复合神经生长因子的纳米纤维导管促神经再生的初步研究

目的 探讨应用同轴静电纺丝技术制备复合神经生长因子的神经导管的可行性,检测神经生长因子的活性及对神经再生的作用.方法 应用同轴静电纺丝技术制备以可降解生物材料乳酸己内酯共聚物[P(LLA-CL)]为壳层材料、神经牛长冈子(NGF)和牛血清蛋白(BSA)为芯层材料的纳米纤维,纺织成神经导管复合体.模拟体内环境进行体外降解缓释8周,在不同时间点,应用PCI2细胞培养法检测缓释液中NGF的生物活性.构建大鼠坐骨神经10 mm缺损模型.分别采用自体神经移植(A组)、P(LLA-CL)/BSA/NGF导管(B组)、P(LLA-CL)/BSA导管加一次性注射NGF(C组)、P(LLA-CL)/BSA导管(D组)桥接神经断端,术后12周进行再生神经形态学等观察.结果 P(LLA-CL)/BSA/NGF导管在体外8周尚末完全降解.能够持续释放NGF,并保持牛物活性.解剖观察可见再牛神经均通过神经导管,B组再生神经的卣径最均匀一致,达到正常神经的直径.透射电镜图片显示,A组和B组神经纤维数日多、大小均匀、成熟良好,C组和D组纤维结缔组织多、神经纤维细小、髓鞘薄.结论 P(LLA-CL)/BSA/NGF导管具有良好的组织相容性和生物活性,能够诱导并促进神经再生,提高神经再牛的质量,其移植效果接近于自体神经移植.     

静电纺纳米聚乳酸己内酮共聚物导管修复周围神经缺损的实验研究

目的 探讨应用同轴静电纺丝技术制备的聚乳酸己内酮共聚物[Poly(1-lactide-co-epsilon-caprolactone),P(LLA-CL)]导管,移植修复大鼠周围神经缺损的效果.方法 选取健康SD大鼠54只,随机分成3组,每组18只.先造成坐骨神经1.5cm缺损段,然后分别采用P(LLA-CL)导管桥接(A组)、硅胶管桥接(B组)、自体神经逆行原位移植(C组).分别在术后4、8、12周对大鼠进行大体观察、坐骨神经功能指数检查、神经电生理检查、肌肉湿重、再生有髓神经纤维计数、电镜观察,评价各组神经再生.结果 术后4周时A组再生神经已部分生长到导管的中部;8周时再生神经已通过神经导管,但再生的神经纤细;12周时再生神经粘连较轻,直径较粗.A组的坐骨神经功能指数、神经电生理、肌肉湿重和组织学观察等各项指标均略差于C组,但明显优于B组.结论 纳米聚乳酸己内酮神经导管具有促进神经轴突再生的作用,有望成为自体神经移植的替代材料应用于周围神经缺损的修复.     

外消旋聚乳酸复合神经生长因子缓释导管促周围神经再生的形态学研究

目的 建立外消旋聚乳酸复合神经生长因子（poly-D，L-lactic acid／nerve growth factor，PDLLA／NGF）可吸收性缓释导管桥接修复大鼠坐骨神经缺损的动物模型，观察复合导管对大鼠坐骨神经缺损再生的促进作用。方法利用溶剂挥发法制备PDLLA单纯导管和PDLLA／NGF缓释导管，每根缓释导管含NGF450U。SD大鼠40只随机分成4组，每组10只，切除中段坐骨神经10mm之后分别行自体神经移植（A组）、单纯导管桥接（B组）、单纯导管加一次性给药（C组）、PDLLA／NGF缓释导管桥接（D组）修复坐骨神经，除A组外，均保留10mm缺损。术后3个月观察神经再生情况，比较各组光镜、电镜及图像分析等指标。结果术后3个月导管与周围组织粘连松，并开始降解，但外形仍保持完整。再生神经均顺利通过导管腔，组织学观察A组和D组内神经纤维数目多，大小均匀，成熟良好；B组和C组纤维结缔组织多，神经纤维细小，髓鞘薄。图像分析显示除神经纤维计数D组高于A组外，A组和D组在纤维直径、轴突直径和髓鞘厚度方面差异均无统计学意义（P〉0．05），并明显优于B组和C组（P〈0．05）。结论 PDLLA／NGF缓释导管能够有效促进大鼠坐骨神经缺损再生，组织学观察指标接近自体神经移植。     

自组装多肽与神经生长因子导管修复兔周围神经缺损

[目的]探索自组装多肽凝胶复合神经生长因子(NGF)的神经导管修复周围神经损伤的可行性及效果。[方法]以静电纺丝技术制备单纯聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)和PLGA复合NGF的纳米纤维复合神经导管,制备"异亮氨酸-赖氨酸-缬氨酸-丙氨酸-缬氨酸"(IKVAV)顺序的自组装多肽凝胶。选取新西兰大白兔72只,制备兔坐骨神经10 mm缺损模型。按随机数字法分为4组,每组18只,分别给予以下处理:A组自体神经移植,B组单纯PLGA神经导管+NGF桥接,C组单纯PLGA神经导管+IKVAV多肽凝胶+NGF桥接、D组复合NGF的PLGA导管+IKVAV多肽凝胶桥接。术后1、2、3个月行电生理检测、大体观察、小腿三头肌湿重恢复率测量和组织学检查。[结果]术后复合NGF导管逐渐吸水膨胀并降解,周围组织未见明显炎性反应,无神经卡压。术后1个月,再生神经已通过缺损,但直径细小,随着时间延长逐渐增粗。各组间比较发现,D组神经再生效果接近A组,各项指标优于B组(P0.05),部分指标优于C组(P0.05)。D组和A组之间比较,差异无统计学意义(P0.05),但小腿三头肌湿重恢复率较A组稍差。[结论]自组装多肽凝胶联合复合神经生长因子的神经导管具有良好的组织相容性,能够有效促进神经生长,效果接近自体神经移植。     

RGD多肽接枝聚复合导管桥接神经缺损的实验研究

目的 探讨RGD多肽接枝聚/β-TCP/PLA复合神经导管桥接周围神经缺损的治疗效果.方法 45只雄性成年Wister大鼠,随机分为3组,每组15只.切断右侧坐骨神经形成10 mm缺损,A组采用单纯PLA神经导管桥接缺损,B组采用RGD多肽接枝聚/β-TCP/PLA复合神经导管桥接缺损,C组采用自体神经移植.术后12周进行大体观察、电生理、小腿三头肌恢复率、组织学、超微结构等测定.结果 B组运动神经传导速度和肌肉湿重恢复率明显优于A组,差异有统计学意义(P<0.05);B组与C组相近,差异无统计学意义(P>0.05).组织学、超微结构测定发现B、C组神经再生情况明显优于A组.结论 在坐骨神经损伤修复中,RGD多肽接枝聚/β-TCP/PLA复合神经导管桥接修复效果与自体神经移植相近,可作为一种较理想的神经缺损修复材料.     

亲和素-生物素黏附系统修饰纳米纤维构建组织工程神经的实验研究

目的 观察亲和素-生物素黏附系统(avidin-biotin binding system,ABBS)快速黏附雪旺细胞(SCs)对组织工程神经促进神经再生的影响.方法 以坐骨神经缺损10 mm作为实验模型.取40只Wistar大鼠分成A、B、C、D4组,每组10只.A组:自体神经移植修复组;B组:空白对照组,用聚乳酸己内酮共聚物[ Poly(L-lactic acid-co-epsilon-caprolactone),P(LLA-CL)]支架修复神经缺损;C组:P(LLA-CL)支架上用普通方法黏附雪旺细胞修复神经缺损;D组:P(ILA-CL)支架上用ABBS法黏附雪旺细胞修复神经缺损.术后3个月,检测坐骨神经功能指数、神经传导速度、再生神经轴突及髓鞘厚度,评估ABBS对于促进神经再生的影响.结果 C组与D组的神经修复效果无差别.虽然修复效果不及A组,但是均明显好于没有雪旺细胞的B组.结论 ABBS在动物体内实验中未对组织工程神经促进神经再生造成不利影响,是一种可靠的细胞快速黏附方法.     

神经导管联合自体变性肌桥修复大鼠周围神经缺损的实验研究

目的探讨PLGA神经导管联合化学萃取的自体骨骼肌肌桥,修复大鼠坐骨神经缺损的可能性。方法SD大鼠45只,建立大鼠左侧坐骨神经缺损模型。随机分为3组．分别采用自体神经（A组）、PLGA神经导管（B组）和PLGA神经导管联合化学萃取自体骨骼肌肌桥（C组）．来修复神经缺损。术后通过大体观察、坐骨神经功能指数测定、腓肠肌湿质量恢复率测定、组织学观察和图像分析对比等,检测神经缺损修复情况。结果神经导管联合化学萃取自体骨骼肌肌桥能促进坐骨神经再生．各项指标均优于单纯神经导管移植．但是效果略差于自体神经移植。结论PLGA神经导管联合化学萃取自体骨骼肌肌桥．对大鼠坐骨神经缺损具有良好的桥梁作用和促神经生长的作用。     

PLGA神经导管联合ADSCs与自体神经组织修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的:探讨PLGA神经导管联合ADSCs与自体神经组织碎屑修复大鼠坐骨神经缺损的修复效果。方法:32只SD大鼠平均分成4组,无菌条件下切断右侧的坐骨神经,制成1 0衄长的大鼠坐骨神经缺损模型,A组采用PLGA神经导管连接缺损神经进行修复,B组由内置自体神经组织碎屑的PLGA神经导管连接,C组由内置ADSCs与自体神经组织碎屑的PLGA神经导管连接,D组采用自体神经移植方式。12周后通过对再生神经桥接体的一般观察、HE染色、免疫荧光染色、甲苯胺蓝染色来评价神经的再生情况;通过肌电图、腓肠肌的HE和Masson染色来评价神经对靶器官的再支配情况。结果:术后12周,各组的神经导管均已降解,切断神经通过神经导管向两端生长。一般观察、肌电图、组织学观察结果均提示PLGA神经导管联合ADSCs与自体神经组织碎屑组C组的修复效果显著优于内置神经组织碎屑的PLGA神经导管组B组和空导管组A组的修复效果,但仍稍差于自体神经移植组D组。结论:PLGA神经导管联合ADSCs与自体神经组织可以比较有效地修复周围神经缺损,为周围神经缺损的修复提供了一种新的方法。     

叶酸复合交联多聚尿烷聚酯神经导管促进大鼠坐骨神经长距离缺损修复

目的 探讨叶酸复合交联多聚尿烷聚酯(folic acid coated-crosslinked urethane-doped polyester elastomer,fCUPE)神经导管支架修复大鼠坐骨神经长距离缺损的效果。方法 选取36只3月龄雄性SD大鼠(体质量180～220 g)随机分为3组，每组12只，分别为CUPE神经导管支架移植组(A组)、fCUPE神经导管支架移植组(B组)及自体神经移植组(C组)，取C组对侧健康肢体作为对照组(D组)。建立大鼠20 mm长坐骨神经缺损模型，按分组分别采用相应材料修复神经缺损，于术后1、2、3个月采用Bain公式计算A～C组坐骨神经指数(sciatic function index,SFI)，神经电生理技术评价A～D组患侧神经传导速度(nerve conduction velocity,NCV)；术后3个月处死大鼠，大体观察后取A～C组再生神经组织行S-100免疫组织化学染色观察及A、B组雪旺细胞计数，比较各组神经修复和再生水平。结果 术后3个月各组大鼠手术部位神经导管支架均部分降解，神经及导管与周围组织之间无严重粘连，导管与远、近端神经连...     

乳酸-羟基乙酸-L-赖氨酸多肽接枝聚复合FK506和神经生长因子缓释膜促进大鼠坐骨神经再生的实验研究

目的 观察乳酸.羟基乙酸-L-赖氨酸(RGD)多肽接枝聚复合FK506和神经生长因子(NGF)缓释膜桥接大鼠坐骨神经5 mm缺损促进神经再生的效果.方法 将24只雄性Wistar大鼠随机分成三组,切断左侧坐骨神经形成5 mm缺损,分别以RGD多肽接枝聚复合FK506和NGF缓释膜(A组)、RGD多肽接枝聚复合FK506缓释膜(B组)和RGD多肽接枝聚膜(C组)桥接缺损;A组膜FK506与NGF的含量分别为0.48 mg和2μg,B组膜FK506的含量为0.72 mg,C组为对照组.术后3个月,采用大体观察、神经电生理、小腿三头肌湿重恢复率、组织学观察和图像分析等方法规查神经再生情况. 结果术后3个月,膜外形完整、质脆;各组再生神经均通过了缺损,且A组的再生神经各项检测指标明显优于B组和C组.结论 RGD多肽接枝聚复合FK506和NGF缓释膜能够有效地促进损伤的大鼠坐骨神经再生,且FK506和NGF联合应用,可减少FK506的用量.     

几丁糖复合聚乙烯醇神经导管修复大鼠坐骨神经损

目的 径较粗,达到正常神经的直径。肌肉湿重和肌细胞截面积：A组和C组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);A、C组明显优于B组,差异有统计学意义(P＜0.05)。组织学观察：A组和C组神经纤维数日多、大小均匀、成熟良好,B组神经纤维数目少、不均匀、髓鞘发育较差。神经示踪观察结果显示：A、B、C三组在L4～L6节段脊髓前角和背根节均可见到真蓝标记的神经元细胞,其中A组脊髓前角真蓝标记的神经元数目和C组相似,差异无统计学意义(P＞0.05),但明显优于B组,差异有统计学意义(P＜0.05)。 结论 几丁糖复合聚乙烯醇神经导管具有促进神经轴突再生的作用,有望成为自体神经的替代材料,应用于周围神经缺损的修复。     

促红细胞生成素促进大鼠坐骨神经再生作用的实验研究

目的 探讨促红细胞生成素(Erythoropoietin,EPO)对大鼠坐骨神经损伤修复后神经再生的影响,为周围神经损伤的临床治疗提供实验依据.方法 雄性SD大鼠40只,随机分为两组,即EPO组和神经生长因子(NGF)组,用硅胶管桥接10 mm的坐骨神经缺损,EPO组和NGF组分别注射EPO和NGF.术后4周和8周时每组分别提取10只大鼠,以坐骨神经功能指数(SFI)、运动神经传导速度(MNCV)、形态学观察和蛋白基因产物9.5(PGP 9.5)免疫组织化学染色,评估EPO对大鼠坐骨神经再生的影响.结果 术后4周SFI,EPO组为[(-78.85±3.87),x-±s,下同],NGF组为(-79.98±4.58),差异无统计学意义(P>0.05);术后8周SFI,EPO组为(-60.26±2.91),NGF组为(-64.65±4.11),差异有统计学意义(P<0.05).术后4周和8周时,EPO组MNCV、有髓神经纤维数目以及PGP9.5免疫阳性神经纤维的平均光密度和积分光密度均优于NGF组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 EPO 能促进大鼠坐骨神经损伤后的修复与再生.     

In vitro and in vivo evaluation of a biodegradable chitosan-PLA composite peripheral nerve guide conduit material

Chitosan, a nature biodegradable material, has good biocompatibility but poor physical properties to serve as a nerve conduit. In this study, polylactic acid (PLA) was added to chitosan to form a composite material with improved intensity and elasticity, to be used as nerve conduits. The chitosan-PLA nerve conduits were fabricated with a mold casting/infrared dehydration technique. The constituent ratio of PLA and chitosan of 1:5 (v:v) was chosen to give the composite material both good mechanical properties and good biocompatibility. An in vitro cytotoxicity test showed that the chitosan-PLA material was not cytotoxic. The conduits were proved biodegradable and had many micropores to allow permeability. We evaluated chitosan-PLA nerve conduits as a guidance channel to repair 10 mm gaps in rat sciatic nerves. Nerve autograft and silicon conduits were used as the control. After 12 weeks, the regenerating nerves in three groups succeeded in passing through the nerve gap and reinnervating the muscle. Assessments, including ECG, histomorphometric evaluation, and weighing of triceps calf muscle, showed that the functional recovery of sciatic nerve was better in chitosan-PLA conduit group than in the silicon conduit group (P < 0.05), but the differences between the chitosan-PLA conduit group and the nerve autograft group were not significant (P > 0.05). Therefore, the chitosan-PLA guide proved to be a promising nerve conduit.     

含神经生长因子的羊膜基质管桥接修复神经缺损的实验研究

目的研究含神经生长因子的人羊膜基质微孔管(NGF·HAMM)、桥接修复周围神经缺损的效果。方法分别用含神经生长因子的人羊膜基质微孔管(NGF·HAMM)、人羊膜基质微孔管(HAMM)、自体神经移植修复60只Wistar大鼠坐骨神经1.2cm缺损;同时将大鼠按手术方法分为3组,每组20只。术后进行组织形态学、电生理学、伤肢功能恢复等检测。结果近端神经再生轴突生长通过1.2cm长的NGF·HAMM移植体,重新支配终末骨骼肌,其再生神经纤维生长速度、数量明显快(多)于单纯HAMM移植体,术后3个月时坐骨神经功能恢复良好。结论NGF和HAMM联合使用可促进轴突再生及其髓鞘化,对损伤神经及伤肢的功能恢复有明显协同促进作用;NGF·HAMM是一种很有希望的神经移植替代材料。     

Rat sciatic nerve repair with a poly-lactic-co-glycolic acid scaffold and nerve growth factor releasing microspheres

The effect of microsphere delivered Nerve Growth Factor (NGF) in a poly-lactic-co-glycolic-acid (PLGA) 85/15 nerve conduit bridging a 10mm rat sciatic nerve gap was assessed, comparing nine groups (n = 6): PLGA conduits filled with saline, saline and NGF, saline with blank microspheres; four different NGF microspheres (5, 20, 50, and 100 mg/ml); an autologous graft and sciatic nerve gap. Histomorphometry, retrograde tracing, electrophysiology, and functional outcomes were evaluated up to 16 weeks. The autologous graft showed the largest fascicular area (0.65 mm(2) ) and had a significantly greater number of myelinated fibers (P < 0.0001). Electrophysiology showed Compound Muscle Action Potential (CMAP) recordings for the autologous graft returning at 6 weeks after nerve transection, reaching their highest amplitude of 3.6 mV at endpoint. No significant differences were found in functional evaluation between groups or between conduits with microspheres and the saline filled conduit. A PLGA 85/15 nerve conduit is capable of sustaining nerve regeneration. The microsphere delivery system does not interfere with regeneration.     

The effect of in vivo created vascularized neurotube on peripheric nerve regeneration

IntroductionCreating vascularized nerve conduits for treatment of nerve gaps have been researched, however, these methods need microsurgical anastomosis thereby complicating the nerve repair process. Thus, the concept of vascularized nerve conduits has not popularized up till now. The aim of this study is to evaluate the effects of vascularized and non-vascularized biological conduits on peripheral nerve regeneration.Material and methodsFollowing ethical board approval, 15 Sprague-Dawley rats were used in the study. The rats were equally divided into three groups. In group I, a silicon rod was inserted next to the sciatic nerve of the rat and connective tissue generated around this rod was used as a vascularized biological conduit. In group II, a silicon rod was inserted into the dorsum of the rat and connective tissue generated around this rod was used as a non-vascularized biological conduit. In group III, autogenic nerve graft was used to repair the nerve gap. The contralateral sciatic nerve is used as a control in all rats. Macroscopic, electrophysiological and histomorphometric evaluations were performed to determine the nerve regeneration.ResultsThere was no statistically significant difference between groups, in terms of latency. However, the mean amplitude of group I was found to be higher than other groups. The difference between group I and II was statistically significant. Myelinated axonal counts in group I was significantly higher than groups II and III.ConclusionOur results showed that vascularized biological conduits provided better nerve regeneration when compared to autografts and non-vascularized biological conduits. Creation and application of vascularized conduits by using the technique described here is easy. Although this method is not an alternative to autogenic nerve grafts, our results are promising and encouraging for further studies.