氨茶碱对哮喘豚鼠嗜酸细胞、低密度嗜酸细胞及内皮素的影响

通过观察氨茶碱对哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液(Ｂｒｏｎｃｈａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｆｌｕｉｄ,ＢＡＬＦ)中嗜酸细胞(Ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｓ,ＥＯＳ)、低密度嗜酸细胞(Ｈｙｐｏｄｅｎｓｅｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｓ,ＨＥＯＳ)及血浆内皮素(Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ,ＥＴ)的影响,探讨茶碱类药物治疗哮喘的部分机制。1　材料与方法　　哮喘动物模型的制作:将30只豚鼠随机分为3组,正常组、哮喘组、治疗组。采用王长征[1]法加以改进复制哮喘模型。治疗组从诱喘当日起予以氨茶碱40ｍｇ/ｋｇ腹腔注射。　　肺组织光镜标本制作:经股动脉放血处死豚鼠…     

咳喘方对哮喘豚鼠肺组织嗜酸细胞凋亡的影响

[目的]通过观察中药咳喘方对哮喘豚鼠肺组织嗜酸细胞凋亡的影响,进一步探讨中药咳喘方治疗哮喘的疗效机制。[方法]采用经典的哮喘豚鼠模型,将60只符合实验标准的雄性豚鼠随机分为4组,即正常对照组、模型组、泼尼松组和咳喘方组,镜下观察各组支气管肺泡灌洗液嗜酸细胞计数的变化及肺组织嗜酸细胞浸润和凋亡的情况,并采用免疫组化的方法观察各组肺组织嗜酸细胞Fas和bcl-2凋亡基因的表达情况,将结果进行统计学分析。[结果]咳喘方组支气管肺泡灌洗液嗜酸细胞计数和肺组织嗜酸细胞浸润的数量明显低于模型组和泼尼松组,而肺组织嗜酸细胞凋亡的数量则高于模型组和泼尼松组;咳喘方组肺组织嗜酸细胞凋亡基因Fas的表达较其他组增强,而凋亡基因bcl-2的表达较泼尼松组和模型组低。[结论]中药咳喘方能减少哮喘豚鼠肺组织嗜酸细胞的浸润,促进嗜酸细胞凋亡基因Fas的表达,诱导嗜酸细胞凋亡,这可能是其治疗哮喘的疗效机制之一。     

氨茶碱对不同密度嗜酸细胞凋亡及其GM-CSF受体αmRNA表达的影响

目的观察氨茶碱(AM)对哮喘豚鼠体外不同密度嗜酸细胞(Eos)凋亡及粒细胞-巨噬细胞克隆剌激因子受体α(GM-CSFRα)mRNA表达的影响,探讨AM促进哮喘Eos凋亡的机制。方法卵蛋白激发哮喘豚鼠动物模型48h后行支气管肺泡灌洗,分离低密度及正常密度Eos(HEos,NEos)。HEos及NEos分别与AM(10-6~10-3mol/L)共培养24h,以原位杂交方法检测不同Eos的GM-CSFRαmRNA表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果AM干预体外不同密度Eos24h后,可见Eos细胞凋亡随AM浓度增加而增加,不同密度Eos GM-CSFRαmRNA表达也增加,并与AM浓度呈剂量依赖性。与NEos相比,HEos表达GM-CSFRαmRNA增加明显。HEos表达GM-CSFRα在10-4mol/L时出现显著差异(P<0.05),而NEos在AM达到最高浓度10-3mol/L时仍未出现显著差异(P>0.05)。GM-CSFRα表达与Eos凋亡呈正相关(P<0.05)。结论AM可促进不同密度Eos表达GM-CSFRα,抑制其细胞因子活动,促进Eos凋亡。AM可通过增加嗜酸细胞GM-CSFRα表达调节Eos凋亡。     

母牛分枝菌菌苗对哮喘豚鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡及Fas、bcl-2蛋白表达的影响

目的:研究母牛分枝杆菌菌苗对哮喘豚鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡及Fas、bcl-2蛋白表达的影响.方法:30只豚鼠随机分为生理盐水组、哮喘组及母分枝杆菌菌苗组.应用卵白蛋白(OVA)建立哮喘模型,母牛分枝杆菌菌苗组每只豚鼠在OVA致敏前10天肌注22.5μg母牛分枝杆菌菌苗.最后一次激发后,TUNEL法检测肺组织嗜酸粒细胞凋亡,免疫组化法检测肺组织Fas、bcl-2蛋白的表达.结果:母牛分枝杆菌菌苗组豚鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡指数(23.8±5.4)%显著高于哮喘组(4.6±0.7)%(P＜0.01);肺组织Fas蛋白表达(OD值)(0.202±0.013)显著高于哮喘组(0.051±0.025)(P＜0.01);肺组织bcl-2蛋白表达(OD值)(0.054±0.032)显著低于哮喘组(0.181±0.041)(P＜0.01).结论:母牛分枝杆菌菌苗通过上调Fas蛋白、下调bcl-2蛋白在哮喘豚鼠肺组织的表达而诱导哮喘豚鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡.     

哮喘豚鼠肺组织嗜酸性粒细胞Fas表达及药物的影响

目的：研究哮喘时嗜酸性粒细胞凋亡与Ｆａｓ表达的关系及药物地它们的影响。方法：应用地塞米松（ＤＭ）、雷公藤甲素及氨茶碱（ＡＭ）干预哮喘豚鼠,以ＴＵＮＥＬ法检测细胞凋亡,以ＲＴ－ＰＣＲ及原位杂交检测ＦａｓｍＲＮＡ表达。结果：哮喘组Ｅｏｓ凋亡率较正常对照组显著降低。应用ＤＭ、ＴＰ、ＡＭ后均显著增加。正常豚鼠Ｅｏｓ可检测到ＦａｓｍＲＮＡ表达,不同Ｅｏｓ表达差异不显著。哮喘组ＦａｓｍＲＮＡ明显减少,以低密度     

哮喘豚鼠嗜酸细胞IL-5、IL-3和GM-CSF受体mRNA表达及意义

目的　观察白介素 5受体α(IL 5Rα)、IL 3Rα、粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子受体α(GM CSFRα)及共同 β链 (βcR)mR NA表达与嗜酸粒细胞 (Eos)凋亡的关系 ,探讨各受体在哮喘发病中的作用。方法　健康豚鼠随机分为正常组、哮喘组 (卵蛋白致敏激发 ) ,以TUNEL法检测支气管灌洗液 (BALF)中低密度Eos(HEos)及正常密度Eos(NEos)细胞凋亡 ,原位杂交及RT PCR法检测各受体mRNA表达。结果　哮喘组Eos显著高于正常组 ,以HEos为著 (P <0 .0 1) ;Eos凋亡率明显低于正常组 (P <0 .0 1) ,HEos表达IL 3Rα、GM CSFRα明显高于NEos ;哮喘组不同密度Eos表达各受体αmRNA明显下降 ,而 βcRmRNA表达明显增加。RT PCR检测IL 5Rα、IL 3RαmRNA相对含量 ,哮喘组显著低于正常组 (P <0 .0 1)。结论　哮喘Eos存在凋亡抑制 ,其IL 5、IL 3和GM CSF受体的表达可能通过两种机制调节 :各自α链表达减少 ,使其对Eos活化及凋亡抑制的负调节减弱 ;共同 β链表达增加 ,使其对Eos活化和凋亡抑制的正性调节增强。表明IL 5等细胞因子受体可以通过调节Eos凋亡参与哮喘发病。     

Galectin-3对哮喘豚鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡及Bax蛋白表达的影响

目的 研究Galectin-3对哮喘豚鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡及Bax蛋白表达的影响. 方法 将36只豚鼠随机分为0.9%氯化钠注射液组(生理盐水组)、哮喘组及Galectin-3组,每组12只.哮喘组及Galectin-3组豚鼠用卵白蛋白(OVA)致敏和激发制作哮喘模型,Galectin-3组豚鼠于致敏第15～21天激发前1 h腹腔注射Galectin-3(0.5 mg/kg),1次/d,连续7 d.测定3组豚鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白介素5(IL-5)含量,计数BALF中嗜酸粒细胞数目,观察肺组织病理变化,应用缺口末端标记技术(TUNEL)法检测肺组织嗜酸粒细胞的凋亡,采用免疫组化法检测肺组织Bax蛋白的表达. 结果 Galectin-3组豚鼠BALF中IL-5含量[(21.3±7.8)ng/L]显著低于哮喘组[(48.6±8.9)ng/L],差异有统计学意义(P<0.01);嗜酸粒细胞计数[(24.2±7.8)×10~6/L]显著低于哮喘组的[(140.9±27.1)×10~6/L],差异有统计学意义(P<0.01);肺组织炎症反应明显轻于哮喘组;肺组织嗜酸粒细胞凋亡指数[(14.7±4.6)%]显著高于哮喘组[(3.5±0.4)%],差异有统计学意义(P<0.01);肺组织Bax蛋白表达量平均积分吸光度值(2 854.2±532.1)显著高于哮喘组(673.4±195.6),差异亦有统计学意义(P<0.01). 结论 Galectin-3能减少哮喘豚鼠BALF中嗜酸粒细胞数量,减轻肺组织炎症反应,与其降低哮喘豚鼠BALF中IL-5含量、上调肺组织Bax蛋白表达、促进肺组织嗜酸粒细胞凋亡有关.     

扶正平喘中药对哮喘豚鼠模型气道嗜酸细胞浸润的影响

目的 :观察扶正平喘中药对豚鼠哮喘发作的预防和治疗作用并探讨其作用机理。方法 :4 8只豚鼠随机分成 4组 :正常对照组、哮喘模型组、地塞米松组、扶正平喘中药组。用鸡卵清蛋白 (OVA)制成哮喘模型。地塞米松组和扶正平喘中药组分别于激发前 3d灌药至激发后 3d停药。计数外周血嗜酸细胞 (EOS) ,观察肺切片中EOS的浸润情况。结果 :哮喘组豚鼠外周血EOS明显增多 ,肺内支气管有大量的EOS浸润 ;地塞米松组、扶正平喘中药组豚鼠外周血EOS有不同程度增多 ,肺内支气管有不同量的EOS浸润 ,均少于哮喘组。结论 ;扶正平喘汤可降低外周血EOS ,抑制肺内ESO浸润。具有类似肾上腺糖皮质激素样抗炎作用     

支气管哮喘豚鼠肺内嗜酸粒细胞增多和凋亡的关系

目的　探讨支气管哮喘 (简称哮喘 )肺内嗜酸粒细胞 (Eos)增多与Eos凋亡的关系。方法　采用卵蛋白致敏的豚鼠哮喘模型 ,动态观察肺组织病理学、支气管肺泡灌洗液 (BALF)细胞学和Eos凋亡的变化。结果　致敏豚鼠抗原激发后 ,血管周围Eos迁移和浸润主要发生在 2 4h以内 ,而支气管周围Eos浸润和BALF内Eos增高持续 1周以上。哮喘豚鼠第 2 4,48,72hEos凋亡率分别为 (2 .1± 1.3 ) % ,(3 7± 2 3 ) % ,(4 6± 2 7) % ,显著低于正常豚鼠 [(10 .1±3 4) % ,P <0 .0 5 ] ,至 168h才接近于正常水平。糖皮质激素地塞米松治疗使Eos凋亡率显著增加 [(3 4 .1± 12 .2 ) % ,P<0 .0 1] ,伴随气道炎症消退。结论　哮喘Eos凋亡抑制可能是肺内Eos浸润增加的一个重要机制     

细胞凋亡及Bcl—2蛋白表达在胃癌发生中的意义

了解细胞调亡和Bcl－2蛋白表达在慢性胃炎、胃溃疡、胃粘膜不典型增生、胃癌中的规律和可能作用。方法：采用原位末端标记法（TUNEL法）检测细胞凋亡，采用免疫级化检测Bcl－2蛋白的表达。结果：慢性活动性胃炎、胃溃疡、轻度不典型增生、重度不典型增生、早期胃癌和进展期胃癌的凋亡指数分别为16．8±12．3％、24．1±20．0％、19．3±16．4％、15．7±15．2％、10．1±9．1％和6．3±6．0％，进展期胃癌显著低于早期胃癌和不典型增生（P＜0．05）。而Bcl－2蛋白阳性率分别为9．4％、27％．6％、52．9％、75．0％、83．3％和46．7％，早期胃癌显著高于进展期胃癌。在Lauren分型中，杨型和弥散型胃癌的细胞凋亡指数、Bcl－2蛋白的表达分别为8．3±7．2％、38．9％和5．1±4．9％、58．3％，两型比较，细胞调亡指数及Bcl－2蛋白表达均有显著差异（P＜0．05）。结论：在胃粘膜不典型增生、早期胃癌到进展期胃癌的发展中，细胞凋亡逐渐受到抑制。胃癌的形成与Bcl－2的高表达有关，而且主要的作用阶段可能在癌变早期。胃癌的Lauren分型与细胞凋亡指数及BcL－2蛋白表达密切相关。     

射干麻黄汤对哮喘豚鼠气道EOS凋亡、IL-5mRNA及IL-10mRNA表达的影响

目的 探讨中药射干麻黄汤对哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)凋亡、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)水平、白细胞介素(IL)-5mRNA及IL-10mRNA表达水平的影响.方法 40只健康雄性Hartley系豚鼠随机分为射干麻黄汤组、地塞米松组、哮喘组和正常对照组.采用原位末端标记技术(TUNEL)、荧光酶标记法和RT-PCR技术检测BALF中EOS凋亡、ECP水平、IL-5mRNA及IL-10mRNA表达水平.结果 射干麻黄汤组BALF中的EOS明显较哮喘组低,EOS凋亡率明显较哮喘组高(P＜0.01); ECP水平明显较哮喘组低(P＜0.05);IL-5mRNA水平明显较哮喘组低,IL-10mRNA水平明显较哮喘组高(P＜0.05).结论 射干麻黄汤可以通过减少IL-5mRNA的表达,增加IL-10mRNA的表达有效抑制哮喘豚鼠气道EOS的上升,增加EOS的凋亡;降低ECP水平.     

氨茶碱雾化吸入对正常及哮喘豚鼠气道粘膜的影响

目的 观察吸入氨茶碱对正常豚鼠气道粘膜的影响及对豚鼠哮喘的预防作用。方法 ３４只豚鼠随机分为６组：对照组、正常动物氨茶碱吸入组、哮喘组、哮喘豚鼠０．５％氨茶碱吸入组、哮喘豚鼠地塞米松吸入组、哮豚鼠０．５％氨茶碱＋地塞米松吸入组,分别行肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）、血清茶碱浓度及病理学检验。结果 正常动物吸入氨茶碱后气道粘膜上皮纤毛不完整,上皮细胞脱落,表面有炎性渗出,粘膜及粘膜下层炎性细胞浸润明显,肺泡     

槐杞黄对OVA诱导哮喘模型大鼠嗜酸性细胞凋亡及免疫调节因子的影响

目的探讨槐杞黄对哮喘模型大鼠嗜酸性细胞凋亡、Th1/Th2/Th17免疫调节及相关炎症因子的影响。方法将60只SD大鼠随机分成正常对照组、模型组、地塞米松组、槐杞黄组、槐杞黄联合地塞米松组,每组12只。卵清蛋白(OVA)致敏激发复制大鼠哮喘模型,对照组和模型组大鼠给予生理盐水,槐杞黄组大鼠按0.4g·100g-1·d-1给予槐杞黄颗粒混悬液灌胃,地塞米松组大鼠按0.1g·100g-1·d-1给予地塞米松混悬液,槐杞黄联合地塞米松组大鼠给予槐杞黄(0.4g·100g-1·d-1)+地塞米松(0.1g·100g-1·d-1),连续给药15天后,测定各组大鼠血清免疫球蛋白E(IgE)、白介素5(IL-5)、白介素3(IL-3)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及白介素17(IL-17)水平;肺泡盥洗液进行白细胞计数及分类;病理切片观察肺组织病理变化;实时定量-PCR测定肺组织Bcl-2、Bax及NF-κB mRNA表达。结果与模型组比较,地塞米松、槐杞黄以及槐杞黄联合地塞米松可显著降低哮喘大鼠血清IgE水平[(57.14±5.66)ng/mL、(57.87±5.31)ng/mL、(46.68±6.67)ng/mL比(84.17±5.41)ng/mL,P<0.05,P<0.01];槐杞黄联合地塞米松可明显降低哮喘大鼠血清IL-5[(23.56±6.60)pg/mL比(32.20±10.64)pg/mL,P<0.05]、IL-3 [(2717.38±128.88)pg/mL比(4235.66±165.50)pg/mL,P<0.01]、GM-CSF[(6.84±5.54)pg/mL比(13.20±2.01)pg/mL,P<0.01]及IL-17[(252.25±15.14)pg/mL比(415.80±32.67)pg/mL,P<0.01]水平;地塞米松和槐杞黄联合地塞米松可降低哮喘模型大鼠肺泡盥洗液白细胞总数[(83.41±4.65)、(63.7±6.10)比(169.40±11.18),P均<0.05],以及嗜酸粒细胞(EOS)[(1.05±0.02)、(0.71±0.04)比(7.01±0.18),P均<0.05]和淋巴细胞(LYM)[(7.91±0.09)、(8.18±0.23)比(17.91±0.11),P均<0.05]百分比。给药组均可缓解大鼠肺组织肺泡壁及气道周围炎症细胞浸润的现象。地塞米松、槐杞黄以及槐杞黄联合地塞米松均可明显降低哮喘模型大鼠肺组织Bcl-2/Bax mRNA相对表达量[(0.92±0.24)、(1.65±0.28)、(0.78±0.44)比(6.08±2.31),P均<0.01]。槐杞黄以及槐杞黄联合地塞米松可降低哮喘大鼠肺组织NF-κB mRNA相对表达量[(1.19±0.11)、(1.10±0.15)比(1.46±0.08),P均<0.05]。结论槐杞黄辅助治疗可减轻哮喘模型大鼠气道炎症,其机制可能与纠正Th1/Th2/Th17免疫失衡,促进嗜酸性细胞凋亡,减少哮喘发作炎症因子水平相关。     

大鼠脑出血后细胞凋亡和bcl-2表达间关系的研究

目的研究脑出血后血肿周围水肿带内细胞凋亡与bcl-2表达的关系.方法使用胶原酶法建立大鼠脑出血模型.于脑出血后6、12、24 h、3、7 d选取血肿灶周围脑组织制成冰冻切片,对切片进行相应染色:用TUNEL法观察血肿灶周围细胞凋亡,通过免疫组化和原位杂交方法分别从mRNA和蛋白的水平观察bcl-2的表达.对染色结果进行图像分析及统计学处理,分析细胞凋亡与bcl-2表达的关系.结果脑出血6 h后血肿周围出现TUNEL阳性细胞,此时bcl-2的表达降低;之后凋亡细胞数量逐渐增加,至3 d达到高峰,此时bcl-2的表达仍处于低水平;3 d至7 d凋亡细胞数量减少,而bcl-2的表达增加.结论脑出血后血肿周围存在细胞凋亡,而bcl-2的表达降低是脑出血后发生细胞凋亡的重要步骤.     

创伤性颅脑损伤后细胞凋亡状态及相关基因表达的实验研究

目的 探讨不同程度颅脑损伤后bcl-2、bax基因表达与细胞凋亡的关系。方法 将100只SD大鼠分为轻、中、重度损伤组和对照组 ,通过改进的Feeney自由落体损伤装置制作脑损伤模型 ,然后用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法以及免疫组织化学方法 ,对各组大鼠脑组织中的凋亡细胞和bcl-2、bax免疫反应阳性细胞进行检测和统计。 结果 各损伤组大鼠脑组织中凋亡细胞标记指数 (LI)明显高于未损伤的对照组(均P<0.05) ,bcl-2、bax阳性细胞LI也有所增加 (均P<0.05) ,同时 ,各损伤组bax/bcl-2阳性细胞LI的比值均大于对照组 (均P<0.05) ;轻度、中度组与重度组之间各项指标的差别大多有显著性意义 ,损伤程度重者指标升高明显。结论 bcl-2和bax表达的比例对颅脑损伤后促进细胞凋亡可能起重要的调控作用 ,其表达水平与损伤程度成正比。     

The bcl-2 mRNA Expression in GCDC-induced Obstructive Jaundice in Rats and Its Implication in Hepatocellular Apoptosi

The modulatory role of bcl-2 gene in hepatocellular apoptosis of rats with glycochenodeoxycholate (GCDC)-induced obstructive jaundice was investigated. The hepatocytes in normal rats and those with bile duct-ligation for 7 days, 14 days and 21 days were isolated and obtained by in situ collagenase perfusion and primary culture. The expression of bcl-2 mRNA in the hepatocytes was detected by RT-PCR. Primary culture was performed on the hepatocytes from normal rats and those with bile duct-ligation for 14 days. 100 μmol/L GCDC was added to the hepatocytes for incubation for 24 h. The hepatocellular apoptotic ratio was measured by using FCM and hepatocellular apoptosis detected in situ by using TUNEL technique. Results showed that the expression of bcl-2 mRNA was not detectable in the hepatocytes of normal rats by RT-PCR technique, while detectable in the hepatocytes of those with bile duct ligation (BDL) for 7, 14 and 21 days. Hepatocellular apoptosis in the BDL group was obviously decreased as compared with normal control group after addition of 100μmol/L GCDC to the cells for 24 h. It was concluded that the hepatocytes in the BDL rats expressed bcl-2. During obstructive jaundice, expression of bcl-2 from the hepatocytes can inhibit the bile saltinduced hepatocellular apoptosis.     

Survivin、bcl-2蛋白在白血病中的表达及相关性探讨

目的：探讨急性白血病骨髓细胞中Survivin、bcl-2蛋白的表达及相关性。方法：采用免疫组化S-P法检测70例白血病患者骨髓细胞Survivin、bcl-2蛋白表达情况。结果：病例组、ANLL、ALL、CML组Survivin、bcl-2蛋白阳性表达率明显高于对照组，差异有显著性（P〈0．01）；ANLL、CML组Survivin、bcl-2蛋白阳性表达率明显高于ALL组，差异有显著性（R0．01）；而ANLL与CML组之间差异无显著性（P〉0．05）；Spearman秩和相关分析显示，Survivin、bcl-2蛋白表达呈显著正相关（rs=0．32，P〈0．01）。结论：Survivin、bcl-2均与白血病发生、发展密切相关，且两者有一定的协同效应。