福建省嗜肺军团菌KatB基因分布研究

目的 了解福建省公共场所中央空调冷却塔水及冷凝水分离的嗜肺军团菌KatB基因携带状况.为该病防控提供基础研究资料.方法 采用PCR法对2008-2010年从其水中分离的84株菌株进行KatB基因检测.结果 从冷却塔水分离的78株中有25株扩增出了2.7 kb的KatB毒力基因片段.阳性率为32.1％;在25株阳性菌株中...     

军团菌rcp毒力基因的聚合酶链反应检测方法研究

目的 建立军团菌rcp毒力基因聚合酶链反应(PCR)检测方法.方法 根据GenBanK公布的嗜肺军团菌核苷酸序列合成军团菌rcp毒力基因的特异引物,采用PCR方法对2005年-2007年天津市中央空调冷却塔分离的16株嗜肺军团菌、杜氏军团菌(Legionella dumoffii,L.dum)、博氏军团菌(Legionella bozemanii,L.boz)、长滩军团菌(Legionellafeeleii,L.fee)等菌株进行了军团菌毒力基因rcp的检测.结果 3株嗜肺军团菌扩增出了900 bp的rcp基因片段,其余菌株未扩增出该基因片段.结论 本研究建立的军团菌毒力基因rcp的PCR检测方法具有较高的特异性和敏感性,适于军团菌毒力基因的深入研究.

Abstract：

Objective To establish a polymerase chain reaction method for the detection of the rcp virulence gene of L. pneumophila. Methods Sixteen strains of Legionella pneumophila, L. dumiffii, L. bozemanii and L. Longbeachae isolated from the cooling towers of the centralized air-conditioning systems in Tianjin form 2005 to 2007 were detected by polymerase chain reaction method using L. pneumophila rcp virulence gene-specific primer according to GenBank published nucleotide sequence. Results The 900 bp rcp genetic fragment was amplified in three strains of L. pneumophila, while others not. Conclusion The rcp virulence gene-based polymerase chain reaction method for the detection of L. pneumophila has been successfully established and is the foundation for the studies of Legionella virulence.     

军团菌KatB毒力基因聚合酶链反应检测技术的建立及应用

为建立军团菌KatB毒力基因聚合酶链反应(PCR)检测方法 ,根据GenBanK公布的嗜肺军团菌核苷酸序列合成军团菌毒力基因KatB的特异引物,采用PCR方法 对2005-2007年天津市中央空调冷却塔分离的嗜肺军团菌、杜氏军团菌、博氏军团菌、长滩军团菌等菌株进行了军团菌毒力基因KaLB的检测.结果 显示,本室分离的16株致病军团菌中有9株嗜肺军团菌和1株杜氏军团菌扩增出了2.7 kb的KatB基因片段,其余菌株未扩增出该基因片段.本研究成功建立了军团菌毒力基因KatB的PCR检测方法 ,为军团菌的毒力研究奠定了基础.     

辽宁省空调冷却水中非嗜肺军团菌基因分型与毒力初探

目的了解辽宁省集中空调冷却水中检出的非嗜肺军团菌基因分型,并对其携带的毒力基因情况进行调查。方法采用16SrDNA和mip基因作为引物对2013～2017年辽宁省各大公共场所空调冷却水中分离到的9株非嗜肺军团菌基因分型鉴定,同时对它们分泌的系统毒力岛基因组进行了检测。结果检出4株茴芹军团菌(L.anisa),2株吉斯特军团菌(L.geestiana),1株沃斯利军团菌(L.worsleiensis),2株红光军团菌(L.rubrilucens);9株非嗜肺军团菌中有8株携PAI毒力基因。结论辽宁省公共环境集中空调冷却系统中存在非嗜肺军团菌,以茴芹军团菌居多,且多数分离菌株携带毒力基因,是可致病性病源菌。     

嗜肺军团菌基因检测及分子特征研究

目的:了解外环境水中分离的嗜肺军团菌菌株的基因特征及遗传背景。方法:40株分离株分别经血清学凝集试验、胶乳凝集试验确定为LP1型嗜肺军团菌后,利用普通PCR技术对军团菌属5S rRNA基因和嗜肺军团菌mip毒力基因的特异序列进行扩增,应用实时荧光定量PCR技术扩增嗜肺军团菌mip基因,使用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型技术对菌株进行全染色体DNA酶切电泳分型,并用BioNumerics Version 4.0软件进行聚类分析。结果:所有的菌株均带有属特异性5S rRNA基因及mip毒力基因,PFGE聚类分析结果显示大多数菌株的遗传相似度有一定差异。结论:所有菌株经普通PCR或定量PCR均相应扩增出其特征基因,PFGE聚类分析结果提示浙江省散在水系中分离的嗜肺军团菌菌株存在遗传多样性。     

嗜肺军团菌荧光定量PCR检测

目的 建立特异、快速、敏感的TaqMan探针荧光定量PCR方法,用于检测嗜肺军团菌mip基因。方法 嗜肺军团菌及其他军团菌DNA模板来自中国疾病预防控制中心呼吸道室,嗜肺军团菌地方株及其他对照株由本中心菌种室供给。利用嗜肺军团菌mip基因保守序列设计引物和TaqMan探针,对其进行筛选,同时对荧光定量PCR反应条件和反应体系进行优化,并对嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及其他细菌进行检测,验证该方法的特异性、敏感性、重复性等。结果 该方法在检测多株嗜肺军团菌时,均出现阳性信号,而对非嗜肺军团菌和其他细菌则未有阳性扩增结果出现。检测灵敏度达10个拷贝/反应,从菌株核酸的提取至检测完成仅需2 h左右,可减少常规PCR操作的污染机会。结论 TaqMan荧光定量PCR方法可定量检测嗜肺军团菌,具有特异性高、快速、敏感等特点,适于外环境污染源状况的调查及应急事件的快速定量检测。     

土壤中的军团菌和嗜肺军团菌PCR检测研究

目的调查土壤中军团菌的污染状况并探讨土壤中军团菌的污染来源。方法于2009年7—9月,在江苏省南京市冷却塔水军团菌培养法阳性的公共场所集中空调冷却塔0～2m处及距离冷却塔2km的居民区分别采集20件和10件土壤样品。普通聚合酶链反应(PCR)方法扩增军团菌属5SrRNA基因,巢式PCR方法扩增嗜肺军团菌种Mip基因,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。结果冷却塔旁土壤和居民区土壤中军团菌阳性率分别是80%(16/20)和70%(7/10);嗜肺军团菌阳性率分别是55%(11/20)和0。冷却塔旁土壤中军团菌的阳性率与居民区土壤比较,差异无统计学意义(χ2=0.373,P=0.542)。结论环境土壤中存在军团菌,受集中空调冷却塔水污染的土壤中可检出嗜肺军团菌。     

嗜肺军团菌不同分子分型方法检测

目的采用2种分子分型方法对冷却塔水中嗜肺军团菌进行检测分析。方法分别应用扩增军团菌巨噬细胞感染力增强因子基因(Macrophage Infectivity Potentiator,MIP)后测序的分型方法以及脉冲场凝胶电泳(PFGE)对48株嗜肺军团菌进行分型。结果MIP分型方法将48株嗜肺军团菌分为5类,分别为,i>L.pnuemophile-phil-1、L.pnuemophile-phil-sg3、L.pnuemophile-phil-D-15、L.pnuemophile-phil-sg10、L.pnuemophile-phil-97-2898,其中L.pnuemophile-phil-1为优势菌群,占60.4%。PFGE分型方法将48株嗜肺军团菌分为23类,无优势菌群。结论PFGE分型方法具有更高的分型能力,更有利于流行病学溯源、调查。     

酶底物定量法检测水中嗜肺军团菌

目的 建立水中嗜肺军团菌定量检测法—酶底物定量法。方法 通过加标比对试验确定酶底物定量法的样品保存条件以及试验条件;通过酶底物定量法与传统培养法对采集的水样加标前后测定结果的比对,获得该方法的准确度、精密度、特异性和灵敏度等技术指标,确定该方法的检测性能。结果 酶底物定量法的样品应在含硫代硫酸钠的无菌采样容器中,常温条件下送往实验室完成检测;试验最适培养条件为36℃下培养7 d;准确度(回收率)范围在109%～113%;精密度RSD为0.37%～2.46%;方法特异性为94.59%,灵敏度为92.31%;50份实际样品测定时,酶底物定量法结果与真值的一致性为94%,准确度和灵敏度均高于传统培养法。结论 酶底物定量法具有较好的准确度、精密度、特异性和灵敏度,适用于批量样品筛查以及较低水平嗜肺军团菌污染时的测定,是水中嗜肺军团菌标准检验方法的有益补充,同时为国标方法修订提供技术储备。     

应用PCR检测环境水体中的嗜肺军团菌

目的　建立检测Mip基因的PCR方法,以检出环境水体中的嗜肺军团菌。　方法　采用Godkey软件设计引物,制备菌种模块,对模拟和环境水样进行处理,然后作PCR扩增及其产物检测。　结果　该方法检测军团菌的灵敏度为5 .8×10 2 cfu/ml,6株标准军团菌均扩增出65 0bp的条带,4株非嗜肺军团菌和4株非军团菌无条带出现;检测71份环境水样,5份阳性,阳性率为7.0 %。　结论　该方法快速、灵敏、特异,为水体中的嗜肺军团菌检测提供了有效方法     

嗜肺性军团菌的遗传学

嗜肺性军团菌是人类呼吸道疾病一军团病的致病菌。本菌为需氧性革兰氏阴性杆菌,广泛分布于水环境中。嗜肺性军团菌对人的致病性是由于本菌能进入肺泡巨噬细胞和单核细胞内,并且可以繁殖的缘故。由于嗜肺性军团菌也可以在实验室人工培养基上生长,故将其分类为兼性细胞内致病菌。对嗜肺性军团菌和人单核吞噬细胞间的相互作用已做过十分详细的检查。嗜肺性军     

嗜肺军团菌分子分型研究进展

军团菌病主要由嗜肺军团菌引起,尤其以血清1型为多见。在军团菌病暴发流行时,为了了解环境标本与病人标本来源的分离株的亲缘关系,需要对其进行分型。目前主要有表型分型和分子分型。表型分型只能了解最基本的分型信息,而新近发展起来的基于DNA水平的分子分型在疫情的溯源及细菌群体进化研究中发挥着越来越重要的作用。该文对嗜肺军团菌分子分型方法进行综述。     

嗜肺军团菌聚合酶链反应检测方法及其应用研究

根据嗜肺军团菌基因组ＤＮＡ的种特异性ＤＮＡ片段序列，合成一对引物进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）。经琼脂糖凝胶电泳、ＥＢ染色结果表明，一条８７０ｂｐ的核苷酸区带为嗜肺军团菌１～１４血清型菌株所共有。ＰＣＲ检测水中军团菌，其敏感性为３５０ｃｆｕ／ｍｌ，而用同位素标记探针、斑点杂交法检测，其敏感性为４３ｃｆｕ／ｍｌ。ＰＣＲ检测人工感染嗜肺军团菌的豚鼠组织标本，阳性率为８３．３％，而细菌分离培养的阳性率仅为２６．６％。在现场调查中，用ＰＣＲ法初步验证了一起由Ｌｐ１０引起的军团菌病爆发。上述结果表明，ＰＣＲ法能快速、敏感、特异性检测嗜肺军团菌感染。     

聚合酶链反应检测空调冷却水中的嗜肺军团菌DNA

目的: 检测中央空调系统冷却水的嗜肺军团菌污染状况。方法: 建立了嗜肺军团菌MIP基因DNA的PCR检测方法,并对中央空调冷却水进行了嗜肺军团菌DNA的检测, 同时使用了BYCE培养基进行标本的军团菌分离培养。结果:在所有30 个受测系统水样中, 有12 (40% ) 个嗜肺军团菌DNA检测阳性, 与此同时只有6 个嗜肺军团菌经BYCE培养基培养阳性, 两种方法敏感性差别有统计学意义 (P< 0.05)。结论: 中央空调冷却水中嗜肺军团菌的污染有相当的普遍性     

嗜肺军团菌荧光定量PCR检测方法的建立

目的：建立嗜肺军团菌mip基因荧光定量PCR检测方法。方法：利用Primer Express软件设计特异性引物和探针,对质粒标准品、嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及其他菌株进行检测,验证方法的特异性、敏感性和重复性,最后采集环境样本进行检测。结果：该方法特异性好,嗜肺军团菌呈现阳性结果,而非嗜肺军团菌及其他菌株均为阴性结果。检测灵敏度达293copies／μl;重复性较好,Ct值变异系数较小;检测的12份环境样本中5份阳性。结论：该方法快速且具有较好的特异性、敏感性、重复性,适于外环境嗜肺军团菌污染调查及应急事件的快速检测。     

嗜肺军团菌的检测方法及临床应用评价

军团菌属是一种常见的需氧革兰阴性杆菌,广泛存在于自然界中,能引起以发热和呼吸道症状为主的疾病,该病首发于1976年的美国一次军人聚会,故称作军团菌病,次年分离出一种新的病原体,1978年,此病原体被命名为嗜肺军团菌(Legionella pneumophila,LP).近年来,随着人们生活水平的提高,军团菌的发病率有上升的趋势,特别是医院感染的增加,引起了人们的高度重视.由于军团菌病缺乏典型的临床表现,与其他病原体引起的肺炎很难鉴别,因此采用特异、敏感、快速的检测方法就显得非常重要.笔者就近年来对嗜肺军团菌的实验室检测方法及临床应用评价综述如下.     

水中嗜肺军团菌检测基础培养基的质量分析

目的为保证水中嗜肺军团菌检测的准确性,对市售的4家厂商的BCYE培养基进行质量分析。方法选取嗜肺军团菌标准株和环境分离株,经过不同处理方式(酸处理、热处理)后分别接种4家厂商的BCYE培养基,对菌落结果进行计数,参考ISO 11133:2014(E)计算生长率,评估检出限。结果嗜肺军团菌标准株和环境分离株在不同处理方式、不同厂商的BCYE培养基的生长率均大于0.5,符合ISO 11133:2014(E)对合格培养基生长率的规定,经Levene方差齐性检验,生长率间比较,差异无统计学意义(P0.05)。除1家厂商的BCYE培养基对嗜肺军团菌标准株的检出限为100 CFU/ml外,其他家厂商的检出限可达到10 CFU/ml。结论 4家厂商的BCYE培养基在生长率评定中均为合格,但有2家对嗜肺军团菌标准株的检出限较高,其可能对活性较弱的嗜肺军团菌检出有一定影响。     

嗜肺军团菌核酸等温扩增快速检测技术研究

目的建立一种嗜肺军团菌的核酸等温扩增试纸条及pH显色快速检测方法,从而实现对空调冷却水样中嗜肺军团菌的快速现场检测。方法基于嗜肺军团菌特异性mip基因设计引物,建立环介导等温扩增体系,并结合反应产物横向流动试纸条和pH显色检测技术,进而验证方法的灵敏性、特异性,并对浙江省不同地区的中央空调冷却水水样进行检测。结果环介导的等温扩增试纸条及pH显色检测方法灵敏度可高达3 cfu/μl,特异性好,且检测时间仅需40 min左右。检测的灵敏度与荧光定量PCR的方法基本一致,对外环境空调冷却水的检测阳性率与荧光定量也相符。结论建立的嗜肺军团菌试纸条与pH显色快速检测方法,灵敏度高,特异性好,适合现场快速检测。     

环境水中嗜肺军团菌分离培养与巢式PCR检测研究

] 目的应用分离培养法与巢式聚合酶链反应法(PCR)检测深圳环境水中军团菌最新污染状况.方法 于2012年9月-2012年11月采集商场、宾馆和综合性医院三类场所的中央空调冷却水、淋浴水、自来水、景观水,分别用传统分离培养法与巢式聚合酶链反应法(PCR)检测嗜肺军团菌。结果本次共检测环境水样171份,其中传统分离培养法检出64份嗜肺军团菌,巢式聚合酶链反应法(PCR)检出130份嗜肺军团菌,水样的阳性率分别为37.4%和76%;结论 深圳多种水源存在军团菌污染;巢式聚合酶链反应法(PCR)检出率高于传统分离培养法。     

嗜肺军团菌感染37例分析

在 2 0 0 3年抗击“非典”的特殊日子里 ,我区按照卫生部的要求 ,对符合《传染性非典型肺炎临床诊断标准 (施行 )》[1] 4条或仅符合第 2、3、4条的病人进行了隔离治疗 ,以做到早发现、早诊断、早报告、早隔离、早治疗病人。在 4～ 5月全国“非典”疫情较严重期间 ,我区各医疗机构共隔离治疗病人 13 9例 ,经我疾病预防控制中心采样送上海市疾病预防控制中心防疫科实验室检测 ,其中 3 7人为嗜肺军团菌感染 ,占总病例的 2 6.62 % ,位居本次检测的常见呼吸道致病菌之首 ,第 2位为乙型流感病毒 ,占10 .79% ,第 3位为肺炎支原体 ,占 7.19%。现将 3…