我院耐碳青霉烯类抗菌药物革兰氏阴性杆菌的分离及其产金属β-内酰胺酶情况分析

目的:为我院临床合理应用抗菌药物提供参考。方法:对我院2013年5月-2015年12月住院患者感染革兰氏阴性杆菌的耐药及产金属β-内酰胺酶(MBLs)情况进行回顾性分析。结果:我院2013-2015年共检出革兰氏阴性杆菌2 089株,其中肠杆菌科细菌1 456株(69.70%)、非发酵菌633株(30.30%),以大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和阴沟肠杆菌为主。共检出耐碳青霉烯类菌株406株(19.44%),包括非发酵菌367株、肠杆菌科细菌39株。耐碳青霉烯类菌株对16种抗菌药物的耐药率均大于50%,而非耐碳青霉烯类菌株的耐药率相对较低;除氨曲南外,耐碳青霉烯类菌株对其余15种抗菌药物的耐药率均显著高于非耐碳青霉烯类菌株,差异均有统计学意义(P<0.05)。共检出产MBLs耐药菌株36株(8.87%),包括产MBLs耐药铜绿假单胞菌13株、产MBLs耐药鲍曼不动杆菌23株;未检出产MBLs耐药肠杆菌科细菌。结论:我院革兰氏阴性杆菌以肠杆菌科细菌为主;耐碳青霉烯类菌株以非发酵菌为主,耐药率普遍高于非耐耐碳青霉烯类菌株;产MBLs情况较为严重,且产酶菌株均为非发酵菌。临床应加强病原菌耐药性及产酶菌株的监测,避免不合理应用抗菌药物而造成耐药菌株的产生与传播。     

一株产10-羟基喜树碱喜树内生真菌的分离和鉴定

目的 从喜树组织中筛选产10-羟基喜树碱的内生真菌,并对其进行鉴定.方法 从喜树(Camptotheca acuminate Decne)树皮中分离、纯化得到6株内生真菌,经摇瓶发酵后,采用TLC法、HPLC和MS分析菌丝的提取物;用插片法进行形态学观察,采用分子生物学方法对XK002菌株rDNA的ITS基因(ITS-...     

生物技术文摘

B35-16 一株高产-胡萝卜素的鞘氨醇单孢菌(Sphingomonassp.)的分离 Silva C 等[Biotechnol Lett, 2004, 26: 257]从土壤中分离得到一株鞘氨醇单孢菌(Sphingomonas sp.),能产1.7mg类胡萝卜素·(g干细胞)-1,其中-胡萝卜素和nostoxanthin分别占总类胡萝卜素的29%和36%。经甲磺酸乙酯处理得到的突变株可累积达到3.5mg类胡萝卜素·(g干细胞)-1。该菌株产-胡萝卜素依赖于培养基的氧合作用(theoxygenation of the growth medium),在一定条件下最大累积可达89%。在甘油(不同化或仅缓慢同化)和酵母提取物存在下,-胡萝卜素的累积量可达5.7 mg -…     

地黄活性成分梓醇对小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化的影响

目的检测地黄活性成分梓醇对成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响。方法制备不同浓度地黄活性成分梓醇提取液。以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1作为药物筛选的细胞模型;用MTT法测定不同浓度的梓醇溶液的促细胞增殖作用;采用ALP活性和骨钙素定量检测分别观察不同浓度的梓醇溶液的促细胞分化作用;以Vonkos-sa钙化染色法了解不同浓度的梓醇溶液的促细胞钙化作用。结果梓醇在1×10-7～1×10-9mol·L-1浓度范围内培养24及48h促进成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-148及72h提高成骨细胞株MC3T3-E1细胞内碱性磷酸酶的活性。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-1培养8及12d时能明显促进成骨细胞MC3T3-E1骨钙素合成和分泌。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-1培养19d时成骨细胞株MC3T3-E1细胞的矿化结节(mineralized bone nodular structure,MBNS)数目增多。结论梓醇可以提高成骨细胞株MC3T3-E1增殖和分化能力,梓醇可能是地黄治疗骨质疏松作用的活性成分之一。     

2株南极来源放线菌所产的二酮哌嗪类化合物研究

目的 对从南极潮间带沉积物样品中分离得到的两株具有抗菌活性的放线菌进行分类鉴定并进行次生代谢产物研究。方法 通过形态学分析及构建系统发育进化树鉴定菌株并对其发酵产物进行生物活性评价;利用硅胶、凝胶柱层析、semi-HPLC等色谱分离手段对两株菌的发酵产物进行分离纯化;采集所得化合物的质谱、NMR等数据并分析后鉴定其结构。结果 两株菌分别鉴定为Streptomyces sp. SCSIO 40061和Nocardiopsis sp. SCSIO KS107;从相应的发酵产物中分离得到两个二酮哌嗪类化合物,结构分别鉴定为：(3Z,6E)-1-N-甲基-3-苯亚甲基-6-(2-甲基-3-羟基丙烷)-2,5-二酮哌嗪 (1) 以及(3Z,6Z)-3-(4-对甲氧苯亚甲基)-6-(2-甲基丙烷)-2,5-二酮哌嗪 (2) 。结论 发现了两株能产二酮哌嗪类化合物的南极来源放线菌。     

医院内1989株病原菌菌群分布及耐药性分析

目的 :了解医院感染菌群分布及耐药现状 ,为医院感染的控制和指导临床合理用药提供实验依据。方法 :采用常规方法对临床标本进行分离鉴定 ,应用VITEK微生物全自动分析仪和API鉴定系统鉴定菌株 ,并按NCCLS规定的标准 ,应用K B纸片扩散法进行药敏试验。结果 :2 0 0 2年共分离获得 1989株病原菌 ,其中革兰阳性球菌 43 2株 ,占 2 1 7% ;肠杆菌科细菌 44 5株 ,占 2 2 4% ;非发酵糖革兰阴性菌 62 1株 ,占 3 1 2 % ;真菌 488株 ,占 2 4 5 %。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs的阳性率分别为 44 6%和40 6% ,对头孢哌酮钠 -舒巴坦和亚胺培南 -西司他丁钠 (泰能 )的耐药率低于 8 2 % ;非发酵菌对头孢哌酮钠 -舒巴坦的耐药率低于 17 4% ;革兰阳性球菌对奈替米星和万古霉素的耐药率分别低于 10 5 %和 1 2 %。结论 :医院内感染标本的来源主要以呼吸道为主。非发酵菌已成为医院内感染的重要病原菌 ;白色假丝酵母菌、铜绿假单胞菌、粪肠球菌、大肠埃希菌为医院感染的流行菌 ;肠杆菌科细菌产ESBLs状况十分严重。对耐甲氧西林葡萄球菌引起的重症感染应首选万古霉素 ;对产酶菌及非发酵菌引起的重症感染应首选头孢哌酮钠 -舒巴坦和泰能。     

麦角固醇突变株啤酒酵母S—97—71的诱变选育及其优化发酵条件的研究

采用He-Ne激光和紫外线对啤酒酵母S-12进行了诱变,筛选出一株产麦角固醇较高的突变株S-97-71,其产量为2.39%（mg/100g）,比出发菌株提高了39.8%。该菌株产角固醇最佳条件为：培养基碳源8%蔗糖,氮源0.5%（NH4）2SO4,培养温度30℃,起始pH6,发酵时间96h。     

30株CRE临床感染特点及blaNDM-1基因检出情况分析

目的 了解我院2013年4月-2014年3月临床分离的30株耐碳青霉烯类肠杆菌科(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae, CRE)菌株blaNDM-1基因型检出情况,感染患者的临床特征,以及对常用抗菌药物的耐药特点。方法 临床分离菌株由美国BD公司生产的Phoenix-100全自动细菌鉴定/药敏系统进行菌株鉴定和药敏试验。改良Hodge试验检测产碳青霉烯酶,EDTA协同试验筛查金属β-内酰胺酶。利用特异性引物进行blaNDM-1基因PCR扩增,采用双脱氧末端终止法进行DNA测序,所测序列与GenBank基因库中的已知序列进行BLAST比对。结果 (1)菌株分布情况：我院2013年4月-2014年3月临床标本中分离出对碳青霉烯类抗生素耐药肠杆菌科细菌共30株,其中肺炎克雷伯菌16株,占53.3%;阴沟肠杆菌12株,占40.0%;布氏柠檬酸杆菌和弗氏柠檬酸杆菌各1株,blaNDM-1基因确证,共有5株为产NDM-1酶菌株,5株菌包括肺炎克雷伯菌2株,阴沟肠杆菌2株,布氏柠檬酸杆菌1株,这些细菌来自不同的科室,但主要分布在重症医学科 (15/30, 50.0%),神经内科重症病房(8/30, 26.7%)。标本主要来源于痰(20/30, 66.7%),其次为尿液(5/30, 16.7%),血液4株(13.3%),引流液1株(3.3%)。5株产NDM-1酶菌株分离自4例患者,3株分离自患者尿液标本,2株分离自患者痰标本;感染患者平均年龄为73岁,平均住院时间10个月,2例死亡。(2)药物敏感性试验结果：30株CRE对碳青霉烯类抗生素亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为100%和86.7%,对其他β-内酰胺类抗生素耐药率均为100%;对氯霉素、庆大霉素、左氧氟沙星、环丙沙星的耐药率在76.7%~93.3%之间;对多黏菌素和替加环素敏感率高达100%,其次为复方磺胺甲噁唑和阿米卡星,敏感率分别为66.7%和46.7%。5株产NDM-1酶菌株对多黏菌素和替加环素均敏感,3株对复方磺胺甲噁唑敏感,2株对阿米卡星敏感;而对β-内酰胺类抗生素以及喹诺酮类、氯霉素类等均耐药。结论 我院流行的CRE菌株主要分离自重症医学科和神经内科重症病房患者,对多种抗生素呈高度耐药,其中产NDM-1酶菌株主要来自长期住院的高龄患者,且死亡率较高,应对其感染的风险因素进行调查,并有针对性的采取感染预防措施进行防控。     

不同产地淡豆豉优势发酵菌群的筛选及酶活性分析

目的:为淡豆豉生产标准化提供参考。方法:分别采集黑龙江、河北、甘肃、山东、安徽、云南等6个产地的淡豆豉,以青蒿、桑叶选择性培养基培养发酵菌,分别采用福林酚法、纤维蛋白平板法、对硝基苯酚-β-D-葡萄糖苷显色法测定菌株的蛋白酶、纤溶酶、β-葡萄糖苷酶活性以筛选发酵优势菌。结果:从6个产地淡豆豉中共分离出14个野生型菌株,包括3株细菌和11株霉菌。其中,从黑龙江产淡豆豉中分离出杆状细菌1株和毛霉菌1株;从河北产淡豆豉中分离出毛霉菌2株和杆状细菌1株;从甘肃产淡豆豉中分离出毛霉菌1株、青霉菌1株、微球菌1株、曲霉菌1株;从山东产淡豆豉中分离出毛霉菌2株;从安徽产淡豆豉中分离出毛霉菌1株和曲霉菌1株;从云南产淡豆豉中仅分离出毛霉菌1株。根据菌种类别及酶活性测定结果分析,初步判定其中的1号杆状细菌、9号曲霉菌、11号和14号毛霉菌为优势发酵菌,4种菌的3种酶总活性分别为22.77、25.49、41.32、39.13 U/g。结论:不同产地淡豆豉中发酵菌有所不同,通过酶活性分析可初步筛选出优势发酵菌。     

常压室温等离子体诱变选育他克莫司高产菌株及发酵条件优化

目的 选育他克莫司高产菌株,提高发酵单位。方法 采用常压室温等离子体(ARTP)技术对一株他克莫司出发菌株FK13-2-14进行诱变,对高产菌株的种子瓶接种量、异亮氨酸的添加量及添加时间等发酵条件进行优化。结果 获得1株稳定的突变高产菌株FK18-1-56,摇瓶发酵单位提高了162%;优化后种子瓶接种量为1.5cm2/40mL,异亮氨酸添加时间为48h,添加量为3.0g/L。高产菌株在优化后的发酵条件下,100L罐发酵单位达到997μg/mL,比出发菌株提高了128%。结论 利用常压室温等离子体诱变技术得到他克莫司高产菌株,经发酵工艺优化后,大幅度提高了他克莫司的工业发酵水平。     

米尔贝霉素A3和A4高产菌的理性选育

目的 应用理性选育理论，结合各种诱变手段，获得米尔贝霉素A4(1)，A3(2)的高产菌种。方法 以吸水链霉菌CGMCC7677为出发菌，通过紫外、甲基磺酸乙酯与常压室温等离子体等单独诱变或组合诱变，结合含甘氨酸、利福平、乙酸钠和3-溴丙酮酸的抗性平板进行筛选。结果 通过多轮的筛选，得到米尔贝霉素突变株75-22和95-23。在不改变培养基组成和培养条件的情况下，75-22在50L发酵罐中培养360h，米尔贝霉素A4(1)的生产能力提高了5倍，米尔贝霉素A4(1)的含量也从70%提高至80%以上。95-23在50L发酵罐中培养360h，米尔贝霉素A3(2)的生产能力提高了10倍，米尔贝霉素A3(2)的含量提高至70%以上。结论 主产单一组分菌种的获得，可进一步扩大米尔贝霉素的应用研究范围，也为米尔贝霉素的产业化提供了优良的菌种。     

高效液相色谱法测定降糖宁胶囊中梓醇的含量

目的:建立HPLC测定降糖宁胶囊中梓醇含量的方法。方法:色谱柱:Lanbo^?Kromasil C₁₈（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相:乙腈-0.1%磷酸（1:99）,流速:1.0 ml·min^-1,检测波长:210 nm,柱温:30℃。结果:梓醇在0.311～1.556μg范围内线性关系良好（r=0.999 7）;平均回收率为98.3%,RSD为0.5%（n=6）。结论:本方法操作简便、结果准确、灵敏度高、重复性好,可作为降糖宁胶囊中梓醇的含量测定方法。     

新型常压室温等离子体-紫外复合诱变选育埃莎霉素I高产菌株#br#

目的 通过对埃莎霉素Ⅰ产生菌WSJ-IA进行诱变选育研究,以期获得埃莎霉素Ⅰ高产菌株。方法 使用多功能等离子体诱变系统(multifunctional plasma mutagenesis system, MPMS)对出发菌株的孢子进行等离子体和紫外复合诱变,设定不同的诱变时间处理孢子悬液,通过致死率确定合适的诱变条件,利用突变株摇瓶发酵效价筛选出正突变菌株。结果 在MPMS射频功率为100W,处理距离5mm,气体流量12.5SLM,等离子体-紫外辐射时间为50s时,菌株致死率为96.08%。在此诱变条件下,以突变株的初筛效价为指标的突变率、正突变率分别达到63.96%和22.52%,复筛效价是出发菌株1.5倍以上的有5株,占复筛菌株的9%。最终筛选出一株发酵单位比出发菌株提高221%、埃莎霉素Ⅰ组分含量提高192%的正突变株IA-425。42L自动发酵罐发酵结果表明,该菌株埃莎霉素Ⅰ产量达到(2000±200)μg/mL左右。结论 新型等离子体复合紫外诱变方式,可有效提高菌株的埃莎霉素Ⅰ发酵产量和组分含量。这为埃莎霉素Ⅰ的大规模发酵和临床前研究奠定了良好基础。     

低氮源消耗和高产雷帕霉素菌株的选育

目的 采用亚硝基胍(NTG)、常压室温等离子体(ARTP)、核糖体工程育种方法处理产雷帕霉素游动放线菌SIIA-1602，结合OSMAC策略以期筛选得到发酵水平有较大提高，氮源利用更加高效的新菌株。方法 首轮采用NTG诱变筛选；第二轮采用链霉素抗性育种，第三轮采用ARTP诱变育种；采用3种不同的发酵培养基考察突变菌株的发酵水平。结果 出发株游动放线菌SIIA-1602经过NTG诱变、链霉素抗性和ARTP诱变筛选得到的突变株ASN-256，其发酵水平提高了55.7%，通过发酵培养基删减有机复合氮源并且添加了赖氨酸和哌可酸后，发酵水平提高分别107.6%和148.9%。在10t发酵罐通过流加 ，使菌种ASN-256发酵单位进一步提高到1250mg/L，是出发菌株SIIA-1602发酵水平的2.85倍。菌种ASN-256发酵过程中总氮源使用量减少50%，放罐时氨基氮排放仅为菌株SIIA-1602的一半，菌渣量也显著降低。结论 本方法简单经济，突变效率高，能够快速获得传代稳定，氮源利用更加高效的雷帕霉素高产突变株。另外，该菌通过发酵培养基的调整实现了氨基氮排放和菌渣量的大幅降低，在环保方面取得了显著的效益。     

HPLC法测定滋肾健脾液中梓醇和大黄素含量

目的建立滋肾健脾液（生地、枸杞、制首乌等）中梓醇及大黄素含量测定的HPLC方法。方法采用ZORBAX SB-Aq Agdem 1100（150mm×4．6mm,5μm）色谱柱。梓醇含量测定色谱条件为：以乙腈-水（0．6：99．4,V/V）为流动相,流速1mL·min^-1,检测波长210nm,柱温25℃。大黄素含量测定色谱条件为：以甲醇-0．1％磷酸（80：20,V／V）为流动相,流速1mL·min^-1,检测波长290nm,柱温25℃。结果梓醇质量浓度在0．02408-0．2408g·L^-1内与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9999,n=6）,低、中、高浓度的对照品溶液的加样回收率分别为97,54％、99．46％、101．35％;大黄素质量浓度在0．81—8．10mg·L^-1内与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9999,n=6）,低、中、高浓度的对照品溶液的加样回收率分别为97．74％、100．18％、100．66％。结论本法简便、准确、专属性强,可用于该制剂中梓醇及大黄素含量测定。     

Mead production: Selection and characterization assays of Saccharomyces cerevisiae strains

Mead is a traditional drink, which results from the alcoholic fermentation of diluted honey carried out by yeasts. However, when it is produced in a homemade way, mead producers find several problems, namely, the lack of uniformity in the final product, delayed and arrested fermentations, and the production of “off-flavours” by the yeasts. These problems are usually associated with the inability of yeast strains to respond and adapt to unfavourable and stressful growth conditions. The main objectives of this work were to evaluate the capacity of Saccharomyces cerevisiae strains, isolated from honey of the Trás-os-Montes (Northeast Portugal), to produce mead. Five strains from honey, as well as one laboratory strain and one commercial wine strain, were evaluated in terms of their fermentation performance under ethanol, sulphur dioxide and osmotic stress. All the strains showed similar behaviour in these conditions. Two yeasts strains isolated from honey and the commercial wine strain were further tested for mead production, using two different honeys (a dark and a light honey), enriched with two supplements (one commercial and one developed by the research team), as fermentation media. The results obtained in this work show that S. cerevisiae strains isolated from honey, are appropriate for mead production. However it is of extreme importance to take into account the characteristics of the honey, and supplements used in the fermentation medium formulation, in order to achieve the best results in mead production.     

12C离子束辐射选育庆大霉素高产菌株及其罐发酵水平

采用^12C离子束对庆大霉素产生菌23-18^#进行诱变，通过大量摇瓶筛选，选出5株进行2T罐中试，通过中试，选出2株高产变株在50T罐放大试验中发酵水平较出发菌株有重大突破，发酵水平及批总亿均提高10％以上。     

一种快速筛选抗菌活性海洋真菌的方法

摘要：目的 建立一种快速筛选抗菌活性真菌菌株的方法 方法 设计并改良了一种双层琼脂板快速筛选方法 结果 利用改良双层琼脂板筛选法，从一批真菌中快速筛选获得一株具有显著抗菌活性的菌株WZXY-33-10，并通过现代色谱学及波谱学方法从其发酵物中分离鉴定了2个抗菌活性化合物equisetin（1）和epi-equisetin（2）。结论 改良双层琼脂板筛选法可以作为一种快速发现抗菌活性海洋真菌的方法。     

RP-HPLC法测定顽痹通丸中的梓醇含量

目的建立反相高效液相色谱法测定顽痹通丸中的梓醇的含量。方法采用Agilent Zorbax SB-Aq C18(150mm×4.6 mm,5μm)柱,以水为流动相;检测波长为210 nm,流速为1 mL.min-1。结果梓醇在0.216~4.32μg范围内线性关系良好,r=0.999 7,平均回收率为94.74%(n=6)。结论该方法准确可靠,可为控制顽痹通丸质量提供标准。