荧光定量PCR法检测生殖器疱疹病毒感染患者的结果及分析

目的：了解重庆地区疑有单纯疱疹病毒（HSV）感染患者的感染情况。方法：用荧光定量PCR法对422例疑有HSV感染的门诊患者进行检测。结果：（1）3个年龄段患者，即≤25岁，＞25岁并≤35岁，＞35岁的阳性率分别为27．93％（31／111）、23．65％（48／203）、15．74％（17／108），0．05＜P＜0．1，无差异。（2）男性患者和女性患者的阳性率分别为29．5％（41／139）和19．43％（55／238），P＜0．05，相差显著。（3）妇科、泌尿科、皮肤科就诊患者的阳性率分别为18．14％（41／226）、26．44％（23／87）、29．36％（32／109），P＜0．05，相差显著。结论：（1）重庆地区HSV感染率在男性患者和低龄人群（≤25岁）中发病率较高。（2）皮肤科患者的阳性率较其他两个科室为高。说明取标本的采取集部位十分重要。（3）FQ－PCR特异性高，灵敏度强，操作简单，时间短，结果客观准确，特别适宜于门诊患者快速检测诊断的需要。     

荧光定量PCR检测性传播病原体结果分析

目的了解深圳市女性性服务(FCSW)性传播感染(STIs)的流行现况。方法选取深圳市女性性服务,采集其宫颈和阴道分泌物,采用荧光定量PCR分别检测其中的CT、NG、HPV及HSV-2,评价其感染状况。结果391例FCSW中,STIs病原体总阳性检出率为53．20％(208／391),其中,CT阳性检出率最高,为27．62％;余依次为HPV、NG和HSV-2,阳性检出率分别为26．34％,21．23％和2．81％;在STIs病原体的阳性中,感染2种以上STIs病原体83例,占39．90％(83／208),其中,83例NG阳性中,CT的阳性栓出率为45．78％;108例CT阳性中,NG的阳性栓出率为35．18％。结论深圳市FCSW人群中,STIs流行率较高;加大该人群的STIs筛查及健康教育,是当前预防和控制STIs传播的重要策略。     

PCR检测生殖器疱疹患者HSV—2

目的：用聚合酶链反应检测生殖器疱疹患者２型单纯疱疹病毒。方法：对１０１例生殖器疱疹和糜烂患者及２０例对照组用ＰＣＲ法检测ＨＳＶ－１，ＨＳＶ－２。结果：ＨＳＶ－２检出阳性率占６０．４％（６１／１０１），ＨＳＶ－２和ＨＳＶ－１双重感染占４％（４／１０１），对照组均为阴性，并且年龄轻者感染阳性率高于年龄长者，结论：ＰＣＲ具有操作较易，快速，敏感的特点，为临床对生殖疱疹的诊断和鉴别诊断提供了理想的新方法。     

荧光定量PCR检测孕妇单纯疱疹病毒的感染

目的探讨荧光定量PCR技术(Fluorescence Quantitative Polymerase Chain Reaction, FQ-PCR)检测孕妇单纯疱疹病毒(HSV)感染的临床诊断价值.方法45例怀疑HSV-Ⅱ感染的孕妇用ELISA法检测血清HSV-ⅡIgM,同时用FQ-PCR检测血清及宫颈分泌物HSV DNA.结果该组孕妇血清HSV-ⅡIgM阳性率为20.0%,血清HSV DNA阳性率为33.3%,后者检出阳性率明显高于前者(P＜0.05).宫颈分泌物标本HSV DNA阳性率为40.0%,明显高于血清ELISA检测阳性率(P＜0.05),但与血清FQ-PCR检出阳性率无显著性差异(P＞0.05).结论荧光定量PCR检测孕妇HSV DNA感染可以提高诊断率及准确率.     

应用荧光探针定量PCR检测生殖单纯疱疹病毒Ⅱ型的临床应用

目的:探讨荧光探针定量PCR检测生殖单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSVⅡ)在临床上的应用。方法:采用荧光探针定量聚合酶链反应(FQ-PCR)对93例临床诊断为生殖器单纯疱疹病毒感染者检测。结果:检出56例HSVⅡ阳性,阳性率60.22%。结论:FQ-PCR在检测生殖单纯疱疹病毒Ⅱ型的临床应用中具有快捷、特异性强的优点。     

ELISA法与荧光定量PCR法检测HSVⅡ感染的应用研究

目的：分析ELIS法和荧光定量PCR法联合检测生殖器范疹感染HSVⅡ的敏感性。方法：对191例生殖器疮疹患者同时运用改良的ELISA法和荧光定量PCR法进行检测。结果：ELISA法检测抗体阳性率为61．8％，荧光定量PCR法检测HSVⅡ阳性率85．9％，总阳性率92．1％。结论：荧光定量PCR法灵敏度优于ELISA法，两种方法联合进行检测可提高校测阳性率。     

衡阳地区性乱人群中HSV2感染的研究

目的：了解性乱人群典型皮损及无皮损的生殖道分泌物中2型单纯疱疹病毒（HSV2）的感染情况。方法：用PCR法对衡阳地区310例性乱者作HSV2－DNA检测。结果：187例典型皮损的性乱人群中,115例检出HSV2－DNA,阳性率为61．5％,其中男性阳性率为54．9％,女性阳性率为77．8％,男女之间差异显著（P＜0．05）。123例无皮损性乱人群中,28例检出HSV2－DNA,HSV2－DNA检出率为22．8％,其中男性阳性率为20．9％,女性阳性率为27．0％。结论：衡阳地区性乱人群中HSV2有较高的感染率,典型皮损区HSV2－DNA检出率高于无皮损的生殖道分泌物。     

荧光定量PCR与ELISA法检测HBV-DNA结果分析

目的 :应用荧光定量PCR方法精确检测HBV -DNA的拷贝数 ,为临床判断病毒复制程度提供指标 ;对比分析荧光定量PCR方法和ELISA方法检测HBV -DNA的结果。方法 :用荧光定量PCR法检测 10 14例用ELISA法诊断为乙型肝炎病人的血清HBV -DNA拷贝数。结果 :10 14例病人中 ,病毒拷贝数≥ 1× 10 5的 4 99例 ,阳性率4 9.2 % ;HBeAg阳性患者的HBV -DNA拷贝数≥ 1× 10 5的阳性率显著高于HBeAg阴性患者。结论 :荧光定量PCR检测HBV病毒复制情况结果准确 ,对临床工作指导意义更大 ;HBeAg是一项重要指标。     

ELISA法检测HSVⅡ-Ag与HSVⅡ-Ab(IgG,IgM)在HSVⅡ感染上的应用研究

目的 分析ELISA法检测生殖器疱疹病毒抗原、抗体的敏感性和特异性。方法 同时对84例皮肤性病门诊病人用ELISA法进行生殖器疱疹病毒抗原、抗体检测。结果 HSV Ⅱ—Ag阳性率53．6％,HSVⅡ—Ab(IgG)阳性率42．9％,HSVⅡ—Ab(IgM)22．6％。结论 ELISA法检测HSVⅡ—Ag可应用于基层医院在生殖器疱疹上的辅助诊断,检测HSVⅡ—Ab(IgG,IgM)可应用于医疗事业单位健康体检;确诊患者的病程监测和疗效观察。     

单纯疱疹病毒性角膜炎治疗中应用定量PCR技术的研究

目的 在单纯疱疹病毒性角膜炎(HSK)的治疗过程中,研究应用定量PCR检测单纯疱疹病毒(HSV)Ⅰ型DNA数量,结合临床症状体征,指导HSK的治疗.方法 将HSK分成浅层的上皮型角膜炎组和深层的角膜基质炎和角膜内皮炎组,两组再按不同治疗方法各分A、B两组,A组为单纯局部用药,B组为A组基础上联合口服阿昔洛韦.以症状体征评分的变化来比较单纯局部用药与联合口服阿昔洛韦的不同治疗效果.所有患者在治疗前与治疗后作定量PCR检测HSV-Ⅰ DNA数量,以定量PCR数值的lg数作为定量PCR得分来比较AB组的PCR数值变化,与症状体征评分对照来指导HSK的治疗.结果 所有HSK病人治疗后8周A组症状体征评分均显著大于B组,差异有统计学意义.上皮型角膜炎病人的定量PCR得分显示治疗后A＞B,差异有统计学意义.深层型角膜炎病人治疗前后定量PCR无显著差异.上皮型角膜炎中定量PCR值＞10 5的病人,治疗后6、8周,A组症状体征评分显著＞B组,差异有统计学意义;＜ 105的病人,A、B两组症状体征评分无显著差异.结论 对于上皮型角膜炎,定量PCR有以下的作用:①可定性,用于明确单纯疱疹病毒Ⅰ型感染;②可定量,明确HSV-Ⅰ型DNA拷贝数,如拷贝数＞ 105,建议加用口服抗病毒药;如拷贝数＜ 105,可以单纯局部抗病毒.对于角膜基质炎和角膜内皮炎,定量PCR意义不大.     

PCR在猴B病毒与猴病毒8型鉴别中的应用

目的为了使BV147与SA8相区别,并进一步分析BV147基因结构特点.方法用PCR方法扩增BV147DNA,并对扩增片段进行克隆测序.结果该序列与美国BVE2490株部分基因(UL27)相对应位置的核苷酸同源性为99.54%,与SA8相对应位置的核苷酸同源性为89.91%.结论进一步证明了新分离物为B病毒.     

细胞培养与PCR法检测生殖器疱疹病毒的对比研究

目的:比较不同方法检测生殖器疱疹病毒感染的效率。方法:采用病毒培养和PCR法检测疑为生殖器疱疹病毒感染者标本60例,并用PCR作病毒分型。结果:根据病史及临床表现确诊的生殖器疱疹患者标本60例中,病毒培养法阳性36例,阳性率60%(36/60);PCR检测单纯疱疹病毒(HSV)阳性45例,阳性率75%(45/60),和病毒培养相比,差异非常显著(χ2=26.76,P<0.01);PCR分型结果显示阳性标本均为单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)。水疱和脓疱标本的病毒培养和PCR检测阳性率均较高(80.0%~93.3%),糜烂、结痂、斑丘疹标本检测中PCR阳性率(20.0%~66.7%)高于病毒培养(0~33.3%)。结论:对疑为生殖器疱疹患者作病原学诊断,采集水疱、脓疱标本进行病毒分离或PCR检测较佳。     

实时荧光PCR法分析浙江省乙型肝炎病毒基因型的分布

目的 研究浙江省各地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布状况.方法 采用实时荧光聚合酶链反应(FQ-PCR)检测240例HBVDNA病毒含量＞105拷贝/毫升的浙江籍(杭州、湖州、金华、绍兴、台州、宁波各40例)HBV感染者的基因型.结果 240例HBV感染者中基因B型82例占34.17%,基因C型140例占58.33%,基因B,C混合型15例占6.25%,基因D型3例占1.25%,未捡出基因型A、E、F.结论 浙江地区HBV基因以B、C型为主,B、C混合型次之,D型基因偶见.各地区间基因型分布未见差异.     

应用PCR,病毒分离及核酸杂交技术诊断疱疹病毒性脑炎的研究

应用聚合酶链反应，核酸分子杂交和病毒分离技术检测了７例临床诊断为病毒性脑炎患者及１０例其他神经疾病对照组患者的脑脊液中单纯疱疹病毒ＤＮＡ。结果ＰＣＲ检出５例脑炎患者ＣＳＦ中ＨＳＶＤＮＡ阳性，其中ＨＳＶ１型２例，ＨＳＶ２型３例，而核酸杂交方法仅检出２例，其中ＨＳＶ－１和ＨＳＶ－２各１例，与病毒分离结果一致。     

应用PCR技术诊断单纯疱疹病毒性角膜炎

目的探讨聚合酶链反应（PCR）技术诊断单纯疱疹（单疱）病毒性角膜炎的实用价值，为临床诊断提供依据和方法。方法应用PCR技术对60例按临床诊断标准诊断为单疱病毒性角膜炎患者的患眼泪液及角膜上皮进行病毒DNA检测。结果PCR检测60例患者标本结果，阳性46例占76．7％，阴性14例占23．3％。结论对单疱病毒性角膜炎诊断不能只根据其临床特征来诊断；PCR可为临床提供实验诊断依据。     

单纯疱疹病毒2型DNA提取及ICP10启动子基因获得和纯化

目的用单纯疱疹病毒2型DNA,扩增并纯化得到ICP10启动子基因。方法培养vero细胞并接种HSV-2,获得大量HSV-2。用酚:氯仿提取病毒DNA,用PCR方法获得病毒ICP10启动子基因,并用UNIQ-10柱试剂盒纯化PCR产物。结果接种病毒的vero细胞出现病变,病变为“”,收集细胞,反复冻融3次,使细胞裂解,获得大量HSV-2。经PCR扩增获得641bp大小的目的基因片段。电泳显示片断大小符合。结论获得的ICP10启动子基因,经过测序正确后,可以和其他基因连接,用于进一步研究。     

博尔纳病病毒荧光定量套式RT-PCR检测方法的建立

目的：建立博尔纳病病毒(BDV)荧光定量套式RT-PCR检测方法，为快速、准确地定量检测BDV奠定基础。方法：根据BDV P24基因序列，设计并合成引物和荧光标记探针。将PCR扩增的BDV P24基因片段克隆入载体，重组质粒经筛选、鉴定后，作为阳性模板，用于标准曲线的制定和样品检测。结果：应用量组质粒制作的定量曲线循环阈值与模板具有良好的线性关系，相关系数为0．998，建立了检测BDV的荧光定量套式RT-PCR方法。检测58例神经精神病患者及50例健康人外周血单核细胞(PBMC)中BDV P24基因片段，3例精神分裂症及1例帕金森病患者呈阳性，其余均为阴性。结论：荧光定量套式RT-PCR方法能够避免PCR后处理导致的假阳性污染，并实现准确定量，对于研究BDV感染与人类神经精神疾病的关系有很好的应用价值。     

酒精性肝病羰基应激状态下蛋白酶体LMP7亚基表达研究

目的：分析酒精性肝病羰基应激状态下蛋白酶体活性亚基LMP7 mRNA的表达量,研究其在酒精性肝病发病机制中的作用。方法:利用酒精灌胃的方法建立大鼠酒精性肝病模型,分批于6、8、10、12周处死大鼠。采用2,4-二硝基苯肼比色法测定大鼠肝组织蛋白质羰基含量,荧光定量PCR方法测定蛋白酶体活性亚基LMP7 mRNA表达量。结果:模型各组肝组织中羰基含量均明显高于正常对照组（P＜0.05）,并随肝组织病理损害程度的加重而逐渐增高;LMP7亚基mRNA水平逐渐降低,并与羰基含量呈负相关。结论:酒精性肝病时组织处于羰基应激状态,蛋白酶体活性亚基LMP7基因表达下降,可能在酒精性肝病发病机制中发挥重要作用。     

荧光定量RT PCR法检测OATP B和OATP D mRNA表达

目的建立荧光定量RT—PCR检测肺癌及正常肺组织中人类有机阴离子转运多肽(organic anion transporting polypeptide, OATP) OATP B、OATP D mRNA表达的方法,了解肺癌和正常肺组织中OATP B、OATP D mRNA的表达水平。 方法利用RT PCR方法从肺癌及正常肺组织中扩增出目的基因片段,用TA克隆的方法将基因片段插入到PGEM T质粒载体中,在Line Gene荧光定量检测系统上建立检测OATP B、OATP D mRNA表达的标准曲线,并通过40例肺癌及正常肺组织标本进行验证。结果成功构建了OATP基因的质粒重组子,建立了在mRNA水平定量检测OATP B、OATP D基因的标准曲线,相关系数为0.998。以荧光定量RT—PCR法检测, OATP B、OATP D 的mRNA在肺癌及正常肺组织中均有表达,且肺癌中OATP B、OATP D mRNA的表达水平高于正常肺组织（P＜0．05）。 结论成功建立了荧光定量RT PCR检测OATP B、OATP D mRNA表达的方法,检测结果用绝对拷贝数表示,定量准确可靠,敏感性高。