低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和IL-6免疫反应的影响

目的 观察低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和IL-6免疫反应的影响。方法 取培养12d的两组（对照组和低氧预处理组）培养神经元,同时置于缺氧环境（0.9L/LN2、0.1L/LCO2)中培养2、4、8和12两组（对照组和低氧预处理组）培养神经元,同时置于缺氧环境（0.9L/LN2、0.1L/LCO2)中培养2、4、8和12h,分别观察它们的形态变化和神经元存活数,并用抗rhIL-6单克隆抗体进行免疫组化染色,观察缺氧对大鼠海马培养神经元IL-6免疫反应的影响。结果 低氧预处理可增强海马神经元对rhIL-6的免疫反应,经低氧预处理的海马神经元缺氧后神经元存活数和对rhIL-6的免疫反应均明显高于对照组。结论 低氧预处理氧预处理的海马神经元缺氧后神经元存活数和对thIL-6的免疫反应均明显高于对照组。结论 低氧预处理可使体外培养的海马神经元对缺氧产生耐受,其中rhIL-6的免疫反应增加可能是海马神经元对缺氧的一种适应性变化,提示IL-6可能参与脑缺氧耐受性的形成,并在海马神经元缺氧损伤的调控中起重要作用。     

低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐性和热休克蛋白表达的影响

采用免疫组织化学方法,观察低氧预处理对大鼠海马培养神经元缺氧耐受性和热休克蛋白（Ｈsp70)表达的影响。结果显示,低氧预处理能诱导海马神经元对Ｈsp70的表达。经低氧预处理的海马神经元缺氧－复氧后Ｈsp70表达较对照组明显增强,神经元损伤程度减轻,神经元存活数明显高于对照组。本结果表明,低氧预处理可诱导海马培养神经元对Hsp７０的表达,并使海马神经元对缺氧产生耐受,减少缺氧－复氧后神经元的死亡。     

低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和热休克蛋白表达的影响

采用免疫组织化学方法 ,观察低氧预处理对大鼠海马培养神经元缺氧耐受性和热休克蛋白(Hsp70 )表达的影响。结果显示 ,低氧预处理能诱导海马神经元对Hsp70的表达。经低氧预处理的海马神经元缺氧 复氧后Hsp70表达较对照组明显增强 ,神经元损伤程度减轻 ,神经元存活数明显高于对照组。本结果表明 ,低氧预处理可诱导海马培养神经元对Hsp70的表达 ,并使海马神经元对缺氧产生耐受 ,减少缺氧 复氧后神经元的死亡     

缺氧预处理对脑缺血大鼠海马超微结构的影响

目的观察缺氧预处理对脑缺血大鼠海马CA1区神经细胞和星形胶质细胞超微结构的影响。方法将60只雄性Wistar大鼠随机分为3组:(1)窒息心脏停搏组(ACA组,n=20),大鼠遭受窒息性心脏停搏1min后复苏;(2)脑缺氧预处理+窒息心脏停搏组(HP+ACA组,n=20),在窒息性心脏停搏前24 h给予大鼠1min的脑缺氧预处理4次,每次间隔5 min;(3)脑缺氧预处理组(HP组,n=20),只给予4次脑缺氧预处理。观察各组大鼠死亡率和复苏后神经功能评分(NDS),72 h后取海马CA1区组织置电子显微镜下观察神经细胞和星形胶质细胞超微结构改变情况。结果与ACA组相比,HP+ACA组死亡率显著降低(5% vs.30%,P0.01),NDS明显改善(P0.05),神经细胞和星形胶质细胞超微结构改变明显减轻。结论脑缺氧预处理可明显减轻脑缺血大鼠海马CA1区神经细胞和星形胶质细胞缺血性形态学改变。     

氢气预处理对乳鼠海马神经元细胞缺氧/复氧损伤后细胞活力的影响

目的探讨氢气对乳鼠海马神经元细胞缺氧/复氧损伤后细胞活力的影响。方法原代培养的SD乳鼠海马神经元细胞,随机分成对照组,缺氧/复氧组和氢气预处理组。对照组常规培养;缺氧/复氧组在100%N2中培养15min后复氧30min;氢气预处理组在2%H2+98%N2中培养15min后复氧30min。采用MTT法检测乳鼠海马神经元细胞活力。结果氢气预处理能够增强细胞活力(P<0.05)。结论氢气预处理对海马神经元细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用,可能与提高细胞活力有关。     

丁苯酞预处理对缺血再灌注损伤后大鼠海马神经元的保护作用

目的探讨丁苯酞(NBP)预处理对脑缺血再灌注损伤后大鼠海马神经元的保护作用。方法将120只SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、NBP低剂量预处理组(低剂量组)、NBP中剂量预处理组(中剂量组)和NBP高剂量预处理组(高剂量组),每组24只大鼠。低、中、高剂量组大鼠分别给予20 mg/kg、40 mg/kg、80 mg/kg NBP预处理。采用改良Zea Longa线栓法制备脑缺血再灌注模型。2%氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测量梗死体积,免疫组织化学法观察5-羟色胺(5-HT)阳性细胞数,免疫印迹法检测5-HT蛋白水平。结果 NBP低剂量组、中剂量组、高剂量组脑梗死体积显著小于缺血再灌注组(均P0.05)。中剂量组与高剂量组脑梗死体积显著小于低剂量组(均P0.05)。与假手术组比较,缺血再灌注组大鼠海马中5-HT阳性细胞数及蛋白表达明显降低(均P0.01)。与缺血再灌注组比较,NBP低、中、高剂量组的5-HT阳性细胞数及蛋白表达显著增加(均P0.05)。中剂量组与高剂量组5-HT阳性细胞数及蛋白表达显著高于低剂量组(均P0.05),高剂量组与中剂量组差异无统计学意义。结论丁苯酞预处理具有脑保护作用,其机制可能为上调缺血海马半暗带区5-HT表达。     

TGF-β1抑制大鼠创伤性颅脑损伤后海马神经元的凋亡

目的转化生长因子β1（TGF-β1）在星形胶质细胞增生和神经元的存活方面都发挥这重要作用,但是其在创伤性颅脑损伤（TBI）中的作用还未见报道。方法本课题组先前的研究利用大鼠模型发现在大鼠颅脑损伤后,TGF-β1的表达显著上调,表明TGF-β1参与到创伤性颅脑损伤修复的过程中。结果本研究聚焦在TGF-β1对TBI后海马神经元凋亡的影响,神经元的免疫荧光染色和Westernblot结果显示：对TBI后的海马神经元给予适当浓度及时程的TGF-β1处理,海马神经元的的凋亡明显降低。结论这些结果的发现,将有助于更好的理解TGF-β1在大鼠创伤性颅脑损伤中的作用,也有望使得TGF—β1成为临床上救治创伤性颅脑损伤的靶点。     

雌激素和姜黄素对海人酸杏仁核点燃大鼠行为学、脑电图及海马神经元损伤的影响

目的了解雌激素和姜黄素对海人酸(kainic acid,KA)杏仁核点燃大鼠癫痫发作的影响。方法给去势的雌性大鼠添加雌激素治疗,添加姜黄素治疗,或添加雌激素和姜黄素治疗,比较各组大鼠致痫后癫痫发作的行为学、脑电图和海马神经元损伤的变化。结果给雌激素治疗的大鼠重型发作(Racine 4/5级)评分最高,而雌激素加姜黄素治疗组评分最低(P<0.05)。脑电图的变化与行为学的改变基本一致。致痫后大鼠注射KA侧海马CA3区、CA4区可见到明显的细胞损伤,而该侧海马CA1区、齿状回区(DG)及对侧海马CA3区、CA1区及DG区神经元损害不明显。雌激素组大鼠双侧海马CA3区均出现加重的神经元损害,姜黄素组及雌激素加姜黄素组大鼠海马注射对侧CA3区存活神经元较雌激素组明显增加(P<0.01)。结论高水平的雌激素可以加重癫痫的发作,给姜黄素治疗可以减轻大鼠海马CA3区神经元损害。     

缺氧预处理对颅脑损伤大鼠脑组织MMP-9表达及含水量的影响

目的观察缺氧预处理对颅脑损伤(TBI)大鼠脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达和含水量变化。方法 SD雄性大鼠108只,随机分为对照组(n=6)、缺氧预处理组(HPC组,n=6)、TBI组(n=48)、缺氧预处理+外损组(HPCT组,n=48)。采用干湿重法测定脑组织含水量,RT-q PCR、Western blotting分别测定MMP-9 m RNA及蛋白表达水平。结果 TBI组和HPCT组MMP-9 m RNA在伤后3h、6h、12h、1d、3d明显升高(P0.05),MMP-9蛋白表达和脑组织含水量均在伤后3h、6h、12h、1d、3d、7d明显增加(P0.05)。HPCT组中MMP-9 m RNA在伤后3h、6h、12 h、1d、3d,MMP-9蛋白和脑组织含水量在伤后6h、12h、1d、3d、7 d明显低于TBI组(P0.05)。结论缺氧预处理能抑制颅脑损伤脑组织MMP-9表达从而减轻脑水肿,可能是缺氧预处理对颅脑损伤大鼠发挥脑保护作用的机制之一。     

己酮可可碱预处理对癫痫发作大鼠海马损伤的影响

目的观察己酮可可碱(Ptx)预处理对癫痫发作大鼠海马损伤的影响。方法健康、成年雄性Wistar大鼠分为3组:对照组、癫痫组和Ptx预处理组。对照组腹腔注射生理盐水(127mg·kg~(-1));癫痫组和Ptx组大鼠用氯化锂-匹罗卡品(Li-Pc)诱发癫痫发作,先腹腔注射氯化锂(127mg·kg~(-1)),20h后背部皮下注射匹罗卡品(15mg·kg~(-1));Ptx组大鼠在匹罗卡品注射前30min通过腹腔给予Ptx(60mg·kg~(-1))。观察大鼠癫痫发作情况,利用Timm和Thionin染色分别观察海马苔藓纤维发芽(MSF)和神经元损伤情况。结果癫痫组大鼠在海马苔藓纤维发芽明显增多,并伴有海马神经元的损伤和脱失,Ptx预处理降低了Li-Pc诱发大鼠的癫痫发作率和癫痫发作程度,延长了其癫痫发作潜伏期,减轻了Li-Pc诱发大鼠海马的苔藓纤维出芽及神经元的损伤。结论 Ptx预处理缓解了Li-Pc诱发大鼠的癫痫发作和海马损伤,可能成为治疗癫痫的一种方法。     

缺氧预处理对颅脑损伤周围皮质神经血管单元的影响

目的观察缺氧预处理对颅脑损伤周围皮质神经血管单元(NVU)的影响。方法 108只SD雄性大鼠随机分为对照组(n=6)、缺氧预处理组(HPC组n=6)、颅脑损伤组(TBI组n=48)、缺氧预处理+颅脑损伤组(HPCT组n=48)。免疫组化技术检测神经元核抗原(Neu N)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP),Ig G法测定血-脑屏障通透性变化情况。结果 TBI组和HPCT组的GFAP在伤后3 h~14 d、Ig G在伤后1 h~14 d均增加,而Neu N在两组表达分别在伤后3 h~14 d、6 h~14 d减少(均P0.05)。HPCT组Neu N在伤后3 h~7 d均多于TBI组,GFAP在伤后6 h~1 d多于TBI组而伤后7 d少于TBI组,Ig G在伤后1 h~14 d少于TBI组(P0.05)。结论缺氧预处理在一定时间窗内保护神经元,调整星形胶质细胞活化,降低血-脑屏障通透性,减轻随后颅脑损伤对周围皮质NVU的损伤。     

缺氧预处理对颅脑损伤大鼠脑组织HIF-1α及其HO-1表达的影响

目的探讨缺氧预处理对颅脑损伤大鼠脑组织缺氧诱导因子（HIF-1α）及血红素氧合酶-1（HO-1）表达的影响。方法 Sprague-Dawley大鼠102只,随机分为对照组（n=6）、创伤组（n=48）和预处理组（n=48）。创伤组按照改进的Feeney自由落体撞击法建立大鼠颅脑损伤模型,预处理组给予缺氧预处理后,同法造模。采用RT-PCR和Western blotting观察伤后1 h、4 h、8 h、12 h和1 d、3 d、7 d、14 d挫伤周围脑组织HIF-1α、HO-1表达变化。结果创伤组与对照组比较,HIF-1α和HO-1在伤后4 h、8 h、12 h和1、3 d表达上调（P〈0.05）。预处理组与创伤组比较,HIF-1α和HO-1在伤后1 h逐渐上调,伤后4 h、8 h、12 h和1、3 d表达显著上调,直至伤后7 d（P〈0.05）。结论缺氧预处理可增加颅脑损伤后挫伤区周围脑组织HIF-1α的表达,进而促进HO-1 m RNA及蛋白表达。其机制可能是缺氧预处理提高颅脑损伤对缺氧的适应性,减轻挫伤周围脑组织氧自由基对神经细胞伤害。     

缺氧预处理对颅脑损伤大鼠皮质内质网应激蛋白P-eIF2α表达的影响

目的探讨缺氧预处理(hypoxic preconditioning,HPC)对颅脑损伤大鼠皮质内质网应激蛋白P-e IF2α表达的影响。方法将SD大鼠,随机分为对照组(n=8)、HPC组(n=8)、外伤组(TBI,n=96)、HPC+TBI组(HPCT,n=96)。采用改良Feeney’s法制作颅脑损伤大鼠模型,提前在低压氧舱内对大鼠处理3 d(-50 k Pa、3 h/d)。免疫组化法和Western blotting法检测挫伤区周围皮质P-e IF2α表达变化,TUNEL法检测凋亡神经元细胞。结果 P-e IF2α蛋白于颅脑损伤后3 h开始增加,6~12 h逐渐升高,1 d达高峰,3~14 d逐渐恢复;HPCT组与TBI组比较,伤后6 h~7 d P-e IF2α蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。TBI组、HPCT组伤后6 h可见凋亡细胞表达,12 h~1 d上升,3 d达高峰,7~14 d逐渐恢复;HPCT组与TBI组比较,伤后12 h~7 d凋亡率明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论 HPC可选择性抑制颅脑损伤大鼠皮质P-e IF2α蛋白表达,减轻内质网应激损伤,降低细胞凋亡率,维持神经元细胞功能稳定。     

缺氧对大鼠海马脑片CA1区锥体神经元膜电位的影响

本文应用海马脑片细胞内记录技术，观察了ＣＡ１区锥体神经元膜的电学性质及缺氧对它的影响。发现缺氧可使锥体神经元膜电位呈现时相性变化，即缺氧早期（２－４ｍｉｎ）神经元膜电位出现超极化反应并伴随自发放电消失；缺氧４－７ｍｉｎ时膜呈现慢去极化，此时诱发电位逐渐消失；继续缺氧（８ｍｉｎ左右）膜出现快去极化直至膜电位的消失。用ＴＴＸ或无Ｃａ２＋人工脑脊液灌流脑片可显著地降低缺氧去极化幅度，延迟去极化的发生。结果提示，缺氧去极化的发生与Ｎａ＋、Ｃａ２＋跨膜内流有关。     

行为学训练对海马损伤梗死大鼠齿状回区BrdU和Nestin表达的影响

目的 探讨行为学训练对海马损伤梗死大鼠齿状回区神经干细胞增殖的影响。方法 采用光化学法制成单侧海马损伤梗死模型大鼠72只,随机分为训练组（n=36）和自由活动组（n=36）,每个组设1、7、14、21、28及35d 6个亚组。另设正常对照组36只,与模型组对应分为1、7、14、21、28及35d 6个亚组。训练组大鼠于造模1d后给予水迷宫训练,自由活动组大鼠自由活动,不予水迷宫训练。免疫荧光双标记法观察各不同时间点大鼠海马齿状回区溴脱氧尿嘧啶核苷（Bromodeoxyuridine,BrdU）与巢蛋白（Nestin）的双标记表达情况。结果 正常对照组大鼠海马齿状回区有少量BrdU/Nestin双标记阳性细胞,训练组及自由活动组大鼠在7、14、21及28d海马损伤梗死侧齿状回区BrdU/Nestin双标记阳性细胞数量均有显著增多（P <0.01）;训练组大鼠7、14、21、28d时海马损伤梗死侧齿状回区的BrdU/Nestin双标记阳性细胞数量显著高于自由活动组（P <0.01）;至35d时,训练组及自由活动组大鼠海马损伤梗死侧齿状回区BrdU/Nestin双标记阳性细胞数量与正常对照组无明显差异（P >0.05）。结论 行为学训练能显著增强海马损伤梗死大鼠齿状回区神经干细胞的增殖,促进神经功能恢复。     

电针及氟西汀对抑郁大鼠行为学及海马神经元凋亡的影响

目的 探究电针及氟西汀对慢性应激抑郁大鼠行为学及海马神经元凋亡的影响.方法 65只Sprague-Dawley雄性大鼠,按随机数字表随机分为空白组、空白电针组、模型组、电针组、氟西汀组,每组13只.慢性应激后进行行为学评价;采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法检测海马神经元凋亡率;采用免疫组织化学方法检测海马bcl-2蛋白表达.结果 模型组大鼠旷场试验水平穿越格数[(1.6±1.3)格]、竖立次数[(0.4 ±0.2)次]、体质量增加量[(34±18)g]均明显低于空白组[分别为(51.1 ±22.3)格、(13.2±4.6)次、(128 ±21)g],P均＜0.05;海马神经元细胞凋亡率[(67±10)%]高于空白组[(53±13)%],P＜0.05;海马组织bcl-2蛋白阳性细胞计数[(28±10)个/mm<'2>]低于空白组[(78±22)个/mm<'2>],P＜0.05.电针组[分别为(39.3 ±14.3)格,(9.6 ±4.1)次,(81±43)g]、氟西汀组[分别为(37.2±15.1)格,(9.3±4.6)次,(80 ±35)g]上述指标均明显高于模型组(P＜0.05);海马神经元细胞凋亡率[电针组(30±9)%,氟西汀组(51±13)%]均低于模型组(P＜0.05);海马组织bcl-2蛋白阳性细胞计数[电针组(56±18)个/mm<'2>,氟西汀组(62±24)个/mm<'2>]均高于模型组(P＜0.05),而电针组与氟西汀组间的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 电针和氟西汀可改善抑郁大鼠行为学症状,这种改善与海马细胞凋亡机制有一定相关性.     

缺氧-复氧对大鼠海马培养神经元Bcl-2、Bax表达和神经元凋亡的影响

目的 观察缺氧-复氧对体外培养海马神经元Bcl-2和Bax表达和神经元凋亡的影响。方法 取培养12d的海马神经元，置于恒温(36℃)密闭容器内，连续充以无氧气体[90％(体积分数)N2、10％(体积分数)CO2]，在缺氧条件下继续培养4h后，再于常氧培养箱内复氧培养24h和72h。于不同时间观察神经元存活数，并分别用抗Bcl-2和Bax抗血清进行免疫组织化学染色，观察缺氧-复氧后大鼠海马培养神经元Bcl-2和Bax表达。并用原位末端标记(TUNEL)法和流式细胞术分别检测缺氧-复氧对体外培养海马神经元凋亡的影响。结果 缺氧-复氧后24～72h,海马神经元对Bcl-2的表达逐渐减弱，对Bax的表达逐渐增强，对Bax／Bcl-2比值逐渐增大，凋亡神经元百分率逐渐增多。结论 缺氧-复氧后24～72h神经元凋亡的发生与神经元Bcl-2表达逐渐减弱，Bax表达逐渐增强，Bax／Bcl-2比值逐渐增大有关。     

缺氧预处理对颅脑外伤大鼠皮层TrxR2、CHOP表达及神经元细胞超微结构改变的影响

目的探讨缺氧预处理对颅脑外伤大鼠皮层TrxR2、CHOP表达及神经元细胞超微结构改变的影响。方法 48只SD大鼠随机分成对照(Con)组、缺氧预处理(HPC)组、单纯外伤(TBI),组和缺氧预处理颅脑外伤(HPCT)组。采用改良的Feeney's自由落体装置制作颅脑损伤大鼠模型,预先在低压氧舱内连续处理3 d(-50 kPa、3 h/d)制作缺氧预处理模型。采用HE染色法和新鲜标本制作超薄切片,分别在光镜和电镜下观察各组大鼠皮层脑组织的大体结构和神经元细胞超微结构改变。qRT-PCR和Western blotting法检测挫伤区周围皮层TrxR2、CHOPmRNA和蛋白的表达变化。结果 Con组和HPC组病理改变无明显差异,HPCT组较TBI组大鼠病理改变轻,神经元细胞超微结构受损明显减轻。HPCT与TBI组比较,TrxR2 mRNA和蛋白表达显著上调,CHOPmRNA和蛋白表达显著下调,差异均具有统计学意义(均P0.05);Con与HPC组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论缺氧预处理可明显减轻颅脑外伤大鼠皮层神经元细胞形态学改变,这可能与上调TrxR2、下调CHOP的表达有密切关系,从而对神经元细胞起保护作用。     

出生5 d大鼠海马神经元缺氧耐受性研究

目的建立出生5d大鼠海马神经元原代培养方法，并研究该神经元的缺氧耐受性。方法改进出生5d大鼠海马神经元原代培养方法，分离海马时分为充氧组与对照组，培养过程中倒置显微镜和细胞核因子（NF）免疫组织化学法观察细胞生长和形态。原代培养7d后，分别对出生5d大鼠海马神经元和出生1d大鼠海马神经元进行12h、24h的缺氧处理（0％02、5％C02、95％N2），MTT法检测细胞存活情况。结果（1）充氧组中培养的出生5d大鼠海马神经元生长状态要优于对照组中培养的神经元。（2）缺氧12h出生1d以及5d大鼠海马神经元存活率分别为（81．5±2．3）％和（89，4±2，2）％（P〈0．01）；缺氧24h二者存活率分别为（75．0±2．8）％和（85．0±2．2）％（P〈0．01）。5d海马神经元缺氧耐受能力优于1d大鼠海马神经元。结论海马神经元分离培养过程中充氧有利于神经元的原代培养，出生5d大鼠海马神经元缺氧耐受力强于出生1d大鼠海马神经元。     

睫状神经营养因子对抑郁大鼠行为和海马神经元损伤的影响

目的　观察中枢给予外源性睫状神经营养因子 (CNTF)对抑郁大鼠行为和海马神经元损伤的影响。方法　将 60只SD雄性大鼠随机分为正常对照组 (NC组 )、生理盐水 +抑郁组 (S +D组 )、CNTF 3 0 0 0U +抑郁组 (Ch+D组 )和CNTF 30 0U +抑郁组 (Cl+D组 ) ,每组 1 5只。采用长期不可预见性中等强度应激造成大鼠抑郁模型 ,于实验开始前 1天和实验第 7,1 4 ,2 2天用Openfield法测定大鼠行为 ,于应激第 2 2天将其处死 ,固定脑组织 ,用组织化学、光镜和电镜等技术观察海马CA1、CA3及齿状回神经元的数目和形态。结果　 (1 )应激第 2 2天 ,S +D组体重增长的g数 [(2 8 2 2± 4 2 2 )g]和蔗糖溶液消耗量 [(7 33± 2 43)g]均低于NC组 [分别为 (1 2 4 95± 6 44)g和 (2 0 50± 4 80 )g;P <0 0 1 ] ;而Ch+D组 [分别为 (64 72± 1 5 69)g和 (1 5 56± 3 48)g]均高于S +D组 (P <0 0 1 )。 (2 )Ch+D组的抑郁行为 [水平运动为 (9 80± 1 2 3)次 / 3min ,垂直运动中位数为 3次 / 3min]较S +D组 [水平运动为(1 1 6± 0 41 )次 / 3min ,垂直运动中位数为 0次 / 3min]有显著改善 (P <0 0 1 )。 (3)S +D组和Cl+D组各脑区神经元的丢失均多于NC组 (P <0 0 5和P <0 0 1 ) ,而Ch+D组神经元的丢失则少于S +D组和Cl+D组 (P <0 0