异基因造血干细胞移植研究进展

异基因造血干细胞移植已成为治愈血液系统恶性肿瘤、骨髓衰竭性疾病、某些先天性及代谢性疾病等的重要方法。本文就外周血干细胞移植（PBSCT）、脐血造血干细胞移植（CBSCT）、非清髓性干细胞移植（NST）、移植物抗宿主病（GVHD）与移植物抗白血病（GVL）效应以及间充质干细胞（MSC）在异基因造血干细胞移植中的应用等方面的新进展进行介绍。     

异基因造血干细胞移植后动态监测调节性T淋巴细胞的临床意义

目的探讨监测调节性T淋巴细胞（Treg）的动态变化在异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）中的临床意义。方法选择45例allo-HSCT患者，其中31例采用短程甲氨蝶呤（MTX）联合环孢素A（CsA）预防移植物抗宿主病（GVHD），另14例加用霉酚酸酯（MMF）和达利珠单抗（抗CD25单克隆抗体）强化GVHD的预防。采用流式细胞术动态监测allo-HScT患者移植预处理前、移植后2、4、8、12周时及发生急性移植物抗宿主病（aGVHD）时外周血Treg的水平；分析Treg水平的变化与aGVHD发生的相互关系。结果45例患者中，发生Ⅱ～Ⅳ度aGVHD10例。移植后8和12周时，未使用达利珠单抗组中发生Ⅱ～Ⅳ度aGVHD较发生0～I度aGVHD的患者外周血Treg水平显著降低，差异有统计学意义（P〈0．05）；患者发生Ⅱ～Ⅳ度aGVHD后，外周血Treg水平较发生前显著降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。使用达利珠单抗组的患者外周血Treg水平在各时间点均明显降低，各时点间比较，差异均无统计学意义。结论Treg的动态变化与aGVHD的关系密切，可作为临床监测aGVHD发生的重要指标之一；达利珠单抗的应用显著降低了外周血Treg的水平，其对aGVHD的预防作用有待今后深入研究。     

异基因造血干细胞移植后慢性移植物抗宿主病的临床分析

目的：探讨异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后慢性移植物抗宿主病（cGVHD）的临床特点、相关危险因素及治疗效果。方法：回顾性分析69例allo-HSCT患者的临床资料。根据供、受者的关系以及配型情况，将患者分为三组：A组为亲缘全相合异基因骨髓移植，22例；B组为亲缘全相合异基因外周血干细胞移植，37例；C组为非血缘移植和不全相合移植，10例。术前均采用化疗预处理，术后采用短程甲氨蝶呤联合环孢素A（CsA）预防移植物抗宿主病（GVHD）。局限性cGVHD患者多采用单一免疫抑制剂（CsA或糖皮质激素）治疗，病情进展者采用标准方案（CsA联合糖皮质激素）治疗；广泛性cGVHD患者则需用标准方案治疗（一线治疗方案）。一线治疗无效、病情进展者，对一线治疗依赖不能停药，或停药后病情反复者，需用他克莫司、霉酚酸酯及硫唑嘌呤治疗（二线治疗方案）。结果：移植后随访6～120个月，中位时间为43个月，39例诊断为cGVHD，其中局限性cGVHD13例（33．3％，13／39），广泛性cGVHD26例（66．7％，26／39），7例死于cGVHD或与之相关的并发症。B组cGVHD发生率较A组显著升高（P〈0．05），B组和C组的广泛性cGVHD发生率显著高于A组（P〈O．05）。外周血干细胞移植和病程中发生2～4度急性GVHD是cGVHD发生的主要危险因素。局限性cGVHD患者采用一线方案治疗的有效率显著高于广泛性cGVHD患者（P〈0．05），标准危险度cGVHD者的治疗有效率显著优于高危险度cGVHD者（P〈0．05）。结论：eGVHD是allo-HSCT后常见并发症和致死原因；广泛性cGVHD多发生于异基因外周血干细胞移植、HLA配型不全相合移植和非血缘移植，且临床治疗效果不佳。     

异基因造血干细胞移植后人CMV感染与GVHD相关性的临床研究

目的 探讨异基因造血干细胞移植后人巨细胞病毒(CMV)感染与移植物抗宿主病(GVHD)的关系.方法 对1998年3月至2001年3月进行的63例造血干细胞移植受者的CMV感染情况进行检测,用聚合酶链反应法检测CMV gB分型,并统计受者GVHD的发生情况.结果 40例发生CMV感染,23例未感染,其GVHD发生率分别为82.5％(33/40)和47.8％(11/23),差异有统计学意义(P＜0.01).CMV gB-1、gB-2、gB-3型感染者发生Ⅱ～Ⅳ度急性GVHD的几率分别为58.8％(10/17)、40％(2/5)和66.7％(4/6),三者间差异无统计学意义(P＞0.05).CMV阳性受者中27.5％(11/40)出现移植后继发性造血抑制,CMV阴性的受者13.0％ (3/23)出现,发生率的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CMV感染者GVHD的发生率升高,而CMV感染与GVHD严重程度无关,合理治疗后不会显著抑制移植后的造血重建.     

非清髓性造血干细胞移植后并发移植物抗宿主病的相关因素分析

目的 探讨和分析非清髓性造血干细胞移植(NST)后并发移植物抗宿主病(GVHD)的相关因素.方法 选择34例血液病患者,其中重型再生障碍性贫血(SAA)15例,重型β-地中海贫血(TM)1例,肿瘤性血液病18例;进行无关供者脐带血造血干细胞移植(UCBT)11例,同胞供者骨髓联合外周血干细胞移植7例,外周血造血干细胞移植(PBSCT)16例.移植前采用以抗胸腺细胞球蛋白(ATG)、抗淋巴细胞球蛋白(ALG)或者氟达拉滨强效免疫抑制为基础的非清髓性预处理方案.GVHD的预防采用短程的甲氨蝶呤(MTX)联合环孢素A(CsA).观察非清髓性造血干细胞移植后的临床特点以及急、慢性移植物抗宿主病的发生情况;分析发生慢性移植物抗宿主病(cGVHD)的相关因素.结果 NST的植入率为91.2%.移植后7例肿瘤性血液病患者形成了供、受者造血细胞混合嵌合体(MC),给予供者淋巴细胞输注(DLI)2～9次后,例由MC转变为供者造血细胞完全嵌合体(FDC).随访12(3～96)个月,共发生Ⅰ～Ⅱ度急性移植物抗宿主病(aGVHD)5例,GVHD 15例.经统计学分析,发现年龄大的肿瘤性血液病患者经以ATG为基础的NST后,再给予DLI,其cGVHD的发生率高,且合并感染,对治疗的反应差;而以氟达拉滨为基础的NST患者发生cGVHD后治疗反应较好.移植100 d前后患者分别死亡3例和5例,其中3例死于广泛性cGVHD.结论 患者的年龄大、有合并症、以ATG为基础的预处理方案、肿瘤性血液病是NST后患者并发cGVHD的危险因素.     

第三方脐血预防异基因造血干细胞移植后移植物抗宿主病

目的 探讨无关供者和单倍型亲缘供者异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)前输注第三方脐血预防移植物抗宿主病(GVHD)的效果.方法 2007年至2011年接受无关供者及单倍型亲缘供者allo-HSCT的受者共41例.脐血预防组(25例),于移植前1d予以HLA配型为4/6～6/6的第三方脐血细胞输注,平均输入有核细胞数为(1.64±0.49)×107/kg,次日再输入供者造血干细胞.其余患者作为对照组(16例).两组均采用抗胸腺细胞球蛋白+环孢素A+甲氨蝶呤+吗替麦考酚酯预防急性GVHD.比较两组间急性GVHD的发生率、严重程度以及移植相关死亡率.结果 脐血预防组和对照组aGVHD累积发生率分别为44.0％(11/25)和68.8％(11/16),两组比较,差异无统计学意义(x2=2.403,P＞0.05);Ⅲ～Ⅳ度aGVHD累积发生率分别为16.0％(4/25)和37.5％(6/16),两组比较,差异无统计学意义(x2=2.445,P＞0.05),100 d治疗相关病死率分别为12.0％(3/25)和12.5％(2/16),两组比较,差异无统计学意义(x2=0.002,P＞0.05).结论 在无关供者及单倍型亲缘供者allo-HSCT前应用第三方脐血细胞,可能有效预防GVHD的发生或减轻GVHD的严重度,但尚需要进一步设计扩大规模的随机对照临床试验验证其有效性.     

异基因造血干细胞移植后并发肾病综合征一例

异基因造血干细胞移植作为治疗恶性血液病的有效方法被广泛应用，随着移植技术的进步，患者移植后存活率提高，生存时间明显延长，慢性移植物抗宿主病（cGVHD）已经成为严重影响患者生活质量和导致患者死亡的主要原因。cGVHD多表现为皮肤、肝脏、呼吸和造血系统的异常，并发肾病综合征（NS）者较少见，我们诊治一例，现报告如下。     

异基因造血干细胞移植后肺移植的研究进展

迟发型非感染性肺部并发症(LONIPC)是异基因造血干细胞移植(HSCT)术后慢性移植物抗宿主病(cGVHD)的重要部分, 目前缺乏有效的药物治疗方法。虽然肺移植是治疗多数终末期肺病的唯一方法, 但由于HSCT术后受体潜在的风险, 肺移植难以广泛应用。本文结合世界各地多个移植中心针对HSCT术后LONIPC受体行肺移植治疗的研究, 就HSCT术后肺移植手术适应证及时机、肺移植术后血液肿瘤的复发及感染并发症、肺移植术后的HSCT受体移植物存活率等方面进行总结。     

同种异基因造血干细胞移植急性移植物抗宿主病小鼠模型的制作

目的 制作同种异基因造血干细胞移植急性移植物抗宿主病(GVHD)小鼠模型.方法 以C57BL/6( H-2b)小鼠为供者,Balb/c( H-2d)小鼠为受者,进行同种异基因骨髓移植.设立全身照射(TBI)对照组(4只)、GVHD组(10只)、单纯骨髓移植组(10只)及正常对照组(4只).TBI对照组仅进行致死性TBI,TBI后不进行骨髓移植;GVHD组于TBI前5d开始饮用含320 mg/L庆大霉素和250 mg/L红霉素的饮用水,移植当天以60Co γ射线行一次性TBI,总剂量8.0Gy,TBI后5h内每只小鼠经尾静脉输注C57BL/6小鼠骨髓细胞2×106个+脾细胞1×107个;单纯骨髓移植组预处理与GVHD组相同,每只小鼠经尾静脉输注C57BL/6小鼠骨髓细胞2×106个.移植后观察小鼠的精神状态、活动能力、体位改变、皮毛、体重和大便等,记录每只小鼠的存活时间,计算存活率,并绘制生存曲线.濒死小鼠的皮肤、肝脏、小肠和骨髓行病理检查.结果 TBI对照组小鼠的存活时间为(9.0±0.7)d,GVHD组为(32.0±3.2)d,单纯骨髓移植组为(17.5±1.6)d,3组间两两比较,存活时间的差异均有统计学意义(P＜0.01).TBI对照组病理检查显示造血功能衰竭.GVHD组于移植后第10～13天出现急性GVHD表现,其皮肤、肝脏和小肠组织的病理表现均符合Ⅰ～Ⅱ度急性GVHD改变,单纯骨髓移植组也于移植后第10～13天出现GVHD表现,但其GVHD表现和组织学改变明显轻于GVHD组,仅为0～Ⅰ度GVHD.结论 Balb/c小鼠经致死性TBI后移植同种异基因小鼠骨髓细胞+脾细胞可成功制作稳定的急性GVHD模型.     

HLA-I类PCR-SSP基因分型在异基因造血干细胞移植中的应用

目的：提高异基因造血干细胞移植供、受者HLA－I类配型的精确度,有效防止移植物抗宿主病（GVHD）的发生。方法 采用准确、简便的DNA、RNA提取方法和HLA－I类PCR－SSP基因分型方法。建立HLA－A33、A68、B40、B13 PCR－SSP分型方法以及HLA基因序列测序分析。结果：对300例中清学难以判断结果的30例临床标本进行基因水平的研究发现,DNA及RNA提取方法可以满足此项研究对样本的要求。HLA－I类PCR－SSP分型方法具有良好的稳定性、可靠性和特异性;重复率达100％。同时,HLA－A33、A68、B40、B13结果与HLA－I类PCR－SSP分型结果一致。HLA基因测序分析进一步肯定了HLA－I类PCR－SSP分型的特异性。HLA－I类PCR－SSP不受某些血清学影响因素的干扰。整个实验过程仅耗时2．5h。结论：HLA－I类PCR－SSP基因分型方法准确、特异、重复性好,可作为临床骨髓移植配型和正常人群无关供者筛选的常规方法,对GVHD的发生必将起到重要的预防作用。     

环孢素A联合钴原卟啉预防小鼠HSCT后移植物抗宿主病

目的 探讨应用环孢素A(CsA)联合钴原卟啉(CoPP)预防小鼠异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后移植物抗宿主病(GVHD)的作用.方法 以C57BL/6小鼠为供鼠,Balb/c小鼠为受鼠,分为4组:清髓性全身照射(TBI)组,受鼠TBI后经尾静脉注射磷酸盐缓冲液;常规异基因移植组(BS组),受鼠TBI后经尾静脉注射供鼠骨髓细胞与脾细胞的混合悬液(含骨髓细胞5×106个和脾细胞5×105个);CsA组,受鼠HSCT后腹腔注射CsA;CsA联合CoPP干预组(联合组),受鼠HSCT后腹腔注射CsA和CoPP.观察受鼠存活情况,记录体重.获取受鼠肝脏、小肠和皮肤组织样本,观察GVHD的病理变化;行Masson染色,观察肾组织纤维化;检测受鼠肾组织血红素氧合酶1(HO-1)mRNA的表达.结果 与BS组和CsA组相比较,联合组GVHD程度较轻,体重下降较少且恢复较快.移植后30d时BS组累积存活率为36.8％,联合组为69.6％,CsA组为53.5％,差异有统计学意义(P＜0.05).联合组小鼠肝脏、小肠和皮肤组织可见细胞水肿、变性均较轻,坏死少见,炎症细胞浸润较少,其病理改变较BS组和CsA组轻.联合组几乎无肾间质小管纤维化,而CsA组则较明显.联合组HO-1 mRNA表达高于BS组,CsA组HO-1 mRNA表达低于前两组(P＜0.05).结论 CsA和CoPP联合应用可增强CsA抗GVHD效应,并可减轻CsA的不良反应,其机制可能与HO-1表达上调有关.     

非亲缘异基因造血干细胞移植治疗白血病患者疗效观察

目的探讨非亲缘异基因造血干细胞移植(URD-HSCT)治疗白血病的效果。方法 10例白血病患者(急性髓细胞白血病第1次缓解期3例,急性淋巴细胞白血病第1次缓解期3例、第2次缓解期1例,慢性髓细胞白血病慢性期3例)接受URD-HSCT治疗。所有患者均采用经典的或改良的白消安联合环磷酰胺预处理方案。4例采用环孢素+短程甲氨蝶呤+吗替麦考酚酯预防移植物抗宿主病(GVHD),另6例患者加用抗胸腺细胞免疫球蛋白。输注供者有核细胞中位数为5.6×108/kg,CD34+细胞中位数为3.3×106/kg。结果除1例在移植后早期死亡不能评估外,其余9例均证实植活。发生急性GVHDⅠ度3例和Ⅱ度、Ⅲ度、Ⅳ度各1例,局限性慢性GVHD7例;发生真菌感染4例、CMV血症3例、出血性膀胱炎3例。10例患者目前无病存活7例,生存期为3个月～10年。结论 URD-HSCT安全而耐受性好,移植相关并发症仍是影响URD-HSCT效果的主要问题。     

非清髓性造血干细胞移植后移植物抗宿主病的临床观察

目的 观察非清髓性造血干细胞移植（NST）后移植物抗宿主病（GVHD）的发生情况。方法 将18例患者分为3组：A组为6例重型再生障碍性贫血（SAA）成人患者，行无关供者脐血造血干细胞移植；B组为5例SAA患者，行同胞供者骨髓联合外周血造血干细胞移植；C组为7例肿瘤性血液病患者，其中3例行同胞供者骨髓移植，4例行外周血造血干细胞移植。均采用以抗胸腺细胞球蛋白或抗淋巴细胞球蛋白为基础的预处理方案。A组和B组应用环孢素A（CsA）和甲泼尼龙预防GVHD，C组应用CsA和甲氨蝶呤预防GVHD。C组形成混合性嵌合体后行供者淋巴细胞输注（DLI）。结果 A组有4例形成并维持混合性嵌合体状态，1例死于真菌性败血症，1例自动出院。移植后早期，B组有3例供者型嵌合体占94％以上，并在短期内转变并维持完全供者嵌合体状态，获得无病存活，其中1例在移植后8个月发生慢性GVHD；另2例行供者千细胞输注后，1例6个月后死于继发性纵隔淋巴瘤，1例造血功能恢复。C组患者早期均形成混合性嵌合体，获得血液学部分缓解，患者DLI前无急性GVHD发生，1例于2次DLI后死于严重感染，1例失访；另5例分别经过4、3、7、5、4次DLI，全部转为完全供者型嵌合体，并获得血液学完全缓解，4例并发慢性GVHD，2例并发急性GVHD。结论 对于SAA患者，NST的临床效果较好，GVHD的发生率较低；而对于肿瘤性血液病，NST后患者的早期死亡率低，急性GVHD发生率下降，但慢性GVHD和感染的发生率较高。     

造血干细胞移植相关早期并发症的防治

目的总结造血干细胞移植(HSCT)相关早期并发症的预防和治疗经验。方法 50例恶性血液病患者接受不同方法治疗,其中自体HSCT20例、异基因HSCT19例、混合HSCT10例和脐血HSCT1例。预处理方案包括白消安+环磷酰胺,卡莫司汀+依托泊苷+阿糖胞苷+马法兰,大剂量马法兰等。异基因HSCT患者采用环孢素+甲氨蝶呤为主的移植物抗宿主病(GVHD)预防方案,其中非亲缘异基因HSCT患者则采用环孢素+甲氨蝶呤+吗替麦考酚酯+抗胸腺细胞免疫球蛋白为主的GVHD强化预防方案。所有患者均采用小剂量肝素及复方丹参,部分联合前列腺素E1脂质体微球预防肝静脉闭塞病。所有献血员进行CMV特异性抗体筛查和分次全身照射。结果 50例患者中发生肝静脉闭塞病1例(2.0%),该患者合并Ⅳ度GVHD,症状持续加重且治疗无效,于+26d死亡。CMV血症4例(8.0%),1例发生CMV间质性肺炎,经过抗病毒治疗后痊愈。30例异基因及混合HSCT患者中16例(53.3%)发生急性GVHD,其中Ⅰ度3例、Ⅱ度6例和Ⅲ～Ⅳ度7例,经过治疗后,4例重度患者死亡,其余12例病情控制;6例(20.0%)发生慢性GVHD。发生出血性膀胱炎2例(4%),经对症治疗后痊愈。结论通过筛查献血员CMV-IgM和CMV-IgA抗体,输注经照射及白细胞滤除的血制品,监测CMV-pp65及抗CMV抗体,预防性使用抗病毒药物及分次全身照射等综合措施可以有效地防治CMV感染。对不同移植种类的受者采用不同强度的GVHD预防方案十分必要。     

输注供者自然杀伤细胞对小鼠单倍型相合造血干细胞移植的影响

目的 探讨输注供者自然杀伤(NK)细胞对小鼠单倍型相合造血干细胞移植的影响.方法 选取C57BL/6(H-2b)雄性小鼠为供者、CB6F1(H-2d/b)雌性小鼠为受者.移植前制备供者的骨髓细胞(BMC)、脾细胞(SC)及脾NK细胞,NK细胞经体外培养扩增和激活;所有受者均接受直线加速器X线全身照射(TBI)预处理.TBI后将受者分为4组(每组10只),分别进行单倍型相合造血干细胞移植.单纯TBI组:TBI后不输注细胞,仅作为对照;单纯BMC输注组:输注5×106个BMC;诱发GVHD组:输注5×106个BMC+1.5×107个SC;NK细胞输注组:输注5 x 106个BMC+1.5×107个SC+1×107个NK细胞,并腹腔注射100 ng重组人白细胞介素2(rhIL-2)和1μg rhIL-15,持续7 d.移植后观察各组受者GVHD的发生情况,并对各组受者进行组织病理学、供者细胞嵌合度和免疫功能重建等检测.另取TBI后受者20只,设白血病复发组和白血病治疗组,每组10只.白血病复发组:输注5×106个BMC+1×107个SC+2×106个白血病细胞株EL9611;白血病治疗组:在白血病复发组的基础上再输注1 x 107个NK细胞,并腹腔注射100 ng rhIL-2和1μg rhIL-15,持续7 d.观察两组受者白血病复发情况和移植后100 d的存活率.结果 单纯BMC输注组受者无GVHD发生,NK细胞输注组受者GVHD的评分和组织病理学改变均较诱发GVHD组轻(P<0.05)f诱发GVHD组的免疫功能重建较NK细胞输注组延迟.白血病复发组和白血病治疗组移植后100 d的存活率分别为20%和90%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 输注激活的供者NK细胞可以减轻小鼠单倍型相合造血干细胞移植后的GVHD,减少白血病复发,促进免疫功能重建.     

他克莫司和环孢素A防治急性移植物抗宿主病的效果比较

目的比较他克莫司（FK506）和环孢素A（CsA）防治造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病（aGVHD）的效果。方法根据所用免疫抑制方案的不同，将118例异基因造血干细胞移植患者分为两组，一组移植后采用以FK506为主的方案预防GVHD（FK506组，n=36例），另一组采用以CsA为主的方案预防GVHD（CsA组，n=82例）。观察两组患者aGVHD的发生情况及治疗效果、造血重建情况、存活率、原发病的复发率以及免疫抑制剂的不良反应。结果FK506组和CsA组aGVHD累积发生率分别为（50．0±8．8）％和（50．7±5．6）％（P〉0．05），Ⅱ～Ⅳ度aGVHD累积发生率分别为（13．0±6．1）％和（31．0±5．2）％（P〈0．05），Ⅲ～Ⅳ度aGVHD累积发生率分别为（2．8±2．7）％和（12．3±3．7）％（P〉0．05）。采用FK506及甲泼尼龙（MP）治疗Ⅰ～Ⅱ度aGVHD的效果优于CsA与MP组合，但差异无统计学意义（P〉0．05），而治疗Ⅲ～Ⅳ度aGVHD，FK506与MP组合明显优于CsA与MP组合（P〈0．05）。两组在造血重建时间、患者存活率、无原发病的存活率以及原发病复发率等方面的差异均无统计学意义。FK506组16．7％患者血糖升高，而CsA组血糖升高者仅占1．2％。结论FK506可有效预防和治疗异基因造血干细胞移植后的aGVHD，其总体效果优于CsA。     

异基因外周血干细胞移植后GVHD与白血病复发率的相关关系

目的　评价异基因外周血干细胞移植 (allo PBSCT)后 ,移植物抗宿主病 (GVHD)与白血病复发率的相关关系。方法　 1997年 6月至 1999年 12月 ,37例成人白血病患者接受了allo PB SCT。预处理方案用马利兰和环磷酰胺。输入的CD34+ 、CD3+ 、CD4 + 和CD8+ 细胞中位数分别为7.3× 10 6/kg、36 4× 10 6/kg ,、2 10× 10 6/kg和 137× 10 6/kg。移植后用环孢素A (CsA) +甲氨碟呤(MTX)预防GVHD。结果　受者中性粒细胞和血小板的平均植活时间分别为 13d和 12d。 37例中 ,18例发生急性GVHD(48.8% ) ,其中 9例发生II～IV度急性GVHD(2 4 .3% )。在可评价的 32例中 ,2 2例发生慢性GVHD(6 8.8% )。随访 6 0 0～ 15 0 0d(平均 95 0d) ,2 8例无病生存。主要死亡原因为 :急性GVHD 2例 ,巨细胞病毒肺炎 (CMV CP) 4例 ,慢性GVHD 2例 ,白血病复发 1例。 3年无病生存率为 75 .7%。结论　allo PBSCT后 ,慢性GVHD的高发生率增强了移植物抗白血病效应 ,从而降低了移植后白血病的复发率。