利用聚合酶链式反应方法检测转基因大豆和玉米中的基因修饰物质

采用聚合酶链式反应 (PolymerasechainreactionPCR)来检测转基因大豆 (RR大豆 )和玉米 (Bt 176玉米 )中基因修饰物质 (GeneticallyModifiedOrganismsGMOs)的方法。利用已知GMOs准确含量的转基因大豆和玉米对PCR检测方法进行了探讨 ,检测限可以达到 0 1% ,即 ,可以把食品中含量仅为 0 1%的GMOs检测出来 ,检测为定性检测。检测的步骤包括 :(1)大豆和玉米基因组DNA的提取 ;(2 )对转入的CaMV35s启动子和NOS终止子利用PCR方法进行扩增 ;(3)对食品的house -keeping基因进行PCR扩增 ,以确定我们所检测的食品确实来自于大豆和玉米 ;(4)利用琼脂糖凝胶电泳及XmnI限制性内切酶方法对PCR产物进行描述与确认。RR大豆含有CaMV35s启动子和NOS终止子 ,而Bt 176玉米只含有CaMV35s启动子。由于玉米的淀粉含量较高 ,因此其基因组DNA的提取效果不如大豆 ,最终的电泳图谱也不如大豆的清晰     

PCR法筛选检测转基因食品

目的通过PCR检测花椰菜花叶病毒(camv)35S启动子和胭脂碱合酶(nos)终止子建立筛选食品中有无转基因成分的方法.方法用改良溴化十六烷三甲基铵(CTAB)法制备转基因抗除草剂[大豆RoundUp ReadyTMSoybean(RRS)]和转基因抗虫玉米系列标准品Bt176 Maximaizer的DNA,PCR检测其内参照基因及camv 35 S启动子和nos终止子.结果改良CTAB法制备的DNA用作PCR模板均可扩增出内参照基因,PCR扩增camv 35S启动子可检测出含量为0.5%的RRS和Bt176 Maximaizer,而PCR扩增nos终止子可检测出含1%RRS的食品样品.结论改良CTAB法制备的DNA可用作PCR模板,建立的PCR检测camv 35S启动子和nos终止子方法可用于筛选食品中有无转基因成分.     

SYBR GreenⅠ实时荧光PCR检测食品中转基因成分方法的初步建立

目的：建赢SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法检测食品中转基因成分35S启动子和NOS终止子,并对样品进行检测。方法：以大豆Lectin基因为内源性基因,以转基因食品中常用的花椰菜花叶病毒启动子（CaMV35S）和根癌农杆菌终止子（NOS）基因为目标基因,设计并合成3对特异性引物,优化反应条件,使用SYBR GreenⅠ染料实时荧光PCR检测35S启动子和NOS终止子,并做熔解曲线分析。同时利用该方法对胡萝卜、青豆、玉米、马铃薯等实际样品进行检测。结果：运用该方法检测8份样品,有4份检出35S基因和NOS基因成分。结论：SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法能有效检测出35S和NOS两种转基因成分,简便、快速。     

大豆和玉米加工产品中外源转基因成分检测技术的建立

目的：建立检测大豆和玉米加工产品中转基因成分的PCR技术.方法：采用PCR技术检测CaMV 35S启动子,并进一步通过PCR检测RoundUp Ready Soybean（RRS）和Bt176 Maximaizer的特异性DNA片段,判断大豆和玉米加工产品中是否含相应转基因成分.结果：在1份豆粕和豆腐样品中检测到了RoundUp Ready大豆特异性的498bp片段,而在玉米粒样品中检测到了Bt176特异性转基因成分.PCR检测的灵敏度达到0.1%,稳定性良好.结论：PCR技术检测外源基因是灵敏和准确的,可以广泛地应用到转基因作物及其加工产品的转基因成分检测中.     

转基因食品DNA提取技术研究

目的：建立从食品中提取DNA的方法。方法：采用CTAB法、酶裂解法、SDS沉淀法3种方法提取转基因相关食品中的：DNA，用核酸蛋白分析仪测定核酸的纯度和浓度、PCR扩增真核生物的18S rDNA基因评价提取核酸的质量。用转基因植物通常含有的CaMV35S启动子作为转基因成分的指示标记。结果：3种方法得到的DNA提取物OD260／OD280比值均接近1．6-1．9，CTAB法获得的DNA量较少，酶提取法所得的DNA提取物的量多，但扩增条带荧光较暗。SDS法能收获较多的DNA，PCR扩增效果好。用SDS法提取的DNA进行35S启动子检测，3份转基因样品均出现强阳性结果，而10份非转基因食品均未产生阳性条带。结论：SDS沉淀法提取DNA，具有经济、简便的特点，所提的DNA量适用于PCR检测。     

SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测食品中转基因成分方法的灵敏度和特异性研究

目的:研究SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测食品中转基因成分(35S基因和NOS基因)方法的灵敏度、特异性和线性关系。方法:使用SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR方法检测不同转基因含量的标准品,并对转基因阳性和阴性样品分别进行扩增,分析扩增曲线和Ct值。结果:SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测食品中转基因成分方法检出限为0.05%,转基因大豆标准品和阳性样品中检出35S基因和NOS基因成分,阴性样品中未检出35S基因和NOS基因成分。结论:SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测35S和NOS转基因成分方法灵敏度高,特异性较好,标准曲线线性良好。     

植物源性转基因食品PCR检测技术研究

〔目的〕建立简便、快速、灵敏、特异的植物源性转基因食品DNA检测技术。〔方法〕针对转基因植物技术中载体上常用花椰菜花叶病毒的 3 5S启动子和根农杆菌的NOS终止子特异基因序列 ,设计合成特异的引物对 3 5s -f/ 3 5s-r、Nos -f/Nos -r ,利用基因PCR扩增技术检测植物源性转基因食品。〔结果〕引物对 3 5s -f/ 3 5s -r、Nos -f/Nos -r分别成功从转基因大豆中扩增出 195bp和 180bp特异的DNA带。采用引物对 3 5s -f/ 3 5s -r进行PCR时检测灵敏度为每反应 10 4分子 ;采用Nos -f/Nos -r时检测灵敏度为 2× 10 4分子。最低可以对 0 .1μg转基因大豆进行检测。〔结论〕基于 3 5S启动子和NOS终止子基因序列的PCR扩增技术是一种简便、快速、灵敏、特异的植物源性转基因食品DNA检测技术     

转基因豆油的检测

目的探讨转基因豆油的检测方法。方法采用PCR扩增法,对通常转基因植物共有的外源基因35s启动子和Nos终止子序列进行检测,确定其是否转基因作物。结论在转基因豆油中成功检测到35s启动子和Nos终止子的基因片段。     

抗环斑病毒转基因番木瓜55-1的PCR检测

目的建立对抗环斑病毒转基因番木瓜55-1进行品系鉴定的检测方法。方法采用改良十六烷基-三甲基．溴化铵（CTAB）法及试剂盒方法进行番木瓜基因组DNA提取，根据番木瓜管家Papain基因和抗环斑病毒转基因番木瓜55-1品系的外源结构基因（35S-GUS）和调控基因（NOS-35S）序列设计合成特异性检测引物，采用PCR技术对抗环斑病毒转基因番木瓜55-1进行品系鉴定。结果内源Papain基因PCR扩增结果表明，改良CTAB法及试剂盒方法都可用于番木瓜种籽及果肉的DNA提取。实验中合成的引物及建立的PCR反应体系、反应参数能特异性地扩增转基因番木瓜55—1的外源基因35S—GUS序列和NOS-35S序列。该方法的绝对检测低限为8．15×10^-2ng，相对检测低限为0．14％。结论本检测方法有较高的稳定性，能有效地对转基因番木瓜55-1进行品系鉴定，该方法的检测灵敏度可完全满足转基因食品标识管理定性检测的需要。     

转基因番木瓜55-1的多重PCR鉴定方法研究

目的：建立对转基因番木瓜55—1进行品系鉴定的多重PCR检测方法。方法：根据番木瓜管家Papain基因和转基因番木瓜55—1品系的外源结构基因（35S—GUS）和调控基因（NOS）序列设计合成特异性检测引物。采用多重PCR技术对转基因番木瓜55—1进行品系鉴定。结果：本研究建立的多重PCR反应体系、反应参数能特异性地同时扩增转基因番木瓜55-1的管家基因Papain、外源结构基因35S—GUS和调控基因NOS序列。其中针对管家基因和外源结构基因的双重PCR检测方法的绝对检测低限为0．14ng，其相对检测低限为0．14％；三重PCR检测方法的绝对检测低限为1．56ng，其相对检测低限为1．56％。结论：本检测方法有较高稳定性，能快速准确地对转基因番木瓜55—1进行品系鉴定，该方法的检测灵敏度可基本上满足转基因食品标识管理定性检测的需要。