应用逆转录聚合酶链反应检测肠道病毒感染

为建立一种能检测出临床上绝大多数肠道病毒（ＥＶ）感染的快速、敏感、特异的逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，通过对ＥＶ基因组的序列分析，在其５′端非编码区设计一对引物，用该引物建立的ＲＴ－ＰＣＲ方法对３１种ＥＶ标准毒株和３４例无菌性脑膜炎及１１例无菌性脑炎患儿的脑脊液（ＣＳＦ）分别进行扩增，其产物做琼脂糖凝胶电泳及斑点杂交检测。研究表明，３１种ＥＶ标准毒株斑点杂交的敏感度达１０－２～１０－３５０％组织培养感染量（ＴＣＩＤ５０）。３４例无菌性脑膜炎中２１例阳性（６１．８％），１１例无菌性脑炎中８例阳性（７２．７％）；阳性患儿恢复期ＣＳＦ，２例无菌性脑膜炎和１例无菌性脑炎仍为阳性。提示用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＥＶ感染是值得推广的。     

逆转录—多聚酶链反应检测柯萨奇B组病毒

研究目的用分子生物学方法对柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＢＶ）进行检测并探讨与临床症病的关系。研究方法对我院２９８例疑似ＣＢＶ感染的患儿，采用特异性引物进行逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＣＢＶ。结果检出ＣＢＶ阳性１２７人，阳性率４２．６％。感染与年龄有关，夏秋季多见。８０例健康儿童中，阳性５人，占６．２５％。２０例ＲＴ－ＰＣＲ检测阳性标本用ＥＬＩＳＡ法检测，１７例阳性。结论ＲＴ－ＰＣＲ可快速、敏感、准确地检出标本中的ＣＢＶ。此病毒可侵犯多种器官，引起各种临床症病，有较强的传染性。     

逆转录多聚酶链反应对肠道病毒性脑膜炎、脑炎诊断价值探讨

目的探讨中枢神经系统感染的病原体及其检测方法。方法应用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测６４例无菌性脑膜炎及２７例无菌性脑炎患儿脑脊液（ＣＳＦ）中肠道病毒（ＥＶ）ＲＮＡ。结果急性期ＣＳＦ中ＥＶＲＮＡ阳性检出率为：无菌性脑膜炎６０９％,脑炎４８１％;阳性患儿恢复期ＣＳＦ仅个别阳性;对照组全部阴性。起病５天以内阳性率明显高于５天以后（Ｐ＜００５）;５～１０月份较１１～４月份发病率高（Ｐ＜００５）。２５例病毒分离阳性者中２４例ＲＴ－ＰＣＲ阳性,５３例病毒分离阴性者中１９例ＲＴ－ＰＣＲ阳性,ＲＴ－ＰＣＲ敏感性显著高于病毒分离的敏感性（Ｐ＜００１）。结论ＥＶ是引起中枢神经系统感染的重要病原体,ＲＴ－ＰＣＲ技术是诊断ＥＶ感染的有效方法。     

下呼吸道感染患儿外周血单个核细胞呼吸道合胞病毒感染的研究

为探讨呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）对外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）的感染情况及感染后细胞免疫的变化，采用免疫组化法对１８例ＲＳＶ性急性下呼吸道感染患儿ＰＢＭＣ内ＲＳＶ及其Ａ、Ｂ亚型抗原进行了检测；采用ＡＰＡＡＰ法、ＭＴＴ比色法和ＥＬＩＳＡ法对Ｔ细胞亚群及Ｔ细胞表面白细胞介素２受体表达、ＰＢＭＣ培养上清液白细胞介素２（ＩＬ－２）活性和可溶性ＩＬ－２受体水平进行了测定。结果显示：１８例ＲＳＶ感染患儿中７例ＰＢＭＣ内可检测到ＲＳＶ抗原；１１例ＲＳＶＡ亚型感染者５例ＰＢＭＣ内均为ＲＳＶＡ亚型阳性，７例ＲＳＶＢ型感染者２例Ｂ亚型阳性；７例恢复期和１０例对照组患儿均为阴性；发病３天以内ＰＢＭＣ中ＲＳＶ抗原阳性者多于３天以后（Ｐ＜０．０５）。ＲＳＶ感染组ＰＢＭＣ内ＲＳＶ抗原阳性者，ＣＤ４细胞比率和ＩＬ－２水平均低于阴性者（ｔ＝２．３８，２．４０，Ｐ值均＜０．０５）。提示：ＲＳＶ性急性下呼吸道感染患儿ＰＢＭＣ可被ＲＳＶ感染，可能由此加重免疫活性细胞损害，导致细胞免疫功能紊乱。     

PCR管单法快速检测单纯疱疹病毒性脑炎的临床价值

为了确立ＰＣＲ单管法快速检测单纯疱疹病毒（ＨＳＶ－１）的临床价值，本文对１８例经临床、ＥＥＧ，ＭＲＩ或ＣＴ诊断的单疱病毒脑炎（ＨＳＥ）患者２４份ＳＣＦ标本，先经解偶联裂解吸附预处理，抽提模板ＤＮＡ，然后进行ＰＣＲ一次性扩增研究。首次扩增１８份ＣＳＦ标本，其中１７份ＰＣＲ阳性，１份阳性，但６天后复查转为阳性。５例ＰＣＲ阳性患儿经正规抗病毒治疗后均转为阴性。对照组３０例其他中枢神经系统疾病均为阴性。结     

弓形体,人巨细胞病毒和人微小病毒B19感染对新生儿畸形和生长发 …

探讨弓形体（ＴＯＸＯ）人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）及人微小病毒Ｂ１９（ＨＰ－ＶＢ１９）对新生儿畸形及生长发育的影响。采取聚合酶链反应技术对４２例畸形新生儿进行了ＴＯＸＯ－ＤＮＡ，ＨＣＭＶ－ＤＮＡ和ＨＰＶＢ１９－ＤＮＡ的检测，并对检测阳性与阴性畸形新生儿，用标准差记分法（ＳＤＳ）衡量生长发育。ＰＣＲ检测阳性率为１８／４２（４２．８８％），中枢及心血管系统畸形阳性率为１２／１８（６６．６７％），其他系统畸     

呼吸道合胞病毒免疫球蛋白治疗儿童骨髓移植后下呼吸道感染

呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）感染是骨髓移植（ＢＭＴ）后常见的并发症之一．据报道ＢＭＴ患者并发ＲＳＶ下呼吸道感染,若未经抗病毒治疗病死率接近１００％,而应用利巴韦林（ｒｉｂａｒｉｒｉｎ）治疗者病死率高达５０％－７０％．报道静注呼吸道合胞病毒免疫球蛋白（ＲＳＶ－ＩＧＹＶ）治疗儿童ＢＭＴ合并ＲＳＶ感染的疗效． 病例和方法ＲＳＶ－ＩＧＩＶ是一种含有高浓度ＲＳＶ中和抗体（抗体滴度＞１９２００ＭＵ／ｍｌ）的ＩｇＧ免疫球蛋白．１９９１年６月至１９９６年２月,１１例ＢＭＴ合并ＲＳＶ感染患儿接受了ＲＳＶ－ＩＧＩＶ治疗…     

新生儿室管膜下囊肿的病因研究

为了探讨新生儿室管膜下囊肿（ＳＥＣ）与先天性感染的关系，采用ＥＬＩＳＡ酶标法检测母婴双方囊肿组与对照组各７０例血巨细胞病毒（ＣＭＶ）、风疹病毒、弓形虫的抗体，并应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术直接检测病原ＤＮＡ（风疹病毒除外），同时作尿ＣＭＶ的ＰＣＲ检测。结果：囊肿组新生儿血ＣＭＶ－ＩｇＭ抗体和ＣＭＶ－ＰＣＲ阳性率显著高于对照组（分别为１７．１％、５．７％和１２．９％、２．９％）；且尿ＣＭＶ－ＰＣＲ的阳性率达４０．０％（２８／７０），高于对照组的１７．１％（１２／７０）；分别进行两组自身对照，尿ＣＭＶ－ＰＣＲ的阳性率显著高于血ＣＭＶ－ＰＣＲ阳性率（Ｐ＜０．０５）。囊肿组母亲的尿ＣＭＶ－ＰＣＲ阳性率亦显著高于对照组（３０％、１０％、Ｐ＜０．０１）。提示新生儿ＳＥＣ是宫内感染损害中枢神经系统的表现之一，与先天性ＣＭＶ感染有关，尿ＣＭＶ－ＰＣＲ检查可作为宫内ＣＭＶ感染的首选实验室诊断方法。     

新生儿脐血体外感染呼吸道合胞病毒后IL—6基因表达的变化

目的 研究呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）对新生儿脐带血白细胞介素－６（ＩＬ－６）基因表达的影响。方法 体外培养新生儿脐带血单个核细胞,用ＲＳＶ和灭活ＲＳＶ体外感染培养的单个核细胞,用反转录聚合酶链反应技术（ＲＴ－ＰＣＲ）检测感染后不同时间ＩＬ－６基因表达的变化。用酶切鉴定其产物特异性。以正常成人外因为对照。结果 ＲＳＶ感染后６小时脐带血和成人血单相核细胞均有ＩＬ－６ｍＲＮＡ的高表达,但１２－２４小时后脐     

特发性血小板减少性紫癜患儿巨细胞病毒感染的初步研究

为探讨特发性血小板减少性紫癜（ＩＴＰ）与人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）活动性感染的关系，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了４４例临床确诊为特发性血小板减少性紫癜患儿外周血白细胞中ＨＣＭＶ－ＤＮＡ，同时作病毒分离及ＨＣＭＶ－ＩｇＧ、ＩｇＭ测定。结果表明：ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性者１４例，阳性率为３２％；而病毒分离阳性者８例，阳性率为１８％；ＨＣＭＶ－ＩｇＧ、ＩｇＭ阳性率分别为３９％和２３％。提示：（１）部分ＩＴＰ患儿发病时有ＨＣＭＶ活动性感染；（２）ＰＣＲ技术特异、敏感、快速，对ＩＴＰ患儿的ＨＣＭＶ活动性感染的早期快速诊断有重要作用。     

应用实时聚合酶链反应技术检测儿童呼吸道标本中的呼吸道合胞病毒

目的建立实时聚合酶链式反应（PCR）技术检测儿科呼吸道标本中呼吸道合胞病毒（RSV）的方法.方法（1）根据RSV N基因序列设计合成分别用于扩增RSV A亚型和B亚型的TaqMan探针和引物,建立实时PCR方法,进行灵敏度和特异性检测.（2）采用实时PCR检测61例RSV检测阳性的冻存标本和103例新收集的呼吸道标本,并与病毒分离、间接免疫荧光、巢式PCR结果相比较.结果（1）实时PCR对A亚型RSV检测的灵敏度为5.25 pfu,B亚型为3.75 pfu,与巢式PCR相同.（2）实时PCR检测其他呼吸道病毒阳性标本,结果均为阴性;A亚型和B亚型之间无交叉.（3）实时PCR检测其他方法检测过的RSV阳性的冻存标本61例,A亚型（30例）阳性为27例（90%）,B亚型（31）阳性为27例（87.1%）.（4）103例新鲜标本中,实时PCR检出RSV 35例（A亚型7,B亚型28）,阳性率34.0%,其中巢式PCR阳性31例,阳性率30.1%;间接免疫荧光阳性22例,阳性率21.4%;病毒分离阳性9例,阳性率8.7%.实时PCR阴性的68例,其他方法均为阴性.实时PCR与三种方法的一致性检验,一致率在74.76%～96.12%（P均＜0.01）;差异性检验结果说明,实时PCR阳性检出高于间接免疫荧光和病毒分离（P均＜0.01）,而与巢式PCR差异无统计学意义（P＞0.05）.结论实时PCR检测儿科鼻咽分泌物标本中RSV的方法,敏感性、特异性和可重复性好,可用于急性呼吸道感染患儿标本中的RSV检测.     

呼吸道感染患儿呼吸道合胞病毒核酸扩增荧光定量检测及分析

目的：核酸扩增荧光定量PCR用于病原学诊断,是目前诊断呼吸道合胞病毒（RSV）感染的先进方法。通过检测呼吸道感染患儿RSV- RNA相关序列的存在,探讨其敏感性和RSV感染情况。方法：收集2007年1月至2008年10月该院儿科261例呼吸道感染住院患儿鼻咽部支气管分泌物标本,用核酸扩增荧光定量检测痰标本RSV核酸RNA。同时抽取静脉血用酶联免疫吸附法检测RSV-IgM作对照,比较两种方法的敏感性。结果：①痰标本RSV-RNA阳性率38.7%,血RSV-IgM阳性率21.1%,两种方法检测阳性率差异有显著性(P<0.01)。②年龄≤6个月组痰标本RSV-RNA阳性率43.6％,显著高于1～3岁组阳性率32.1％（P<0.01）。③毛细支气管炎痰标本RSV-RNA阳性率最高（58.5%）,与急性支气管炎和支气管肺炎痰标本比较,差异有显著性（P<0.01和<0.05）。结论：核酸扩增荧光定量PCR检测呼吸道RSV感染敏感性高,RSV是婴幼儿时期下呼吸道感染的主要病原,年龄越小感染率越高,毛细支气管炎感染率最高。［中国当代儿科杂志,2009,11（10）：825-828］     

Breastfeeding is associated with the production of type I interferon in infants infected with influenza virus

Background: Breast milk‐mediated protection against respiratory viruses is well established. However, protective mechanisms are unclear. Type I interferons (IFN) mediate host defence against respiratory viruses, particularly influenza virus. The relationship among type I IFN, respiratory viral infections and breastfeeding has not been explored. Methods: Type I IFN responses were studied by ELISA and real time PCR in nasal secretions of infants experiencing their first respiratory infection. Modulation of IFN by breastfeeding and other variables affecting severity during viral infection was explored. Results: One hundred and twenty infants were positive by RT‐PCR for influenza virus (n = 24), human metapneumovirus (hMPV) (n = 30) or respiratory syncytial virus (RSV) (n = 66). Type I IFNs were detected more frequently in infants infected with influenza virus than in those infected with RSV or hMPV. Breastfeeding promoted higher rates and levels of type I IFN only in infants infected with influenza virus. No effect on IFN production was observed for age, gender or smoking. Conclusion: Our study confirms that type I IFN production is detected more frequently in infants infected with influenza virus. Importantly, higher rates and levels of type I IFN in these infants are associated with breastfeeding. These observations suggest that breast milk can protect against respiratory viruses by activating innate antiviral mechanisms in the host.     

6岁以下儿童急性下呼吸道感染的病毒病原及临床研究

目的　了解北京地区 6岁以下儿童中急性下呼吸道感染 (ALRI)患儿的病毒感染状况 ;探讨人类偏肺病毒 (hMPV)感染在儿童ALRI中的作用及所致支气管肺炎的临床特征。方法　 (1)采集 2 0 0 1年 2月至 2 0 0 3年 3月就诊于首都儿科研究所 4 4 6例年龄 1个月至 5岁的ALRI住院患儿的鼻咽分泌物 ,同时应用间接免疫荧光 (IFA)及病毒分离方法进行人类呼吸道合胞病毒 (hRSV)、流感病毒 (甲、乙型 )、副流感病毒 (Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型 )及腺病毒等 7种常见呼吸道病毒的病原检测。 (2 )采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法对 2 0 0 2年 11月至 2 0 0 3年 3月住我院内科的ALRI患儿中经 7种呼吸道常见病毒病原检测阴性的 2 16份鼻咽洗液 ,进行了hMPV基因检测 ,并分析hMPV感染患儿的临床资料。结果　 (1) 4 4 6例患儿中 7种常见呼吸道病毒总阳性例数为 2 0 9例 (46 86 % ) ,hRSV阳性者最多为 16 3例 (36 5 5 % )。 (2 )在 2 16份上述 7种呼吸道病原检测阴性的标本中 6 9份测到hMPV阳性扩增产物 (31 9% ) ,占同期送检标本的 19 17%。结论　 (1)hRSV是北京地区冬春季节婴幼儿ALRI的主要病原。 (2 )2 0 0 2年 11月至 2 0 0 3年 3月我院ALRI住院患儿中有 19 17%与hMPV感染有关     

2013~2018年重庆地区2 066例急性下呼吸道感染住院患儿呼吸道合胞病毒流行特征分析

目的 研究急性下呼吸道感染住院患儿呼吸道合胞病毒（RSV）检出率、流行规律及临床特征。方法 收集2013年6月至2018年5月于重庆医科大学附属儿童医院呼吸中心住院的2岁以下急性下呼吸道感染（ALRI）患儿鼻咽抽吸物,采用多重PCR检测16种常见呼吸道病毒,分析RSV流行特征。结果 共纳入2 066例ALRI住院患儿,病毒检出阳性1 595份（77.20%）。其中RSV阳性检出826份（39.98%）。RSV阳性样本中,RSV-A阳性410份（49.6%）,RSV-B阳性414份（50.1%）,RSV-A与RSV-B均阳性2份（0.2%）。2013~2014年、2016~2017年主导流行亚型为RSV-B,2014~2015年、2017~2018年以RSV-A为主要检出亚型,2015~2016年为RSV-A与RSV-B共同流行。冬季检出率最高。RSV合并人鼻病毒为最常见的2种病毒混合检出组合（123份）。该组患儿较单一RSV检出患儿更易出现喘息（P=0.030）。在2 066例患儿中,单一RSV检出298份,RSV混合其他病毒检出148份,其他病毒检出389份,病毒检出阴性241份。RSV单一检出组较其他病毒检出组和病毒检出阴性组月龄更小,更易发生呼吸困难、呼吸衰竭及重症下呼吸道感染（P < 0.0083）。RSV-A阳性患儿中的男性比例高于RSV-B阳性患儿（P=0.004）,而临床表现二者未见显著差异。结论 2013~2018年重庆地区RSV-A与RSV-B既可分别主导流行,也可共同流行;RSV为急性下呼吸道感染住院患儿最主要病毒病原,易导致重症下呼吸道感染;RSV-A和RSV-B感染患儿临床表现无差异,但RSV-A更易感染男性患儿。     

WU多瘤病毒与呼吸道合胞病毒感染患儿临床特征比较

目的探讨和比较WU多瘤病毒(WUPyV)以及呼吸道合胞病毒(RSV)所致呼吸道感染患儿的临床特征。方法应用多重PCR技术,检测呼吸道感染住院患儿WUPyV、RSV等病毒感染情况,并收集WUPyV和RSV感染患儿的临床资料。结果 2008年1月至2010年9月,在1 701例呼吸道感染住院患儿的咽拭子标本中检测出WUPyV阳性46例(2.7%),RSV阳性365例(21.5%);单纯WUPyV感染为22例(47.8%),单纯RSV感染为88例(24.1%)。RSV感染患儿的合并感染率高于WUPyV感染患儿,两者差异有统计学意义(χ2=11.723,P=0.001)。WUPyV阳性检测率在春季呈现高峰,RSV则在冬季。WUPyV感染患儿的中位年龄为26.2个月,RSV感染患儿为14.9个月,两者差异有统计学意义(U=669.5,P<0.05)。WUPyV感染患儿的临床表现和体征与RSV感染相似,咳嗽(χ2=13.34,P<0.001)和喘息(χ2=10.53,P<0.001)在RSV感染的患儿中更为多见。WUPyV感染后主要被诊断为支气管肺炎,而RSV感染后主要为毛细支气管炎。单纯RSV感染患儿更多需要激素治疗(χ2=9.321 P=0.002)。结论部分患儿呼吸道感染与WUPyV感染有关,WUPyV感染的临床特征与RSV感染类似。     

2009—2010年苏州地区博卡病毒感染住院患儿临床特征分析

目的探讨苏州地区因急性呼吸道感染住院患儿中人类博卡病毒(human bocavirus,HBoV)感染的临床特征。方法收集2009年1月—2010年12月因急性呼吸道感染住院的3 826例患儿的痰标本,应用实时PCR检测HBoV DNA,直接免疫荧光法检测呼吸道合胞病毒、流感病毒(A、B)、副流感病毒(1～3)和腺病毒,同时采用逆转录PCR检测人偏肺病毒RNA,并进行细菌培养及荧光定量PCR检测支原体DNA,分析HBoV感染的临床特点及流行病学特征,并与呼吸道合胞病毒(RSV)进行比较。结果 3 816份标本共检测到HBoV 272例(7.13%),仅次于RSV;HBoV单独感染率为32.7%,与其他呼吸道病毒的合并感染率为18.38%,高于RSV和其他病毒的合并感染率(P<0.05)。HBoV感染全年均有发生,夏季最多;6～18月龄婴幼儿检出率最高,占48.17%。在住院患儿中,HBoV主要引起支气管肺炎(85.39%),临床症状主要表现为咳嗽(96.63%)、喘息(46.07%)、发热(56.18%)。与RSV相比,HBoV感染患儿的白细胞、中性粒细胞比例、CRP均高于RSV,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HBoV是苏州地区小儿呼吸道感染的重要病原体之一,有单独的致病性,与RSV相比,在年龄、季节分布、临床症状、实验室指标等方面有明显差异。     

RSV感染患儿呼吸道上皮细胞中干扰素-λ1的表达水平及其与RSV载量的关系

目的了解呼吸道合胞病毒(RSV)感染患儿呼吸道上皮细胞中干扰素(IFN)-λ1的表达水平及其与RSV载量的关系。方法收集2015年6月至2016年6月期间因呼吸道感染住院患儿的鼻咽拭子标本,采用直接免疫荧光法行7种常见呼吸道病毒(含RSV)抗原检测,筛选出单纯RSV阳性患儿作为RSV感染组(n=120);另收集同期门诊体检健康儿童鼻咽拭子标本,行7种常见呼吸道病毒检查均为阴性的儿童作为健康对照组(n=50)。对两组儿童鼻咽拭子标本行荧光定量PCR检测RSV载量和IFN-λ1 m RNA水平。结果 RSV感染组鼻咽拭子中IFN-λ1 m RNA水平显著高于健康对照组(P0.05),且IFN-λ1 m RNA水平与RSV载量呈正相关(r=0.56,P0.05)。结论 RSV可诱导呼吸道上皮细胞中IFN-λ1的表达,推测IFN-λ1在机体抗RSV感染中可能起重要作用。