多重耐药鲍曼不动杆菌RND外排泵基因检测及流行病学分析

目的了解宁波地区鲍曼不动杆菌的耐药率及RND外排泵基因的携带情况,研究该菌的流行型别,为临床合理用药及控制医院感染提供依据。方法采用琼脂稀释法检测临床分离的鲍曼不动杆菌对15种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC),PCR检测9种RND外排泵基因的携带情况,脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术分析多重耐药鲍曼不动杆菌的同源性。结果 30株鲍曼不动杆菌对临床常用抗生素普遍耐药,对美罗培南和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率相对较低;adeABC、ade IJK、ade FGH外排泵基因分布广泛,在敏感菌株中的存在率也很高;PFGE分型结果显示,14株多重耐药鲍曼不动杆菌(MDRAB)主要以流行克隆A为主。结论临床分离鲍曼不动杆菌耐药情况严峻,克隆播散是MDRAB的主要传播方式,携带ade B、ade J等多种外排泵基因是鲍曼不动杆菌多重耐药的重要原因。     

研究鲍曼不动杆菌外排泵在氟喹诺酮类药物耐药中的作用

目的研究外排泵基因ade B的存在与鲍曼不动杆菌对氟喹诺酮类药物耐药的相关性,以及外排泵抑制剂羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)对耐药率的影响,以探讨主动外排作用在鲍曼不动杆菌耐药中所起的作用。方法采用K-B琼脂纸片扩散法进行药敏试验,琼脂稀释法检测环丙沙星、左氧氟沙星和加替沙星等3种氟喹诺酮类药物对58株鲍曼不动杆菌的MICs,同时检测在加入CCCP后3种药物MICs的变化情况。结果 58株鲍曼不动杆菌临床菌株中,45株至少对1种氟喹诺酮类药物耐药,13株对3种氟喹诺酮类药物全部敏感,总耐药率为77.6%(45/58)。加外排泵抑制剂CCCP后,鲍曼不动杆菌临床菌株对3种氟喹诺酮类药物的耐药率都降低:45株耐药株中31株外排泵表型阳性。对3种药物全部敏感的13株菌株中有1株外排泵表型阳性。鲍曼不动杆菌耐药株外排基因ade B检出率(100%)明显高于敏感株(76.9%)(χ~2=11.0,P0.01)。结论 CCCP在体外可以抑制鲍曼不动杆菌对氟喹诺酮类药物主动外排作用,降低鲍曼不动杆菌的MICs值。外排基因ade B的存在与鲍曼不动杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药性具有相关性。     

多重耐药鲍曼不动杆菌耐药性分析及对替加环素敏感性降低的机制研究

目的探讨多重耐药鲍曼不动杆菌对替加环素敏感性降低的机制。方法应用浓度梯度法检测多重耐药鲍曼不动杆菌对替加环素的敏感性,然后应用实时荧光定量PCR检测菌株中adeB外排泵基因的分布,最后应用实时荧光逆转录PCR技术测定外排泵基因adeB的表达水平。结果替加环素对100株受试菌的最低抑菌浓度(MIC)为0.125μg/ml~4μg/ml,MIC50为1μg/ml,MIC90为2μg/ml;菌株中ade B外排泵基因广泛分布,但adeB外排泵基因的相对表达量并未随着MIC值的增加而增加。结论多重耐药鲍曼不动杆菌对替加环素敏感性的降低可能存在ade B基因表达调控以外的机制。     

鲍曼不动杆菌RND主动外排泵的表达与耐药性的关系

目的检测鲍曼不动杆菌耐药结节分化家族(RND)外排系统的分布,探索其表达与耐药性的关系。方法对南昌大学第一附属医院临床标本分离的59株多重耐药鲍曼不动杆菌进行细菌的鉴定与药敏分析,采用PCR技术检测鲍曼不动杆菌中RND主动外排系统的分布情况,比较不同耐药表型的鲍曼不动杆菌间外排泵基因的表达情况,分析其表达量与耐药的关系,并对RND外排系统的扩增产物进行测序。结果鲍曼不动杆菌对氨苄西林/舒巴坦、亚胺培南、庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星耐药率高达93.2%、94.9%、88.1%、96.6%、52.5%。59株鲍曼不动杆菌经外排泵及整合子基因PCR扩增检测,adeR、adeS、adeB、adeJ、adeG基因的携带率分别为81.4%、91.5%、93.2%、100.0%、61.0%。不同菌株外排泵基因的表达均不相同,其中庆大霉素、亚胺培南、氨苄西林/舒巴坦耐药组与非耐药组鲍曼不动杆菌adeB、adeJ基因的表达量相比,差异均有统计学意义(均P0.05)。adeABC外排泵的调控基因adeR、adeS的碱基序列未出现基因突变或插入序列。结论 RND外排系统在鲍曼不动杆菌中普遍存在,RND外排系统中adeB、adeJ基因的表达水平升高与细菌对庆大霉素、亚胺培南、氨苄西林/舒巴坦的耐药性有关。     

鲍曼不动杆菌的耐药分析及主动外排基因adeB的检测

目的了解临床分离不动杆菌属对16种抗菌药物的耐药性,为耐药菌的抗菌药物选择提供依据,并扩增外排泵蛋白编码基因adeB,以探讨鲍曼不动杆菌多重耐药与细胞膜主动外排作用的关系。方法随机收集40株不重复鲍曼不动杆菌,采用K-B法对鲍曼不动杆菌进行药物敏感试验。后采用聚合酶链反应(PCR)方法筛选鲍曼不动杆菌的主动外排基因adeB,并进行序列分析。结果 40株鲍曼不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南最为敏感,耐药率为0;其次对氨苄西林/舒巴坦,耐药率仅为27.5%;对其余抗菌药物的耐药率在52.5%～75.0%之间;根据PCR产物片段大小,40株鲍曼不动杆菌共有adeB基因阳性菌株26株(65.0%)。序列分析显示adeB基因与参考序列AF37088599%相同,与参考序列AJ971416100%相同。结论鲍曼不动杆菌是医院感染的重要病原菌,对多种抗生素的耐药率高,且呈多重耐药。主动外排作用可能是鲍曼不动杆菌多重耐药的重要机制之一。     

多药耐药鲍曼不动杆菌主动外排作用研究

目的:观察羰基氰氯苯腙(CCCP)对多药耐药鲍曼不动杆菌耐药水平影响,以探讨主动外排作用在鲍曼不动杆菌耐药中所起的作用。方法:用琼脂二倍稀释法测定鲍曼不动杆菌对哌拉西林等临床常用抗生素的最低抑菌浓度(MIC),观察在CCCP存在条件下MIC值的变化;用PCR法扩增外排泵编码基因adeB。结果:79.2%(19/24)的菌株外排泵表型试验阳性,其中有63.2%(12/19)同时对2种以上的药物有明显的外排作用,这19株主动外排表型阳性菌株adeB基因检测均阳性。结论:外排泵抑制剂在体外能降低多种抗菌药物对鲍曼不动杆菌的MIC,外排泵抑制剂的应用及外排泵编码基因的检测为临床提供一种敏感的检测鲍曼不动杆菌主动外排系统的方法。     

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌耐药性与外排泵基因adeB关系的分析

目的探讨耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌的耐药性与外排泵基因adeB的关系,为临床合理使用抗生素提供依据,防止和抑制鲍曼不动杆菌耐药菌株的增加。方法收集本院2017年1月-12月临床分离的非重复鲍曼不动杆菌122株,其中亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌(IRAB)96株,亚胺培南敏感鲍曼不动杆菌(ISAB)26株。采用微量肉汤稀释法进行药物敏感性分析试验;应用PCR及序列分析的方法分析外排泵基因adeB。结果 IRAB对大多数抗生素最小抑制浓度(MIC)值均较高,但对替加环素仍保持较高的敏感性,而ISAB对多数抗生素均较敏感。PCR扩增结果显示IRAB的adeB检出率为96.8%。adeB基因与GenBank注册号CP026943.1基因相似性为99%。结论本院分离到的鲍曼不动杆菌对亚胺培南有较高的耐药性,与adeB基因关系密切。     

鲍曼不动杆菌耐药性分析及其主动外排基因adeB的分子检测

目的了解临床鲍曼不动杆菌的多重耐药状况及主动外排基因adeB的检测情况。方法对南华大学附一医院所分离的鲍曼不动杆菌在不同类型标本中的分布与科室来源进行分析,利用ATB药敏系统对所分离菌株进行药物敏感试验;通过Primer Premier软件设计特异性扩增引物,采用聚合酶链反应(PCR)对鲍曼不动杆菌主动外排基因adeB在不同类型标本中的分布情况进行检测,探讨鲍曼不动杆菌的耐药性与主动外排基因adeB之间可能存在的关系。结果所分离的50株鲍曼不动杆菌耐药率较高,对美罗培南和亚胺培南的耐药率达76.0%和74.0%,对其它抗菌药物的耐药率均在80%以上;50株鲍曼不动杆菌经PCR检测,主动外排基因adeB阳性者42株,检出率为84.0%。结论本地区鲍曼不动杆菌耐药率及主动外排基因adeB检出率较高,主动外排基因adeB可能介导了鲍曼不动杆菌的多重耐药。     

多药耐药鲍氏不动杆菌外排泵耐药基因及同源性分析

目的分析临床多药耐药鲍氏不动杆菌外排泵耐药基因adeA、adeB、adeC及其调控基因adeR、adeS分布与抗菌药物耐药的关系,为ICU感染鲍氏不动杆菌的同源性有效应对医院感染。方法 2012年ICU检出鲍氏不动杆菌102株,采用K-B法进行药敏试验,PCR测定所有菌株的药物外排泵基因,并利用脉冲场凝胶电泳进行同源性分析。结果 94株耐药鲍氏不动杆菌对头孢唑林和呋喃妥因耐药率均为100.0%,对亚胺培南和氨苄西林/舒巴坦的耐药率为75.8%和95.0%,对其他抗菌药物耐药率均>85.0%;102株鲍氏不动杆菌中adeA、adeB、adeC、adeR、adeS基因型的阳性株分别为78、79、76、77、74株;5种基因均以阴性为主;敏感株中调控基因adeR、adeS表达率较低分别为37.5%和25.0%。结论 ICU分离的鲍氏不动杆菌中呈现严重的多药耐药,adeABC外排泵耐药基因相对于敏感株在耐药菌株中大量存在,外排泵基因的高表达与鲍氏不动杆菌的多药耐药存在相关性关系,而且其基因的播散主要通过克隆播散得以传播。     

泛耐药鲍氏不动杆菌外排泵系统与耐药机制的关系

目的探讨外排泵adeABC、IJK、FGH在医院泛耐药鲍氏不动杆菌(PDRAB)中的分布特点及其在耐药机制中的作用。方法收集医院2011年1月-2014年4月临床分离的PDRAB 67株(泛耐药组)及同期非多药耐药鲍氏不动杆菌68株(相对敏感组),用CCCP抑制试验对以上两组进行外排泵表型检测;同时PCR扩增外排泵基因adeABC、IJK、FGH,对产物进行测序,通过琼脂糖凝胶电泳观察结果,比较并分析两组间外排泵差异。结果两组共筛选出外排泵表型阳性菌88株,其中泛耐药组52株占77.6%,相对敏感组36株占52.9%;泛耐药组中adeB、adeG基因检出阳性率为100.0%,adeJ基因阳性率为92.5%;相对敏感组中adeB、adeJ、adeG基因检出阳性率分别为44.1%、75.0%、82.4%;泛耐药组检出阳性率均显著高于相对敏感组(P<0.01);泛耐药组中3种基因同时检出率显著高于相对敏感组(P<0.01)。结论外排泵阳性菌株在鲍氏不动杆菌临床分离株中广泛存在,PDRAB表达率显著增高,外排泵基因adeABC、IJK、FGH在PDRAB中均有高检出率,主动外排泵机制可能在PDRAB的耐药机制中起作用,且与3个基因的共同存在和共同表达有关。     

临床分离鲍曼不动杆菌耐药性检测及其主动外排机制的确证

目的对我院分离的鲍曼不动杆菌进行耐药性分析并初步探讨是否存在药物主动外排机制。方法K-B法对临床分离的鲍曼不动杆菌进行药敏试验,CCCP联合不同抗菌药物测定MIC值的变化进行主动外排机制的初步确证。结果75株鲍曼不动杆菌对临床常用抗生素均有不同程度耐药,CCCP处理前后MIC值均呈现不同程度变化,多种药物泵阳性株和泵阴性株的耐药率和敏感率差异有统计学意义（P〈0.05）。结论临床鲍曼不动杆菌耐药形势严峻,75株试验菌株存在药物主动外排机制,其高度耐药性及多重耐药性可能与主动外排机制密切相关。     

泛耐药鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶基因、膜孔蛋白基因及外排泵基因研究

目的全面了解泛耐药鲍氏不动杆菌β-内酰胺类耐药机制。方法收集2008年1-12月住院患者痰液标本中分离的泛耐药鲍氏不动杆菌20株,用聚合酶链反应(PCR)法,分析33种β-内酰胺酶基因和膜孔蛋白carO基因以及外排泵adeB基因。结果 20株泛耐药鲍氏不动杆菌共检出A类β-内酰胺酶基因TEM-1、C类β-内酰胺酶基因ADC-30、D类β-内酰胺酶基因OXA-23,三者阳性率均为100.0%;B类β-内酰胺酶基因未检出;膜孔蛋白carO基因突变率为100.0%,外排泵adeB基因阳性率为100.0%。结论泛耐药鲍氏不动杆菌株对β-内酰胺类药物耐药与产TEM-1、ADC-30、OXA-23β-内酰胺酶,膜孔蛋白carO基因突变和获得adeABC外排泵3种耐药的机制相关。     

多药耐药鲍氏不动杆菌adeABC外排系统研究

目的 调查临床多药耐药鲍氏不动杆菌外排泵耐药基因adeA、adeB、adeC和调控基因adeS、adeR分布情况及与抗菌药物耐药的关系.方法 在全国范围21所医院选择同期多药耐药鲍氏不动杆菌101株和敏感菌12株进行研究；测定其对6种抗菌药物的MIC值；PCR筛选外排泵耐药基因adeA、adeB、adeC及其调控基因adeS、adeR,克隆测序明确基因型.结果 101株多药耐药鲍氏不动杆菌对美罗培南、亚胺培南、米诺环素、头孢噻肟、庆大霉素、环丙沙星耐药率分别为52.5％、62.4％、71.3％、80.2％、94.1％、95.0％,其中对以上6种抗菌药物全部耐药的菌株36株；adeA、adeB、adeC、adeS、adeR基因阳性菌株分别为74、76、75、73、77株；以上5种基因均阳性(基因型命名为组Ⅰ)的菌株检出64株,检出率为63.4％,为分布最广且最主要的基因型；根据脉冲场凝胶电泳菌株的同源性分析结果发现,克隆A、B、C、E中以组Ⅰ为主,而D克隆中以组Ⅶ(5种基因均阴性)为主；12株敏感鲍氏不动杆菌外排泵耐药基因adeA、adeB、adeC阳性率也均＞40.0％,但调控基因adeS、adeR阳性率较低.结论 鲍氏不动杆菌临床分离株中,adeABC外排泵基因在耐药菌和敏感菌中阳性率均高,而且地区分布和克隆分布十分广泛,其与多耐药的获得有极大的相关性,其基因的播散可能主要通过菌株的克隆播散得以实现.     

外排泵adeFGH基因与鲍氏不动杆菌多药耐药的关系研究

目的探讨临床分离鲍氏不动杆菌主动外排基因adeFGH的表达与其多药耐药的关系。方法对2012年1-2月临床分离的60株鲍氏不动杆菌进行回顾性分析,采用BD CRYSTAL细菌鉴定系统进行细菌检测,采用法国生物梅里埃公司ATB药敏系统进行药物敏感试验,PCR检测外排泵基因adeFGH的分布和表达水平。结果痰液及伤口分泌物中分别检出鲍氏不动杆菌51及8株,分别占85.0%、13.3%;科室分布主要为ICU、神经外科、呼吸内科、烧伤科,分别占43.3%、28.3%、10.0%、10.0%;60株鲍氏不动杆菌按药敏结果分为A组全耐药共31株,B组为氨基糖苷类和磺胺甲噁唑/甲氧苄啶敏感、其他抗菌药物耐药共13株,C组为耐阿莫西林和一、二代头孢菌素类抗菌药物、其他抗菌药物敏感,共16株;A组均检出外排泵基因adeFGH,B组均检出外排泵基因adeFGH,C组检出外排泵基因adeG16株、adeH3株,未检出adeF。结论外排泵基因adeFGH与鲍氏不动杆菌对氨基糖苷类和磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药无关,外排泵基因adeG与鲍氏不动杆菌对青霉素类和一、二代头孢菌素类抗菌药物耐药有关。     

生物膜形成促进临床耐亚胺培南鲍曼不动杆菌OXA-23和AdeABC外排泵基因的表达

目的通过生物膜对苯唑西林酶(OXA)和AdeABC外排泵基因表达的影响研究,揭示生物膜的形成对OXA和AdeABC外排泵相关耐药机制的影响,探讨生物膜在鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药方面的作用机制及作用方式。方法微量滴定板法制备生物膜模型及定量实验;多重PCR技术对OXA及AdeABC外排泵基因进行检测;实时荧光定量PCR技术对不同状态下OXA-23、AdeB基因表达量进行检测;E-test方法对产膜与非产膜菌株亚胺培南的最低抑菌浓度(MIC)进行测定。结果106株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌中产生物膜和不产生物膜菌株分别占67.9%和32.1%;各耐药基因检出率分别为OXA-23:99.1%;OXA-24:0.1%;OXA-51:100%;OXA-58:0;AdeA、AdeB和AdeC均为98.1%;生物膜状态下的OXA-23、AdeB基因的相对表达量明显高于普通肉汤培养和浮游状态下基因的相对表达量(P0.05);产膜比非产膜菌株亚胺培南MIC更高,P0.05。结论鲍曼不动杆菌的生物膜形成能够促进OXA-23和AdeABC外排泵基因的表达,从而增强鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药性。     

医院重症监护室多耐药鲍曼不动杆菌耐药基因的流行特征

【目的】分析医院重症监护室临床病例与环境分离的鲍曼不动杆菌株携带多种耐药基因的相关性,探索多重耐药鲍曼不动杆菌携带的耐药基因特征与传播耐药基因的途径。【方法】采用微量肉汤稀释法(MIC)作药敏试验、聚合酶链式反应及基因测序。【结果】2013—2014年ICU临床病例标本分离的150株鲍曼不动杆菌对头孢类菌素、氨基糖苷类抗菌药物、庆大霉素耐药率在96%以上。环境标本分离的103株鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类抗菌药物阿米卡星耐药率最高,达62.39%;对碳青霉烯类抗菌药物(亚氨培南、美罗培南)的耐药率为53.21%、55.96%。基因分析显示主动外排泵adBe阳性时,它分别与A类、D类β-内酰胺酶或A类、C类β-内酰胺酶基因、膜孔蛋白carO基因、氨基糖苷类基因等相关。carO基因与氨基糖苷类基因aph(3′)-Ι、aac(6′)-Ⅰb、D类β-内酰胺酶OXA-51,66群、回旋拓普酶gyrA基因相关。【结论】携带adBe基因的鲍曼不动杆菌对常用抗菌药物产生多重耐药性具有重要作用;膜孔蛋白carO阳性,介导碳青霉烯类药物的渗透,要谨防新耐药基因的亚型出现,加强病区环境消毒与管理,有效阻断医院ICU多重耐药鲍曼不动杆菌传播。     

多重耐药鲍曼不动杆菌ERIC—PCR的分子流行病学研究

目的监测医院不同病区分离的多重耐药鲍曼不动杆菌属耐药性变迁及基因同源性,为临床治疗和医院感染控制提供依据。方法收集2006—2008年医院临床分离非重复多重耐药鲍曼不动杆菌株23株,采用Kirby—Bauer（K—B）法进行药敏试验,应用肠杆菌科基因间重复序列聚合酶链反应（ERIC—PCR）对菌株进行DNA分型及同源性分析。结果23株鲍曼不动杆菌中,对3种或以上抗茵药耐药有22株;ERIC—PCR谱型表现为7种基因型,其中来源于不同的2个克隆株A型和B型,共占79．3％,且2个克隆株的相似度为72．7％。结论来自多个病区的多重鲍曼不动杆菌对抗生素耐药率高,且具有基因同源性,存在院内克隆传播。     

泛耐药鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶、膜孔蛋白、外排泵编码基因研究

目的 调查泛耐药鲍氏不动杆菌(PDRAB)β-内酰胺酶、膜孔蛋白、外排泵编码基因携带情况.方法 收集临床样本分离的20株PDRAB,采用PCR法检测33种β内酰胺酶基因,包括A类13种、B类(金属β-内酰胺酶)10种、C类(AmpC酶)两种、D类8种,膜孔蛋白carO编码基因以及外排泵adeB编码基因.结果 β-内酰胺酶编码基因中,A类TEM-1、C类ADC-30检出率均为100.0％;D类OXA-23的阳性率为65.0％;未检出B类基因,20株PDRAB膜孔蛋白carO基因、外排泵adeB基因阳性率均为100.0％.结论 临床分离的PDRAB,可携带多种β-内酰胺类耐药基因,普遍带有膜孔蛋白和外排泵adeB基因.     

鲍氏不动杆菌外排泵家族及其抑制剂的研究进展

目的抗菌药物的滥用加重了病原菌对药物的耐药性,也增加了临床治疗病原菌感染的难度。近年来鲍氏不动杆菌引发的病原菌感染病例逐年上升,所以研究鲍氏不动杆菌对抗菌药物的耐药机制是目前研究的热点。本研究对鲍氏不动杆菌外排泵系统的分子结构,蛋白家族,耐药基因所在遗传元件的转移方式以及外排泵抑制剂进行了总结,重点对外排泵超家族和与其对应的抑制剂进行了阐述。通过对外排泵系统介导鲍氏不动杆菌耐药性的作用机制的分析,为治疗鲍氏不动杆菌引起的疾病提供理论依据。     

浙江省永康地区多重耐药鲍曼不动菌的分子分型研究

目的分析永康市第一人民医院临床分离的30株多重耐药鲍曼不动杆菌的同源性分布情况及亲缘进化关系,明确永康市第一人民医院多重耐药鲍曼不动杆菌的基因分型。方法收集永康市第一人民医院临床分离的30株多重耐药鲍曼不动杆菌,利用限制性内切酶ApaI酶切进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析,利用BioNumerics软件进行聚类分析反映菌株间的同源性分布情况;通过多位点序列分型(MLST)方法反映菌株间的进化关系,经过数据共享及比较,进行基因分型。结果通过PFGE技术将30株(其中3株菌无PFGE结果)多重耐药鲍曼不动杆菌分为4个脉冲群,其中脉冲群A为主要流行克隆;经MLST分析,永康市第一人民医院感染多重耐药鲍曼不动杆菌主要流行克隆为ST208,且得到一个新的序列型。结论经PFGE和MLST分析,均得到了一个主要流行克隆。永康市第一人民医院的主要流行株ST208与世界上的主要流行克隆具有高度的同源性。