实时荧光PCR快速同时检测从业人员沙门菌和志贺菌结果分析

目的 了解双重实时荧光PCR快速同时检测从业人员沙门菌和志贺菌的效果.方法 采集从业人员肛拭子样本,用双重实时荧光PCR法检测沙门菌和志贺菌,检出的疑似阳性样本按国标法进行培养鉴定.结果 采用双重实时荧光PCR反应体系共检测从业人员39 974人次,荧光PCR检测出沙门菌阳性41份,阳性率1.22‰,培养法检测出31份,阳性率为0.78‰,沙门菌荧光PCR检测法的灵敏度为100％,特异性为99.95％.荧光PCR检测出志贺菌10份,阳性率为0.25‰,培养法检测出3份,阳性率为0.08‰,志贺菌荧光PCR法的灵敏度为100％,特异性为99.98％.从样品处理到检测结果仅需要时间2h～ld.结论 双重实时荧光PCR检测体系快速、灵敏度高、特异性强,可用于从业人员体检的快速诊断和肠道传染病的初筛,为肠道传染病的分子流行病学调查提供新的检测手段.     

荧光PCR法与细菌培养法检测从业人员沙门菌和志贺菌的对比研究

目的比较荧光PCR法与细菌培养法对从业人员肠道携带沙门菌和志贺菌的检出率。方法收集2015年7月24日-2015年11月13日4 620份从业人员肛拭子,分别用荧光PCR法和培养法进行肠道沙门菌和志贺菌的检测,比较2种方法的检出率。结果培养法检出沙门菌54株、志贺菌0株,总检出率为1.17%;荧光PCR法检出沙门菌81株、志贺菌1株,总检出率为1.78%。荧光PCR法检测的灵敏度高于培养法检测,差异有统计学意义(χ~2=5.85,P0.05)。荧光PCR法与培养法对比,其灵敏度为100.00%,特异度为99.39%。结论荧光PCR方法操作简便、快速、灵敏度高、特异性强,可降低工作强度,适合在实验室进行常规推广;本区从业人员肠道沙门菌携带率明显偏高,相关部门需加强公共卫生监督。     

实时PCR筛查、培养法确认方案在从业人员肠道致病菌检测的研究

目的:了解与培养法相结合的实时PCR方案在食品及公共场所从业人员肠道致病菌检测中的应用价值。方法:19818份从业人员肛拭子标本用荧光PCR检测,同时用经典分离培养方法进行确认。结果:在19818份标本中,荧光PCR检测出沙门菌阳性6份,阳性率为0.30‰,培养法检测出5份,阳性率为0.25‰,沙门菌荧光PCR检测法的灵敏度为100%,特异性为99.99%。荧光PCR检测出志贺菌20份,阳性率为1.01‰,培养法检测出5份,阳性率为0.25‰,志贺菌荧光PCR法的灵敏度为100%,特异性为99.94%。结论:在基层应用此方案可提高从业人员带菌检出率及检测准确性并大大降低工作强度,且为从采样到出报告全过程的实验室间比对提供良好基础。     

沙门菌和志贺菌双重实时荧光定量PCR的应用效果评价

目的研究沙门菌和志贺菌双色实时荧光PCR法的应用价值。方法收集2017年8月到2018年4月深圳市西丽人民医院临床肛拭子样本2700份,运用双色实时荧光PCR法检测沙门菌与志贺菌,统计阳性检出率,并与培养法的检测结果进行对比。结果 2700份样本中,培养法检出沙门菌与志贺菌阳性分别为2株、0株,检出率分别为0.07%、0.00%,双色实时荧光PCR法检出沙门菌与志贺菌阳性分别为6株、3株,检出率分别为0.22%、0.11%,双色实时荧光PCR法检出率高于培养法,对比差异有统计学意义(P0.05)。结论双色实时荧光PCR法检测沙门菌和志贺菌的临床效果显著,具有较高的特异性、敏感度及准确率,值得临床推广与应用。     

环介导技术在感染性腹泻沙门菌检测中的应用与研究

目的建立并应用环介导等温扩增法(LAMP)检测肠道门诊感染性腹泻中的沙门菌。方法通过在线软件Primer Explorer V5设计针对沙门菌的保守区引物,建立LAMP检测方法,采用荧光定量PCR法、LAMP法和分离培养法,对本院2015年肠道门诊137例患者的粪便标本进行检测。对建立的方法进行特异度、灵敏度试验,与荧光定量PCR法和培养法进行比对。结果 137份标本中,荧光定量PCR法检出28份阳性,LAMP法检出28份阳性,分离培养法检出23份阳性。3种方法的检测结果差异无统计学意义(P0.05)。LAMP对6株沙门菌属扩增的结果均为阳性,而对志贺菌等5株致病菌株扩增的结果均为阴性。LAMP检测方法具有良好的灵敏度和特异度。结论 LAMP检测方法灵敏特异,简单快速,比荧光定量PCR法更适用于基层疾病预防控制机构,有着较为广泛的发展前景。     

多重实时PCR快速同时检测沙门菌和志贺菌

目的 建立改良分子信标，多重实时PCR同时检测沙门菌和志贺菌的快速方法，应用于食源性致病菌的快速诊断。方法 根据GenBank公布的沙门菌侵袭性基因invA和ssaR基因，分别设计一对引物和改良分子信标探针，用同色荧光标记，用于同体系检测沙门菌。志贺菌根据ipaH基因的保守序列，设计引物和改良分子信标探针，加入沙门菌检测体系中，建立三重实时PCR一改良分子信标检测体系，应用于同时对沙门菌、志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。结果 改良分子信标一多重实时PCR反应体系DNA灵敏度为69～93fg/μl。菌液灵敏度为32～64CFU／ml或1～2CFu／PCR反应体系，无交叉反应。该反应体系同时检测134株沙门菌和67株志贺菌，均出现特异的荧光信号，两种细菌检测互不干扰。对细菌性食物中毒样本等共1100份同时进行沙门菌和志贺菌检测，569份沙门菌实时PCR阳性，其中551份沙门菌培养阳性；42份志贺菌实时PCR阳性，其中41份志贺菌培养阳性。从样品处理到检测结果仅需时间2h至1d。结论 改良分子信标-多重实时PCR检测体系快速、灵敏度高，特异性强，可用于沙门菌和志贺菌食物中毒的快速诊断，伤寒、痢疾等肠道传染病的初筛及预防医学门诊的健康人群体检，为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。     

上海市青浦区健康人群沙门菌属和志贺菌属带菌情况分析

沙门菌属和志贺菌属是人群中最重要的肠道传染病病原菌 ,但在健康人群中也可有一定的携带率 ,是食物中毒事件发生的重要隐患之一。为掌握本地区健康人群沙门菌属和志贺菌属的带菌情况 ,我们对 1992～ 1998年全区各乡镇的 10 82 75份健康从业人员标本沙门菌属和志贺菌属的检测结果进行了分析 ,现报告如下 :1　材料与方法1.1　材料1.1.1　标本来源　由各乡镇卫生院及本中心采集从业人员肛拭一支 ,保存于Cary -Blair半固体培养基进行运送 ,当天送青浦区疾病预防控制中心检验科作细菌培养。从 1992年到 1998年 ,共采集从业人员肛拭标本 10 82 7…     

大型活动饮食服务人员肠道致病菌检查结果分析

目的 探讨在大型活动时对饮食服务人员使用现场肛拭法采集粪便标本并以SN增菌液增菌检查肠道致病菌的检出效果.方法 于2012年夏季天津举办一次大型国际论坛前夕对饮食服务人员采集的现场肛拭标本置入SN增菌液中培养18 ～24 h,再接种SS琼脂平板上,挑选可疑菌落送病原生物实验室进行生化、血清鉴定.结果 从674份肛拭标本中检出沙门菌4株,其中C群沙门菌3株,B群1株;未检出志贺菌,总检出率为0.59％.4份阳性标本均出于男性外来务工人员.结论 该方法可有效提高粪便致病菌的检出率.     

应用LAMP同时快速检测沙门菌和志贺菌的效果评价

目的探讨环介导等温扩增（LAMP）方法同时快速检测沙门菌和志贺菌的应用价值。方法通过通用增菌培养,应用LAMP方法和分离培养法分别对76份食堂从业人员粪便标本进行沙门菌和志贺菌检测。结果LAMP方法检出1份标本沙门菌阳性,阳性率为1．32％;分离培养法检出1份都柏林沙门菌,阳性率为1．32％;2种方法的检测结果一致。LAMP方法可在3h内检出沙门菌、志贺菌,而分离培养法需要3-5d,鼠伤寒沙门菌LAMP方法的灵敏度为170CFU／ml,福氏志贺菌LAMP方法的灵敏度为190CFU／ml,与常见的食源性致病菌均无交叉反应。结论与分离培养法相比,LAMP方法特异性高,灵敏度高,不需要特殊仪器,能够在简易的实验条件下,快速、简便地同时检测沙门菌和志贺菌,LAMP方法适用于基层疾病控制实验室开展沙门菌和志贺菌的快速筛查检测。     

服务行业从业人员肠道致病菌检测结果分析

目的:了解和分析三门县2004~2007年26318份饮食和公共场所从业人员肠道致病菌携带情况及菌型分布。方法:对从业人员粪便及肛拭标本进行肠道菌增菌、分离、生化及血清分型鉴定。结果:合计检测标本26318份,共检出阳性菌72株,总检出率0.27%;其中沙门菌69株,检出率0.26%;志贺菌2株,检出率0.008%;霍乱弧菌1株,检出率0.004%。69株沙门菌经生化和血清学鉴定分为9个血清群12个血清型,另有5株菌型未定,其中B群德尔卑沙门菌共检出37株,占沙门菌检出率53.6%,排在第一位;其次为D3群吉韦沙门菌检出6株,占沙门菌检出率8.7%;第三位的E1群纽兰沙门菌检出5株,占沙门菌检出率7.3%。结论:三门县饮食和公共场所从业人员沙门菌检出率最高,应加强健康体检,及时调离沙门氏菌带菌者。     

上海市奉贤区服务行业从业人员肠道致病菌检测结果分析

目的了解和分析上海市奉贤区2004-2008年饮食服务和公共场所从业人员肠道致病菌携带情况及菌型分布。方法对从业人员肛拭标本进行肠道菌检测及血清分型鉴定。结果共检测标本154 097份,检出阳性菌株545份,总检出率0．35％。其中检出沙门菌537株,志贺菌8株。537株沙门菌经生化及血清学鉴定分为6个血清群46个血清型。其中E群占的比例为38．79％。最常见的血清型依次为伦敦,山夫登堡,德比。结论奉贤区饮食服务和公共场所从业人员沙门菌检出率较高,应加强健康检查,及时调离阳性者。     

一起肠炎沙门菌食物中毒检测分析

目的:应用实时荧光PCR技术对细菌性食物中毒进行快速检测,为食物中毒调查和应急处理提高依据.方法:采集16份相关标本,其中病人肛拭3份、粪便标本1份、呕吐物1份、剩余食物3份、食物加工人员手涂抹液1份和工作台具涂抹液7份,前增菌后,提取核酸,在LightCycler荧光定量PCR仪上利用实时荧光PCR技术进行沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌、单核增生李斯特菌、大肠杆菌0157、副溶血弧菌病原菌的快速检测和筛查,同时进行细菌分离培养,利用Vrr:EK全自动微生物鉴定仪对可疑菌进行生化反应检测,以及进行血清学试验.结果:11份标本沙门菌实时荧光PCR检测阳性,其他细菌荧光PCR检测阴性;该11份荧光.PCR阳性标本分离的菌株经全自动微生物生化鉴定仪鉴定为沙门菌,99%的概率,血清型都为AF、O9、Hg、Hm,为肠炎沙门菌.结论:本次食物中毒由肠炎沙门菌引起的,应大力整顿熟食市场,加强食品卫生管理和宣传健康教育,避免同类事件再次发生.     

上海市奉贤区从业人员肠道沙门菌和志贺菌检测结果

沙门菌属和志贺菌属是人群中最重要的肠道传染病病原菌，因其在人体中的隐性携带，其有些菌型可引起人的急性腹泻和食物中毒爆发。因此，沙门菌和志贺菌的检测是饮食服务和公共场所从业人员体检的重要检测项目之一，它对传染源管理，有效阻止肠道传染病流行和食物中毒的发生具有重要意义。为掌握奉贤区从业人员沙门菌属和志贺菌属的带菌情况及流行趋势，进一步加强饮食服务行业的卫生监督管理，我们对奉贤区2004—2006年全区各镇79319份从业人员健康检查肛拭标本进行了沙门菌属和志贺菌属的检测，结果报告如下。     

实时荧光PCR法快速分离食源性致病菌

目的建立快速的食源性沙门菌和志贺菌检测方法,以提高对该菌的检验速度和准确性,为公共卫生,食源性致病菌监测,突发性群体性食物中毒事件提供技术支持。方法采用实时荧光PCR法和培养法对40份不同类食品进行沙门菌和志贺菌的检测,并对分离的菌株进行血清分型和定量检测,比较两种方法的特异性,灵敏度,准确性。结果采用实时荧光PCR法检测40份样本,其中8份沙门菌核酸阳性,阳性率20%;采用培养法检测这40份样本,4份样品分离出沙门菌,阳性率10%,且4份样品经核酸检测均为阳性,32份核酸阴性样本采用培养法检测,均未分离到沙门菌和志贺菌。结论实时荧光PCR法结合传统分离培养法适宜食品中沙门菌,志贺菌的快速筛查鉴定及食物中毒等突发事件的快速诊断。     

从业人员肠道沙门菌检测结果分析及PCR技术的应用

目的:了解南京市江宁区餐饮和服务行业从业人员肠道沙门氏菌携带和菌型分布情况,为防止肠道传染病的发生提供依据;探讨PCR技术在从业人员肠道沙门菌检测中的应用。方法:采用传统培养法和荧光PCR法对2016年餐饮和服务行业从业人员肛拭子标本进行沙门氏菌检测。结果:检测样品71694份,检出沙门氏菌118株,检出率为0.16%。男性和女性肠道沙门菌检出率分别为0.19%和0.15%,差异无统计学意义(x2=1.68,P0.05);全年中检出阳性菌株数量较多的在三、四季度,以夏秋季节为主;118株沙门阳性菌株共分布为6个血清群(亚群)。其中C2群所占比例最高为29株(24.58%),其余依次为B群25株(21.19%)、C1群21株(17.80%)、E4群20株(16.95%)、D群13株(11.02%)、E1群10株(8.47%);荧光PCR法和传统法结果一致。结论:江宁区从业人员携带的沙门氏菌菌型复杂,人群带菌率与季节密切相关。荧光PCR技术具有较好的特异性和敏感度,可以在从业人员肠道沙门菌检测工作中推广使用。     

一起不典型症状宋内志贺菌暴发疫情的实验室诊断

目的分析本实验室对1起由宋内志贺菌引起的不典型临床症状、疑似不明原因发热暴发疫情的实验室检测过程,为类似事件的实验室诊断提供参考。探讨通过增菌前后Ct值变化,荧光PCR用作病原菌确诊方法的可能性。方法采用总大肠菌群酶底物法测定总大肠菌群和大肠埃希菌,常规培养法和荧光PCR法测定患者咽拭和肛拭样品以及水样中病原微生物,用MIC法对分离菌株进行体外药敏试验。结果 10份饮用水中6份总大肠菌群和大肠埃希菌,不符合GB5749-2006的要求。常规培养9份肛拭均检出宋内志贺菌,而10份水样均未检出肠道致病菌。荧光PCR结果 9份肛拭和5份水样检出志贺菌核酸,5份水样增菌后Ct值较增菌前有明显下降。肛拭中分离的9株菌对青霉素类抗生素中的阿莫西林、哌拉西林、替卡西林100%耐药,对磺胺类、β-内酰胺类、头孢菌素类(1-4代)、氨基糖苷类等存在不同程度耐药。结论实验室应用指标菌检测、常规培养和荧光PCR技术,48 h即找到引起疫情暴发的原因,为疫情的控制提供了及时科学的依据。药敏试验为患者治疗提供了正确的药物选择依据。     

服务行业从业人员肠道致病菌检测结果分析

目的：了解和分析杭州市下城区饮食和公共场所从业人员肠道致病菌携带情况及菌型分布状况。方法：对从业人员粪便及肛拭标本进行肠道菌增菌、分离、生化及血清学分型鉴定。结果：合计检测标本32914份，共检出阳性菌129份，总检出率为0．39％，其中检出沙门菌114株，占总检出率的88．4％；志贺菌11株，占总检出率的8．5％；霍乱弧菌4株，占总检出率的3．1％。114株沙门菌经生化和血清学鉴定分为7个血清群21个血清型，其中B群占33．3％，最常见的血清型依次为阿哥纳、山夫登堡和伦敦沙门菌。结论：杭州市下城区饮食和公共场所从业人员沙门菌检出率较高，应加强健康检查，及时调离阳性者。     

双色实时荧光PCR法快速检测感染性腹泻人群中的沙门菌和志贺菌

目的调查沙门菌和志贺菌在南京市腹泻人群中的分布情况,为做好防治工作提供资料。方法对监测哨点医院腹泻患者的粪便样本提取核酸,采用双色实时荧光PCR方法对携带SsaR毒力基因的沙门菌属和携带Ipah毒力基因的志贺菌属进行检测,阳性样本再采用传统分离培养方法进行分离,获得的可疑菌株采用ATB生化鉴定,血清凝集确认血清型,从而了解这2种病原菌在腹泻人群中的检出率和相应菌型的分布情况。结果在检测的1 558份样本中,检出沙门菌25株,检出率为1.60%;志贺菌9株,检出率为0.58%。结论本市2012年-2013年肠道门诊腹泻中,分离志贺菌属以福氏志贺菌为主,宋内志贺菌次之,无鲍氏志贺菌和痢疾志贺菌。沙门菌属以D群和C1群血清型为相对优势血清型,血清型分布较广。     

改良分子信标-实时PCR快速检测志贺菌

目的：建立改良分子信标-实时PCR检测志贺菌的快速方法，应用于志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。方法：根据GenBank公布志贺菌ipaH基因的保守序列，设计引物和改良分子信标探针，建立实时PCR-改良分子信标检测体系，应用于对志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。结果：改良分子信标-实时PCR反应体系DNA灵敏度为93fg/μl，菌液灵敏度为64cfu／ml或2cfu／PCR反应体系，无交叉反应。此反应体系检测67株志贺菌，均出现特异的荧光信号。对细菌性食物中毒样本等共657份样品进行志贺菌检测，42份志贺菌实时PCR阳性，其中41份志贺菌细菌培养阳性。从样品处理到检测结果仅需2h～1d时间。结论：改良分子信标-实时PCR检测体系快速、灵敏度高，特异性强，可用于志贺菌食物中毒的快速诊断，为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段，对于提高肠道门诊的工作效率有重要意义。     

上海市闵行区饮食和公共场所从业人员沙门和志贺菌属带菌情况

沙门菌属和志贺菌属是人群中重要的肠道传染病病原菌，因其在人体中的隐性携带，所以要特别警惕由于此种情况引发的食物中毒和食源性肠道传染病。为掌握本地区从业人员沙门菌属和志贺菌属的带菌情况及流行趋势，为制定疾病预防控制措施提供可靠依据，我们对2001～2003年全区各乡镇283685份从业人员健康检查肛拭标本进行了沙门菌属和志贺菌属的监测和分析，现报告如下：