胶质瘤干细胞进行鉴定。结果:3例患者原代培养胶质瘤细胞中CD133 细胞分别为7.4%、2.8%和4.2%。每100个原代胶质瘤细胞中可形成1个左右的胶质瘤细胞球;胶质瘤细胞球细胞均表达神经干细胞标记CD133和Nestin,不表达分化标志GFAP和MAP2,少数细胞表达分化标记MBP。每100个原代胶质瘤细胞球体细胞可形成6.07±2.15个悬浮生长的二代胶质瘤细胞球,二代细胞球细胞表达CD133和Nestin。胶质瘤细胞球细胞分化后细胞多数表达GFAP,少数表达MAP2和MBP。胶质瘤球体干细胞的增殖较原代胶质瘤细胞慢。胶质瘤球体细胞1×103个时可成瘤,原代培养的胶质瘤细胞需1×107。结论:采用神经干细胞培养条件可以很简便的分离出悬浮生长的胶质瘤球体干细胞。分离出的胶质瘤球体干细胞表达CD133抗原,具备肿瘤干细胞的基本特征。     

Isolation and characterization of cancer stem like cells in human glioblastoma cell lines

To identify and compare the features of stem like cells in human glioblastoma cell lines U251, U87MG, A172 with primary cultured glioblastoma stem cells, the ratio of CD133⁺ cells, the ability of tumor sphere formation, and self-renewing capacity of U251, U87MG, A172 cells in serum free medium plus EGF, bFGF and B27 supplement were detected. The results suggested that there might be more cancer stem like cells in U251 cells compared with others. CD133⁺ cells enriched in SP cells and in U251 cells cultured with the serum free medium. They expressed the neural stem cell markers CD133 and Nestin, but lacked of neuronal and astrocyte marker MAP2, β-III tubulin and GFAP. They could apparently generate both neurons and glial cells after serum retrieved in vitro. Gli1, Bmi1, Notch2 and PTEN were also found expressed highly in them. Moreover, CD133⁺ cells were more resistant to hypoxia, irradiations and some chemotherapeutics than CD133⁻cells. So we suggested that glioblastoma stem like cells were existed in CD133⁺ cells in U251 cell line with characteristics of self-renew and generation of an unlimited progeny of non-tumorigenic cells. Molecular and functional characterization of such a tumorigenic population may be exploited in the development of novel cancer therapeutic drugs.     

肝癌细胞系Huh-7中CD133阳性细胞亚群的分离及其特性的研究

目的：研究CD133在人肝癌细胞系Huh-7中的表达,初步探讨肝癌中CD133阳性细胞亚群的干细胞特性。方法：流式细胞荧光激活分选技术纯化肝癌细胞系Huh-7中CD133肿瘤细胞,体外培养并观察其增殖、体内成瘤及分化能力。结果i流式细胞仪检测肝癌细胞系Huh-7中有62．3％的细胞CD133呈阳性表达,流式细胞荧光激活分选的CD133肿瘤细胞在无血清培养基中第3、5、7d的吸光度（OD值）分别为0．310、0．362、0．564,均高于相同条件下未分选细胞和CD133阴性细胞;CD133阳性细胞亚群成瘤能力明显强于阴性细胞亚群;CD133阳性细胞亚群在培养体系中的比例逐日下降,至培养的第8天,由第1天的92．3％下降至61．4％。结论：肝癌细胞系Huh-7中CD133阳性细胞亚群比其它细胞亚群具有较强增殖、成瘤和分化能力,是具有肝癌干细胞特性的细胞亚群。     

大肠癌细胞HCT-15肿瘤干细胞样细胞分离及成瘤性比较

目的:依据人大肠癌细胞HCT-15的表面标志物,分离其中的干细胞亚群。建立裸鼠体内原代大肠癌荷瘤模型,比较各亚群肿瘤体积和质量。方法:利用免疫磁珠分选技术,分离其中CD133/CD44干细胞亚群。分选得到CD133+CD44+、CD133+CD44-亚群分别接种于裸鼠体内,并观察肿瘤大小和质量。结果:CD133+CD44+和CD133+CD44-细胞亚群成功的从HCT-15细胞中分离出来。接种CD133+CD44+细胞的裸鼠形成的肿瘤体积［（2.76±0.22）cm3］和质量［（5.2±0.21）g］明显高于接种CD133+CD44-细胞裸鼠的肿瘤体积与质量［（1.56±0.34）cm3,（3.4±0.18）g］（P＜0.05）。结论:CD44阳性的大肠癌肿瘤干细胞成瘤能力明显高于CD44阴性的大肠癌肿瘤干细胞。     

HPV‐avertable cancer risks in India: A pooled analysis of 9 observational studies

Recent advances in cancer stem cell biology have shown that cancer stem‐like cells with epithelial–mesenchymal transition (EMT) phenotypes are more aggressive and cause relapse; however, absence of a specific marker to isolate these EMT stem‐like cells hampers research in this direction. Cell surface markers have been identified for isolating cancer stem‐like cells, but none has been identified for isolating cancer stem‐like cells with EMT phenotype. Recently, we discovered that Vimentin, an intracellular EMT tumor cell marker, is present on the surface of colon metastatic tumor nodules in the liver. In our study, we examined the potential of targeting cell surface Vimentin (CSV) to isolate stem‐like cancer cells with EMT phenotype, by using a specific CSV‐binding antibody, 84‐1. Using this antibody, we purified the CSV‐positive, CD133‐negative (csVim⁺CD133⁻) cell population from primary liver tumor cell suspensions and characterized for stem cell properties. The results of sphere assays and staining for the stem cell markers Sox2 and Oct4A demonstrated that csVim⁺CD133⁻ cells have stem‐like properties similar to csVim⁻CD133⁺ population. Our investigation further revealed that the csVim⁺CD133⁻ cells had EMT phenotypes, as evidenced by the presence of Twist and Slug in the nucleus, the absence of EpCAM on the cell surface and basal level of expression of epithelial marker E‐cadherin. The csVimentin‐negative CD133‐positive stem cells do not have any EMT phenotypes. csVim⁺CD133⁻ cells exhibited more aggressively metastatic in livers than csVim⁻CD133⁺ cells. Our findings indicate that csVim⁺CD133⁻ cells are promising targets for treatment and prevention of metastatic hepatocellular carcinoma.     

原代胃癌干细胞CD44表达意义探讨

目的 肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)在恶性肿瘤的发生发展中起着重要作用,且是肿瘤耐药及复发的根源.本研究探讨CSCs表面标记蛋白CD44在分离及鉴定胃癌干细胞中的重要作用.方法 收集2015-11-06-2015-12 01华中科技大学同济医学院附属同济医院3例胃癌患者手术标本.首先采用胶原酶消化法获取胃癌细胞,部分细胞分别贴壁及悬浮培养,并采用免疫荧光及流式分析的方法检测胃癌球形体中CD44的表达情况.部分细胞采用流式细胞仪分选得到CD44+及CD44胃癌细胞,并通过无血清悬浮培养法比较两群细胞的球形体形成能力.结果 免疫荧光显示,CD44蛋白在球形体中高表达;流式分析发现,贴壁的原代胃癌细胞中CD44+细胞的比例为(30.73±7.6)％,而球形体中CD44+细胞的比例高达(56.4±5.58)％,差异有统计学意义,P=0.009.球形体形成实验结果表明,与CD44-细胞相比,CD44+胃癌细胞具有更强的球形体形成能力,1 000个CD44+及CD44-胃癌细胞分别形成(14.33±2.52)和(1.67±0.58)个球形体,差异有统计学意义,P=0.001.通过比较发现,球形体培养对胃癌干细胞的富集效率为0.3％,而CD44对胃癌干细胞的富集效率为1.4％.结论 CD44是胃癌干细胞的表面标记蛋白,其可能成为胃癌靶向治疗的可靠靶标.     

吉西他滨对人胰腺癌裸鼠移植瘤的放疗增敏作用

目的：评价吉西他滨对人胰腺癌移植瘤的放疗增敏作用。方法：建立人胰腺癌裸鼠移植瘤模型,36只裸鼠随机分为6组：对照组（A）、单纯放疗组（B）、吉西他滨25mg/kg组（C）、吉西他滨50mg/kg组（D）、吉西他滨25mg/kg＋放疗组（E）、吉西他滨50mg/kg＋放疗组（F）。对照组予腹腔注射生理盐水,单纯放疗组荷瘤鼠背部肿瘤局部以6MeV电子线照射。C、D组分别以25mg/kg、50mg/kg吉西他滨腹腔注射,E、F组分别以25mg/kg、50mg/kg吉西他滨腹腔注射加背部肿瘤6MeV电子线照射。然后每两天测量肿瘤的长短径、比较各组的瘤体积、肿瘤生长延缓天数、抑瘤率,利用增敏系数（EF）评价吉西他滨的增敏作用。结果：与对照组比较,25mg/kg、50mg/kg单剂量吉西他滨对移植瘤生长有明显抑制作用（P〈0.01）;两组剂量吉西他滨联合放疗组局部肿瘤生长受到明显抑制,抑瘤率分别为88.22%、91.23%,明显高于单纯放疗组（44.11%,P〈0.05）和吉西他滨两个剂量单药组（72.88%、77.53%,P〈0.05）。联合组（E、F组）肿瘤生长延缓天数（瘤体积增长2倍）分别为9、15天,高于单纯放疗组（4天,P〈0.05）和吉西他滨两个剂量单药组（4、4天,P〈0.05）。结论：吉西他滨可显著增强人胰腺癌裸鼠移植瘤放射治疗敏感性。     

CD133肿瘤干细胞标志物在肺癌中的应用进展

CD133作为肿瘤干细胞标志物已被广泛应用于临床,在肺癌干细胞的分选中亦具有重要作用。全文就肿瘤干细胞概念、CD133基因和结构、CD133与肿瘤干细胞的关系、CD133的临床应用以及CD133作为肿瘤干细胞标志物的局限性作一综述。