环介导技术在流感检测中的应用与研究

目的建立并应用RT-LAMP检测新甲型H1N1、季节性H1N1和季节性H3N2亚型流感病毒及乙型流感病毒。方法通过在线软件Primer Explorer V5设计针对新甲型H1N1、季节性H1N1和季节性H3N2亚型及乙型流感病毒基因的保守区引物,建立RT-LAMP检测方法,对2012年-2013年采集的疑似咽拭子标本采用real-time PCR和RTLAMP法检测。结果 615份标本中,real-time PCR法检出295份阳性,RT-LAMP法检出294份阳性,2种方法的检测结果差异无统计学意义(P0.05)。2种方法所建立的季节性H1N1、季节性H3N2、新甲型H1N1、乙型的检测体系只与相应亚型流感病毒呈阳性反应,而对禽流感病毒H5、禽流感病毒H9、RSV、RV、EV71扩增结果为阴性。RT-LAMP检测方法具有良好的敏感性和特异性。结论 RT-LAMP法使用水浴锅进行等温扩增,结果在可见光或紫外灯下直接肉眼观察。RT-LAMP检测方法具有高度的敏感性、准确性、高特异性,而且简单、快速,比real-time PCR更适合应用于基层疾病预防控制中心和医院。     

环介导等温技术在假结核耶尔森菌检测中的应用

目的:参照环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)的基本原理、特点,并应用于假结核耶尔森菌(Yersinia pseudotuberculosis,Y.pseud)的检测。方法:应用LAMP技术,针对Y.pseud的inv基因设计合成6条引物(2条内引物,2条外引物及2条环引物),对12株耶尔森菌进行检测,并将其结果与传统结果相比较。结果:所检测的菌株样本中3株Y.pseud经LAMP检测均显绿色为阳性,而其余致病性和非致病性的Y.ent均显橙色为阴性。结论:LAMP方法快速、特异性强且操作简便,极适宜在基层实验室应用。     

双色实时荧光PCR法快速检测感染性腹泻人群中的沙门菌和志贺菌

目的调查沙门菌和志贺菌在南京市腹泻人群中的分布情况,为做好防治工作提供资料。方法对监测哨点医院腹泻患者的粪便样本提取核酸,采用双色实时荧光PCR方法对携带SsaR毒力基因的沙门菌属和携带Ipah毒力基因的志贺菌属进行检测,阳性样本再采用传统分离培养方法进行分离,获得的可疑菌株采用ATB生化鉴定,血清凝集确认血清型,从而了解这2种病原菌在腹泻人群中的检出率和相应菌型的分布情况。结果在检测的1 558份样本中,检出沙门菌25株,检出率为1.60%;志贺菌9株,检出率为0.58%。结论本市2012年-2013年肠道门诊腹泻中,分离志贺菌属以福氏志贺菌为主,宋内志贺菌次之,无鲍氏志贺菌和痢疾志贺菌。沙门菌属以D群和C1群血清型为相对优势血清型,血清型分布较广。     

沙门菌显色培养基在健康体检沙门菌检测中的应用

传统检测沙门氏菌的培养基以SS、HE为主,但柠檬酸杆菌,变形杆菌在上述培养基上与沙门菌不易区分,若用沙门菌显色培养基成本太高,不适宜基层防疫站在健康体检沙门菌检测中的大量应用,此次采用可疑菌接种三糖铁并同时点种沙门氏显色培养基的大量应用,此次采用可凝菌落接种三糖铁并同时点种沙门菌显色培养基的方法,不仅减少工作量,还提高检出率,具体实验过程如下.     

余姚市腹泻患者沙门菌检测与分析

目的了解浙江省余姚市感染性腹泻患者中沙门菌感染情况、血清分型及药物敏感情况,为制定预防措施和临床治疗提供参考依据。方法采集感染性腹泻患者的粪便或肛拭样本进行增菌培养、细菌分离、生化鉴定、血清分型及药敏试验。采用SPSS 15.0软件分析,率的比较采用χ2检验,P0.05为差异有统计学意义。结果 1 353份腹泻患者粪便中检出沙门菌41株,检出率3.03%;分为9种血清型。检出率最高的是鼠伤寒沙门菌(46.34%);其次是肠炎沙门菌(14.63%)。对头孢类、喹诺酮类、β-内酰胺类、氨基糖苷类敏感率较高,对头孢他定、氧氟沙星和亚胺培南敏感率为100%;检测发现有耐药菌18株,占43.90%。其中单耐药菌1株,多重耐药菌17株,其中1株沙门菌耐10种抗生素。结论余姚市沙门菌的优势菌是鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌,多重耐药菌的检出可以指导临床合理选择及使用抗生素。     

北京市2008--2009年沙门菌感染性腹泻现况研究

近几年国内外的暴发疫情提示沙门菌可能仍然是腹泻病的一个重要病原体,本研究于2008年5月至2009年12月在北京市肠道门诊进行调查,以了解腹泻病例发病特征及沙门菌感染状况,分析沙门菌菌型分布.     

吉林省感染性腹泻分离的肠炎沙门菌基因同源性研究

目的 分析吉林省感染性腹泻病例分离的肠炎沙门菌基因型别分布与同源关系,为预防控制吉林省内流行肠炎沙门菌引起的感染性腹泻、实现暴发早期识别提供依据.方法 将2014-2016年吉林省分离的117株肠炎沙门菌进行多位点可变数量串联重复序列(MLVA)分子分型,并利用BioNumerics7.6软件进行聚类分析.结果 117...     

食源沙门菌DNA环介导恒温核酸扩增法检测

沙门菌是食源性致病菌中一个主要的属,在各类细菌性食物中毒事件中,沙门菌造成的食物中毒位居前列^[1,2].常规的沙门菌检测方法费时费力,已经不能满足食品生产质量控制的要求^[3].因此,需要开发一种灵敏度高并且反应迅速的方法.Notomi等开发出一种新的恒温核酸扩增法—环介导恒温核酸扩增法(loop-mediated isothermal amplification of DNA,LAMP)^[4,5].本研究利用DNA环介导恒温核酸扩增法对市售不同生肉来源的沙门菌进行快速检测,并且着重在灵敏度和特异性方面对此方法进行验证,以建立的LAMP反应条件能够对今后病原微生物的检测研究工作提供参考依据.     

环境水体中沙门菌环介导等温扩增快速检测方法

目的 建立环境水体中沙门菌的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测方法.方法 以沙门菌的特异性基因(phoP)序列为靶序列,于63℃恒温条件下扩增1h,80℃灭活10 min,扩增产物通过肉眼观察即可判断检测结果.结果 该方法对超纯水加标水样中沙门菌的检测限可达3.07 fg/μl,对环境加标水样的检出限为2.39×10 cfu/ml.结论 该方法灵敏度高、耗时短、方法简便,适用于现场或者基层实验室进行环境水体中病原微生物的快速检测.     

环介导等温扩增（LAMP）技术检测沙门菌属方法的建立

建立一种检测沙门菌属快速敏感的环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）检测方法。针对沙门菌属侵袭蛋白（invA）基因序列的六个区域设计四条LAMP引物，65℃保温约60min，完成对沙门菌属的扩增，扩增产物经电泳和酶切鉴定。利用LAMP和普通PCR方法同时检测4株沙门菌和9株非沙门菌（对照组）来验证LAMP方法的特异性；将肠炎沙门菌菌液做一系列10倍稀释后用LAMP和PCR方法进行检测来比较两者敏感性。4株沙门菌扩增出LAMP特征性梯状条带，9株非沙门菌没有出现LAMP扩增，LAMP产物的特异性通过限制性内切酶得到了证实；LAMP检测沙门菌属的特异性与普通PCR相同，但其敏感性比普通PCR高10倍，LAMP检测沙门菌属的检测下限为10cfu／ml，PCR检测下限为100cfu／ml。LAMP检测速度相比PCR更快速，在60min内即可完成扩增反应。建立了一个快速、特异、敏感的沙门菌属LAMP检测方法。     

儿童感染性腹泻中沙门菌血清型及耐药性分析

目的探讨腹泻患儿感染沙门菌的血清型分布及耐药性。方法收集2017年1至12月在郑州大学附属儿童医院消化内科就诊的门诊及住院患儿腹泻粪便标本进行分离培养,对分离的沙门菌进行血清学分型和药物敏感试验。分析患儿腹泻季节性差异及不同血清型对抗菌药物的敏感性差异。结果在检测的2 037例标本中,分离到124株沙门菌,阳性率为6.09%;共检测有12种血清型,其中以肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌为主,分别占24.19%(30/124)和20.97%(26/124)。冬季沙门菌分离率最低(2.03%),夏季最高(7.83%),不同季节沙门菌分离率比较差异有统计学意义(χ2=15.902,P <0.05)。沙门菌对三、四代头孢菌素的耐药率较高,其中头孢噻肟的耐药率高达31.45%、头孢他啶和头孢吡肟的耐药率均>20.00%,喹诺酮类抗生素中对左氧氟沙星耐药率为72.58%,环丙沙星耐药率高达93.55%。不同血清型对抗菌药物的耐药率不同,肠炎沙门菌对喹诺酮类抗菌药物耐药率高于其他沙门菌,而氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦和派拉西林/他唑巴坦的耐药率均低于其他沙门菌。结论沙门菌血清群可被认为是儿童急性腹泻的重要病原体之一,引起感染性腹泻的沙门菌主要为肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌,各血清型沙门菌对抗菌药物的耐药性有所不同,头孢类抗菌药物仍可作为治疗儿童腹泻沙门菌感染的首选。     

环介导等温扩增技术在食品检测中的应用

环介导等温扩增技术（LAMP）是一种新兴的快速扩增技术,以其快速、灵敏、特异、简便等优点在食品检测中得到了广泛应用。作者在介绍LAMP技术的原理和特点的基础上,就其在国内外食品致病菌安全检测方面的一些应用进行了综述,以期为我国食品检测和同类研究提供参考。     

实时荧光PCR技术在预防性健康检查沙门菌与志贺菌检测中的应用

目的将实时荧光PCR技术应用于食品及公共场所从业人员肛拭标本的沙门菌与志贺菌检测,评价其作为快速检测方法的适用性。方法采集肠道门诊粪便与肛拭标本分别利用实时荧光PCR法与传统培养法进行平行对照实验,验证实时荧光PCR法的灵敏度与特异度;然后将此法与列联表结合应用于从业人员肛拭标本的检测。结果 515份肠道门诊标本的检测结果表明,实时荧光PCR法阳性率高于培养法(P0.05),沙门菌与志贺菌的灵敏度均为100.00%,特异度分别为98.98%、97.02%。检测2013年采集的从业人员肛拭标本21 590份,检出沙门菌18株,阳性率为0.83‰;未检出志贺菌。实时荧光PCR法检出率高于2014年同期传统培养法检出率。结论实时荧光PCR技术有助于提升预防性健康检查中沙门菌与志贺菌的检出率,而且特异度强、灵敏度高,兼具时效性与客观性,适合基层实验室对从业人员进行沙门菌与志贺菌的快速筛查。     

应用PCR技术快速检测沙门菌

[目的]建立用于快速和特异检测沙门菌的PCR方法。[方法]将受试菌种按煮沸裂解法提取DNA,针对hns与invA基因序列合成2对PCR引物,对沙门菌标准菌株和其他菌属的菌株进行PCR检测,并用福建省2006—2007年沙门菌临床分离株137株进行验证。[结果]沙门菌标准菌株hns和invA基因均为阳性;137株沙门菌临床分离株hns和invA基因的阳性率分别为100％和99．3％,其他菌属的菌株无特异性条带。[结论]本研究建立的PCR方法可用于检测沙门菌属。     

沙门菌检测技术现况

沙门菌是重要的人畜共患肠道传染病病原菌，经粪一口途径传播，少数介水传播，大多数由食物传播。近年来，因来源于动物源性生物制剂的化妆品日益增多，沙门菌亦被列入化妆品中微生物的控制指标。因此，沙门菌病的防治备受公共卫生、畜牧兽医和检疫商检等有关部门的关注，均将沙门菌列为重要的监测和控制对象。     

沙门菌显色培养基在食品检测中的应用

[目的]了解沙门菌显色培养基检测食品沙门菌分离和初步鉴定的作用。[方法]将100株实验室保存的沙门菌及非沙门菌接种CAS和DHL培养基平板进行对比。同时取178份食品样品增菌后接种CAS和DHL平板做比较试验。[结果]沙门菌在CAS平板上呈现特定而典型的紫红色菌落,非沙门菌呈蓝色或无色菌落,食品样品中沙门菌的检出率为3.37%(CAS)和1.69%(DHL)。[结论]采用CAS选择性平板分离沙门菌具有直观易鉴别、减轻工作量和检出率较高等优点,适用于暴发性沙门菌感染引起的食物中毒检测。     

实时荧光PCR检测技术在沙门菌血清鉴定中的应用

目的 探究实时荧光PCR检测技术在沙门菌血清分型中的应用。方法 选取2010—2015年无锡市健康从业人员肠道分离得到的144株沙门菌,分别采用传统玻片凝集法和实时荧光PCR法进行血清分型,以前者为金标准,比较两种方法的一致性。结果 144株沙门菌利用传统玻片凝集法均可分型,共鉴定出28个型别。两种方法鉴定结果一致的有134株菌,符合率为93.06%,Kappa值为0.68,具有高度一致性。结论 实时荧光PCR法对沙门菌进行血清分型与玻片凝集法鉴定结果一致性高,且检测时间较短,操作简单;对不常见血清型或存在交叉情况时,建议两种方法联合使用,可提高沙门菌血清分型检测效率。     

重组酶介导扩增技术快速检测沙门菌方法的建立

目的采用重组酶介导核酸扩增方法(Recombinase aided amplification,RAA),建立沙门菌快速检测方法。方法根据沙门菌的inv A基因设计引物和探针,通过构建含目的基因片段的质粒分析RAA方法的灵敏度,通过检测大肠杆菌、志贺菌验证方法的特异性,并检测沙门菌阳性样本进行验证。结果建立的方法在39℃下进行,检测时间在20min以内,检测下限为102拷贝/μl,与大肠杆菌、志贺菌无交叉反应,特异性良好。结论建立的RAA检测方法具有快速、灵敏、特异以及操作简便等特点,适用于沙门菌的快速检测。     

沙门菌实验室检测技术研究进展

自从1885年分离出沙门菌后,对沙门菌的检验普遍采用传统培养方法,其检验结果需4~7天,该综述描述了沙门菌检测领域的研究进展,从各种免疫学检测方法到各种分子生物学的检测方法的发展过程,直到最近几年新出现的环介导等温扩增（LAMP）技术检测沙门菌。反映了人类在检测沙门菌方面进行了不断的创新,一直在追求一种简单、快速的检测方法。