当归醇沉物及其中性组份体外对巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1的影响

目的观察当归醇沉物(ESA)及其中性组分(ESA-1)体外对小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1的影响.方法L929细胞株细胞毒法测TNF-α;L929细胞增殖法测IL-1.结果ESA、ESA-1与小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)共同培养可显著增强其TNF-α、IL-1的分泌.在5～20μg/mL浓度范围,ESA的这种作用呈剂量依赖性;ESA-1虽有明显的作用,但未表现出剂量依赖.结论当归醇沉物及其中性组分体外可增强小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1.     

当归醇沉物及其中性组份体外对巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1的影响

目的 观察当归醇沉物（ESA）及其中性组分（ESA－1）体外对小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF－α、IL－1的影响。方法 L929细胞株细胞毒法制TNF－α、IL-1。结果 ESA、ESA－1与小鼠腹腔巨噬细胞（MΦ）共同培养可显著增强其TNF－α、IL-1的分泌。在50－20μg/mL浓度范围，ESA的这种作用呈剂量依赖性；ESA－1虽有明显的作用，但未表现出剂量依赖。结论 当归醇沉物及其中性组分体外可增强小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF－α、IL-1。     

枳椇子醋酸乙酯提取物对大鼠肝P450同工酶的影响

目的：观察枳椇子醋酸乙酯提取物对大鼠肝P450同工酶的影响。方法：大鼠分别灌胃给予枳椇子醋酸乙酯提取物相当于生药量0.14,0.17,0.2 g·kg^-1,连续10 d,采用紫外分光光度法测定细胞色素P450与NADPH-细胞色素C(P-450)还原酶含量及苯胺羟化酶(ANH)、氨基比林N-脱甲基酶(ADM)、红霉素N-脱甲基酶(ERD)的活性。采用RT-PCR技术检测大鼠肝脏CYP1A1,CYP2C11,CYP2E1,CYP3A1基因的水平。结果：枳椇子醋酸乙酯提取物对细胞色素P450及NADPH-细胞色素C(P-450)还原酶含量无显著影响；可抑制苯胺羟化酶(ANH)活性,抑制率可达31.5%；可增加氨基比林N-脱甲基酶(ADM)活性,可达42.4%；而对红霉素N-脱甲基酶(ERD)的活性没有明显变化。在mRNA水平上,CYP2E1基因的表达水平没有变化；CYP1A1,CYP2C11和CYP3A1基因表达水平则明显增加。结论：枳椇子醋酸乙酯提取物对大鼠肝P450同工酶的影响表现出特异性,对不同的P450同工酶作用不同。     

基于冠心平各组分不同提取工艺的体外抗氧化活性研究

目的通过比较冠心平及其5种组成成分不同工艺提取物的体外抗氧化活性差异,为中药复方制剂提取方式的选择及优化提供科学指导。方法选取水提、醇沉、正丁醇、乙酸乙酯4种不同提取工艺,制备黄精、当归、三七、瓜蒌皮、甘松、冠心平6个组分的的样本溶液,进行体外1,1-二苯基-2-苦肼基(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除试验,比较各组分不同工艺提取物体外抗氧化活性的差别。结果通过计算4种不同提取方法所得提取物的IC_(50)值,可见冠心平各组分的水提和醇沉提取物的IC_(50)值小于乙酸乙酯和正丁醇提取物的IC_(50)值,其中当归、三七、瓜蒌皮、甘松于水提法提取物所得IC_(50)值最小,分别为:3. 261 mg/mL、8. 189 mg/mL、3. 465 mg/mL、16. 853 mg/mL,提示体外抗氧化活性最强;而黄精、冠心平于醇沉法提取物所得IC_(50)值最小,分别为:3. 585 mg/mL、5. 012 mg/mL,体外抗氧化活性最强。从所绘清除曲线来看,冠心平及其5种成分的药物浓度与DPPH清除率呈良好的线性关系,且当其达到适当浓度值,DPPH清除率与阳性对照组相近。结论冠心平及其不同组分均具有良好的抗氧化作用。4种不同提取工艺中以水提法和醇沉法提取物抗氧化活性较强,优于正丁醇和乙酸乙酯。就冠心平制剂而言,醇沉法工艺提取物抗氧化活性最强,是优选提取方法。     

黑水缬草提取物及其活性成分对肝脏药物代谢酶活性的影响

目的:评价黑水缬草提取物及其活性成分对人肝微粒体6种细胞色素P450(CYP450)主要亚型酶活性的影响。方法:分别以香豆素、丁氨苯丙酮、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、右美沙芬、睾酮作为CYP2A6,CYP2B6,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6,CYP3A4的探针底物,以其羟基化或去甲基化的专一性代谢产物7-羟基香豆素,羟基丁氨苯丙酮,4-羟基甲苯磺丁脲,5-羟基奥美拉唑,右菲烷,6β-羟基睾酮作为酶活性的分析指标,建立Cocktail探针底物人肝微粒体体外模型,运用该方法评价黑水缬草提取物及其活性成分对人肝微粒体酶的影响。结果:黑水缬草提取物对CYP2B6,CYP2C9,CYP2D6和CYP3A4共4种亚型酶均有不同程度的抑制作用,半抑制浓度(IC_(50))分别为87.49,1.73,68.29,2.80 mg·L~(-1);在9个木脂素成分中,左旋马尾松树脂醇-3α-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对CYP2A6具有中等的抑制作用,IC_(50)=8.51μmol·L~(-1);8,8'-二羟基-松脂素-4,4'-二-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对CYP2D6具有中等抑制作用,IC_(50)=8.73μmol·L~(-1);(+)-梣皮树脂醇-4,4'-O-β-D-双葡萄吡喃糖苷对CYP2B6和CYP2C9具有中等抑制作用,IC_(50)分别为5.41,8.20μmol·L~(-1)。结论:黑水缬草提取物及其活性成分对肝脏CYP450酶存在抑制作用,在进行新药临床研究时,需要对联合用药可能会带来药物相互作用的风险进行充分评估。     

扶正化瘀方对原代大鼠肝细胞中CYP450的影响

目的:采用原代大鼠肝细胞(PRH)研究扶正化瘀方(FZHY)对大鼠细胞色素P450酶(CYP450)的影响。方法:采用两步灌流法分离大鼠原代肝细胞,形成肝板结构后加入FZHY共培养24 h,换成含有4种CYP450同工酶(CYP1A2,CYP2C9,CYP2D6,CYP3A4)对应的特异性探针药物(非那西丁、甲苯磺丁脲、氢溴酸右美沙芬、睾酮)的培养基,培养2 h后吸取上清液,利用UPLC-MS/MS对探针药物的代谢产物进行检测,考察FZHY对探针药物代谢产物生成量的影响,评价FZHY对PRH中CYP450代谢活力的影响。结果:PRH中CYP1A2,CYP2C9,CYP2D6与CYP3A4具有良好的代谢活力。4种探针药物在0~500μmol·L~(-1)内对PRH没有毒性,在0.5~500μg·L~(-1)时,FZHY对PRH没有毒性。FZHY在5μg·L~(-1)时对PRH具有轻微的保护作用,并能使甲苯磺丁脲的代谢活化值——米氏常数(Km)降低20.8%;氢溴酸右美沙芬的Km降低39.2%;非那西丁的Km降低17.4%;并使睾酮的Km显著降低。结论:FZHY能抑制原代大鼠肝细胞中CYP1A2,CYP2C9,CYP2D6和CYP3A4的代谢活性。     

酸枣仁、远志和桔梗水提液对大鼠肝CYP450酶活性 及mRNA表达的调控作用

目的:研究中药酸枣仁、远志和桔梗水提液对P450同工酶在酶活性及mRNA水平的调控作用。方法:大鼠ig给予酸枣仁、远志和桔梗水提液7 d后取肝脏称重并制备肝微粒体,采用紫外分光光度法测定大鼠肝微粒体细胞色素b5(Cytb5),P450的含量及红霉素N-脱甲基酶(ERD)的活性,高效液相色谱法测定非那西汀O-脱乙基酶(PHD)的活性和对硝基苯酚羟化酶(pNPH),采用RT-PCR技术检测大鼠肝中5种P450同工酶CYP1A1,CYP1A2,CYP2E1,CYP3A1及CYP3A2mRNA的表达。结果:与对照组比较,各给药组大鼠肝指数无显著变化;酸枣仁组显著降低Cytb5含量和ERD活性,增加pNPH活性,远志组显著升高pNPH,极显著降低ERD活性,桔梗组显著降低CYP450含量,并明显升高PHD和pNPH活性;在mRNA水平上,各组的CYP1A1基因均未能检出;酸枣仁组诱导CYP2E1,CYP3A1和CYP3A2基因表达,远志组抑制CYP3A1,诱导CYP3A2的mRNA表达,桔梗组诱导CYP1A2,CYP2E1,CYP3A2的mRNA表达;酸枣仁的CYP2E1、桔梗的CYP1A2和CYP2E1mRNA水平基本与酶活性水平相平行。结论:酸枣仁、远志水提液诱导CYP2E1的活性;桔梗水提液诱导CYP1A2,CYP2E1的活性,酶活性变化可能主要通过影响基因转录来实现。提示若酸枣仁和远志与经CYP2E1和CYP3A代谢的药物同用,桔梗若与经CYP1A2,CYP2E1,CYP3A代谢的药物同服,有可能会影响这些药物的临床疗效,临床用药时应慎重考虑。     

丹皮酚对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶含量及活性的影响

目的:考察丹皮酚对大鼠肝微粒体的蛋白含量、CYP450酶总量和主要CYP450酶亚型(CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4和CYP2C19)活性的影响。方法:大鼠灌胃给予丹皮酚(100 mg/(kg·d)-1,连续7 d,测定其肝微粒体蛋白含量、CYP450蛋白含量以及CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4及CYP2C19活性。结果与空白对照组相比,丹皮酚给药组大鼠肝微粒体蛋白含量及肝微粒体CYP450含量无明显差异(P>0.05)。丹皮酚给药后,给药组大鼠的平均CYP2D6活性是对照组的2倍;而二两组之间CYP1A2、CYP3A4和CYP2C19的活性相当。结论丹皮酚对大鼠CYP2D6活性有一定诱导作用,对CYP1A2、CYP3A4和CYP2C19的活性没有影响。     

HPLC-MS/MS测定葛根芩连汤对大鼠肝脏细胞色素P450酶的影响

研究葛根芩连汤及其主要药效成分对大鼠肝微粒体CYP450酶5种同工酶活性的影响。采用体外肝微粒体孵育技术将葛根芩连汤及其主要药效成分与各个探针底物共同孵育,利用LC-MS/MS建立CYP450 5种亚型探针底物的代谢产物的分析方法,考察微粒体蛋白浓度和孵育时间与代谢产物生成量之间的关系来确定蛋白浓度和孵育时间。运用HPLC-MS/MS检测CYP450酶5种同工酶特异性探针底物(非那西汀、甲苯磺丁脲、右美沙芬、氯唑沙宗、睾丸酮)相应代谢产物(对乙酰氨基酚、4-羟基氯唑沙宗、右菲烷、6-羟基氯唑沙宗、6β-羟基睾酮)的生成速率(V)来确定CYP450的各亚酶活性。结果表明,对乙酰氨基酚、4-羟基甲苯磺丁脲、右菲烷、6-羟基氯唑沙宗及6β-羟基睾酮线性关系良好,精密度、稳定性、平均回收率符合要求,所建方法可行;优化的肝微粒体体外孵育条件,符合药物相互作用指导原则的要求;葛根芩连汤对CYP450 5个亚型(CYP1A2,CYP2C11,CYP2D2,CYP2E1,CYP3A1/2)酶均有不同程度的抑制,其主要药效成分中小檗碱在高浓度下可对各亚型酶有一定的抑制(CYP1A2,CYP3A1/2除外)。     

不同相对分子质量猪牙皂多糖的体外抗氧化活性

目的:研究水溶性猪牙皂多糖的抗氧化活性.方法:用水提醇分级沉降法和中空纤维素膜分离法制备不同相对分子质量的猪牙皂多糖.采用体外化学体系,以维生素C(Vit C)为阳性对照,测定猪牙皂多糖对羟自由基(·OH)、超氧自由基(O2-·)和过氧化氢(H2O2)的清除作用.结果:50％醇沉且相对分子质量在5 000～100000的猪牙皂多糖对O2-·的清除活性高于Vit C.30％醇沉且相对分子质量大于10 000的猪牙皂多糖、50％醇沉且相对分子质量5 000～10000的猪牙皂多糖、74％醇沉且相对分子质量大于5 000的猪牙皂多糖以及88％醇沉得到的猪牙皂多糖在0～1.00 g·L-1,随浓度的增加对·OH的清除作用逐渐增强,最大清除作用都可超过90％.不同醇沉不同浓度得到的猪牙皂多糖对H2O2有一定的清除活性,74％醇沉且相对分子质量大于5 000的猪牙皂多糖在0.07 g·L-1时,对H2O2的清除率为20.18％.结论:猪牙皂多糖具有良好的对·OH,O2-·和H2O2清除活性,猪牙皂多糖的抗氧化活性与醇沉浓度及其相对分子质量相关.     

阿魏酸钠和当归醇沉物对免疫性肝损伤的干预作用

阿魏酸钠(SF)及当归醇沉物(ESA)对卡介苗加脂多糖致小鼠免疫性肝损伤有保护作用,二者均降低肝损伤小鼠血清ALT和谷胱甘肽S-转移酶活性,并增加肝细胞浆中谷胱甘肽还原酶活性,同时ESA降低肝细胞浆中丙二醛含量,提示当归的护肝作用与抗脂质过氧化有关。     

阿魏酸钠和当归醇沉物对免疫性肝损伤的干预作用

阿魏酸钠（ＳＦ）及当归醇沉物（ＥＳＡ）对卡介苗加脂多糖致小鼠免疫性肝损伤有保护作用,二者均降低肝损伤小鼠血清ＡＴ和谷胱甘肽Ｓ－转移酶活性,并增加肝细胞浆中谷胱甘肽还原酶活性,同时ＥＳＡ降低肝细胞浆中丙二醛含量,提示当归的护肝作用与抗脂质过氧化有关。ＥＳＡ在护肝的财时尚小鼠脾脏指数的增加,提示ＥＳＡ更广泛的护肝机制。     

当归提取物对PC3、HeLa、MDA-MB-435肿瘤细胞增殖的影响

目的:观察当归不同组分对人前列腺癌PC3细胞、人宫颈癌HeLa细胞、人乳腺癌MDA-MB-435细胞生长的影响。方法:采用当归水煎液和CO2超临界提取的当归油,分别与体外培养的人前列腺癌PC3细胞、人宫颈癌HeLa细胞、人乳腺癌MDA-MB-435细胞作用48 h后,用磺酰罗丹明B(SRB)染色方法检测细胞活性。结果:当归水提物(500~1 000μg/ml生药)与对照组相比,能够显著升高人宫颈癌HeLa细胞、人乳腺癌MDA-MB-435细胞的OD值(P<0.05),对人前列腺癌PC3细胞系列未见明显影响。超临界CO2提取的当归油,在3个细胞系列中与对照组相比能够明显降低OD值(P<0.01),并在0~250μg/ml范围内呈剂量效应关系。对3个肿瘤细胞系半数抑制浓度分别是218.24μg/ml、281.80μg/ml、285.60μg/ml抑制率最高可达到67%。结论:当归水提物有刺激人宫颈癌HeLa细胞、人乳腺癌MDA-MB-435细胞增殖的作用。当归油能够明显地抑制人前列腺癌PC3细胞、人宫颈癌HeLa细胞、人乳腺癌MDA-MB-435细胞增殖。结果提示,当归中能够刺激肿瘤细胞增殖的化合物可能存在于当归水溶性组分中。     

Effect of the water extract and ethanol extract from traditional Chinese medicines Angelica sinensis (Oliv.) Diels, Ligusticum chuanxiong Hort. and Rheum palmatum L. on rat liver cytochrome P450 activity

Angelica sinensis (Oliv.) Diels (DG), Ligusticum chuanxiong Hort. (CX) and Rheum palmatum L. (DH), three well known traditional Chinese medicines (TCM), have been used widely for the treatment of various types of disorders in China. Herb-drug interactions, especially cytochrome P450 (CYP)-mediated interactions, cause an enhancement or attenuation in the efficacy of co-administered drugs. In this study, to assess the possible interactions between TCM and drugs, the effect of water and ethanol extracts of DG, CX and DH on cytochrome P450 were studied in rats. The activities of various CYP enzymes were determined by HPLC method. Treatment of rats with water extracts or ethanol extracts of DG, CX and DH at daily dosages equivalent to 3 g (dry herbal material)/kg all increased the microsome protein contents and decreased the total CYP levels. The water extract of DG strongly increased the activities of CYP2D6 and 3A and the water extract of DH significantly increased the activity of 2D6. The other water extracts all showed inhibition against CYP isoforms. Only the ethanol extract of DG and DH increased the CYP2D6 and 3A activities, respectively, and the other ethanol extracts all decreased the level of CYP isoforms. All extract treatments had significant effects on CYP isoforms activities, whether induction or inhibition, compared with the blank control. Thus, caution should be paid to possible drug interactions of DG, CX, DH and CYP substrates.     

当归醇沉物对体外小鼠脾、胸腺淋巴细胞增殖的影响

体外试验中,采用ＭＴＴ比色法测定当归醇沉物对小鼠脾及胸腺淋巴细胞增殖功能的影响,结果显示,０．１６～２．５０ｍｇ／ｍＬ范围内的当归醇沉物能单独或协同ＣｏｎＡ／ＬＰＳ发挥促进小鼠脾脏及胸腺Ｔ,Ｂ淋巴细胞增殖的作用,当归醇沉物尚可对氢化泼尼松（ＨＰ）对ＣｏｎＡ诱导的脾脏及胸腺Ｔ淋巴细胞的增殖反应的抑制作用。     

当归对黑色素瘤细胞粘附、侵袭、运动和转移能力的影响

目的:研究中药当归对小鼠黑色素瘤高转移细胞B16-BL6生长、粘附、侵袭、运动、转移能力的影响,并初步探讨其作用机制。方法:采用MTT法测定当归对B16-BL6细胞增殖能力的影响,采用细胞粘附实验、重组基底膜侵袭实验、趋化性运动能力实验以及小鼠黑色素瘤自发性转移模型,观察当归对B16-BL6细胞生长、粘附、侵袭、运动及转移能力的影响。结果:当归水提液能显著抑制B16-BL6细胞的增殖;对B16-BL6细胞与基底膜成分LN的粘附有双向调节的作用;对B16-BL6细胞穿越基底膜的运动能力有显著抑制作用但对B16-BL6细胞侵袭基底膜能力没有显著影响。低剂量当归能明显减少小鼠肺转移结节数目,减轻肺转移程度。结论:当归提取液能够抑制黑色素瘤高转移细胞株B16-BL6的转移,作用可能与其能够抑制B16-BL6细胞外基质的粘附以及降低B16-BL6的运动能力有关。     

当归对小鼠红细胞粘附功能及IL—2免疫调节作用

本文采用红细胞C_(3b)受体花环和免疫复合物花环的试验方法,研究了当归对小鼠红细胞免疫粘附功能的影响;并观察了当归对小鼠脾细胞产生IL-2的作用。实验结果显示:当归可显著提高小鼠的红细胞C_(3b)受体花环率,其花环率的增加与药物的剂量呈正相关。并发现当归具有促进白细胞介素-2(IL-2)产生的功能。结果表明,当归对实验小鼠的红细胞粘附功能、IL-2的产生有明显的促进作用。     

黄芪、当归配伍后促鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的药效比较研究

目的 :探讨黄芪、当归不同配伍对鸡胚绒毛尿囊膜 (chorioallantoic membrane ,CAM)新生血管生成的影响。方法 :制备CAM模型 ,观察应用黄芪与当归 5∶1配比的含药血清后CAM血管生成的情况。结果 :黄芪与当归合用后 ,在血管生成表现以及血管计数方面 ,均明显优于生理盐水对照组及其他配比组。结论 :黄芪与当归按 5∶1配伍具有较好的促进CAM新生血管生成的作用 ,表明当归补血汤原方配比为最佳组合 ,提示中医自古倡导的方剂配伍原则具有一定的科学内涵。     

基于Box-Behnken响应面优化的当归挥发油胶体磨包合工艺

目的优化当归挥发油胶体磨研磨包合的工艺条件。方法以当归挥发油的包封率和包合物收率及综合评分为指标,在单因素基础上,采用Box-Behnken响应面法进行优化,确定了当归挥发油胶体磨研磨包合的最佳工艺条件。结果最佳包合工艺条件为:挥发油(ml)与β-CD(g)的比例为1∶10,β-CD(g)与水(ml)的比例为1∶3,研磨包合时间为19 min。结论优选的当归挥发油胶体磨包合工艺操作简便,包合率高,包合效果好,可用于大规模工业化生产。     

不同产地当归药材及其土壤无机元素的关联分析与探讨

目的:通过对不同产地当归药材及其土壤无机元素类成分的关联分析,以评价该类成分与药材地道性和功效间的关系。方法:采用微波消解法-电感耦合等离子体发射法,测定了我国4个主产区40余份当归药材及其土壤中14种无机元素的含量。结果:当归药材与土壤中Ca、Na、Ni显著相关;当归可能对Mg元素具有富集作用;Zn、Cu、Mn、Mg等元素可能是影响当归地道性最为显著的无机元素。实验结果从无机元素的角度支持岷归为道地药材。结论:当归药材所含无机元素类成分可能与其地道性呈现一定的相关性,为从认识当归的地道性成因及其药材功效物质基础提供参考。