小白菊内酯诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡的实验研究

小白菊内酯属于倍半萜内酯,是墨西哥、印度药用植物的活性成分,也是欧洲小白菊这一常用草药的活性成分[1],主要用于治疗偏头痛、炎症和各种肿瘤。20世纪90年代末,中国学者从中国特有药用植物观光木树皮中分离得到这一抗肿瘤活性物质,并且经过体外抑瘤实验证实,小白菊内酯(10.0μg/mL)对人肝癌细胞的体外抑制率为67.17%,可见其对人肝癌细胞抑制作用比较明显[2]。近年来,随着医学技术和分子生物学技术的发展及各种检测手段的出现,发现小白菊内酯可抑制NF-κB的激活[3,4],诱导细胞凋亡[1],产生细胞毒作用[5,6]。但有关从分子生物学水平研究小…     

岩大戟内酯B诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡的实验研究

目的:探讨岩大戟内酯B对MCF-7乳腺癌细胞生长抑制作用及其机理。方法:通过MTT法观察各组细胞增殖能力;采用流式检测技术分析细胞周期;利用AnnexinV/PI双染检测细胞凋亡情况;电镜观察细胞形态。结果:随着岩大戟内酯B浓度增加对MCF-7的抑瘤率增高;G2/M期细胞减少,S期细胞增多,出现S期阻滞;晚期凋亡和死亡的细胞增加;电镜显示加药后细胞出现核固缩,细胞器空泡变性,凋亡小体形成,甚至出现坏死。结论:岩大戟内酯B对乳腺癌MCF-7细胞生长明显抑制作用,并诱导肿瘤细胞凋亡,为临床开发新药提供理论依据。     

岩大戟内酯B对耐阿霉素白血病细胞株HL-60/ADR细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨死亡受体通路在岩大戟内酯B诱导的耐阿霉素白血病细胞株HL-60/ADR细胞凋亡中的作用。方法采用Annexin V异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(FITC/PI)双染流式细胞术检测HL-60/ADR细胞凋亡;利用Western blot检测Fas/Fas L蛋白的表达;采用荧光比色法测定细胞内caspase-8和caspase-3蛋白酶活性。结果 HL-60/ADR细胞的凋亡率随着岩大戟内酯B浓度的增加及作用时间的延长而逐渐增加。当岩大戟内酯B浓度为40 mg·L-1时,作用24、48及72 h后早期凋亡率和总凋亡率与0 h比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.001);当浓度为20、40、80 mg·L-1时,作用48 h后早期凋亡率和总凋亡率与0 mg·L-1比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.001)。Fas/Fas L蛋白的表达随着岩大戟内酯B作用时间的延长逐渐增加;caspase-8和caspase-3蛋白酶的活性亦逐渐增加。作用24、48及72 h后caspase-3和caspase-8蛋白酶活性与0 h比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.001)。结论岩大戟内酯B能够诱导耐阿霉素白血病细胞株HL-60/ADR细胞凋亡,Fas/Fas L通路参与了岩大戟内酯B诱导的HL-60/ADR细胞凋亡过程。     

蜂毒素对肝癌细胞系BEL-7402细胞凋亡的影响

目的 :了解蜂毒素诱导肝癌细胞凋亡的作用。方法 :肝癌细胞BEL 74 0 2经不同浓度的蜂毒素处理后 ,采用台盼蓝排染法测定细胞增殖的抑制率 ,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡及Fas蛋白的表达。结果 :16 μg/ml蜂毒素作用肝癌细胞系BEL 74 0 2 ,12h抑制率为 (78.13±6 .15 ) % ,2 4h抑制率为 10 0 % ;4 ,8μg/ml蜂毒素对细胞的生长也有抑制作用 ,并且可诱导细胞凋亡的产生 ,能够增加细胞Fas蛋白的表达。结论 :蜂毒素高剂量有杀伤肿瘤细胞作用 ,低剂量可诱导细胞凋亡     

岩大戟内酯4种活性单体对人脑胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究岩大戟内酯4种活性单体对人脑胶质瘤U251细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法 用不同浓度的岩大戟内酯A （JA）、17-羟-岩大戟内酯A （HJA）、岩大戟内酯B （JB）、17-羟-岩大戟内酯B （HJB）处理U251细胞,分别在12、24、48h时间点,用MTT法检测细胞增殖抑制率;在24h时间点,通过LDH释放检测细胞毒性,流式细胞术检测细胞早期凋亡率,Western blot法检测凋亡相关信号蛋白Bax、Bcl-2、cleaved-caspase-3的表达。结果 JA、HJA对U251细胞无作用。与空白对照组比较,JB、HJB使细胞增殖均受到抑制,并呈浓度和时间依赖关系（P<0.05）;使LDH释放率、早期凋亡率、Bax和cleaved-caspase-3表达均随着给药浓度的升高而增大,而Bcl-2的表达降低（P<0.05）。结论 JB和HJB可能通过诱导细胞凋亡而对人脑胶质瘤U251细胞产生作用。     

岩大戟内酯B的抗肿瘤活性及其分子机制研究进展

岩大戟内酯B（jolkinolide B,JB）是从狼毒大戟根部分离出的二萜类化合物。大量研究表明,JB具有抗肿瘤、抗炎、抗骨质疏松和抗结核等多种药理活性。JB的药理作用主要集中于抗肿瘤,是一种毒性较低的天然抗肿瘤药物,受到学者的广泛关注。本文对JB的抗肿瘤活性及其分子机制研究进展进行综述,以期为JB生物学功能的探究及抗肿瘤药物的开发提供理论基础。     

胡桃醌对人肝癌BEL-7402细胞亚显微结构的影响

目的 了解胡桃醌对人肝癌BEL-7402细胞亚显微结构的影响.方法 12.5 μmol/L胡桃醌作用于BEL-7402细胞24h后固定,分别行HE染色、考马斯亮蓝染色、扫描电镜及透射电镜样品制备.结果 12.5 μmol/L胡桃醌处理组细胞形态和细胞骨架发生改变.扫描电镜结果显示BEL-7402细胞胞体体积缩小,与周围细胞群脱离,表面微绒毛卷曲、畸变、小球结构逐渐增多,细胞间连接逐渐断裂,细胞间隙增宽,有凋亡小体形成.透射电镜结果显示胡桃醌作用BEL-7402细胞24 h后,细胞内质网扩大,线粒体结构疏松,胞核核仁裂解,凋亡小体形成.结论 胡桃醌能有效改变人肝癌BEL-7402细胞亚显微结构,诱导细胞凋亡.     

小白菊内酯对人肝癌BEL-7402细胞p53蛋白和增殖细胞核抗原表达的影响

小白菊内酯(parthenolide)为一种西方传统药物,是从艾叶菊属的短舌匹菊(小白菊)PyrethrumParthenium(L.)Smith中提取的化学成分(C15H20O3),主要用于治疗皮肤感染、风湿病和偏头痛[1]。小白菊内酯以时间依赖关系抑制c-fos和c-myc蛋白表达,但不影响p15、p16、p18、p19蛋白表达,以剂量依赖关系使血管平滑肌细胞(VSMC)周期中的G0/G1期细胞比例明显增多,S期细胞比例显著减少,同时抑制VSMC的[3H]TdR掺入[2];前期研究表明小白菊内酯抑制人肝癌细胞BEL-7402细胞增殖,并诱导其凋亡[3]。本研究以BEL-7402细胞为靶细胞,研究小白菊内酯对其p5…     

人参皂苷肠道代谢物诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡

目的探讨一种新的人参稀有皂苷20-O-(β-D-吡喃葡萄糖)-20(S)-原人参二醇皂苷(IH-901)对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制效果和诱导凋亡作用。方法以0、6.25、12.5、25、50、75、100μmol/L的IH-901作用于体外培养的BEL-7402细胞,通过MTT法检测IH-901对细胞生长的抑制作用,相差显微镜观察细胞形态变化,AO/EB的荧光核染色观察凋亡细胞形态,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果MTT实验显示IH-901抑制BEL-7402细胞的生长,呈时间及浓度依赖的方式;显微镜下观察到典型的凋亡形态变化和生化特征:细胞固缩,核染色质凝聚,出现凋亡小体;AO/EB的荧光核染色后,观察到典型的凋亡细胞;流式细胞仪可以检测到凋亡峰,且细胞被阻滞在G0/G1期。结论IH-901能通过诱导细胞凋亡的方式有效地抑制人肝癌BEL-7402细胞的生长,稀有人参皂苷IH-901可能成为一种潜在的抗肝癌药物。     

MiRNA-122对5-氟尿嘧啶诱导BEL-7402/5-FU细胞凋亡的影响

目的探讨微水RNA-122(miR-122)对5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导BEL-7402/5-FU细胞凋亡的影响。方法构建miR-122和阴性对照质粒瞬时转染至BEL-7402/5-FU细胞;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测caspase-8,caspase-9和caspase-3蛋白表达水平。结果仅用miR-122处理BEL-7402/5-FU细胞时,与未转染组和转染对照组比较,miRNA-122转染组细胞凋亡率增加,用10μmol/m L 5-FU作用BEL-7402/5-FU细胞24 h后,与未转染组和转染对照组比较,miR-122转染组细胞凋亡率明显增加;与未转染组和转染对照组比较,转染了miRNA-122的BEL-7402/5-FU细胞中caspase-8、caspase-9和caspase-3前体蛋白表达降低,活化的caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白表达升高。结论 miR-122能够下调BEL-7402/5-FU细胞中caspase-8、caspase-9和caspase-3前体蛋白表达,上调活化的caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白表达,miR-122能促进5-FU诱导的BEL-7402/5-FU细胞凋亡。     

人参皂苷Rh2对人肝癌Bel-7402细胞增殖和凋亡的影响

目的观察人参皂苷Rh2对人肝癌Bel-7402细胞增殖和凋亡的影响,并初步研究其机制。方法将Bel-7402细胞与人参皂苷Rh(2200、100和50μg/mL)共同培养48 h。MTT法检测人参皂苷Rh2对Bel-7402细胞增殖的影响;流式细胞仪分析细胞周期中各时期的细胞百分数;TUNEL技术检测其对Bel-7402细胞凋亡的影响;Western blotting法检测Bel-7402细胞中Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果 MTT结果显示,人参皂苷Rh2能抑制Bel-7402细胞的生长;流式细胞检测显示,人参皂苷Rh2能使细胞停滞于G1期;TUNEL结果显示,人参皂苷Rh2能有效诱导Bel-7402细胞凋亡;Western blotting结果显示,人参皂苷Rh2能上调Bel-7402细胞中Bax的表达,下调Bcl-2的表达。上述结果均在一定程度上呈量效关系。结论人参皂苷Rh2能抑制Bel-7402细胞生长并促进其凋亡,其作用机制可能为上调Bax和下调Bcl-2。     

CpG ODN刺激PBMC后作用于肝癌细胞BEL-7402杀伤活性的检测

目的 :探讨合成含CpG基序的寡核苷酸 (CpGODN)在肿瘤免疫治疗中的研究。方法 :将CpGODN刺激体外培养的人外周血单个核细胞 (PBMC)后作用于肝癌细胞株 (BEL 74 0 2 ) ,采用MTT法检测其杀伤活性。结果 :加CpGODN组较单独PBMC组杀伤活性明显增高 (P <0 .0 5 )。结论 :CpGODN可刺激PBMC增殖 ,提高PBMC的杀伤活性 ,从而增强机体的特异性和非特异性免疫效应     

奥曲肽对人肝癌BEL-7402细胞生长调控的实验研究

目的 观察生长抑素类似物奥曲肽(OCT)对人肝癌BEL-7402细胞生长调控的影响.方法 培养人肝癌细胞株BEL-7402至对数生长期.MTT比色分析法测定OCT对BEL-7402细胞增殖的影响;流式细胞术分析OCT在10～6mol/L时对BEL-7402细胞周期和凋亡的影响;HE染色观察10-6mol/L OCT作用后BEL-7402细胞形态学改变.结果 1)OCT在一定浓度范围内呈剂量依赖性方式抑制肝癌BEL-7402细胞的生长;2)BEL-7402细胞经10-6mol/L OCT作用后细胞周期发生明显改变.3)10-6mol/L OCT作用后BEL-7402细胞形态学发生明显改变.结论 OCT在抑制肝癌细胞增殖,促进凋亡中起着重要的作用.     

川芎嗪对人肝癌耐药细胞BEL-7402/ADM中P-gp表达的影响

目的观察川芎嗪（TMP）对人肝癌耐药细胞BEL-7402/ADM中P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）表达的影响,研究TMP对人肝癌多药耐药细胞BEL-7402/ADM的逆转机制。方法将人肝癌细胞耐药株BEL-7402/ADM及其亲本细胞BEL-7402分为：亲本组、耐药组、逆转组（耐药＋TMP）、阳性对照组（耐药＋维拉帕米）、二抗阴性对照组,用免疫组化SABC法和流式细胞术对照观察TMP对BEL-7402/ADM中P-gp表达的影响。结果流式细胞术结果显示耐药组显著高于亲本组（P〈0.01）;耐药＋TMP组和耐药＋维拉帕米组均显著低于耐药组和亲本组（P〈0.01）。免疫组化SABC法显示耐药组P-gp阳性表达率显著高于亲本组（P〈0.01）;TMP组、维拉帕米组的P-gp阳性表达率显著低于耐药组（P〈0.01）。结论 TMP能显著降低人肝癌多药耐药细胞BEL-7402/ADM细胞表面P-gp的表达,增加阿霉素等化疗药物对BEL-7402/ADM的细胞毒性作用,从而增加对肿瘤细胞的抑制率,提高化疗疗效。     

根皮素诱导肝癌BEL-7402细胞凋亡

目的 研究根皮素诱导肝癌细胞系BEL-7402细胞凋亡.方法 MTT法测定BEL-7402细胞毒性,荧光显微镜观察细胞形态学的变化,流式细胞仪分析细胞周期和线粒体膜电位的变化.发色底物法检测Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9活性变化.结果 根皮素对BEL-7402细胞IC50在89.23 μg/mL.BEL-7402细胞生长曲线表明,根皮素浓度增高,生长率明显下降.细胞凋亡可在40～160 μg/mL根皮素处理后24 h出现.凋亡细胞主要表现为核染色质固缩,荧光染色增强.根皮素阻断细胞于G1期,线粒体膜电位降低.Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9被激活,呈时间依赖性改变.根皮素处理BEL-7402细胞12 h Caspase-9活性最高,而Caspase-6活性在18 h达峰值,Caspase-3活性峰值时间在24h后.结论 根皮素可以诱导BEL-7402细胞发生凋亡,途径可能是通过线粒体旁路.     

D-葡萄糖同系物作为人类肝癌细胞BEL-7402荧光探针的价值

目的 评价荧光D-葡萄糖同系物2-NBDG作为肝癌细胞BEL-7402荧光探针的价值.方法 肝癌细胞株BEL-7402培养24h后分为实验组及对照组,其中实验组加入5 mmol/L D-葡萄糖的DMEM培养基,对照组加入不合5 mmol/LD-葡萄糖的DMEM培养基,再将两组各分为两个亚组加入不同浓度的2-NBDG(0.3 mmol/L、1mmol/L),即共4组:0.3 mmol/L2-NBDG +5 mmol/L D-葡萄糖组、1 mmol/L 2-NBDG +5 mmol/L D-葡萄糖组、0.3 mmol/L 2-NBDG组、1mmol/L 2-NBDG组.比较各组细胞荧光强度,分析2-NBDG在肝癌细胞BEL-7402中的摄取及荧光成像情况,以及D-葡萄糖对2-NBDG的抑制竞争作用.结果 0.3 mmol/L 2-NBDG组的相对荧光强度为(78.72±3.78)％,低于1 mmol/L 2-NBDG组的(100.00±8.23)％(P＜0.05).0.3 mmol/L 2-NBDG +5 mmol/L D-葡萄糖组的相对荧光强度为(20.67±1.46)％,明显低于0.3 mmol/L 2-NBDG组的(78.72±3.78)％(P＜0.05).1 mmol/L 2-NBDG +5 mmol/L D-葡萄糖组的相对荧光强度为(22.23±2.01)％,明显低于1 mmol/L 2-NBDG组的(100.00±8.23)％(P＜0.05).结论 2-NBDG可被肝癌细胞BEL-7402快速摄取,并可通过荧光强度的方式量化其摄取程度,D-葡萄糖可竞争性抑制肝癌细胞BEL-7402对2-NBDG摄取.2-NBDG可以作为人源肝癌细胞株BEL-7402的检测荧光探针.     

MiR-195对BEL-7402/5-FU细胞5-氟尿嘧啶耐药性的影响

目的 探讨miR-195对BEL-7402/5-FU细胞5-氟尿嘧啶药物敏感性的影响。方法采用qRT-PCR检测BEL-7402细胞与BEL-7402/5-FU细胞中miR-195的表达水平。将miR-195质粒载体瞬时转染至BEL-7402/5-FU细胞;MTT检测细胞药物敏感性的改变。结果相比于BEL-7402细胞,miR-195在BEL-7402/5-FU细胞中表达水平下调;miR-195转染组的细胞增殖抑制率较miRNA阴性对照组及未转染组明显增高。结论MiR-195能够增加BEL-7402/5-FU细胞对5-氟尿嘧啶的药物敏感性,抑制细胞增殖。     

circ0090521对肝癌细胞增殖及凋亡的影响机制研究

目的 本研究旨在探讨circ0090521的异常表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 以人正常肝细胞HL-7702和人肝癌细胞HepG2为细胞模型,应用siRNA对HepG2中的circ0090521进行基因敲减,然后将实验分为四组：对照组、肝癌组、si-NC组、si-circ0090521组。CCK-8法对细胞增殖速率进行检测;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;qRT-PCR法检测circ0090521的表达情况;qRT-PCR、Western Blot法和ELISA法分别检测STAT3、Bcl-2、Bax、caspase-3的mRNA相对表达量和蛋白表达及活力情况。结果与对照组比较,肝癌组的circ0090521水平明显升高（P<0.05）。与肝癌组比较,si-NC组中circ0090521表达水平无明显变化,而si-circ0090521组circ0090521水平明显降低（P <0.05）。与肝癌组比较,sicirc0090521组细胞增殖速率显著降低（P<0.05）,而si-NC组无明显变化。与肝癌组比较,si-circ0090521组B...