PCR-SSCP检测结核分枝杆菌利福平耐药性

目的:建立PCR-SSCP快速检测结核分枝杆菌利福平耐药相关基因rpoB突变。方法:用比例法筛选出70株耐利福平结核分枝杆菌临床分离株,用PCR-SSCP方法检测菌株ropB基因突变,并与比例法检测结果进行对比。结果:70株耐利福平菌株中,单耐利福平菌株为12株,同时耐福平和异烟肼菌株为58株。扩增菌株rpoB基因,70株结核分枝杆菌临床分离株ropB基因突变率为91.43%(64/70),其中,耐多药菌株ropB基因突变率为91.38%(53/58),单耐利福平菌株ropB基因突变率为91.67%(11/12)。结论:用PCR-SSCP技术检测结核分枝杆菌RFP耐药性所用时间大幅缩短,检测出的结果与传统方法一致率高,但结核分枝杆菌表型耐药菌株,存在rpoB基因位点无突变的现象,是否存在其他耐药位点或耐药机制,值得深入研究。     

两种快速方法联合检测结核分枝杆菌耐药性

目的建立联合检测结核分枝杆菌耐药性试验方法,以提高耐药检测方法的灵敏度和特异度。方法对126株已知耐药浓度的结核分枝杆菌耐药株和敏感株分别采用硝酸盐还原试验(Nitrate Reductase Assay,NRA)和反向斑点杂交试验(reverse-dot blot hybridization,RBH),检测其对异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)和乙胺丁醇(EMB)的耐药性,并将结果与绝对浓度法结果相比较。结果硝酸盐还原试验和反向斑点杂交试验联合检测与绝对浓度法比较具有高度的一致性(P﹥0.05),异烟肼灵敏度95.5%,特异度100%;利福平灵敏度100%,特异度98.1%;链霉素灵敏度93.2%,特异度92.7%;乙胺丁醇灵敏度94.1%,特异度94.6%。结论硝酸盐还原试验和反向斑点杂交试验联合检测可作为快速结核分枝杆菌耐药性试验方法。     

基因芯片技术快速检测结核分枝杆菌耐药性的临床应用研究

目的研究基因芯片快速诊断技术检测结核病患者耐药性的临床应用效果。方法从2014年1月至2016年7月,在连云港市结核病定点医院(第四人民医院)连续纳入1 297例肺结核患者。按照结核病防治规划实施工作要求收集患者痰标本,分别进行基因芯片检测、传统固体罗氏培养和传统药物敏感试验。结果最终共有1 100例肺结核患者纳入最终的结果分析。以传统药敏结果为金标准,基因芯片检测利福平、异烟肼与耐多药的灵敏度与特异度分别为84.48%,98.18%;81.91%,97.42%;80.56%,99.15%。在rpo B的所有耐药基因位点上共检测到突变68例,以rpo B531位点突变率为主占36.76%。在kat G315与Inh A-15位点上共检测到突变103例,kat G315、Inh A-15突变率分别达到60.19%、33.01%。基因芯片技术共检出38例耐多药患者。结论基因芯片技术直接应用于痰标本检测利福平、异烟肼耐药性有较高的灵敏度和特异度,一致性较好,可用于耐多药结核病早期快速筛查和诊断,以弥补传统药敏试验的不足。     

反向斑点杂交技术在结核分枝杆菌耐药性检测中的应用研究

目的利用反向斑点杂交技术，建立结核分枝杆菌对利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）耐药相关基因突变的快速检测方法。方法根据结核分枝杆菌标准株H37Rv序列，自行设计针对rpoB、katG、inhA、rpsL和embB基因中常见耐药突变区的系列寡核苷酸探针，制成膜芯片，并对64例结核分枝杆菌临床株的基因突变情况进行检测。结果在36株RFP耐药菌中，有32株被检出在rpoB基因上发生突变，突变检出率为88．89％（32／36）；在39株INH耐药菌中，有30株被检出在katG或inhA基因上发生基因突变或缺失，检出率为76．92％（30／39）；在34株SM耐药菌中，有25株被检出在rpsL基因分析部位发生突变，检出率为73．5％（25／34）；在32株EMB耐’药菌中，有19株在embB基因分析部位发生突变，检出率为59．4％（19／32）。膜芯片检出的突变与基因测序结果一致。结论用膜芯片检测结核分枝杆菌对利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）四种主要一线抗结核药的耐药性，具有较高的特异性和敏感性，可作为常规药敏方法的补充，用于指导开展早期、有效的临床化疗。     

结核分枝杆菌耐药性检测技术进展

结核病是全球关注的严重公共卫生问题之一,尤其是亚洲和非洲居民死亡的主要原因。WHO估计2006年全球有920万例新发结核病患者（139/10万）。亚洲（东南亚和西太平洋地区）占全球病例的55%,非洲31%。随着化疗药物的临床应用,结核病在全球范围内得到了有效控制,但是近年来由于药物应用的不合理和不规范,导致结核分枝杆菌耐药形势日益严重,给结核病的防治带来巨大挑战。耐药菌株的播散是结核病再次全球性流行的根本原因。耐药株引起的耐药性结核病甚至耐多药，已成为临床治疗中的难题。     

结核分枝杆菌耐药性检测技术研究进展

结核病是由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）感染引起的一种危害人类健康的慢性传染病,是我国面临的重要公共卫生问题之一。近年来,结核病在我国总体呈现稳步上升的态势,疾病负担日益增加。MTB耐药,尤其是多重耐药、广泛耐药,是结核病临床治疗面临的主要问题,MTB耐药性检测已成为结核病临床治疗、监测的关键性问题。目前MTB耐药检测方法主要有表型检测、分子检测以及新型检测技术。本研究对现有MTB耐药性检测的技术方法进行综述,为结核分枝杆菌耐药性检测新型技术的开发提供参考。     

应用线性探针方法快速检测结核分枝杆菌耐药性的效果评价

目的评估线性探针方法快速检测结核分枝杆菌的耐药性效果。方法选取2013年-2014年江西省耐药监测点分离培养的阳性菌株,收集菌体,提取DNA,采用MTBDRplus试剂盒进行检测,以国际标准的比例法检测结果作为对照,评价其敏感度及特异度,并分析突变分布情况。结果检测利福平耐药的灵敏度为93.33%,特异度为98.35%;检测异烟肼的灵敏度为76.31%,特异度为98.83%。耐利福平基因突变频率最高的位点为rpo B H531L(57.89%),耐异烟肼基因突变频率最高的位点是kat G S315T1(60.61%)。结论可利用MTBDRplus快速检测利福平和异烟肼的耐药性,是快速发现耐药结核分枝杆菌的有效方法。     

高分辨率熔解曲线检测结核分枝杆菌对利福平耐药性研究

目的评价高分辨率熔解曲线(high resolution melt,HRM)技术检测结核分枝杆菌对利福平耐药性的临床应用价值。方法用传统结核分枝杆菌药敏试验对新疆石河子大学人畜共患病实验室保存的50株临床分离菌进行耐药性检测。以rpoB基因的利福平耐药决定区为靶标设计引物进行高分辨率熔解曲线分析,判断分离出的结核分枝杆菌是否对利福平耐药。应用SPSS 17.0分析,以传统结核分枝杆菌药敏试验结果为标准,计算两种方法的符合率。用χ~2检测分析比例法药敏结果与高分辨率熔解曲线检测结果的差异性。用Kappa检测分析两种结果的一致性。结果药敏试验结果显示,50株菌中有1株为非结核分枝杆菌;49株中有20株同时对利福平和异烟肼耐药、1株仅对利福平耐药;HRM检测结果显示,21株对利福平耐药,28株为敏感株。以传统药敏试验为参考,HRM检测利福平耐药性的敏感性为86.36%,特异性为92.59%,经Kappa检验显示,两种方法检测结果具有高度一致性。结论 HRM可快速检测结核分枝杆菌对利福平的耐药性,具有较高灵敏度,在耐药结核病的早期诊断上有一定的应用价值。     

高分辨率熔解曲线检测结核分枝杆菌 对利福平耐药性研究

摘要：目的　评价高分辨率熔解曲线（ｈｉｇｈｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｍｅｌｔ,ＨＲＭ） 技术检测结核分枝杆菌对利福平耐药 性的临床应用价值。方法　用传统结核分枝杆菌药敏试验对新疆石河子大学人畜共患病实验室保存的５０株 临床分离菌进行耐药性检测。以狉狆狅犅基因的利福平耐药决定区为靶标设计引物进行高分辨率熔解曲线分 析,判断分离出的结核分枝杆菌是否对利福平耐药。应用ＳＰＳＳ１７．０分析,以传统结核分枝杆菌药敏试验 结果为标准,计算两种方法的符合率。用χ ２ 检测分析比例法药敏结果与高分辨率熔解曲线检测结果的差异 性。用Ｋａｐｐａ检测分析两种结果的一致性。结果　药敏试验结果显示,５０ 株菌中有１ 株为非结核分枝杆 菌;４９株中有２０株同时对利福平和异烟肼耐药、１株仅对利福平耐药;ＨＲＭ 检测结果显示,２１株对利福 平耐药,２８株为敏感株。以传统药敏试验为参考,ＨＲＭ 检测利福平耐药性的敏感性为８６．３６％,特异性 为９２．５９％,经Ｋａｐｐａ检验显示,两种方法检测结果具有高度一致性。结论　ＨＲＭ 可快速检测结核分枝杆 菌对利福平的耐药性,具有较高灵敏度,在耐药结核病的早期诊断上有一定的应用价值。 关键词：高分辨率熔解曲线（ＨＲＭ）;结核分枝杆菌;利福平;耐药性;药敏试验;狉狆狅犅基因;分子诊断 中图分类号：Ｒ４４６．５　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１９）０３ ０１６１ ０４     

MTBDR plus线性探针技术快速检测结核分枝杆菌耐药性的临床应用评价

目的评价线性探针杂交技术(简称HAIN技术)对耐药结核分枝杆菌的检测效果,评估其应用价值。方法利用传统罗氏培养及药敏试验和HAIN技术同时对开封市2010年4～10月份登记的453例涂阳肺结核患者进行耐多药检测,以传统罗氏培养及药敏试验为金标准对HAIN技术的检测效果进行评价。结果具有完整耐药检测结果的430例患者纳入分析。HAIN技术对新涂阳患者(P=0.589)和复治涂阳患者(P=1.000)耐药的检测效果与金标准差异无统计学意义。检测初治涂阳患者耐多药灵敏度为66.67%,Kappa值为0.56,阳性预测值为50.00%;检测复治涂阳患者耐多药的灵敏度为69.23%,Kappa值为0.61,阳性预测值为69.23%;所有检测结果的特异度均>91.00%,阴性预测值均>91.00%。结论 HAIN技术同传统方法检测涂阳肺结核患者耐药情况相比差异无统计学意义,但HAIN技术对初治涂阳患者耐多药的阳性预测值偏低,检测效果有一定局限性,可能会在实际应用中造成过度诊断。     

焦磷酸测序技术快速检测结核分枝杆菌对氧氟沙星的耐药性

随着耐药结核病患者的不断增加,氧氟沙星(Ofloxacin,OFLK)等氟喹诺酮类抗结核分枝杆菌MTB的药物被广泛应用,对OFLX的耐药呈上升趋势.早期检测OFLX的耐药性对临床用药具有指导作用.氟喹诺酮类药物主要作用靶位是菌体的DNA解旋酶,该酶由gyrA和gyrB基因分别编码的A和B亚基组成.     

基因芯片检测系统在结核分枝杆菌耐药性检测中的应用价值评估

目的评估基因芯片检测系统在结核分枝杆菌耐药性检测中的应用价值。方法选取2016年1月-12月在温州市第六人民医院涂片阳性的202例疑似结核患者痰标本进行基因芯片检查,去除液体培养实验结果为污染与阴性和非结核分枝杆菌等原因的37例,以液体药敏实验为金标准,共165例患者中分析对利福平、异烟肼和MDR(同时对异烟肼和利福平耐药)诊断的敏感度、特异性、阳性预测值和阴性预测值。结果基因芯片对利福平检测的敏感度和特异度分别为89.8%和93.1%;对异烟肼检测的敏感度和特异度分别为78.7%和96.2%,对MDR的敏感度和特异度分别为73.9%和95.0%。结论该方法简便快速,灵敏度和特异度较好,在结核分枝杆菌耐药性检测中有重要应用价值。     

利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术对结核分枝杆菌及利福平耐药快速诊断的评价

目的探讨利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(GeneXpert MTB/RIF,简称Xpert)对呼吸道标本结核分枝杆菌(MTB)及利福平(RIF)耐药性快速检测的应用价值。方法采集2018年1～12月济宁市市级结核病定点医院就诊患者的痰标本,分别进行涂片检测、Xpert检测、960液体培养并对培养阳性的菌株进行比例法药敏试验。结果就诊的355例疑似结核病患者,确诊257例,其中Xpert检测阳性率(56.42%)明显高于涂片法(29.57%),(P0.01)。涂阴肺结核患者的Xpert检测阳性率(38.12%)明显高于960液体培养阳性率(23.20%)(P0.01).比例法药敏试验和Xpert检测对利福平耐药性检测一致性良好(Kappa值为0.91)。结论 Xpert检测技术敏感度高特异性好,耗时短,操作简便,能够快速准确的检测出患者是否感染MTB及对RIF的耐药情况。     

Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌及利福平耐药性的应用价值研究

目的探讨结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)在检测结核分枝杆菌(MTB)及利福平耐药性的临床应用价值。方法选择2016年1月至2017年7月期间入住本院的受试者272例,其中临床诊断肺结核242例,非结核病者30例。所有受试者痰标本分别采用Xpert MTB/RIF及传统罗氏固体培养(LJ)单独检测及联合检测MTB及利福平耐药性。分析比较2种方法检测的敏感度和特异度。结果以临床诊断为金标准,Xpert MTB/RIF阳性率为54.96%,LJ阳性率为40.5%,联合应用阳性率60.33%。以培养结果为金标准,Xpert MTB/RIF检测MTB的敏感度为86.73%,特异度为64.60%。2种方法检测MTB符合率为73.55%,利福平耐药性符合率为98.82%。结论 Xpert MTB/RIF检测技术操作简单快速,高诊断敏感度和特异度,对实验室生物安全要求低,建议在实验室条件不高的地区推广使用。     

结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术在肺结核快速诊断中的应用价值

目的探讨Xpert MTB/RIF检测肺结核及利福平耐药性的应用价值。方法收集200例疑似肺结核患者的痰标本,进行痰涂片抗酸染色显微镜镜检、改良罗氏固体培养、比例法药敏试验和Xpert MTB/RIF检测,分析Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌及其利福平耐药性的敏感度和特异度,与"金标准"进行一致性检验。结果以改良罗氏固体培养为"金标准",Xpert MTB/RIF检测痰标本MTB的敏感度和特异度分别为88.30%和87.74%;以痰涂片抗酸染色法为"金标准",Xpert MTB/RIF检测痰标本MTB的敏感度和特异度分别为88.18%和100.00%;以比例法药敏试验为"金标准",Xpert MTB/RIF检测利福平耐药的敏感度和特异度分别为83.33%和100.00%;Xpert MTB/RIF法和改良罗氏固体培养、痰涂片抗酸染色法、比例法药敏试验均具有较好的一致性(K值分别为0.76、0.87、0.77)。结论 Xpert MTB/RIF在肺结核快速诊断中具有较高的诊断效能,在我国结核病实验室中具有较好的应用前景。     

基因芯片技术对结核分枝杆菌耐药性检测的临床应用

目的评价基因芯片技术对结核分枝杆菌耐药性检测的效果。方法选取我院结核科2014年3月至2016年3月收治的涂片阳性的肺结核住院患者238例,取其痰标本,分别用基因芯片、传统的罗氏培养和药敏试验3种方法进行结核分枝杆菌的异烟肼耐药性检测和利福平耐药性检测;把罗氏培养和药敏试验的结果作为金标准,评价基因芯片技术的临床应用价值。结果基因芯片技术检测涂片阳性患者痰标本异烟肼耐药的情况与金标准无显著差异(P>0.05);利福平耐药的情况与金标准相比也无明显差异(P>0.05)。结论基因芯片能够快速、准确地检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药情况,是一种值得推广的临床实验室检测方法。     

ＸｐｅｒｔＭＴＢ／ＲＩＦ快速检测结核分枝杆菌与 利福平耐药性的应用研究

摘要：目的　评估利福平耐药实时荧光定量ＰＣＲ技术（ＸｐｅｒｔＭＴＢ／ＲＩＦ）快速检测在诊断肺结核和利福平耐 药性的应用价值。方法　对２０１６年衢州市人民医院临床疑似肺结核患者的痰样本分别进行抗酸染色、Ｘｐｅｒｔ ＭＴＢ／ＲＩＦ 检测、ＭＧＩＴ３２０液体培养、胶体金试验、菌种鉴定和液体药敏试验。结果　４３５例肺结核痰样本 中，抗酸染色检出率为１７．０１％ （７４／４３５），液体培养检出率为３５．８６％ （１５６／４３５），ＸｐｅｒｔＭＴＢ／ＲＩＦ检出率 为３５．１７％ （１５３／４３５）。ＸｐｅｒｔＭＴＢ／ＲＩＦ检出率高于抗酸染色法，差异有统计学意义（χ ２＝２６．０８，犘＜０．０１）， ＸｐｅｒｔＭＴＢ／ＲＩＦ技术与液体培养法之间差异无统计学意义（χ ２＝０．１１，犘＞０．０５）。以液体培养结合胶体金法 菌型鉴定为金标准，ＸｐｅｒｔＭＴＢ／ＲＩＦ 检测结核分枝杆菌灵敏度为９４．２０％ （１３０／１３８），特异性为９６．３９％ （２６７／２７７），阳性预测值为９２．８６％ （１３０／１４０），阴性预测值为９７．０９％ （２６７／２７５），两者具有较好的一致性 （Ｋａｐｐａ＝０．９０）。以液体药敏为金标准，ＸｐｅｒｔＭＴＢ／ＲＩＦ 检测利福平耐药的灵敏度９０．００％ （９／１０），特异性 ９７．５０％ （１１７／１２０），阳性预测值７５．００％ （９／１２），阴性预测值９９．１５％ （１１７／１１８）。两种方法一致性较好 （Ｋａｐｐａ＝０．８０）。结论　ＸｐｅｒｔＭＴＢ／ＲＩＦ检测痰液中结核分枝杆菌和利福平耐药性具有较高的灵敏度和特异 性，能准确区分非结核分枝杆菌，适用于普通肺结核、耐多药肺结核的快速诊断和筛查。 关键词：结核分枝杆菌；耐多药肺结核；利福平；利福平耐药实时荧光定量ＰＣＲ 技术；灵敏度；特异性 中图分类号：Ｒ５２１　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１８）０９ ０６５６ ０４     

酶联免疫斑点技术在出入境人员结核分枝杆菌快速检测中的应用

〔目的〕寻求一种试验周期短,特异性高的结核病检测方法。〔方法〕采集100份入境人员的外周抗凝全血标本,采用基于酶联免疫斑点试验（ELISPOT）的结核感染检测试剂盒TSPOT-TB,测定结核杆菌特异抗原刺激反应的效应T淋巴细胞数量。〔结果〕TSPOT-TB阳性率试验对象的性别、年龄无相关性,而与标本来源地区呈相关性。〔结论〕TSPOT-TB的敏感性和特异性均较高,可用于口岸出入境人员结核感染的快速检测。     

非结核分枝杆菌快速检测方法的评价

目的评价针对结核分支杆菌复合群(Mycobacterium Tubercu losis Comp lex,MTC)MPB64抗原,快速检测非结核分枝杆菌(Nontubercu lous mycobacteria,NTM)的方法。方法与对硝基苯酸(PNB)生长实验检测NTM的方法比较。结果检测结核分枝杆菌(M.tubercu losis)H37RV、蟾蜍分枝杆菌(M.xenop i)、偶然分枝杆菌(M.fortu itum)和86例临床分离菌株,快速检测非结核分枝杆菌与PNB方法符合率100%。结论与PNB方法相比,快速检测非结核分枝杆菌有较高的特异性和灵敏性,更适于基层实验室和大规模调查时的初筛实验。