Iressa对ER表达状态不同的乳腺癌细胞增殖的影响

目的:观察Iressa对雌激素受体表达状态不同的人乳腺癌细胞:ER(+)的MCF-7和ER(-)的MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用.方法:设置Iressa不同浓度组、时间组,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Iressa对细胞生长的影响,并分析量效关系、时效关系.结果:Iressa以0.01-1μmol/L浓度作用24h之后对2种细胞均有抑制增殖的作用,其中MDA-MB-231的抑制率于48h达到高峰;浓度为10 μmol/L时抑制率高峰,MCF-7出现在48h,而MDA-MB-231在72h;且同浓度的Iressa作用相同时间后,对MDA- MB-231的抑制率更高.结论:一定浓度的Iressa作用一定时间后对雌激素受体表达状态不同的人乳腺癌细胞有抑制细胞增殖的作用,且对ER(-)的MDA-MB-231细胞作用更显著.     

γ-干扰素增强他莫昔芬抗乳腺癌作用的体外研究

研究γ-干扰素（γ-IFN）对他莫昔芬（TAM）抗乳腺癌细胞的增强作用。方法：在体外培养条件下，分别或联合应用γ-干扰素、TAM或雌二醇（E2）作用于雌激素受体（estrogen receptor，ER）阳性的MCF-7和ER阴性的MDA-MB-231人乳腺癌细胞株，用MTT比色法分析细胞生长抑制作用，流式细胞仪检测细胞周期分布，DNA凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：TAM能抑制ER阳性和阴性的乳腺癌细胞的生长，阻滞细胞周期于GO／G1期，并可诱导细胞凋亡；相同浓度条件下，TAM对ER阳性乳腺癌细胞的抑制作用强于对ER阴性的乳腺癌细胞。同时，TAM能拈抗外源性雌激素对MCF-7细胞的促生长作用，而对MDA-MB-231细胞的生长抑制作用与雌激素的存在与否无关。γ-干扰素预处理细胞24h后，TAM抗乳腺癌细胞的作用增强。结论：体外条件下，TAM有抗ER阳性和阴性乳腺癌细胞作用，作用机制是通过影响细胞周期，诱导细胞凋亡，γ-干扰素能加强TAM的抗乳腺癌作用。     

西乐葆对不同受体状态乳腺癌细胞株的作用研究

[目的]探讨选择性COX-2抑制剂西乐葆对受体状态不同的MDA-MB-231和MCF-7乳腺癌细胞株的抑制作用.[方法]取对数生长期ER(-)的MDA-MB-231细胞和ER( )的MCF-7细胞,加入不同浓度的COX-2抑制剂西乐葆共同培养,以MTT法检测两种细胞的存活率;用流式细胞仪检测两种细胞的细胞周期变化;用Annexin-V-FITC双标法检测各自的细胞凋亡.[结果]西乐葆对MDA-MB-231和MCF-7细胞均有明显的生长抑制作用,且对前者的作用比后者显著,60μmol/L西乐葆作用72h后,对MDA-MB-231细胞的生长抑制率为81.70%;对MCF-7细胞的生长抑制率为70.8%(P＜0.05).60μmol/L西乐葆作用48h后,MCF-7细胞G0/G1期比例为82.72%±1.25%,MDA-MB-231细胞G0/G1期比例为43.58%±0.58%.60μmol/L西乐葆作用72h后,MCF-7细胞的凋亡率为13.25%,而MDA-MB-231细胞为70.10%(P＜0.01).[结论]选择性COX-2抑制剂西乐葆对ER( )或ER(-)的乳腺癌细胞均具生长抑制作用,但对ER(-)的乳腺癌细胞的抑制更为显著.西乐葆均能明显抑制两种细胞的增殖,可使ER( )的细胞周期停止在G0/G1期;对ER(-)的细胞则以促进凋亡为主.     

曲格列酮对人乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞株增殖影响的研究

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂曲格列酮(TRG)对体外培养雌激素受体(ER)阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞及ER+乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响。方法:以不同浓度的TRG(0～50μmol/mL)分别处理体外培养的MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞48h,MTT法检测细胞存活率;流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布;蛋白质印迹法检测PPARγ和ER-α的表达。结果:MTT结果示TRG浓度≥5μmol/mL时MDA-MB-231细胞(P值分别为0.006、0.006、0.000和0.000)和MCF-7细胞(P值分别为0.007、0.006、0.004和0.001)的存活率降低。FCM检测结果表明,经TRG作用后肿瘤细胞主要集中在G1期。以上2种检测结果显示,MDA-MB-231细胞对TRG的敏感程度较MCF-7细胞高;蛋白质印迹法检测结果表明,TRG处理后的MDA-MB-231细胞中PPARγ蛋白的表达水平随药物浓度增加逐渐升高(相对强度分别为2.045、2.600和3.038),MCF-7细胞的ER-α表达水平则随药物浓度增加逐渐降低(相对强度分别为1.164、1.130和0.680)。结论:TRG对ER+和ER-乳腺癌细胞均有抑制作用,且ER-乳腺癌细胞对TRG更敏感。     

药物诱导MDA-MB-435细胞表达ER α及其对内分泌治疗的敏感性

目的通过药物诱导雌激素受体（ER）阴性的乳腺癌细胞株MDA—MB-435恢复ER的表达,探讨其对内分泌治疗的敏感性。方法采用HDAC抑制剂古曲抑菌素（TSA）联合DNMT抑制剂5-AZA-CdR（AZA）作用于MDA-MB-435细胞;以RT-PCR方法检测细胞ERα及其下游基因产物孕激素受体（PR）、雌激素调节蛋白（pS2）的mRNA水平;以水溶性四氮唑盐-8（WST-8）方法检测诱导前后细胞增殖水平。将药物诱导后的MDA—MB-435细胞接种裸小鼠,观察其在体内增殖能力的改变。结果药物诱导后,MDA-MB-435细胞恢复ERα表达,ERα下游基因产物PR和psz的表达增加。2．5μmol／LAZA和100ng／ml TSA诱导MDA-MB-435细胞后,其ERα表达最强。诱导后的MDA—MB-435细胞在不同浓度的雌激素中表现出不同的增殖能力。与未经诱导的细胞相比,诱导后的MDA—MB-435细胞增殖能力下降（P〈0．01）;经诱导的细胞联合4-羟基三苯氧胺后,其增殖能力进一步下降（P〈0．01）;而单用4-羟基三苯氧胺不能抑制未经诱导的细胞的增殖（P〉0．05）。在裸鼠体内,诱导处理后的MDA—MB-435移植瘤较未经处理的细胞增殖能力下降（P〈0．01）。去除雌激素后,诱导后肿瘤细胞在体内增殖能力进一步受到抑制（P〈0．01）。结论通过TSA和AZA联合诱导作用,MDA-MB-435细胞株中沉默的ER恢复表达ERα。并且该ERα是具有功能的。经过诱导的细胞株在体内及体外对雌激素均恢复反应。联合应用HDAC抑制剂以及DNMTI抑制剂可以恢复乳腺癌细胞MDA—MB-435对内分泌治疗的敏感性,这为ER阴性的乳腺癌患者治疗开辟一条新的思路,具有重要的临床意义。     

三氧化二砷对乳腺癌细胞MDA-MB-231雌激素受体α的去甲基化作用

目的研究三氧化二砷（As2O3）作用于乳腺癌细胞MDA-MB-231后,对雌激素受体α（ERα）表达的影响,并初步探讨其机制。方法用As2O3处理ERα阴性的人乳腺癌细胞MDA-MB-231,甲基化特异性PCR（MSP）检测ERα启动子CpG岛的甲基化状态,反转录PCR（RT-PCR）检测ERα mRNA表达水平的变化。以雌激素受体α阳性的人乳腺癌细胞MCF-7 为阳性对照。结果MDA-MB-231细胞ERα启动子CpG岛存在高甲基化,经过As2O3处理后,CpG岛高甲基化水平降低,ERα mRNA恢复表达。结论 一定浓度的As2O3能够使人乳腺癌细胞MDA-MB-231 ERα启动子中的CpG岛发生去甲基化,重新恢复mRNA的表达。     

Nimesulide对乳腺癌细胞株化疗敏感性的影响及机制研究

目的：探讨选择性环氧化酶2（cy-clooxygenase-2，COX-2）抑制剂nimesulide对乳腺癌细胞株化疗敏感性的影响，同时探讨其可能机制。方法：利用体外培养的乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7，MTT法比较多柔比星（ADM）及联合不同浓度的nimesulide对两种细胞抑制率的影响（IC50）；应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）观察不同浓度nimesulide对两种细胞多药耐药蛋白（MDR1）mRNA的影响。结果：Nimesulide能增加ADM对MDA-MB-231、MCF-7的细胞毒作用，这种作用与nimesulide呈剂量依赖性，对COX-2高表达的MDA-MB-231细胞更加敏感；nimesulide能降低MDR1 mRNA的表达水平，并呈剂量依赖性（10、25、50μmol／L nimesulide）。结论：选择性COX-2抑制剂nimesulide能增加ADM对MDA-MB-231、MCF-7的细胞毒作用，这种作用可能与MDR1水平的下调有关，为选择性COX-2抑制剂联合细胞毒药物用于乳腺癌的化疗提供了实验依据。     

miRNA-34a抑制乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的增殖与侵袭

目的:研究miRNA-34a(miR-34a)对乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的生物调控作用。方法:采用定量PCR检测人乳腺上皮细胞MCF-10A,乳腺癌细胞株MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453、Hs578T中miR-34a的表达水平。通过miR-34a mimics分别上调MCF-7、MDA-MB-231细胞中miR-34a的表达水平,MTT和Transwell检测肿瘤细胞增殖能力、侵袭力等生物学行为的变化。结果:乳腺癌细胞MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453、Hs578T中miR-34a处于低表达水平。通过miR-34a mimics上调MCF-7、MDA-MB-231细胞中miR-34a的表达后,细胞的增殖能力被miR-34a抑制（P＜0.05）,miR-34a对细胞侵袭有显著抑制作用（P＜0.05）。结论:miR－34a在乳腺癌细胞MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453及Hs578T中低表达,miR-34a抑制乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的细胞增殖和侵袭能力。     

转铁蛋白修饰多柔比星脂质体靶向抑制乳腺癌细胞增殖的研究

目的：利用转铁蛋白（TF）修饰多柔比星脂质体,并探讨其对乳腺癌细胞增殖的影响。方法采用薄膜超声法制备脂质体,利用硫酸梯度法制备多柔比星脂质体,然后采用后插入法制备 TF修饰多柔比星脂质体。激光共聚焦显微镜检测乳腺癌细胞 MCF-7和 MDA-MB-231对 TF-多柔比星脂质体的摄取,四甲基偶氮唑盐比色法（MTT 法）检测 TF-多柔比星脂质体靶向作用 MCF-7和 MDA-MB-231细胞后的杀伤能力,软琼脂克隆集落实验检测 TF-多柔比星脂质体对 MCF-7和 MDA-MB-231细胞的生长抑制作用。结果激光共聚焦显微镜观察显示,MCF-7细胞和 MDA-MB-231细胞对 TF-多柔比星脂质体摄取率显著高于多柔比星脂质体;MTT 法检测结果则显示,TF-多柔比星脂质体对 MCF-7细胞[（20．8±3．2）μmol／L]和 MDA-MB-231细胞[（20．1±3．0）μmol／L]杀伤的 IC50显著低于多柔比星脂质体[（158．6±24．6）μmol／L;（160．1±25．1）μmol／L）]和游离多柔比星[（161．7±26．2）μmol／L;（166．9±27．0）μmol／L）],差异有统计学意义（F ＝116．03,P ＜0．001;F ＝75．29,P ＜0．001）。软琼脂克隆集落实验显示,TF-多柔比星脂质体对克隆集落的生长抑制显著优于多柔比星脂质体、游离多柔比星及对照组[MDA-MB-231细胞直径：（60．5±10．4）μm、（94．3±16．8）μm、（131．8±22．6）μm、（162．8±30．3）μm;MCF-7细胞直径：（31．8±5．5）μm、（62．1±11．1）μm、（108．6±18．6）μm、（157．4±29．3）μm],差异有统计学意义（F ＝87．17,P ＜0．0001;F ＝178．23,P ＜0．0001）。结论 TF-多柔比星脂质体对乳腺癌细胞体外增殖具有显著的抑制作用,能够高效、特异地杀死乳腺癌细胞,为体内治疗乳腺癌提供了一定的理论依据。     

环氧化酶-2抑制剂nimesulide对乳腺癌细胞株增生、凋亡的影响

目的 探讨环氧化酶-2抑制剂nimesulide(NIM)对雌激素受体(ER)阴性(MDA-MB．231)和阳性(MCF-7)人乳腺癌细胞株增生、凋亡的影响。方法 应用MTT比色法分析细胞生长抑制作用，流式细胞技术测定细胞周期分布和凋亡率，透射电镜观察细胞形态与超微结构，AnnexinV法检测细胞的凋亡。结果 NIM以时间、剂量依赖性方式抑制MDA-MB-231(COX-2阳性)、MCF-7(COX-2阴性)细胞生长，阻滞细胞周期于G0／G1期，诱导细胞的凋亡，MDA—MB-231细胞对NIM的作用更为敏感。NIM对COX-2表达阴性的MCF-7细胞同样具有抑制增生、诱导凋亡的作用。结论 NIM对ER阳性和ER阴性乳腺癌细胞均有抑制增生、诱导凋亡的作用。NIM的抗肿瘤作用存在环氧化酶．2依赖性与非依赖性两种途径。     

ERK信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移

目的：探讨细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路在RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移中的作用.方法：流式细胞术检测MDA-MB-231细胞表面RANK蛋白的表达;western-blot检测RANKL刺激后磷酸化ERK（P-ERK）及ERK的表达;Transwell法测定RANKL刺激后细胞迁移能力的改变.结果：MDA-MB-231细胞表达RANK蛋白,RANKL诱导MDA-MB-231细胞迁移能力增强.RANKL刺激后MDA-MB-231细胞P-ERK表达升高,PD98059抑制RANKL诱导的细胞迁移.结论：ERK信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移.     

CXCL12 对人乳腺癌细胞株 MDA - MB - 435 失巢凋亡的研究

目的：研究趋化因子CXCL12对人乳腺癌高转移细胞系MDA—MB-435失巢凋亡的影响。方法：实验组培养基中加入终浓度为50ng／ml的CXCL12,对照组为无CXCLl2的DMEM培养基。两组细胞悬浮培养,建立人乳腺癌高转移细胞系MDA—MB-435失巢凋亡抵抗细胞模型。MTr检测CXCLl2对于失巢凋亡抵抗MDA—MB-435细胞系生长的影响,流式细胞仪检测两组细胞的凋亡情况,Transwe11实验检测细胞侵袭能力改变。结果：CXCLl2对于失巢凋亡抵抗MDA—MB-435细胞系在形态学方面与对照组相比无特异性改变。CXCLl2作用组失巢凋亡抵抗细胞增殖能力低于对照组,凋亡率增加,侵袭能力增加,穿过膜细胞数明显高于对照组（28±3．0VS15±2．4,P〈0．05）。结论：在人乳腺癌高转移细胞系MDA—MB-435失巢凋亡过程中,CXCL12能在一定程度上抑制失巢凋亡抵抗细胞的生长,但却能增加存活肿瘤细胞的侵袭性。     

整合素连接激酶在非小细胞肺癌中过度表达及促进肺癌细胞的侵袭和迁移

目的:探讨整合素连接激酶(ILK)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及在侵袭和迁移中的作用和相关分子机制。方法:免疫组化法检测ILK蛋白在NSCLC患者中的表达,细胞转染、siRNA干扰、细胞划痕试验、实时定量PCR、Westernblot方法探讨ILK在肺癌A549细胞中的表达及分子机制。结果:ILK蛋白在原发性NSCLC组织中过度表达30.6%(33/108)并且和TNM分期(P=0.001)、淋巴结转移(P=0.033)相关。ILK在A549细胞中过度表达并且通过下调E-cadherin,上调波形蛋白、纤维连接蛋白、Snail、Slug导致上皮-间质转化(EMT)。此外,NF-κB抑制剂BAY11-7028和小干扰靶RNA(siRNA)NF-p65可诱导E-cadher in的表达下调。结论:ILK在原发性NSCLC组织中高表达并与TNM分期和淋巴结转移相关,其促进肺癌细胞的侵袭和迁徙机制可能是经NF-κB信号通路诱导EMT所致。     

重组人血管内皮抑素对 HER -2 过表达乳腺癌细胞 MDA - MB -453 的诱导凋亡研究

目的：检测重组人血管内皮抑素（恩度）作用于HER-2过表达乳腺癌细胞后细胞的生长情况及凋亡率.方法：免疫细胞化学法检测乳腺癌细胞MDA-MB-453的HER-2表达水平,以25、50、100、200、300mg/ml的恩度作用于HER-2过表达乳腺癌细胞MDA-MB-453,光学显微镜下观察细胞生长情况,流式细胞仪检测乳腺癌细胞的凋亡率及细胞周期.比较各组药物对HER-2过表达乳腺癌细胞的诱导凋亡作用.结果：MDA-MB-453细胞HER-2表达率95%可信区间为63.32%-69.60%;25、50、100、200、300mg/ml的恩度作用于MDA-MB-453细胞24h后的凋亡率分别为17.98%、20.71%、43.06%、72.05%、84.93%.48h后的凋亡率为43.57%、47.69%、42.69%、49.61%、51.23%.恩度可将乳腺癌细胞阻滞于G2期.结论：恩度可诱导HER-2过表达乳腺癌细胞凋亡,呈剂量依赖关系,该药可将细胞阻滞于G2期.     

乳腺癌细胞系中肿瘤干细胞相关亚群的初步研究

目的 通过乳腺癌细胞系及其干细胞的培养,化疗药干预和流式细胞仪筛选鉴定,探讨不同乳腺癌细胞系中CD44⁺CD24^-/low细胞比例,及富集乳腺癌干细胞相关亚群的方法。方法 通过细胞培养乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231,观察生长曲线,比较化疗药物干预下生长情况;利用流式细胞仪检测两种乳腺癌细胞系中CD44⁺CD24^-/low细胞比例;无血清悬浮培养,化疗药(多西紫杉醇、表阿霉素)干预这两种乳腺癌细胞系,观察其是否形成细胞球。结果 (1)MDA-MB-231细胞系倍增时间短,生长速率高于MCF-7细胞系;(2)MCF-7细胞系中可能存在较大比例肿瘤干细胞,其对化疗抵制,能自我更新;(3)化疗敏感性用两独立样本t检验,MCF-7细胞,差异没有统计学意义;MDA-MB-231细胞,差异有统计学意义,提示MDA-MB-231细胞系对该方案化疗较敏感;(4)无血清悬浮培养,MDA-MB-231细胞系未发现明显细胞球;MCF-7细胞系初次无血清培养约6天出现细胞球。加入化疗药筛选后两种细胞,见大部分肿瘤细胞逐渐死亡,未发现明显细胞球;(5)流式细胞仪检测,MCF-7、MDA-MB-231两种细胞系中主要是CD44⁺CD24⁺亚群和CD44^-CD24⁺亚群,CD44⁺CD24^-/low细胞比例分别2.07%和0.20%。结论 (1)MDA-MB-231细胞系增值较快,恶性度相对较高,其对TA联合化疗药物较敏感;MCF-7细胞系中可能存在少量肿瘤干细胞,对化疗抵制,能自我更新;(2)无血清培养液培养MCF-7细胞系能形成悬浮细胞球;流式细胞仪检测两种细胞系中CD44⁺CD24^-/low细胞比例小;(3)CD44⁺CD24^-/low表型可能不是乳腺癌干细胞唯一特异性的表面标志。     

EGFRvIII‐induced estrogen‐independence,tamoxifen‐resistance phenotype correlates with PgR expression and modulation of apoptotic molecules in breast cancer

The tumor‐specific, ligand‐independent, constitutively active epidermal growth factor receptor (EGFR) variant, EGFRvIII, remains understudied in breast cancer. Here, we report that expression of EGFRvIII in the ErbB‐2‐overexpressing, estrogen‐dependent MDA‐MB‐361 breast cancer cell line resulted in significant estrogen‐independent tumor growth in ovariectomized, athymic nude mice in comparison to MDA‐MB‐361/wt cells. MDA‐MB‐361/vIII breast cancer cells maintained estrogen‐induced tumor growth, but were tamoxifen‐resistant in the presence of estrogen, while MDA‐MB‐361/wt cells had a significant reduction in tumor growth in the presence of estrogen and tamoxifen. Tamoxifen alone did not have a significant effect on EGFRvIII‐mediated estrogen‐independent tumor growth. Constitutive signaling from the EGFRvIII receptor resulted in an increased activation of both the Akt and MAPK pathways. Compared to estrogen‐dependent, tamoxifen‐sensitive MCF‐7/vIII breast cancer cells, which had unchanged levels of ERα, but an increase in progesterone receptor (PgR) in comparison to MCF‐7/wt cells, MDA‐MB‐361/vIII cells had a reduction in ERα expression as well as a more pronounced reduction in PgR compared with MDA‐MB‐361/wt cells. EGFRvIII expression was also significantly associated with an absence of PgR protein in invasive human breast cancer specimens. Alterations of proapoptotic proteins and antiapoptotic proteins were observed in EGFRvIII transfectants. In conclusion, constitutive signaling through EGFRvIII and its downstream effector proteins crosstalks with the ERα pathway, resulting in loss of PgR expression and alterations in the apoptotic pathway, which may result in the estrogen‐independent, tamoxifen‐resistant phenotype conferred to EGFRvIII‐expressing breast cancer cells. © 2009 UICC     

雌激素调节人乳腺癌细胞CD147表达的研究

目的：探究雌激素对人乳腺癌细胞系中CD147表达的调节作用。方法：用雌激素处理人乳腺癌细胞系,RT-PCR及Real-time PCR定量检测用药前后细胞中CD147 mRNA表达水平变化,Western blot检测用药前后细胞中CD147蛋白表达水平变化。结果：经雌激素处理后的ER阳性人乳腺癌细胞系中CD147 mRNA及蛋白的表达均呈上升趋势,而ER阴性人乳腺癌细胞系则无明显变化。结论：雌激素通过ER激活CD147的表达,在乳腺癌的发生发展过程中发挥了重要的作用。     

hCLP46基因在不同侵袭转移潜能乳腺癌细胞表达中的差异及其意义

目的 探讨hCLP46基因在MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞中表达的差异性及其意义。方法 采用RT-PCR的方法检测2个细胞系(乳腺癌低度侵袭转移细胞系MCF-7、中度侵袭转移细胞系MDA-MB-231)中hCLP46 mRNA的表达差异。取MCF-7和MDA-MB-231细胞株进行培养,分别加入100 μmol/L的转化生长因子-β(TGF-β)并设对照组,培养72 h,用Western-blot方法分析P15蛋白表达。结果 RT-PCR检测hCLP46结果显示,在MCF-7和MDA-MB-231细胞系中,内参基因GAPDH的表达量相近,hCLP46基因在两个细胞系中均表达,其中MDA-MB-231细胞系中的表达高于MCF-7细胞系。两个细胞系分别加入TGF-β培养72 h后,与相应的对照细胞系相比,P15的表达均有降低,hCLP46基因高表达的MDA-MB-231细胞中P15表达较MCF-7细胞显著降低。结论 hCLP46基因过表达可能抑制TGF-β对MDA-MB-231和MCF-7乳腺癌细胞P15基因的上调,hCLP46可能在乳腺癌的发病中起到一定作用。