直接涂片法、乳胶免疫层析法检测淋球菌效果比较

目的：比较直接涂片法、乳胶免疫层析检测淋球菌效果。方法：收集2017年8月-2022年8月本院就诊临床疑似淋球菌感染的患者216例标本,其中男性尿道分泌物标本115例、女性宫颈分泌物标本101例。以细菌培养法检测为金标准,比较直接涂片法和乳胶免疫层析法检测淋球菌效果。结果：细菌培养法显示,216例临床样本中,淋球菌阳性173例(80.1%)、阴性43例(19.9%),115例男性标本中淋球菌阳性96例(83.5%)、阴性19例(16.5%),101例女性标本中,淋球菌阳性77例(76.3%)、阴性24例(23.8%)。与金标准比较,直接涂片法216例样本检出淋球菌阳性154例(71.3%),115例男性样本中检出淋球菌阳性85例(82.6%),101例女性样本中检出淋球菌阳性59例(58.4%);乳胶免疫层析法216例样本中检出淋球菌阳性177例(81.9%),115例样本中检出淋球菌阳性96例(87.8%),101例女性样本中检出淋球菌阳性76例(75.3%)。乳胶免疫层析法对所有样本、男性样本、女性样本中检出淋球菌的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确度均高于直接涂片法。直...     

聚合酶链反应检测慢性淋球菌感染

６８例拟诊慢性淋病患者的尿道和宫颈分泌物标本作淋球菌ＰＣＲ聚合栈链反应检测与淋球菌培养和直接涂片法比较,结果ＰＣＲ阳性率为７２．１％,培养阳性率３３．８％,标本直接涂片阳性率为２７．９％,而培养阳性者,ＰＣＲ检测全部阳性,但在涂片１９例阳性中,有２例培养和ＰＣＲ检测均阴性。由此可见ＰＣＲ对诊断慢性淋病具有灵敏度高、特异性强、简便、快速的新方法,帮笔者认为ＰＣＲ检测既可作为急慢性感染的诊断依据,又可     

实时荧光核酸恒温扩增技术在淋球菌检测中的应用评价

目的评价实时核酸恒温扩增检测技术(SAT)在淋球菌检测中的应用价值。方法对204例疑似淋球菌感染患者的生殖道拭子分别进行SAT、PCR法及培养法检测,同时对其尿液标本进行SAT检测。分别对生殖道拭子和尿液标本SAT检测结果与生殖道拭子PCR法和培养法检测结果进行比较分析。结果 204例疑似患者拭子标本中,SAT法检出阳性90例,高于培养法而略低于PCR法,但阳性率差异均无统计学意义(P0.05)。其中有3例患者拭子标本SAT检测阳性而尿液标本检测为阴性,符合率为98.53%,两者阳性率差异无统计学意义(P0.05)。以淋球菌培养为金标准,SAT检测拭子标本的敏感度为100%,特异度为91.94%;SAT检测尿液的敏感度为98.77%,特异度为94.31%。结论SAT技术检测拭子及尿液标本中的淋球菌与生殖道拭子PCR法和培养法效果相当,且尿液标本SAT检测作为一种非侵入性采样方法有望替代生殖道拭子标本检测。     

荧光定量PCR基因检测在心血管病患者术后血流感染的诊断应用

目的建立16SrRNA基因荧光定量PCR方法检测心血管病患者术后血流感染的诊断技术,以提高临床细菌检测的准确性及敏感性,缩短检测细菌的时间。方法 2010年4月-2012年3月医院对411例术后疑为血流感染的标本进行常规血液培养,同时进行细菌16SrRNA基因的检测,包括DNA提取、设计引物和探针、聚合酶链反应(PCR)扩增及对扩增产物荧光定量检测,比较二者的诊断阳性率、敏感性和特异性,数据采用SPSS11.0软件进行统计分析。结果荧光定量PCR方法检测血流感染的阳性患者182例,阳性率为44.3%,明显高于血液培养的15.6%,差异有统计学意义(P<0.01);若以血液培养阳性和(或)临床诊断血流感染的标准作为对照,PCR的诊断敏感性为87.9%、诊断特异性为90.6%。结论荧光定量16SrRNA基因检测的阳性率远高于血液培养,可为心血管病患者术后血流感染提供早期、敏感的病原学诊断依据。     

荧光定量PCR基因检测在心血管病患者术后血流感染的诊断应用北大核心CSCD

目的建立16SrRNA基因荧光定量PCR方法检测心血管病患者术后血流感染的诊断技术,以提高临床细菌检测的准确性及敏感性,缩短检测细菌的时间。方法 2010年4月-2012年3月医院对411例术后疑为血流感染的标本进行常规血液培养,同时进行细菌16SrRNA基因的检测,包括DNA提取、设计引物和探针、聚合酶链反应(PCR)扩增及对扩增产物荧光定量检测,比较二者的诊断阳性率、敏感性和特异性,数据采用SPSS11.0软件进行统计分析。结果荧光定量PCR方法检测血流感染的阳性患者182例,阳性率为44.3%,明显高于血液培养的15.6%,差异有统计学意义(P<0.01);若以血液培养阳性和(或)临床诊断血流感染的标准作为对照,PCR的诊断敏感性为87.9%、诊断特异性为90.6%。结论荧光定量16SrRNA基因检测的阳性率远高于血液培养,可为心血管病患者术后血流感染提供早期、敏感的病原学诊断依据。     

漏声表面波生物传感器直接快速检测病原体DNA的实验研究

目的应用漏声表面波生物传感器直接检测从临床标本中提取的HPV基因组DNA。方法选取36例临床确诊为宫颈癌的患者,提取其生殖器分泌物的基因组DNA,并经荧光定量PCR检测为HPV阳性的标本,以14例健康志愿者为阴性对照;利用漏声表面波生物传感器检测临床样本,并与荧光定量PCR法进行方法学比较。结果传感器法检测35例标本为阳性,阳性率为97.22%,而荧光定量PCR法检测36例均为阳性;14例阴性对照标本中,两种方法的检测结果均为阴性;传感器法的检测限为1.21pg/L。结论传感器法与荧光定量PCR法差异无统计学意义,一致性较好,且漏声表面波生物传感器实现了对临床标本中HPV基因组DNA的直接快速检测。     

降钙素原与C-反应蛋白对患儿血流感染的预测研究

目的探讨降钙素原(PCT)和C-反应蛋白(CRP)对患儿血流感染(BSI)中血培养阳性标本预测的研究,为患儿血流感染的诊断提供参考依据。方法选取2014年7月-2015年7月于医院治疗发热的患儿237例,根据患儿血培养的结果分为阳性组67例和阴性组170例,比较两组患儿PCT和CRP的检测结果。结果阳性组患儿PCT的中位值为4.27ng/ml,CRP的中位值为21.73mg/ml,阴性组患儿的PCT的中位值为0.47ng/ml,CRP的中位值为7.64mg/ml,阳性组患儿PCT和CRP的检测结果明显高于阴性组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 PCT的检测结果对预测患儿血流感染血培养为阳性的具有更好的敏感性和特异性,值得推广应用。     

实时荧光定量PCR检测女性淋球菌的评价

[目的]评价实时荧光定量PCR检测方法在诊断女性淋球菌(NGH)感染的效果和可行性,试图寻找一种快速而敏感的淋球菌检测方法。[方法]用革兰染色涂片法、培养法和FQ-PCR法检测女性疑诊淋病患者,其中FQ-PCR法采用宫颈拭子、阴道拭子和尿液3种取材方法进行对比。以培养法为“金标准”,分别计算其敏感性、特异性、阳性预期值和阴性预期值。并对部分患者治疗前后定量结果进行分析。[结果]培养法检测淋球菌的检出率为6.7%,涂片法的敏感性为60.00%,阳性预期值为54.55%。宫颈拭子FQ-PCR、阴道拭子FQ-PCR和尿液FQ-PCR法的敏感性分别为90%、95%和80%,3种FQ-PCR法特异性高达98%。[结论]FQ-PCR法检测女性淋球菌,具有快速、定量准确、较高敏感性和特异性等优点,可弥补涂片法较粗糙、培养法耗时长的缺点。是一种具有临床应用价值的淋球菌快速定量检测方法。     

磁珠法检测抗酸杆菌的方法建立与临床应用

目的运用磁珠法检测痰液标本中的抗酸杆菌,探讨该技术在抗酸杆菌诊断中的临床应用价值。方法采用磁珠法检测102份痰液标本中的抗酸杆菌,并与离心沉淀法平行检测结果相比较。结果同一份标本经磁珠法处理后镜下视野更清晰,抗酸杆菌和背景对比更鲜明,102份痰液标本中离心沉淀法检测的阳性率为47.1%,磁珠法检测的阳性率为51.0%,54份离心沉淀法检测阴性的标本用磁珠法检测有4份阳性,平行检测同一份标本,磁珠法检测出的阳性等级更高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论磁珠检测方法操作简便、快速,其阳性率高,浓缩效果明显,适合结核病检测实验室的推广。     

结核分枝杆菌DNA分子生物学检测

目的探讨利用结核分枝杆菌的核酸扩增(PCR)技术,检测结核杆菌DNA在临床诊断中的价值。方法采用病例对照研究方法,各组诊断采用双盲法,对健康对照组血标本,胸膜炎的胸水标本、腹膜炎的腹水标本、脑膜炎的脑脊液标本和有泌尿系症状的尿液标本,咳痰患者的痰标本进行PCR扩增及ABI-7300仪器荧光检测结核分枝杆菌DNA定量。应用统计学分析阳性率、敏感性、特异性及各组间的统计学意义。结果共检测427例,其中初治涂阳肺结核100例,初治涂阴肺结核100例,肺外结核100例,肺部其他疾病77例,健康对照50例。结核杆菌DNA检测初治涂阳肺结核的阳性率86.0%、敏感性86.0%、特异性96.0%;阳性预测值97.7%、阴性预测值77.4%。初治涂阴肺结核的阳性率42.0%、敏感性42.0%、特异性96.0%;阳性预测值95.5%、阴性预测值45.3%。肺外结核的阳性率34.0%、敏感性34.0%、特异性96.0%。阳性预测值94.4%、阴性预测值42.1%。结论结核分枝杆菌DNA分子生物学检测技术是对传统诊断活动性结核病实验室诊断方法的补充,具有较高的敏感性和特异性,对结核病的诊断有重要的诊断价值,成为结核病诊断和研究的重要手段。     

实时荧光PCR检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的研究

目的建立一种快速、准确检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的实时荧光聚合酶链反应（PCR）方法。方法收集临床诊断或疑似为败血症患者的血标本，直接提取细菌基因组DNA，确定其敏感性；以金黄色葡萄球菌nuc基因和MRSA的mecA基因为靶序列，合成引物，采用实时荧光PCR技术对上述基因进行检测，并将其结果与细菌常规培养结果对比，分析该方法检测MRSA的特异性、灵敏度、阳性预测值和阴性预测值。结果直接从血标本中提取细菌基因组DNA的灵敏度为10’CFU／mL。MRSA阳性血标本实时荧光PCR灵敏度为46．15％，特异性为100．00％，阳性预测值为100．00％，阴性预测值为56．25％。结论使用该方法快速检测临床血标本中MRSA的灵敏度不高，欲应用于临床快速诊断尚有若干问题需解决。     

变性高效液相色谱分析技术对乳腺癌易感基因突变位点检测的敏感性和特异性

目的:探讨变性高效液相色谱分析技术对乳腺癌易感基因突变位点检测的敏感性和特异性。方法:收集202例诊断为原发性乳腺癌女性患者,同时采用PCR/DNA测序法和变性高效液相色谱分析技术检测BRCA1基因突变,以PCR/DNA测序法作为"金标准",评估变性高效液相色谱分析技术的敏感性和特异性。结果:202例乳腺癌标本中,PCR/DNA测序法发现BRCA1基因突变例数为76例,变性高效液相色谱分析技术结果,阳性73例,敏感性为96.1%;PCR/DNA检测结果为阴性126例,采用变性高效液相色谱分析技术,阴性120例,特异性为95.2%。两种检测方法敏感性和特异性无统计学差异(P=0.265,P=0.226)。结论:采用变性高效液相色谱分析技术检测乳腺癌易感基因BRCA1具有较高的敏感性和特异性,与传统检测方法相比,变性高效液相色谱分析技术具有较多的优点,值得推广。     

荧光定量PCR和FISH技术诊断肺结核的价值比较

目的比较荧光定量PCR和FISH技术对肺结核诊断的敏感性和特异性。方法共收集300例明确诊断为肺结核的患者作为阳性对照组,以及收集300例健康志愿者(明确排除肺结核患者)做为阴性对照组。收集800例新收临床疑似肺结核患者做为研究组。收集该800例患者的肺活检标本以及同期的痰液标本,其中痰液进行涂片、结核杆菌分离培养以及结核杆菌DNA荧光定量PCR检测和FISH检测。比较荧光定量PCR和FISH技术对肺结核诊断阳性符合率和阴性符合率。结果 1FISH技术检测结核杆菌阳性符合率为99.3%;荧光定量PCR检测结核杆菌阳性符合率为97.3%。两者阳性符合率存在统计学差别(p=0.015)。2FISH技术检测结核杆菌阴性符合率为98.2%,荧光定量PCR技术检测结核杆菌阴性符合率为96.9%。两者阴性符合率存在统计学差别(p=0.007)。结论与荧光定量PCR比较,FISH对肺结核诊断具有较高的阳性符合率和阴性符合率。     

荧光定量PCR技术和分离培养法检测小肠结肠炎耶尔森菌的比较研究

目的比较荧光定量PCR法和分离培养法在检测小肠结肠炎耶尔森菌中特异性和灵敏度的差异。方法从686份婴幼儿腹泻患儿的粪便标本中提取细菌基因组DNA,在进行小肠结肠炎耶尔森菌保守基因fox A和黏附侵袭位点基因ail的实时荧光定量PCR检测的同时,也按常规方法进行菌株分离培养,并对2种方法的检出结果进行比较分析。结果686份标本中,分离培养法检测结果为阳性4份,阴性682份;荧光定量PCR法检测结果为阳性5份,阴性681份。荧光定量PCR法检出的5份阳性标本中,分离培养法结果为4份阳性,1份阴性。结论采用fox A联合ail基因的荧光定量PCR法特异性强,灵敏度高,且操作简便快速,检测成本低,对于监测小肠结肠炎耶尔森菌有重要意义。     

ELISA方法筛查住院病人梅毒结果分析及筛查方案研究

目的:建立住院病人梅毒筛查方案,以提高梅毒检测的准确性,减少假阳性和假阴性,避免漏检和误诊。方法:先用ELISA方法对14028例住院病人进行检测,对阳性标本再作TPPA及RPR检测,结果以TPPA和RPR最高稀释倍数为阳性报告。结果:以TPPA为确认结果,ELISA梅毒检测敏感性为100%,假阳性率为2.08%,RPR检测敏感性为100%,假阳性率为1.35%;ELISA检测阳性标本OD值大于1.5倍阴性对照OD值又小于2.1倍阴性对照OD值的标本47例(7.7%),OD值小于5倍阴性对照OD值的标本有107例(17.5%),OD值大于5倍阴性对照OD值的标本43例(7.0%)。结论:此筛查方案既能减少假阳性和漏检,又能为临床诊断和治疗提供准确的依据,值得推广应用;ELISA方法检测梅毒要注意钩状效应造成的假阴性结果,阳性的结果要谨慎结合临床表现,才可以诊断是否感染梅毒。     

G试验和GM试验联合痰真菌培养对ICU患者侵袭性真菌感染的早期诊断

目的探讨血清1,3-β-D葡聚糖检测(G试验)及半乳甘露聚糖抗原检测(GM试验)联合痰真菌培养在重症监护病房(ICU)患者侵袭性真菌感染(IFI)早期诊断中的价值。方法选取徐州医科大学附属医院2015年1月—2016年12月重症监护病房(ICU)有高危IFI因素的住院患者,根据IFI的诊断标准将患者分成3组:IFI组(包括确诊及临床诊断)、拟诊IFI组、非IFI组。分析三组患者血清G试验、GM试验和痰真菌培养的结果,评价三者联合检测对IFI的早期诊断价值。结果共调查ICU住院患者264例,其中IFI组56例,拟诊IFI组43例,非IFI组165例。56例诊断IFI患者中,血清G试验阳性46例,GM试验阳性39例,真菌培养阳性34例;三者联合检测的敏感性98.2%、特异性82.4%、阳性预测值65.5%、阴性预测值99.3%、阳性似然比5.58、阴性似然比0.02、Youden指数0.98。三者联合检测的敏感性、阴性预测值均高于G试验、GM试验和痰真菌培养的单独检测,差异均有统计学意义(均P0.05);但是,三者联合检测的特异性、阳性预测值与单独检测G试验、GM试验和痰真菌培养比较,差异均无统计学意义(均P0.05)。结论 G试验、GM试验和痰真菌培养三者联合检测能提高ICU患者IFI早期诊断的敏感性,从而指导临床医生早期治疗IFI。     

肽核酸生物传感器直接检测临床标本中提取的病毒基因组DNA

目的 以肽核酸生物传感器检测系统直接检测从临床标本中提取的乙型肝炎病毒基因组DNA。方法 抽取63例临床免疫学检测证实为乙型肝炎病毒(HBV)感染者标本血清的DNA，以及15例免疫学检测全阴的标本血清中的DNA，分别用肽核酸生物传感器法以及定量PCR法检测，比较两种方法的优劣并确定传感器法的检测限。结果 传感器法检测60例标本阳性，阳性率为95．24％，而定量PCR法检测63例均为阳性；15例阴性血清两种方法检测均为阴性；传感器法的检测限为8．6pg／L；两种方法检测HBV差异无显著性，但传感器检测法所用时间更短，且无需进行探针的标记。结论 利用肽核酸生物传感器成功地绕过了PCR扩增而直接检测出了临床标本中的HBV基因组DNA。     

江苏省传染性非典型肺炎病原学检测研究

目的:建立传染性非典型肺炎(SARS)实验室检测方法,为SARS病例诊断和现场防治提供依据。方法:用逆转录套式PCR、实时荧光定量PCR检测SARS病毒核酸;酶联免疫法检测血清标本SARS病毒IgM抗体;部分PCR检测阳性或SARS病毒IgM抗体阳性病例的标本进行直接电镜观察;简并引物PCR检测冠状病毒属病毒核酸;鉴别诊断IFA检测血清中肺炎支原体等9种常见呼吸道感染病原IgM抗体,PCR检测军团菌以及甲、乙型流感病毒核酸。结果:检测各类临床标本506份。2003年全省报告临床诊断病例7例,5例检测结果阳性;逆转录套式PCR检测各类标本132份,阳性8份;对其中4份PCR扩增产物(108bp)进行了序列分析,与SARS病毒序列100%同源;实时荧光定量PCR检测各类标本30份,阳性3份;酶联免疫法检测血清标本101份,SARS病毒IgM抗体阳性4份;3个诊断病例的各类标本电镜检查发现冠状病毒样颗粒;IFA检测血清标本75份,嗜肺军团菌IgM抗体阳性9份,乙型流感IgM抗体阳性11份,两者同时阳性3份,其他病原体IgM抗体均为阴性。不明发热病例的标本21份简并引物PCR检测冠状病毒,2份咽拭子标本阳性;漱口液、尿液标本各15份PCR检测军团菌、漱口液25份PCR检测甲、乙型流感病毒结果均为阴性。结论:本研究建立的检测方法与临床诊断有比较好的符合性,对于临床诊断和防治工作具有重要的参考价值。PCR检测SARS-CoV特异性较好,而敏感性有待提高。     

玻片酶联免疫吸附法鉴定淋球菌

将分离培养的淋球菌涂片，加淋球菌抗血清，直接在载玻片上进行间接酶联免疫吸附法检测。结果，仅淋球菌出现阳性反应，其他１２株对照菌均为阴性，反应特异性为１００％。６４株临床标本分离株经传统方法鉴定为淋球菌，经本法检测反应均为阳性，两种方法鉴定淋球菌的符合率为１００％。该法简便，经济，省时，适应淋球菌快速鉴定。     

应用3种流感病毒检测方法检测流感样病例病原结果及分析

目的:比较所用流感检测方法的敏感性,确保明确感染因子。方法:在通州区24家医院采用胶体金法现场检测流感样病例咽拭子标本,阳性标本送北京市疾病预防控制中心做禽流感应急检测,阴性标本送通州区疾控中心实验室用RT-PCR法进行流感病毒核酸检测和分型;同时用狗肾细胞(MDCK)细胞培养法做流感病毒分离和血凝实验(HA);将HA≥1:8的病毒培养液送北京市疾控中心复核鉴定。结果:采集经胶体金法(甲型/乙型)检测阴性的流感样病例咽拭子143份,用RT-PCR法检测流感病毒核酸阳性82份,阳性检出率为57.34%,分型全部为甲型;用MDCK细胞培养法分离出流感病毒毒株37株,阳性检出率为25.9%,经分型鉴定,甲1亚型36株、甲3亚型1株;培养法阳性的标本均为RT-PCR法阳性。将HA≥1:8的病毒培养液再次用胶体金试纸检测,37份全部显示甲型强阳性结果,即经MDCK细胞培养阳性的37份病毒培养液用RT-PCR法和胶体金法检测的阳性符合率和型别符合率均为100%。结论:流感病毒胶体金快速检测试剂盒的敏感性较低(尤其是国产试剂盒),存在一定的假阴性结果。如果不提高检测试剂的敏感性,不能单独用做病例诊断或筛查。RT-PCR技术是疑似流感疫情和流感样病例可靠的快速诊断方法;2009年1月通州区流感流行的优势毒株为甲1(H1N1)亚型,同时有甲3(H3N2)亚型毒株的存在。