通州区6类食品单增李斯特菌污染状况及分子流行病学特征调查研究

目的:了解通州区6类食品中单增李斯特菌的污染情况,探讨所污染菌株携带的三个毒力基因(hlyA、iap、prfA)的状况和DNA随机扩增多态性PCR分型情况。方法:依据国标方法,采用全自动微生物分析仪和API Listeria试剂条鉴定系统对样本进行单增李斯特菌分离和生化鉴定;采用聚合酶链反应检测实验菌株携带毒力因子的情况,使用随机引物PCR的方法对菌株进行分子分型。结果:从通州区共采集6类食品样品121件,检出单增李斯特菌18株,检出率为14.9%;18株实验菌株均携带单核细胞增多性李斯特菌特异的毒力因子;随机引物PCR方法将实验菌株分成6个随机引物PCR型别。结论:本区食品中单增李斯特菌污染较为严重,且毒力基因prfA、hly、iap同时存在,说明有潜在的致病能力,应引起相关部门关注;通州区在不同时间、不同地点分离的单增李斯特菌其PCR型别差别较大,有多种型别的细菌存在;也可根据PCR分型看出在食品加工过程中存在着内部污染问题。但来源不同的菌株之间PCR分型无关联,无流行趋势。     

DiversiLab系统单增李斯特氏菌分子分型评估

目的用DiversiLab系统(DVL)对单增李斯特菌进行分子分型,评估其分型能力。方法用DVL对食品中分离的24株单增李斯特菌进行分子分型,并与脉冲场凝胶电泳(PFGE)结果进行比较,探讨DVL的分群能力和分辨率。结果 DVL将24株单增李斯特菌分成9个群,菌株之间的相似度46.7%～99.7%,DVL的相似度明显高于PFGE;DVL将PFGE型别相同的单增李斯特菌分在同一个的群中,也将不同PFGE型别的单增李斯特菌分在不同的群,但同一群中的单增李斯特菌有不同的PFGE型。结论 DVL操作简便、快速,重复性好,但分辨率低于PFGE;对大量单增李斯特菌分型时,先用DVL筛选再用PFGE对分布在同一群中的单增李斯特菌进行分型,能快速明确单增李斯特菌之间的关系。     

自贡市2014年农贸市场食品中单增李斯特菌污染状况调查

目的 探索自贡市农贸市场食品中单核细胞增生性李斯特菌(单增李斯特菌,Listeria monocytogenes, L. monocytogenes)的污染状况。方法 2014年12月采集四川自贡市农贸市场的各类食品样品,分离单增李斯特菌,采用血清分型,多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)对分离的单增李斯特菌进行分子分型,并用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)研究菌株之间的同源性。结果 从农贸市场626份各类食品中检出单增李斯特菌48株(阳性率7.67%),牛羊肉样品的菌株分离率(37.50%)最高。菌株分为 3种血清型:1/2a(17株,占35.41%)、1/2b(22株,占45.83%)、1/2c(9株,占18.75%)。9种ST型,以ST87型(13株,占27.08%)、ST8型(12株,占25.00%)、ST9型(9株,占18.75%)为主;PFGE分为21 种PT型,9个PFGE带型的菌株来自不同种类的食品。结论 自贡市各类食品中单增李斯特菌污染情况广泛存在,不同食品存在交叉污染,食品监督部门应加强市场卫生情况的监管。     

冷冻饮品加工过程中单核细胞增生李斯特菌污染状况分析

目的了解湖南省冷冻饮品生产加工过程中单核细胞增生李斯特菌(以下简称单增李斯特菌)污染状况,为食源性疾病预防和控制提供科学依据。方法采集湖南省2家冷冻饮品生产企业的生产加工各个环节的样品,包括食物样品75份(原料类、中间产品、终产品)和非食物样品279份(环境、仪器设备、人员、工具等),参照GB 4789.30-2010中方法进行单增李斯特菌检测,分离菌株采用脉冲场凝胶电泳法(PFGE)进行分子分型。结果两家企业共监测354份样品,检出28株单增李斯特菌,检出率为7.91%,均在非食品样品中检出(检出率10.04%),其中环境样品的检出率最高(16.07%),人员、仪器设备、工具检出率分别为6.35%、6.58%、10.00%;与车间前处理区(0.96%)、整箱包装区相比(4.44%),灌装区检出率较高(12.20%);O企业非食品样品的检出率(13.94%)高于P企业(4.39%)(χ~2=6.815,P=0.009)。PFGE结果显示,O企业分离的23株单增李斯特菌,分为4个型别,其中有82.6%的菌株为同一型别,P企业分离的5株单增李斯特菌,分为2个型别,其中有4株为同一型别。结论两家冷冻饮品企业在生产加工过程中均检出单增李斯特菌,主要存在于车间灌装区的地面与地面接触物中,两企业检出的单增李斯特菌均存在优势型别,提示应加强消毒与监督,预防单增李斯特菌对冷冻饮品污染的潜在风险。     

2009—2010年山东省食品中单核细胞增生李斯特菌的耐药性和分子分型研究

目的 了解山东省单核细胞增生李斯特菌(单增李斯特菌)耐药及分子分型特点,并探讨耐药表型与PFGE基因组型之间的关系.方法 从2009-2010年山东省6个城市的生畜禽肉、熟肉制品、水产品等食品中采集80株单增李斯特菌,采用微量肉汤稀释法测定其抗生素敏感性,采用PFGE进行分子分型,并对耐药谱与PFGE型别关系进行分析.结果 16.25％(13/80)的菌株存在耐药,其中,业胺培南的耐药率最高(12.50％,10/80),其次是四环素和强力霉素(3.75％,3/80;2.50％,2/80).耐药分型可将80株菌分为9个型别.PFGE将80株菌分为34个带型,以17型和29型为主.A型耐药谱分布范围较广,出现在79.41％ (27/34)的PFGE型别中.结论 2009-2010年山东省单增李斯特菌存在较为严重的耐药现象,单增李斯特菌的PFGE分型与其药敏分型无对应关系.     

1例单核细胞增生李斯特菌感染患者的病因食品溯源分析

目的对1例单核细胞增生李斯特菌感染病例的病因食品进行调查和溯源分析。方法在病例个案调查基础上,采集病例家庭及周边超市、农贸市场、路边快餐等处的食品类样品进行菌株分离,并运用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术进行分子分型,利用聚类结果对菌株同源性进行分析。结果从病例血液中分离到1株菌株;在33份食品类样品中,单核细胞增生李斯特菌阳性样品7份,共分离到9株菌株;所有10株菌株分为9个PFGE型别,其中只有从某超市采集的某品牌三黄鸡中分离的菌株与病例菌株具有100%同源性,且该型别与山东省往年分离菌株的一个较大聚类型别GX6A16.SD0008完全一致。结论病例感染跟没有正确食用被单核细胞增生李斯特菌污染的某品牌三黄鸡有直接关系,且这种型别菌株在山东省持续存在,特别是肉制品,应对其致病风险引起注意。     

2009年四川省副溶血性弧菌血清型、致病力及分子分型研究

目的 了解四川地区2009年副溶血弧菌食物中毒疫情分离株和监测食品样品分离菌株菌型分布、致病力及分子分型特征,为四川地区副溶血性弧菌疾病防治提供科学依据.方法 采用血清玻片凝集试验对2009年从食物中毒疫情和常规监测食品中分离的副溶血孤菌菌株进行血清分型、应用PCR方法进行耐热直接溶血素基因(tdh)和耐热直接溶血素相关基因(trh)的检测、小鼠腹腔注射进行致病力实验和进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析等.结果 40株菌分属于5个血清群,疫情分离株分属于O3和O4群,监测分离株主要为O1群占43.75％ (7/16),其中2起疫情分离到多个血清型的菌株;所有菌株trh基因均为阴性,其中20株携带tdh毒力基因,携带tdh毒力基因和不携带tdh、tlh毒力基因的菌株均有致病力.40株菌通过PFGE分型,共得到29个带型,同一疫情分离株具有多个PFGE型别..结论 四川省食品分离株和暴发疫情无太多联系,食品分离株血清型和PFGE型别呈多样性.对于从同一起暴发疫情中检出的不同血清型和不同PFGE型别的副溶血性弧菌需要确认各菌株与暴发的关系.     

广州市58株单增李斯特菌菌株特征分析

目的 了解广州市动物源性食品中单增李斯特菌菌株优势血清型、携带毒力基因和分子分型情况。方法 对广州地区365份动物源性食品中的单增李斯特菌分离鉴定,并进行血清分型,毒力基因鉴定和肠道细菌基因间重复序列扩增(ERIC-PCR)。结果 单增李斯特菌阳性率为15.89%(58/365),其中生畜肉类检出率最高,为25.38%(33/130);血清型分析将58株单增李斯特菌分为4种血清型,分别为1/2b、1/2a、1/2c和4b,优势的血清型为1/2b(44.80%)和 1/2a(32.80%);10株缺失毒力基因actA;ERIC-PCR扩增出9~18条100~8000bp之间的条带,将58株单增李斯特菌在相似系数为0.8处分为6个群19个类型。结论 广州市动物源性食品中单增李斯特菌菌株污染严重,优势血清型是与人或动物感染有关的致病血清型(1/2b和1/2a),大部分毒力基因均存在,ERIC-PCR结果显示分子型别呈多样性,应加强防控。     

十堰市26株单增李斯特菌同源性与耐药特征分析

目的 研究十堰市单增李斯特菌分离株的同源性和耐药性,为追溯传染源和临床用药提供参考依据。方法 对单增李斯特菌分离株进行PFGE分型,然后用E-test法对氨苄西林等13种抗生素进行耐药性分析。 结果 26株单增李斯特菌可分为13个PFGE亚型,相同PFGE型的菌株为同一来源。分别有45.15%和19.23%的菌株对磺胺嘧啶和环丙沙星耐药,对这2种抗生素均耐药的菌株有2株,为多重耐药菌株。结论 十堰市单增李斯特菌对一些抗生素存在较严重的耐药性,应加强对单增李斯特菌等食源性致病菌的监测,避免其污染水体而影响南水北调水源区水质。     

食品中副溶血弧菌PFGE分子分型及三种毒力基因的测定

目的:了解食品中分离的副溶血弧菌菌株之间及其与病人分离菌株的关系,了解食品中分离菌株的毒素基因携带情况。方法:对食品中分离的副溶血弧菌进行PFGE分子分型;并应用PCR法进行3种毒力基因(tdht、rh和tlh)测定。结果:55株O1～O4群副溶血弧菌的PFGE图谱分为50型别;三种毒力基因检测结果为:12株菌tdh检测阳性、55株菌trh检测均为阴性5、5株菌tlh检测均为阳性。结论:食品中分离的副溶血弧菌PFGE型别多,且相互之间关系分散;所有被检测副溶血弧菌均携带tlh基因,没有检测到携带trh基因的菌株,不同来源的菌株TDH基因携带情况差异较大。     

同一酒店两起副溶血性弧菌食物中毒的病原体分型溯源及耐药性研究

目的对同一酒店、同一时间两起副溶血性弧菌食物中毒中分离到的副溶血性弧菌,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行同源性分析,为查明原因和溯源提供依据。方法对患者和食品中分离到的菌株进行分离鉴定、药敏试验、PFGE分子分型和聚类分析。结果两起食物中毒中共检出8株副溶血性弧菌,其中5株来自A组患者,2株来自B组患者,1株来自菜鱼饼样本。8株菌株经PFGE分子分型和聚类分析显示,按100%相似度可分2个基因型别,型别间同源性为70.8%。8株菌株的耐药状况也大致分为2大类,与PFGE分型结果一致。结论 2起食物中毒无相关性,为独立暴发,PFGE可有效应用于食物中毒溯源分析及分子流行病学研究。     

1株分离于肿物积液的单增李斯特菌的病原学特点及分子特征

目的了解1株分离于肿物积液的单增李斯特菌的病原学特点和分子特征。方法对该菌株进行血清型、毒力基因、耐药性、脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)等分析。结果该菌株属于1/2b血清型、ST87型,携带12种毒力基因(actA,hlyA,prfA,flaA,plcA,plcB,Inl 1A,Inl 1B,Inl 1C,Inl J,iap,Mpl)。该菌株与LM263(江苏)、LM417(上海)的PFGE带型一致,与2株北京分离株(LM188、LM403)的PFGE带型相差一条带,相似性为95%。该菌株对青霉素G、苯唑西林、氨苄西林、头孢克洛、头孢噻肟、克拉霉素等6种抗生素耐药,对其他18种抗生素敏感或中介。结论该菌株属于引起李斯特菌病的常见血清型(1/2b)和ST型(ST87),具有强致病性,其PFGE型别已在中国其他地区出现。该菌对青霉素类抗生素耐药,应选用其他药物进行治疗。     

我国部分产生志贺毒素肠出血性大肠埃希菌O157：H7脉冲电场凝胶电泳分型

目的 探讨我国部分地区产生志贺毒素的肠出血性大肠埃希菌（EHEC）O157：H7菌株的分布，流行以及分型情况。方法 用脉冲电场凝胶电泳（PFGE）方法进行分型，辅以药物敏感性试验对51株产生志贺毒素的EHECO157：H7菌株进行研究。结果 根据细菌染色体DNA的XbaI酶切图谱，可将从江苏省徐州市等地分离的51株产生志贺毒素的EHECO157：H7菌株分成8个PFGE型别（PFGE1-PFGE8），宁夏菌株为PFGE1型和2型，徐州菌株有6个PFGE型，1986-1988年的分离菌株属于PFGE7型，1999、2000年病人分离株的优势型别分别是PFGE5型与3型，1999年爆发性流行期间从患者分离的5株菌属于PFGE5型，从家畜家禽的粪便，食品，蔬菜等标本分离的19株菌，可以分为PFGE3-6等4个型别，其中，PFGE5型占优势（10株菌）。结论 爆发性流行的发生与携带病原菌的家畜家禽粪便污染的食品，蔬菜等有关，从我国部分地区分离的EHECO157：H7菌株的PFGE型别有地区性差异。     

我国部分产生志贺毒素肠出血性大肠埃希菌O157∶H7脉冲电场凝胶电泳分型

目的　探讨我国部分地区产生志贺毒素的肠出血性大肠埃希菌 (EHEC)O15 7∶H7菌株的分布、流行以及分型情况。方法　用脉冲电场凝胶电泳 (PFGE)方法进行分型 ,辅以药物敏感性试验对 5 1株产生志贺毒素的EHECO15 7∶H7菌株进行研究。结果　根据细菌染色体DNA的XbaI酶切图谱 ,可将从江苏省徐州市等地分离的 5 1株产生志贺毒素的EHECO15 7∶H7菌株分成 8个PFGE型别 (PFGE1～PFGE8) ,宁夏菌株为PFGE1型和 2型 ,徐州菌株有 6个PFGE型。 1986～ 1988年的分离菌株属于PFGE7型 ,1999、2 0 0 0年病人分离株的优势型别分别是PFGE5型与 3型。 1999年爆发性流行期间从患者分离的 5株菌属于PFGE 5型 ,从家畜家禽的粪便、食品、蔬菜等标本分离的 19株菌 ,可以分为PFGE3～ 6等 4个型别 ,其中 ,PFGE5型占优势 (10株菌 )。结论　爆发性流行的发生与携带病原菌的家畜家禽粪便污染的食品、蔬菜等有关 ,从我国部分地区分离的EHECO15 7∶H7菌株的PFGE型别有地区性差异     

中国八省市食品来源单核细胞增生李斯特菌的脉冲场凝胶电泳分析

目的 采用国际标准化的脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析方法对单核细胞增生李斯特菌（Lm）进行基因分型,初步建立中国Lm的基因分型数据库。方法 按照标准化的Lm-PFGE方法对来自国内8个省市、多种食品来源的118株Lm进行了PFGE分型。结果 118株Lm分成了39种带型,其中GX6A160004型有37株菌,占分析菌株的31．36%,是主要型别。结论 初步建立了中国单核细胞增生李斯特菌用于网络监测分析（PulseNet China）的基础数据库,发现同型菌株在全国多个地区广泛存在。     

崇州市23株副溶血弧菌的病原特征分析

目的分析四川崇州地区2014-2017年6起23株副溶血弧菌食物中毒疫情分离株毒力基因携带,耐药及分子分型特征,为该地区副溶血性弧菌疾病防治提供科学依据。方法采用微量肉汤稀释法(MIC)检测13种抗生素的敏感性;实时荧光PCR法检测(tdh、trh)毒力基因;脉冲场凝胶电泳(PFGE)和Bio Numerics软件对菌株进行分子分型分析。结果 23株副溶血性弧菌PFGE聚类分析共分为18个型别。2起暴发的病人之间分属同一PFGE型别,其余4起暴发病人、食品、环境之间相关性均低于60%;2起暴发病人分离株存在100%相似的带型。食品和环境分离株无毒力基因检出,病人分离株毒力基因检出率88.89%(16/18)。食品环境分离株对头孢唑啉100%(5/5)耐药,对其他12种药物均敏感;临床分离株对氨苄西林27.78%(5/18)耐药、头孢唑啉100%(18/18)耐药,对其他11种药物均敏感。结论该地区近年来由副溶血性弧菌引起的食物中毒事件存在由多种不同型别和相同型别(PFGE带型100%相似)弧菌引起情况。     

MLST和PFGE在耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌医院感染监测中的应用

 目的 探讨某院重症监护病房(ICU)患者、医院环境中耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)菌株的同源性,为医院感染防控提供理论依据。方法 收集2017年9—12月某三甲医院ICU患者、环境中连续分离的CRKP菌株,进行耐药表型、碳青霉烯酶基因检测,采用多位点序列分型(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子同源性分析。结果 共收集10株CRKP菌株,其中9株分离自5例患者的临床感染标本,1株分离自气压治疗仪面板。10株菌均携带产KPC酶基因;MLST分型均为ST11型;共有5种PFGE带型,其中5株带型完全一致,为流行菌株,1株菌株与流行菌株带型仅相差1条条带,其余4株菌带型相近,但与流行株带型差异较大。气压治疗仪面板分离的1株CRKP菌株与患者来源的4株CRKP菌株耐药表型、PFGE型别及ST型别完全一致,考虑为仪器共用造成的医院感染。分离自同一重症胰腺炎患者腹腔引流液、血标本的CRKP菌株PFGE带型完全一致,推测CRKP可能通过腹腔感染入血。结论 PFGE和MLST对明确医院感染细菌传播路径,个体细菌感染路径以及遗传变异有重要意义,有助于从切断感染途径方面入手指导控制多重耐药菌的传播。     

广东省食品中单核细胞增多性李斯特菌脉冲场凝胶电泳技术分子分型的研究

目的应用脉冲场凝胶电泳技术（PFGE）对广东省食品中分离的单核细胞增多性李斯特菌（Lm）进行分子分型,并建立PFGE数据库。方法参照美国PulseNet的Lm PFGE分子分型标准方法进行检测。应用BioNumerics软件对不同食物种类、时间和地点的分离株进行比对,分析菌株之间的相关性。结果107株Lm分成41个PFGE型,型别较为分散;从鸡肉中分离的菌株数最多（37株）,PFGE分型也最多（19个）;冷藏和冷冻食品的分离率较高,其中有26株菌仅存在1-2个电泳条带的差异,相似度极高;韶关和惠州地区分离的Lm存在着地区特异性;随时间变迁,部分菌株仍存在不同程度的相关性。结论广东省食品中分离的Lm在整体上表现出较大的遗传多样性,但部分菌株有不同程度的相关性。     

温州市畜肉中小肠结肠炎耶尔森菌的污染现状与病原特征分析

目的 了解2020年—2021年温州市畜肉中小肠结肠炎耶尔森菌的污染现状及病原特征。方法 对2020年—2021年温州市食品安全风险监测中的畜肉样本进行小肠结肠炎耶尔森菌的分离鉴定、血清分型、生物分型、毒力基因检测、耐药性分析和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型。结果 356份样本共检出小肠结肠炎耶尔森菌31株，检出率为8.71%。分离菌株血清型以O:5型为主，生物型以1A型为主。检出1株4/O:3型菌株携带毒力基因ail、ystA、yadA、virF,其余菌型菌株仅携带ystB或不携带任何毒力基因。分离株对头孢西丁、磺胺异恶唑耐药率最高，为32.26%,多重耐药株有4株，占12.90%。31株分离株经PFGE分型，共获得31种带型。结论 小肠结肠炎耶尔森菌是温州市畜肉中的潜在污染源，菌株耐药率处于较低水平但存在多重耐药株，PFGE带型呈多态性分布。     

一起肠炎沙门菌食物中毒实验室检测及溯源分析

目的对一起沙门菌引起的食物中毒进行病原菌检测及溯源分型分析。方法常规分离沙门菌,对分离到的肠炎沙门菌进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型。结果 14名食物中毒学生标本检出肠炎沙门菌4株;57名食堂工作人员肛拭标本检出肠炎沙门菌6株、纽波特沙门菌1株;9份冷冻预包装食品中检出肠炎沙门菌1株。对11株肠炎沙门菌进行脉冲场凝胶电泳分型,学生、食堂工作人员检出的10株菌株PFGE条带完全一致,与1份冷冻预包装食品中检出的肠炎沙门菌的PFGE聚类分析的同源性为86%。结论这起食物中毒是由肠炎沙门菌引起,通过PFGE分型分析,本次食物中毒与预包装食品肠炎沙门菌污染无关联。PFGE可有效应用于食物中毒溯源分析及分子流行病学研究。