硅酸修饰的抗体微阵列玻片对红细胞的血型抗体吸附能力的研究

目的探讨用硅酸修饰的微阵列玻璃基片,对红细胞血型抗体的吸附能力.方法将玻片用硅酸钠溶液处理,经酸化以形成硅酸,然后用抗红细胞血型抗体(抗-A、抗-B、抗-AB、抗-D)包被,以对应红细胞作反应指示物,以检测经硅酸修饰后的玻片对红细胞血型抗体的吸附能力,以及血型抗体的免疫活性.结果抗红细胞血型抗体可以牢固的结合在硅酸修饰过的玻片上,并且可以与其对应的红细胞抗原进行免疫学反应.结论经硅酸修饰的玻片对血型抗体有很高的结合效力,同时抗体仍保持很高的免疫活性,因而可进一步充当蛋白质抗体微阵列基片.     

Poly-L-Lysine玻片在寡核苷酸芯片制备中的改进

目的为了制得适合固定未修饰寡核苷酸的芯片,提高检测灵敏性,对Patrick Brown 实验室的多聚左旋赖氨酸包被玻片的方法进行改进。方法玻片经清洗后用缩水甘油-丙氧基三甲氧基硅烷进行硅烷化,然后应用Poly-L-Lysine在玻片表面形成聚合物涂层,经次亚苯基二异硫氰酸盐表面活化后可使寡核苷酸共价连接在芯片表面。设计了各种实验考察方法改进前后芯片表面的性能,并将改进后的玻片初步应用于SARS冠状病毒寡核苷酸芯片检测中。结果方法改进后芯片表面性能优良:固定效率高、点的同一性好、杂交效率和热稳定性好、寡核苷酸结合牢固、芯片可以重复利用。结论利用共价连接,方法改进后的芯片表面适合固定未修饰的寡核苷酸,解决了寡核苷酸与玻片之间物理结合不稳定、易剥离的缺陷,提高了芯片检测的灵敏性。     

Poly-L-Lysine玻片在寡核苷酸芯片制备中的改进

目的 为了制得适合固定未修饰寡核苷酸的芯片，提高检测灵敏性，对Patrick Brown实验室的多聚左旋赖氨酸包被玻片的方法进行改进。方法 玻片经清洗后用缩水甘油-丙氧基三甲氧基硅烷进行硅烷化，然后应用Poly-L-Lysine在玻片表面形成聚合物涂层，经次亚苯基二异硫氰酸盐表面活化后可使寡核苷酸共价连接在芯片表面。设计了各种实验考察方法改进前后芯片表面的性能，并将改进后的玻片初步应用于SARS冠状病毒寡核苷酸芯片检测中。结果 方法改进后芯片表面性能优良：固定效率高、点的同一性好、杂交效率和热稳定性好、寡核苷酸结合牢固、芯片可以重复利用。结论 利用共价连接，方法改进后的芯片表面适合固定未修饰的寡核苷酸，解决了寡核苷酸与玻片之间物理结合不稳定、易剥离的缺陷，提高了芯片检测的灵敏性。     

荧光检测孕妇感染蛋白质芯片制备的初步研究

目的：建立一种用蛋白质芯片检测血清中弓形虫、巨细胞病毒、风疹病毒、单纯疱疹病毒（TORCH）抗体的新方法。方法：采用玻片表面修饰琼脂糖膜制备蛋白质芯片，以荧光标记抗体，检测血清中TORCH IgM抗体。结果：所制备的蛋白质芯片可检测到血清中微量TORCH抗体的存在，荧光强度和抗原质量浓度呈线性关系，抗体之间交叉反应可忽略不计。该芯片法与ELISA试荆盒检测阴阳性符合率均100％。结论：蛋白质芯片技术检测孕妇TORCH感染，具有高通量、微型化、操作简便等优点，可望应用于临床中。     

两种氨基修饰的基因芯片表面制备方法比较

目的探讨两种氨基化方法修饰玻片表面的过程及其在基因芯片制备中应用的可行性。方法玻片经清洗、硅烷化后，一种用多组分多氨化合物包被，经次亚苯基二异硫氰酸盐表面活化；另一种方法采用的包被剂是丙烯酸-丙烯酰胺单体，活化剂是碳二业胺／N-羟基琥珀亚胺酯官能团分子。将被修饰好的玻片用于λ噬菌体基闲组DNA芯片的制备，并进行杂交检测分析结果经两种方法修饰后玻片表面分别形成分支结构和聚合物涂层，与商业化的芯片比较发现，两种芯片杂交、扫描检测后显示所得点阵的杂交信号均匀、稳定、清晰，杂交点饱满、同一性好。结论两种方法修饰的玻片用于制备基因芯片均取得了成功，其中丙烯酸-丙烯酰胺聚合物包被法处理过程简单、成本低廉、能大规模生产，是一种较理想的芯片表面制备方法。     

两种氨基修饰的基因芯片表面制备方法比较

目的 探讨两种氨基化方法修饰玻片表面的过程及其在基因芯片制备中应用的可行性。方法 玻片经清洗、硅烷化后,一种用多组分多氨化合物包被,经次亚苯基二异硫氰酸盐表面活化;另一种方法采用的包被剂是丙烯酸-丙烯酰胺单体,活化剂是碳二亚胺/N-羟基琥珀亚胺酯官能团分子。将被修饰好的玻片用于λ噬菌体基因组DNA芯片的制备,并进行杂交检测分析。结果 经两种方法修饰后玻片表面分别形成分支结构和聚合物涂层,与商业化的芯片比较发现,两种芯片杂交、扫描检测后显示所得点阵的杂交信号均匀、稳定、清晰,杂交点饱满、同一性好。结论 两种方法修饰的玻片用于制备基因芯片均取得了成功,其中丙烯酸-丙烯酰胺聚合物包被法处理过程简单、成本低廉、能大规模生产,是一种较理想的芯片表面制备方法。     

构建玻片蛋白质芯片的实验研究

目的:探讨玻片蛋白质芯片的构建方法及其中间操作条件的选择与优化。方法:利用生物芯片点样仪将超微量蛋白质点到经特殊处理的玻璃片表面,然后选用不同的化学试剂对玻片背景进行封闭;再用荧光素标记的蛋白质与点样蛋白杂交;最后用生物芯片分析仪扫描成像并进行分析,比较不同条件下芯片的显示效果。结果:蛋白质样品与片基稳定结合,并保持原活性状态;封闭试剂选用酪蛋白或明胶效果较佳;点样探针与其特异蛋白质抗体可稳定结合,结合效果与点样蛋白浓度在一定范围内呈正相关;在1.6 cm×1.6 cm的玻璃片面积上,构建了36×36=1269点的蛋白质芯片。结论:本实验条件下,蛋白质抗原或抗体可以稳定地固定于经过处理的玻璃片表面.制成免疫型蛋白芯片,并可通过随后的抗原抗体反应与荧光素标记的相应抗体或抗原结合,用生物芯片分析仪可对其荧光信号进行检测分析。     

结核杆菌检测基因芯片的制备研究

目的　建立结核杆菌检测基因芯片的制备技术。方法　制备和标记靶基因 ,用点样仪将靶基因点于玻片介质上 ,并经点样后处理制成基因芯片 ,用扫描仪测定处理前后芯片上荧光强度的变化 ,计算 DNA固定率 ,同时测定和比较两种不同玻片、不同点样液和三种不同点样后处理方法的 DNA固定率。结果　制备结核杆菌检测基因芯片 ,用醛基修饰玻片作为介质 ,用 DMSO溶液作为点样液 ,点样后芯片处理以水合 1小时再干燥 30分钟为佳。结论　本研究所建立的结核杆菌检测基因芯片制备技术具有较高的效率和可靠的实用性能     

基于琼脂糖膜为载体的抗体芯片工作条件的优化

目的:优化以琼脂糖修饰的玻片为载体的抗体微阵列的制备方法,提高微阵列信噪比及检测灵敏度。方法:选取单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)作为待检的靶蛋白,在琼脂糖膜上首先固定MCP-1捕获抗体,经过洗涤、封闭,然后依次加入标准抗原、生物素标记的检测抗体以及亲和素标记的cy3,分别孵育、洗涤后,激光共聚焦扫描仪扫描获取图像,分析各点的荧光强度,根据荧光强度确定捕获抗体的最佳固定时间、温度以及最适宜的洗涤缓冲液。结果:与4、37℃过夜固定相比,捕获抗体室温(25℃左右)过夜固定时,蛋白质在载体上的固定效率和反应活性最高;捕获抗体过夜固定比固定2 h获得更高的检测灵敏度;另外,通过比较相同pH值不同溶质缓冲液的洗涤效应,pH 7.4的缓冲液PBST可获得更优信号强度。结论:本研究优化了以琼脂糖修饰的玻片为载体的蛋白质微阵列的反应条件,提高了微阵列的检测灵敏度。     

结核杆菌检测基因芯片的制备研究

目的 建立结核杆菌检测基因芯片的制备技术。方法 制备和标记靶基因，用点样仪将靶基因点于玻片介质上，并给点样后处理制成基因芯片，用扫描仪测定处理前后芯片上荧光强度的变化。计算DNA固定率，同时测定和比较两种不同破片，不同点样液和三种不同点样后处理方法的DNA固定率。结果 制备结核杆菌检测基因芯片，用醛基修饰玻片作为介质，用DMSO溶液作为点样液，点样后芯片处理以水合1小时再干燥30分钟为佳。结论 本研究所建立的结核杆菌检测基因芯片制备技术具有较高的效率和可靠的实用性能。