应用荧光原位杂交技术在人肺癌中发现c－myc基因易位

基因易位是癌基因激活的一种机制，但是以往检测基因改变的方法较难检测基因易位。我们建立了荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）技术，井应用这项技术在人肺癌细胞系ＧＬＣ－８２和１例经ＳＶ４０Ｔ转化了的人支气管上皮细胞中发现了癌基因ｃ－ｍｙｃ易位。在ＧＬＣ－８２细胞系中ｃ－ｍｙｃ基因易位到一条Ｃ组大小标记染色体的短臂。在ＳＶ４０Ｔ转化支气管上皮细胞中ｃ－ｍｙｃ易位到１４ｑ３２，提示ｃ－ｍｙｃ基因易位可能在肺癌起因中起重要作用。     

应用原位分子杂交技术检测实验性肝癌中c—fos基因的表达

目的：探讨实验性肝癌中ｃ－ｆｏｓ基因的表达及其意义。方法：采用二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌模型，应用核酸原位分子杂交和细胞图像分析技术，检测肝癌细胞ｃ－ｆｏｓ基因的表达。结果：肝癌细胞胞浆中ｃ－ｆｏｓ基因呈阳性表达，ｃ－ｆｏｓ基因表达的强度差异与癌周肥大细胞数量变化呈平行一致关系（Ｐ〈０．０５），癌巢周围组织及正常肝组织ｃ－ｆｏｓ基因呈阴性。结论：ｃ－ｆｏｓ基因与肝癌的发生、发展密切相关，肝癌细胞ｃ－     

人脑胶质瘤组织中c－myc基因的扩增和重排及异常表达

目的：癌基因结构及表达异常与肿瘤的发生发展有着密切的关系，作者在于考察胶质瘤中ｃ－ｍｙｃ基因的状况．方法：采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交和ＲＮＡ打点杂交的方法以正常人脑组织为对照观察了７例人脑胶质瘤组织中ｃ－ｍｙｃ基因在ＤＮＡ和ＲＮＡ水平的改变．结果：７例人脑胶质瘤标本中ｃ－ｍｙｃ基因有不同程度的扩增和重排，其ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达幅度是正常组织的１．６～４．０倍，结论：在胶质瘤中有ｃ－ｍｙｃ基因的异常．     

乳腺癌c—myc扩增的临床意义

应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分析法检测２５例乳腺癌组织中ｃ－ｍｙｃ基因的拷贝数及多态性，发现其中１２例有ｃ－ｍｙｃ基因的扩增，长度分别为１３ｋｂ和（或）２３ｋｂ，高龄患者（≥４５岁）中，ｃ－ｍｙｃ扩增的阳性率高于成年患者（〈４５岁），同时证实腋窝淋巴结转移出现，ｃ－ｍｙｃ扩增的比例明显高于无腋窝淋巴结转移者（Ｐ〈０．０５）。结果表明，ｃ－ｍｙｃ基因扩增与乳腺癌腋窝淋巴结转移及高龄状态发病有关，提示ｃ－ｍｙ     

原癌基因c—myc与肿瘤

原癌基因ｃ－ｍｙｃ是ｍｙｃ家族的重要成员，它编码细胞核内磷酸化蛋白质。ｃ－ｍｙｃ基因在维持正常细胞功能活中起重要作用，参与细胞的增殖，分化及凋亡过程。ｃ－ｍｙｃ与人类肿瘤有密切关系，在许多肿瘤组织中均可以检测到原癌基因ｃ－ｍｙｃ及其蛋白表达产的的异常。而且体外实验证实ｃ－ｍｙｃ基因可与其他癌基因协同转化多种细胞。     

乳腺癌c－myc扩增的临床意义

应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分析法检测２５例乳腺癌组织中ｃ－ｍｙｃ基因的拷贝数及多态性，发现其中１２例有ｃ－ｍｙｃ基因的扩增，长度分别为１３ｋｂ和（或）２３ｋｂ。高龄患者（≥４５岁）中，ｃ－ｍｙｃ扩增的阳性率高于成年患者（＜４５岁）；同时证实腋窝淋巴结转移出现ｃ－ｍｙｃ扩增的比例明显高于无腋窝淋巴结转移者（Ｐ＜０．０５）．结果表明，ｃ－ｍｙｃ基因扩增与乳腺癌腋窝淋巴结转移及高龄状态发病有关，提示ｃ－ｍｙｃ经扩增方式激活在更年期女性乳腺癌发生过程中起着重要作用，可作为临床预后的评价指标。     

c－myc基因表达水平是评价大肠腺瘤恶变倾向的一个临床实用的指标

本文作者利用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交、斑点杂交技术，比较了大肠癌、腺瘤（癌前期病变）与正常粘膜组织中ｃ－ｍｙｃ基因的表达水平。实验结果表明：在大多数结肠癌（１４／１７）和一部分腺瘤（直径＞１ｃｍ）中ｃ－ｍｙｃ基因的表达水平显著增高，而另一部分小腺瘤（直径（１ｃｍ）中仅有轻度增高。我们认为：ｃ－ｍｙｃ基因的表达水平对于判断大肠腺瘤是否恶变是一个具有潜在临床应用价值的指标。     

食管癌c－myc基因扩增的临床意义

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对４１例食管鳞癌石蜡包埋标本进行了ｃ－ｍｙｃ基因的研究。结果发现：ｃ－ｍｙｃ基因扩增与淋巴结转移及临床病理分期有密切关系（Ｐ＜０．０１）。ｃ－ｍｙｃ基因扩增者，淋巴结转移较多，临床病理分期较晚，同时还发现ｃ～ｍｙｃ基因扩增与预后有明显关系（Ｐ＜０．０５），ｃ－ｍｙｃ基因扩增者预后较差。提示ｃ－ｍｙｃ基因可以作为判断食管鳞癌预后的检测指标之一。     

人宫颈癌多基因致癌机理的研究

应用核酸分子杂交、ＰＣＲ、ＰＣＲ－ＡＳＯ杂交等技术，对人宫颈癌中Ｈａ－ｒａｓ等三种癌基因、ＨＰＶ１６病毒基因及Ｐ５３、Ｒｂ抑癌基因等多基因变化及其致癌机理进行了研究。结果表明：①宫颈癌中存在Ｈａ－ｒａｓ第１２位密码子Ｇ→Ｔ点突变，突变率为１８．２％（８／４４），并有Ｈａ－ｒａｓ基因扩增，扩增率为４５％（９／２０）；②ｃ－ｅｒｂＢ２基因在宫颈癌中的扩增率为７３．３％（１１／１５），５例伴有重排；③ｃ－ｍｙｃ基因在宫颈癌中的扩增率为９１．７％（１１／１２）；④ＨＰＶ１６Ｅ６／Ｅ７为引物的ＰＣＲ检测结果，宫颈癌中的阳性率为８０．５％（３３／４１）；⑤１２例宫颈癌中未发现Ｐ５８、Ｒｂ基因缺失。上述多基因致癌机理的研究表明，人宫颈癌中Ｈａ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｅｒｂＢ２经点突变、扩增、重排而被激活，在癌变中起着协同致癌作用。ＨＰＶ１６基因的整合可能启动ｃ－ｍｙｃ，为癌变的起始因素，而Ｈａ－ｒａｓ、ｃ－ｅｒｂＢ２的基因改变可能为中、晚期事件，抑癌基因Ｐ５３、Ｒｂ的作用尚需进一步研究。     

真核表达载体Rc／LTR携带的报告基因可在Hela细胞中高效表达

利用基因重组技术构建了荧光酶报告基因ｌｕｃ和真表达载体Ｒｃ／ＬＴＲ的重组子Ｒｃ／ＬＴＲ－ｌｕｃ。将此重组子转染Ｈｅｌａ细胞后，ｌｕｃ基因在Ｈｅｌａ细胞中得到高效表达。蛋白激酶Ｃ激活剂ＴＰＡ可使ｌｕｃ基因的表达成增加。结果表明，ＨＩＶ－ＬＴＲ可用作真核细胞内外源基因表达的有效启动子。     

黄曲霉毒素B1转化体原代培养的大鼠肝上皮细胞

利用基因转染技术，研究黄曲霉毒素Ｂ１在ｃ－ｍｙｃ基因和ｐ４５０ＩＡ２基转染的基础上，转化体外原代大鼠肝上皮细胞的可能性及其部分分子机理，首先构建Ｘｍ－６／ｃ－ｍｙｃ真核表达载体，并将其转染Ａｌｅｘａｎｄｅｒ细胞，免疫组化实验证明重组的ｃ－ｍｙｃ基因可行肝细胞中表达，随后分别将ｃ－ｍｙｃ和人ｐ４５０ＩＡ２表达载体转染无血汪原代接着的新生Ｗｉｓｔａｒ大鼠肝细胞，结果发现ｐ４５０ＩＡ２基因可代谢活化５ｎ     

人脑胶质瘤组织中c—myc基因的扩增和重排及异常表达

癌基因结构及表达异常与肿瘤的发生发展有着密切的关系，作者在于考察胶质瘤中ｃ－ｍｙｃ基因的状况。采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ杂交和ＲＮＡ打点杂交的方法以正常人脑组织为对照观察了７例人脑胶质瘤组织中ｃ－ｍｙｃ基因在ＤＮＡ和ＲＮＡ水平的改变。７例人脑胶质瘤标本中ｃ－ｍｙｃ基因有不同程度的扩增和重排。其ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达幅度是正常组织的１．６－４．０倍。在胶质瘤中有ｃ－ｍｙｃ基因的异常。     

WHV／myc转基因小鼠肝癌发生过程中c—jun,c—fos和c—H—ras基因的表达

用核酸分子原位杂交的方法，检测了ＷＨＶ／ｍｙｃ转基因小鼠肝癌发生于过程中ｃ－ｊｕｎ，ｃ－ｆｏｓ和ｃ－Ｈｒａｓ基因的表达情况。正常小鼠肝脏中可检测出上述三种基因呈低水平的表达。１０天龄转基因小鼠肝脏中这三种基因的表达与正常同龄小鼠相拟，而４月龄转基因小鼠肝脏中三种基因的表达强度明显高于下沉小鼠，且杂交信号的分布范围广。肿瘤形成阶段，仍可在肝肿瘤结节中检测到这三种癌基因较弱的表达信号。结果表明，在ＷＨ     

p^53cDNA突变和突变型p^53蛋白表达与大肠癌预后的关系

目的 探讨ｐ＾５３基因ｃＤＮＡ突变和突变型ｐ＾５３基因蛋白表达与大肠腺癌预后的关系。方法 ＲＴ－ＳＳＣＰ检测大肠腺癌组织ｐ＾５３基因ｃＤＮＡ突变，ＰＡｂ２４０单抗免疫组化检测腺癌组织突变型ｐ＾５３基因蛋白表达，比较两者与大肠腺癌预后的关系。结果 １００例大肠腺癌中，ｐ＾５３基因ｃＤＮＡ突变５１例（５１％），突变型ｐ５３基因蛋白高表达７６例（７６％），两者同步阳性４９例：ｐ＾５３基因ｃＤＮＡ突变与突     

嗜热菌热休克蛋白基因的克隆与表达

克隆和在原核表达系统中表达超嗜热古球菌之热休克蛋白基因β亚基。方法：用ＰＣＲ技术从ＨＰＫ基因组ＤＮＡ中扩增ｃｐｋＢ基因片段，经克隆和核苷酸序列分析后再克隆至原核表达载体ｐＢＶ２２０，升温诱导ｃｐｋＢ基因表达，利用ＣｐｋＢ蛋白的耐温特性纯化该蛋白。结果：扩增和克隆了１．６ｋｂ的ｃｐｋＢ基因，并经ＤＮＡ测序证实，实现了ｃｐｋＢ基因在原核系统ＰＬＰＲ启动子控制下的表达，建立了纯化ＣｐｋＢ蛋白的方法。结论     

反义寡聚脱氧核苷酸抑制HL－60细胞中bcl－2基因表达的研究

目的：研究ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２基因的表达并探索ｂｃｌ－２基因ｍＲＮＡ特异的反义寡聚脱氧核苷酸（反义ＯＤＮ）对ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２基因表达的影响．方法：采用细胞原位杂交和免疫细胞化学染色技术检测ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２基因的表达，人工合成ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ特异性反义ＯＤＮ片段与ＨＬ－６０细胞共培养，在作用一定时间后分别测定细胞中ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ和Ｂｃｌ－２蛋白表达的变化．结果：ｂｃｌ－２基因在ＨＬ－６０细胞中既有转录水平的高表达，又有翻译水平的高表达，人工合成的反义ＯＤＮ片段在一定浓度范围内，作用一段时间后细胞内ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达无显著改变，而蛋白表达却呈现了显著下降，与浓度和作用时间呈正相关．结论：人工合成的反义ＯＤＮ片段可以抑制ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２的转录作用．在进行白血病基因治疗的实验研究中，ｂｃｌ－２基因可以作为基因治疗的一个有用的靶基因．     

Ⅰ、Ⅲ 型前胶原 mRNA 在风心病心肌中表达及其与 c-myc 基因表达相关性的研究

目的：了解风湿性心脏病心肌中Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ和ｃ ｍｙｃ基因的表达定位情况及意义。方法：用人Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｃＤＮＡ探针和ｃ ｍｙｃ基因探针，对３２例风湿性二尖瓣乳头肌进行分子原位杂交并进行图像分析。结果：①病变心肌间质中Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ阳性表达明显增强，Ⅰ型较正常成年心肌中增高１６７倍，Ⅲ型增高４３６倍；②病变心肌细胞核内出现Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ和ｃ ｍｙｃ基因阳性表达，胎儿心肌亦有类似表达；③Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ阳性表达量与ｃ ｍｙｃ基因阳性表达呈正相关关系。结论：①发现在病理情况下心肌细胞参与了胶原的生成与代谢，对胶原的合成和分泌具有重要作用。②ｃ ｍｙｃ基因对风湿性病变心肌的胶原代谢过程起调控作用。③风心病心肌胶原增生和调控发生在转录和转录后水平，心肌细胞重现了胎儿期合成胶原的表型。     

Ⅰ,Ⅲ型前胶原mRNA在风心病心肌中表达及其与c—myc基因表达相关？…

目的：了解风湿性心脏病心肌中Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ和ｃ－ｍｙｃ基因的表达定位情况及意义。方法；用人Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｃＤＮＡ探针和ｃ－ｍｙｃ基因探针，对３２例风湿性二尖瓣乳头肌进行分子原位杂交并进行图像分析，结果：（１）病变心肌间质中Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ阳性表达明显增强，Ⅰ型较正常成年心肌中增高１．６７倍，Ⅲ型增高４．３６倍；（２）病变心肌细胞核内出现Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ和ｃ－ｍｙｃ基因阳性表达，     

食管癌c—myc基因扩增的临床意义

应用聚合酶链反应技术对４１例食管鳞癌石蜡包埋标本进行了ｃ－ｍｙｃ基因的研究。结果发现：ｃ－ｍｙｃ基因扩增与淋巴结转移及临床病理分期有密切关系。ｃ－ｍｙｃ基因扩增者，淋巴结转移较多，临床病理分期较晚。     

应用PCR检测HL—60细胞诱导分化前后c—myc癌基因的扩增

应用ＰＣＲ方法研究了维甲酸（ＲＡ）和二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）诱导ＨＬ－６０细胞分化过程中ｃ－ｍｙｃ基因扩增的变化。结果：ＨＬ－６０细胞内ｃ－ｍｙｃ基因扩增为１１，经ＲＡ诱导６ｄ后，其扩增程度无明显变化，而ＤＭＳＯ诱导３ｄ后，ｃ－ｍｙｃ基因扩增出现下降，至５ｄ，较未诱导分化前下降约３０％。提示了ＲＡ和ＤＭＳＯ对ＨＬ－６０细胞不同的诱导分化机制。