富亮氨酸胶质瘤失活基因在胶质瘤中的表达

目的 探讨胶质瘤组织富亮氨酸胶质瘤失活基因1(LGI1)mRNA的表达及与细胞增殖活性之间的关系.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法对30例脑胶质瘤组织、2例脑膜瘤、2例瘤旁及2例颅脑损伤内减压脑组织标本进行半定量检测,同时采用S-P免疫组化法检测Ki-67标记指数.结果 脑胶质瘤组的LGI1 mRNA表达水平低于正常脑组织和脑膜瘤(P＜0.05).脑胶质瘤中,WHO Ⅳ级的胶质瘤LGll mRNA表达低于WHOⅡ级和Ⅲ级胶质瘤(P＜0.05),与Ki-67标记指数呈负相关关系(r=-0.621,P＜0.01).结论 LGI1基因的表达与Ki-67标记指数呈负相关,提示LGI1与胶质瘤的发生关系密切.     

人脑胶质瘤中ING4和CTGF的表达及其意义

目的 探讨人脑胶质瘤中生长抑制因子4(ING4)及结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA的表达及其意义.方法 采用荧光实时定量聚合酶链式反应法检测ING4和CTGF mRNA在30例脑胶质瘤组织和5例正常脑组织中的表达水平,统计分析表达水平和肿瘤级别之间的关系以及二者表达水平的相天性.结果 ING4 mRNA在Ⅰ～Ⅱ级...     

Survivin及其剪接变异体在脑胶质瘤中的表达

目的 探讨凋亡蛋白抑制因子Survivin及其剪接变异体Survivin-Δex3、Survivin-2B在脑胶质瘤发生发展中的作用.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Survivin及其剪接变异体Survivin-Δex3、Survivin-2B mRNA在62例脑胶质瘤和10例正常脑组织标本中的表达水平.结果 Survivin、Survivin-Δex3及Survivin-2B mRNA在脑胶质瘤中表达阳性率分别为67.7%、30.6%和17.7%,三者在正常脑组织中均无表达;Survivin和Survivin-Δex3 mRNA表达阳性率在脑胶质瘤及正常脑组织之间分别具有极显著差异(P=0.000<0.01)和显著差异(P=0.010<0.05);Survivin mRNA表达阳性率在低恶性度和高恶性度脑胶质瘤之间以及脑胶质瘤不同病理级别间分别具有极显著差异(P=0.002<0.01,P=0.004<0.01).结论 Survivin在脑胶质瘤发生发展过程中具有重要作用,其剪接变异体Survivin-Δex3、Survivin-2B也发挥一定作用;Survivin可作为脑胶质瘤生物治疗的一个良好分子靶点.     

人脑胶质瘤中GOLPH3的表达及意义

目的 研究GOLPH3在胶质瘤组织中的表达及其临床意义.方法 选取山东大学齐鲁医院和聊城市脑科医院神经外科自2008年7月至2009年12月间手术切除并经病理证实的人脑胶质瘤标本76例,其中Ⅰ级13例,Ⅱ27级例,Ⅲ级25例,胶质母细胞瘤11例.另取9例因脑创伤行内减压术患者的正常脑组织标本作为对照.应用RT-PCR、Western blotting分别检测各标本中GOLPH3 mRNA和GOLPH3蛋白的表达.结果 RT-PCR与Western blotting检测结果显示正常脑组织中GOLPH3 mRNA和GOLPH3蛋白不表达,不同级别胶质瘤组织GOLPH3 mRNA、GOLPH3蛋白的阳性表达率差异无统计学意义(P＞0.05),而其表达值差异有统计学意义(P＜0.05),且随着肿瘤病理级别的增高,胶质瘤组织中GOLPH3mRNA、GOLPH3蛋白表达值增高,差异有统计学意义(P＜0.05).相关性检验显示GOLPH3蛋白的表达值与肿瘤的病理分级呈正相关(rs=0.961,P=0.000).结论 GOLPH3在不同级别的胶质瘤组织中均有表达,其表达值与肿瘤的病理分级呈正相关,可能是胶质瘤发生发展的重要机制之一.     

反义封闭hTERT基因对人TJ905胶质瘤细胞端粒长度及p33ING1b表达的影响

目的 探讨反义封闭胶质瘤细胞端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达,对其端粒长度及p33ING1b表达的影响.方法 用真核表达质粒(pcDNA3.0)构建hTERT正义和反义RNA表达载体.经脂质体介导,将空载体peDNA3.0及正义和反义RNA表达载体分别导人人胶质母细胞瘤细胞株(TJ905细胞),经G418筛选获得分别携带空载体、hTERT正义或反义RNA表达载体的三种TJ905细胞亚克隆.用Western blot、Tolo TAGGG端粒长度分析和RT-PCR方法,检测各对照组和反义封闭组不同代数TJ905细胞的hTERT蛋白表达、端粒长度及p33ING1b mRNA转录.结果 空白对照组、空载体组及正义RNA组TJ905细胞均有hTERT蛋白异常表达、端粒缩短迟缓及p33ING1b mRNA表达异常减少,以上三个对照组间这些指标的差异均无统计学意义(P>0.05).与以上三组相比,反义封闭组TJ905细胞的hTERT蛋白表达水平明显降低(P<0.01),端粒长度明显缩短(P<0.01),而p33ING1b mRNA表达水平则明显升高(P<0.01),它们各自与三个对照组相同指标之间的差异均有统计学意义.结论 胶质瘤细胞hTERT过表达导致的端粒酶异常再活化,可通过维持有效端粒长度抑制其抑癌因子p33ING1b表达,反义封闭hTERT基因表达可矫正该异常过程,提示hTERT是胶质瘤分子靶向治疗的重要靶点.     

PUMA在人脑胶质瘤中表达及其与Bcl-2、Bax相关性的研究

目的 探讨促凋亡基因PUMA在脑胶质瘤中的表达,及其与Bcl-2、Bax蛋白表达的相关性.方法 应用免疫印迹法(Western blot)检测10例正常脑组织及52例脑胶质瘤组织中PUMA、Bcl-2、Bax蛋白的表达,通过计算吸光度比值求得各蛋白相对表达量并统计分析结果.结果 (1)PUMA蛋白、Bax、Bcl-2蛋白表达在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中与正常脑组织差异有统计学意义(P＜0.01),Ⅰ级胶质瘤与对照组表达差异无统计学意义(P＞0.05).(2)病理分级与PUMA、Bax蛋白和Bcl-2蛋白表达相关(rPUMA=-0.925,rBax=-0.931,rBcl-2=0.945,P＜0.001).(3)PUMA和Bax、Bcl-2蛋白的表达相关(r1=0.963,r2=-0.937 P＜0.001).结论 PUMA可能是胶质瘤的一个重要的预后标记物.PUMA可通过促进肿瘤细胞凋亡,对脑胶质瘤的发生、发展起作用;PUMA可能与凋亡相关基因Bax、Bcl-2在脑胶质瘤的凋亡中分别起协同和拮抗作用.     

乳酸脱氢酶-A亚基在人胶质瘤中的表达与意义

目的 研究乳酸脱氢酶-A亚基(LDH-A)在人胶质瘤中的表达与意义.方法 收集67例脑胶质瘤标本(WHO Ⅱ级25例、Ⅲ级22例、Ⅳ级20例)及10例行内减压术切除的正常脑组织标本,采用免疫组织化学方法研究LDH-A在不同病理级别胶质瘤及正常脑组织中的表达情况.结果 在正常脑组织中未见阳性表达,LDH-A阳性表达率在Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中分别为68.2％、75.0％,均显著高于Ⅱ级胶质瘤(32.0％)(P＜0.05).胶质瘤病理级别与LDH-A蛋白表达强度呈正相关(r=0.522,P＜0.05).结论 LDH-A在胶质瘤中高度表达,其阳性表达率及表达强度随着病理级别增加而上升,这提示胶质瘤中存在糖酵解通路的活化.     

脑胶质瘤患者FAM46A基因表达水平与生存期的相关性研究

目的探讨脑胶质瘤患者FAM46A基因表达水平与生存期的相关性。方法采用对临床样本进行定量PCR和免疫组化染色检测FAM46A基因的表达水平及对该基因与脑胶质瘤患者生存期进行相关性分析。结果脑胶质瘤组及高级别、低级别亚组的FAM46A基因mRNA表达水平显著高于正常对照组(均P0.01)。与正常对照组比较,脑胶质瘤组FAM46A蛋白高表达比率显著升高,低表达比率显著降低(均P0.01)。FAM46A蛋白高表达患者的总生存期和无进展生存期都分别显著低于低表达患者(P=0.033,P=0.042)。结论 FAM46A基因表达在脑胶质瘤组织中存在明显的上调,该基因可以作为预测脑胶质瘤患者生存期的相关因子。     

人脑胶质瘤中TPX2的表达及其病理相关性分析

目的研究TPX2在不同级别脑胶质瘤组织中的表达,及其表达水平同胶质瘤病人生存时间的关系。方法正常脑组织、低级别和高级别脑胶质瘤标本分别为5、21、31例,采用免疫组化染色和Western blot法检测TPX2蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测TPX2 mRNA的表达水平。结果 正常脑胶质细胞TPX2蛋白染色为阴性,绝大部分胶质瘤标本中可见TPX2蛋白的阳性表达,胶质瘤组织TPX2表达水平与病人生存时间成负相关(P<0.01)。TPX2蛋白及mRNA表达水平在胶质瘤组织中均明显上调,与正常脑组织相比差别显著(P<0.01),其在高级别与低级别胶质瘤中的表达有显著差异(P<0.05)。并且TPX2蛋白的相对表达量与胶质瘤的病理级别呈正相关(r=0.408,P<0.05)。结论 TPX2的表达可能同恶性胶质瘤进展有关。     

脾酪氨酸激酶在不同等级胶质瘤中的表达及其与周期素1水平的相关性

目的 探讨人脑胶质瘤中脾酪氨酸激酶(Syk)的表达及其与周期索1(CyclinDl)水平的相关性.方法 收集贵州航天医院神经外科自2005年1月至2010年1月间手术切除并经病理证实的脑胶质瘤标本46例,其中Ⅰ级13例,Ⅱ级9例,Ⅲ级5例,Ⅳ级胶质母细胞瘤19例.另取5例因脑创伤行内减压术患者的正常脑组织标本作为对照,RT-PCR检测脑组织标本Syk mRNA、CyclinD1 mRNA的表达并分析二者的相关性.结果 与正常脑组织比较,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级脑胶质细胞瘤标本Syk mRNA表达较低,CyclinDl mRNA表达较高,差异有统计学意义(P＜0.05),而且胶质瘤的病理级别越高,Syk mRNA的表达越低,CyclinDl mRNA表达较高,差异均有统计学意义(P＜0.05);胶质瘤中Syk与CyclinDl的表达呈负相关关系(r=-0.832,P=0.000).结论 Syk在脑胶质瘤中表达较低或缺失,提示其可能具有抑癌基因功能,其机制可能与下调胶质瘤中CyclinD1的表达有关.     

实时荧光定量RT-PCR法测定脑胶质瘤中MT1-MMP基因mRNA表达水平

目的探讨胶质瘤恶性程度和MT1-MMP基因mRNA表达水平的关系。方法采用实时荧光定量RT-PCR法检测34例脑胶质瘤和7例正常脑组织（取自癫痫病人手术切除脑组织）中MT1-MMP的mRNA表达水平。结果经实时荧光定量RT-PCR法检测，正常脑组织和低级别、高级别胶质瘤的△△Ct（循环阈值）值分别为（0．834±0、517）、（4．063±2．309）和（7.072±4．072）。正常脑组织与低级别、高级别胶质瘤之间，低级别、高级别胶质瘤之间MT1-MMP基因mRNA表达水平的差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论脑胶质瘤中存在MT1-MMP基因mRNA高水平的表达，随着肿瘤恶性级别的增加，MT1-MMP基因mRNA表达水平有增高趋势。     

Rab23基因在胶质瘤中的表达分析

目的研究Rab23基因在胶质瘤组织中的表达,探讨Rab23基因与胶质瘤临床病理学特征间的关系。方法采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测78例不同级别脑胶质瘤病人的肿瘤组织以及30例正常成人脑组织中的Rab23蛋白和mRNA表达情况。分析Rab23基因表达与胶质瘤病人临床参数(包括年龄、性别、肿瘤大小、部位、术前KPS评分、病理级别)的关系。采用Kaplan-Meier统计方法分析Rab23 mRNA的表达及临床参数与胶质瘤病人总生存期的关系。进一步对病理分级及KPS评分进行多因素分析。结果胶质瘤组织中Rab23 mRNA中的平均表达量为0.532±0.028,正常脑组织的平均表达量0.199±0.039,差异有统计学意义(P0.05);低级别组与高级别组Rab23 mRNA表达差异有统计学意义(P0.01)。Western blot检测显示:Rab23蛋白在胶质瘤中的表达明显增高;正常脑组织Rab23蛋白分别与低级别组、高级别组比较,差异均有显著性(P0.01),低级别组Rab23蛋白与高级别组比较,差异有显著性(P0.01)。Rab23 mRNA表达水平与病人的年龄、性别、肿瘤大小、部位、术前KPS评分等不相关。Rab23高表达的病人其生存时间显著短于低表达组(P=0.0042)。结论 Rab23 mRNA及蛋白在脑胶质瘤组织中高表达,且其表达水平与病理分级相关。Rab23可作为判定胶质瘤恶性程度及进程的参考指标。     

SYBR Green实时定量PCR检测人原发脑胶质瘤中REV3和REV7基因的表达

目的 运用实时定量PCR检测跨损伤修复基因REV3和REV7在人脑原发脑胶质瘤组织中的表达水平,探讨其和肿瘤级别之间的关系.方法 采用SYBR Green实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测跨损伤修复基因REV3和REV7的mRNA在85例原发胶质瘤(Ⅱ级20例、Ⅲ级20例和Ⅳ级45例)和14例正常脑组织中的表达水平,统计学分析表达水平和肿瘤级别之间的关系.结果 与正常组织相比,REV3和REV7在各病理级别胶质瘤中均表达上调(P＜0.05);并且REV3在Ⅳ级胶质瘤中的表达比在Ⅱ级和Ⅲ级中都要高(P＜0.05).秩相关分析表明:REV3的表达量与胶质瘤病理分级呈正相关性(r=0.454,P＜0.001).结论 REV3和REV7在胶质瘤组织中均高表达,而且REV3表达水平和恶性程度有密切联系.     

Smad2基因在人脑胶质瘤的表达及其临床意义

目的 探讨Smad2基因在人脑胶质瘤组织中的表达情况,与细胞增殖指数Ki-67及患者生存期的关系.方法 对80例人脑胶质瘤组织标本,用免疫组化SP法检测Smad2、Ki -67的蛋白表达,逆转录聚合酶链反应法( RT - PCR)测定Smad2 mRNA的转录水平.Smad2蛋白表达情况与患者生存期的关系用Kaplan -Meier生存曲线表示,并采用log - rank方法分析.结果 (1) Smad2蛋白在高级别胶质瘤(Ⅲ级和Ⅳ级)中表达水平较低级别胶质瘤(Ⅱ级)明显增高(P ＜0.001).(2)Smad2 mRNA在高级别胶质瘤(Ⅲ级和Ⅳ级)中转录水平较低级别胶质瘤(Ⅱ级)增高(P＜0.05).(3)Smad2蛋白阳性表达与Ki -67阳性表达呈正相关(r=0.812,P＜0.001).(4)将所有患者分为Smad2高表达组和低表达组,两组间生存率差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Smad2的转录和蛋白表达水平在恶性胶质瘤中显著增高,检测Smad2表达水平有利于脑胶质瘤的恶性程度判断及对患者预后的评估.     

水通道蛋白4在脑胶质瘤患者脑内表达的研究

目的 观察水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP4)在脑胶质瘤患者脑内的表达.方法 采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫组织化学技术,分析比较16例脑胶质瘤手术患者脑组织与12例正常脑组织标本AQP4的mRNA和蛋白的表达情况.结果 AQP4主要在脑内星形胶质细胞表达.脑胶质瘤患者脑组织AQP4的mRNA和蛋白的表达均显著高于正常对照组(P<0.01).AQP4在不同分级的胶质瘤中表达并不相同,在Ⅲ、Ⅳ级(32.5±6.5)表达要高于Ⅰ、Ⅱ级(21.6±4.9)(P<0.05).结论 AQP4参与了脑胶质瘤继发脑水肿的发生,是脑水肿产生的重要分子基础.     

B mi-1基因过度表达在脑胶质瘤诊断中的意义

目的探讨B mi-1基因过度表达在脑胶质瘤诊断中的临床意义。方法收集2013-06—2014-06在我院诊疗被确诊为脑胶质瘤患者脑组织切片65例份,称为实验组;根据病理分级又将实验组分为高级别胶质瘤组和低级别胶质瘤组,简称为实验高组和实验低组。同时间段正常脑组织切片45例份为对照组。应用PCR技术和蛋白印迹法测定B mi-1基因在实验组和对照组中的B mi-1mRNA以及蛋白表达水平。结果 B mi-1mRNA在实验组呈高表达,其阳性表达率和蛋白表达水平与对照组相比差异有统计学意义(P0.05);实验高组与低组之间相比,差异均有统计学意义(P0.05);且随着胶质瘤的病理分级越高表达阳性率也越高。结论 B mi-1基因表达与脑胶质瘤的病理分级呈正相关,在脑胶质瘤发生、发展与预后的治疗中有着重要的提示意义。     

脑胶质瘤中hMLH1、hMSH2基因转录表达的研究

目的检测脑胶质瘤中hMLH1、hMLH2基因mRNA表达水平，探讨其在胶质瘤发病过程中的作用。方法用半定量RT—PCR法检测42例脑胶质瘤和5例正常脑组织标本中hMLH1、hMSH2基因mRNA的表达情况。结果hMLH1，hMSH2 mRNA在正常脑组织中均有表达。在胶质瘤组织中，表达量均低于正常脑组织；hMLH1 mRNA表达缺失3例（7．1％），hMSH2 mRNA表达缺失7例（16．7％）；hMSH2转录表达下降与病理分级相关。结论hMLH1、hMSH2基因在脑胶质瘤中转录表达下降，可能与胶质瘤发病相关。     

靶向Xklp2靶蛋白和极光蛋白在脑胶质瘤中的表达及其临床意义

目的 探讨靶向Xklp2靶蛋白(targeting protein for Xenopus kinesin-like protein 2,TPX2)和极光蛋白(serine/threonine-protein kinase 6,Aurora-A)在胶质瘤组织中的表达及其两者的相关性.方法 采用SP免疫组织化学方法检测50例胶质瘤组织及10例正常脑组织标本中TPX2和Aurora-A蛋白的表达.结果 Aurora-A在胶质瘤组织中的阳性表达率为56.0％(28/50),在高级别胶质瘤中(Ⅲ-Ⅳ级)的表达水平(18/25)显著高于低级别组(Ⅱ级,10/25)(x2=5.195,P=0.023).TPX2在胶质瘤组织中的阳性表达率为62.0％(31/50),在高级别胶质瘤中(Ⅲ-Ⅳ级)的表达水平(20/25)显著高于低级别组(Ⅱ级,11/25)(x2=6.876,P=0.009).二者在正常脑组织中均未见表达.胶质瘤中Aurora-A和TPX2的表达呈正相关(r=0.521,P＜0.01).结论 Aurora-A和TPX2的表达与胶质瘤的恶性程度密切相关,推测二者在胶质瘤的发生、发展中可能起协同作用,可用于评价胶质瘤恶性生物学特性的指标之一.     

人脑胶质瘤中CD133的表达及其意义

目的 探讨CD133 mRNA在人脑胶质瘤组织中的表达及其与病理分级的相关性.方法 用半定量逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)对43例胶质瘤患者、16例正常脑组织标本(均为急性颅脑损伤患者行内减压术切除的脑组织)进行CD133 mRNA检测.结果 (1)43例胶质瘤组织中CD133 mRNA表达全部呈阳性,而16例正常脑组织标本中仅有1例CD133 mRNA表达呈弱阳性.病例组和正常对照组CD133 mRNA的阳性率分别为100%和6.25%.病例组和对照组CD133 mRNA表达阳性率差异有统计学意义(P＜0.01).(2)在病例组中,参照1993年WHO分级标准分为Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级组,计算分组的标本CD133 mRNA与β-actin mRNA灰度比值.Ⅰ级和Ⅲ、Ⅳ级之间差异有统计学意义(P＜0.01),Ⅲ、Ⅳ级之间CD133 mRNA表达均高于Ⅰ级;Ⅱ级和Ⅲ、Ⅳ级之间差异有统计学意义(P＜0.01),Ⅲ、Ⅳ级之间CD133 mRNA表达均高于Ⅱ级.(3)相关性分析:CD133 mRNA表达量与胶质瘤病理分级呈正相关性(r=0.987,P＜0.001).结论 检测胶质瘤组织中CD133 mRNA的表达可用于胶质瘤患者的诊断及恶性程度和预后的判断.     

人脑胶质瘤中ATM、ATR、Chk1和Chk2基因表达研究

目的 研究ATM、ATR、Chk1和Chk2在人脑胶质瘤中的表达及其与肿瘤发生的关系. 方法 采用SYBRTM Green实时定量PCR技术检测35例人原发脑胶质瘤组织和10例正常脑组织中的ATM、ATR、Chk1和Chk2的表达水平. 结果 ATR、Chk1和Chk2基因在各级脑胶质瘤中表达较正常脑组织升高,差异均有统计学意义(P<0.05).其中,ATR和Chk2基因表达在Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级胶质瘤组织之间差异均无统计学意义(P0.05),而Chk1,在Ⅳ级胶质瘤中的表达较Ⅱ级、Ⅲ级胶质瘤明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05).ATM基因表达量在正常脑组织和各级脑胶质瘤中差异无统计学意义(P0.05). 结论 ATR、Chk1和Chk2在人脑胶质瘤中表达上调,说明这些基因可能与人脑胶质瘤的发生有关.其中,Chk1表达与肿瘤恶性程度有关.可作为判别胶质瘤病理级别的辅助指标.