肝癌病人癌组织与血浆p16及APC基因甲基化检测及意义

目的检测肝细胞性肝癌(HCC)病人癌组织及血浆中多肿瘤抑制因子p16和结肠腺瘤样息肉基因(APC)的基因启动子区异常甲基化状态,并探讨其临床意义。方法应用实时荧光PCR技术,检测86例HCC病人癌组织、癌旁正常组织及血浆标本中p16、APC基因启动子区异常甲基化状态,以24例正常肝组织作为对照。结果 24例正常肝组织未检出p16和APC基因的异常甲基化。癌组织p16基因甲基化率明显高于癌旁正常组织和对应的血浆标本(χ2=67.48、6.72,P<0.05)。癌组织中APC基因甲基化率明显高于癌旁正常组织和对应的血浆标本(χ2=18.03、29.16,P<0.05)。肝癌组织及对应血浆标本p16、APC基因甲基化的一致率分别为65.4%、43.3%。HBsAg阳性组肝癌组织及其对应血浆标本p16基因甲基化率显著高于HBsAg阴性组,差异有统计学意义(χ2=5.60、5.67,P<0.05)。结论 p16、APC基因启动子区异常甲基化导致的基因沉默可能与HCC的发生和发展密切相关。     

原发性肝细胞癌中p16、p15基因启动子区甲基化状态检测

目的研究原发性肝细胞癌中p16、p15基因启动子区甲基化状态及其与原发性肝细胞癌发生发展的关系。方法用特异性甲基化PCR（MSP）法检测30例原发性肝细胞癌肿瘤组织和5例正常肝脏组织中p16、p15基因启动子区甲基化状态，并进行统计分析。结果30例原发性肝细胞癌肿瘤组织中p16和p15基因启动子区分别有53．3％（16／30，P〈0．05）和46．7％（14／30，P〉0．05）甲基化，5例正常组织中未发现甲基化。两基因甲基化与原发性肝细胞癌临床病理及HBsAg之间无明显相关性（P〉0．05），两者在原发性肝细胞癌发生中有协同性（相关性和一致性）。结论p16、p15基因启动子区异常甲基化在原发性肝细胞癌中发生频率很高，可能对肝细胞癌发生发展起重要作用。     

哈萨克、汉族食管癌p16基因甲基化及其表达的研究

目的 探讨新疆哈萨克族、汉族食管癌患者p16基因的甲基化状态及其与食管癌发生的关系.方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)的方法,检测哈萨克族(36例)、汉族(35例)食管癌患者及正常人群对照组p16基因的甲基化状态,分析其与年龄、性别、淋巴结转移、分化程度及临床病理分期等的关系.结果 36例哈萨克族食管癌癌组织、癌旁组织的甲基化率分别为44.4%、13.9%,正常人群对照组的甲基化率为2.8%;35例汉族食管癌癌组织、癌旁组织的甲基化率分别为42.9%、14.3%,正常人群对照组的甲基化率为2.9%.食管癌癌组织p16基因的甲基化率显著高于癌旁组织和正常人群对照组,差异有统计学意义(P<0.05),p16基因启动子区甲基化与肿瘤分化程度密切相关.结论 新疆哈萨克族、汉族食管癌患者中p16基因启动子甲基化与食管癌的发生有密切的关系.     

鼻咽癌组织中p15INK4b和p27KIP1基因甲基化及其相关性研究

目的探讨鼻咽癌组织中p15INK4b和p27KIP1基因启动子区甲基化状态在鼻咽癌临床早期诊断和治疗中的作用。方法应用甲基化特异性PCR方法对65例鼻咽癌组织（鼻咽癌组）和30例正常鼻咽上皮组织（对照组）中的p15INK4b和p27KIP1基因启动子区甲基化状态进行检测。结果鼻咽癌组中p15INK4b和p27KIP1基因启动子区甲基化阳性率分别为26.2%（17/65）和61.5%（40/65）,两者总检出率为72.3%（47/65）;而对照组中均未检测到p15INK4b和p27KIP1基因启动子区甲基化;两组间p15INK4b和p27KIP1基因启动子区甲基化阳性率的差异具有统计学意义（均P＜0.01）。鼻咽癌组中p15INK4b和p27KIP1基因启动子区甲基化与其临床分期及病理特征均无明显相关性（均P＞0.05）。同时,p15INK4b基因甲基化和p27KIP1基因甲基化间无明显相关性（r=-0.03,P＞0.05）。结论p15INK4b和p27KIP1基因启动子区甲基化可能参与鼻咽癌的发生、发展;p15INK4b和p27KIP1基因启动子区甲基化具有一定的肿瘤特异性,有助于鼻咽癌的早期辅助诊断和治疗。     

肺癌组织p16基因启动子区高甲基化情况分析

目的:了解不同临床病理情况下肺癌组织中p16基因启动子区高甲基化的情况。方法:采用甲基化特异的PCR(MSP)法,根据5-甲基胞嘧啶与胞嘧啶修饰后的不同,设计甲基化与非甲基化等位基因特异的引物,通过PCR扩增检测手术后53例不同临床病理类型肺癌组织中p16基因启动子区高甲基化情况。结果:肿瘤组织标本中p16基因启动子区甲基化比例为占71.7%(38/53),其中鳞状细胞癌占80.0%(20/25),腺癌占66.7%(10/15),小细胞肺癌占61.5%(8/13)。长期吸烟史与鳞状细胞癌p16基因启动子区高甲基化比例增高有关(P<0.001),与小细胞肺癌(P=0.293)、腺癌的(P=1.000)p16基因启动子区高甲基化关系不密切。肿瘤T分期与鳞状细胞癌p16基因启动子区高甲基化比例增高有关(χ2=8.719,P=0.013)。结论:肺癌瘤组织标本中p16基因启动子区高甲基化是比较常见的现象;肿瘤组织基因启动子区高甲基化发生率随TNM分期的提高有升高趋势;基因启动子区甲基化状态与吸烟有关,有长期吸烟史的肺癌病人p16基因启动子区甲基化率增高。肺鳞状细胞癌中随T分期增高p16基因启动子区高甲基化比例增高。     

乳腺癌组织中p16基因的甲基化状态研究

目的:探讨乳腺癌组织中p16基因启动子区域的甲基化状态。方法:应用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测82例乳腺癌组织及30例乳腺良性病变的甲基化状态。结果:乳腺癌组织p16基因启动子甲基化阳性率为30.5%。乳腺癌患者癌组织p16基因启动子区域甲基化状态与肿瘤分期、肿块的大小、病理类型、月经状况、淋巴结转移、激素受体和家族史均无明显关系(P>0.05)。结论:p16基因启动子区域甲基化参与了乳腺癌的发生,是一个早期事件,有可能作为乳腺癌的早期诊断和筛查的一个分子生物学指标。     

p27kip1和 p16INK4A 基因在鼻咽癌组织中的甲基化表达及意义

目的探讨 p27kip1和 p16INK4A 基因启动子区甲基化在鼻咽癌早期诊断和治疗中的作用.方法采用甲基化特异性PCR 方法对54例鼻咽癌组织(观察组)和20例正常鼻咽上皮组织(对照组)的 p27kip1和 p16INK4A 基因启动子区甲基化状态进行检测及对比分析.结果观察组患者 p27kip1和 p16INK4A 基因启动子区甲基化检出率分别为62.96%(34/54)和46.30%(25/54),两者同时甲基化19例,总检出率为74.1%(40/54);对照组均未检测到 p27kip1和 p16INK4A 基因启动子区甲基化;两组间差异有统计学意义(P<0.01).p27kip1和 p16INK4A 基因启动子甲基化与鼻咽癌患者年龄、性别、T 分期、N 分期、TNM 分期、病理类型等临床特征均无相关性(P >0.05).鼻咽癌患者 p27kip1基因甲基化与 p16INK4A 基因甲基化无明显相关关系(r=0.2507,P >0.05).结论鼻咽癌中 p27kip1基因甲基化可能是其基因表达调节的一种重要方式,p27kip1和 p16INK4A 基因甲基化具有肿瘤特异性,为鼻咽癌早期事件,有望成为早期分子生物学诊断的标志物,将来还可能作为去甲基化基因治疗的靶点.     

人原发性肝癌中p16基因表达及CpG岛甲基化状态的研究

目的　进一步探讨人原发性肝癌中 p16基因 m RNA转录水平变化与其基因启动子区 Cp G岛甲基化的关系 ,及其在肝癌发生中的意义。方法　采用狭缝印迹杂交检测 2 0例人原发性肝癌及相应的癌旁、远癌组织及 2例正常人肝组织中 p16基因 m RNA表达水平 ,以甲基化特异性 PCR分析各组织中 p16基因启动子区 Cp G岛的甲基化状况 ,并进行统计分析。结果　 2 0例人原发性肝癌中 14例 (70 % ) p16 m RNA水平比远癌组织显著降低 ;13例 (6 5 % )显示 p16基因启动子区 Cp G岛甲基化 ,其中 84 .6 % (11例 )伴 p16 m RNA转录水平降低。结论　人原发性肝癌中存在高频率的 p16基因表达失活 ,其主要机制可能是启动子区 Cp G岛甲基化抑制了基因的转录 ,在人原发性肝癌的发生发展中有重要作用。其临床诊断和治疗意义有待进一步深入研究。     

人原发性肝癌中p16基因表达及CpG岛甲基化状态的研究

目的：进一步探讨人原发性肝癌中p16基因mRNA转录水平变化与其基因启动子区CpG岛甲基化的关系，及其在肝癌发生中的意义。方法：采用狭缝印迹杂交检测20例人原发性肝癌及相应的癌旁、远癌组织及2例正常人肝组织中p16基因mRNA表达水平，以甲基化特异性PCR分析各组织中p16基因启动子区CpG岛的甲基化状况，并进行统计分析。结果：20例人原发性肝癌中14例（70％）p16 mRNA水平比远癌组织显著降低；13例（65％）显示p16基因启动子区CpG岛甲基化，其中84．6％（11例）伴p16 mRNA转录水平降低。结论：人原发性肝癌中存在高频率的p16基因表达失活，其主要机制可能是启动子区CpG岛甲基化抑制了基因的转录，在人原发性肝癌的发生发展中有重要作用。其临床诊断和治疗意义有待进一步深入研究。     

大肠癌p16抑癌基因甲基化及与Dukes分期的关系

目的检测大肠癌患者p16基因启动子CpG区甲基化的改变,探讨其与大肠癌发生、发展和临床资料的关系.方法采用甲基化特异PCR技术(MSP法)研究58例大肠癌标本p16基因甲基化改变,分析临床病理资料.结果 25例标本(43.1%)呈p16 CpG区甲基化阳性;Dukes C、D期病人p16 CpG区甲基化发生率(75%)明显高于Dukes A、B期病人(13.3%).结论 p16启动子区甲基化导致p16抑癌基因失活参与了大肠癌的发生和发展;p16甲基化可能可以作为估计大肠癌病人预后的一个指标.     

p16、p21、p53蛋白在肺癌组织中的表达及其意义

目的 探讨肺癌组织中p16、p21、p53蛋白的表达及其意义。方法 采用免疫组化方法检测30例肺癌组织中p16、p21、p53蛋白的表达情况。以上标本中有7例呼吸道合胞病毒(RSV)N基因片段扩增阳性。结果 30份肺癌标本中p16、p21、p53蛋白阳性表达率分别为36．7％(11／30)、43．3％(13／30)、53．3％(16／30)；各种蛋白阳性表达例数在鳞癌与腺癌组织间差异无显著性意义；不同临床分期的肺癌标本，其p16、p21阳性表达，差异具有显著性意义；晚期肿瘤组织较早期p53阳性表达增强。p16、p21在肿瘤Ⅲ Ⅳ期较Ⅱ期阳性表达率下降。p16、p21、p53蛋白在RSV N基因片段扩增阳性肺癌标本中的表达与扩增阴性的肺癌标本比较差异无显著性意义。结论 p16、p21可能作为判断肺癌分期及预后的参考指标。RSV感染对肺癌组织细胞癌基因无明显影响。     

p15/p16与白血病

ｐ16和ｐ15基因已被公认为肿瘤抑制基因 ,通过参与细胞周期负调控调节机体代谢 ,维持自身稳定 ,控制着肿瘤的发生 ,作用较Ｒｂ和ｐ5 3更直接 ,特异性更强 ,在多种肿瘤的发生机制研究及利用抑癌基因的治疗中引起关注。现就其在白血病中的研究进展综述如下 :1　ｐ16和ｐ15基因的发现 ,定位 ,结构1993年底Ｓｅｒｒａｎｏ等在研究与ＣＤＫ结合的蛋白质时 ,发现一分子量为 15 845ｋＤ的蛋白质 ,定名为ｐ16蛋白。 1994年 ,Ｋａｍｂ等在对近 30 0种肿瘤细胞系进行普查时 ,在染色体 9Ｐ2 1(约 40ｋｂ)发现了两个肿瘤抑制基因 ,分别命名为多种肿瘤抑…     

p53，rasp21，C－erbB－2癌基因蛋白在胃癌中的表达及分布特征

作者应用免疫金银染色（ＩＧＳＳ）方法检测了８２例胃癌标本ｐ５３，ｒａｓｐ２１，Ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因蛋白。其阳性结果分别为５６．１％，５１．２％，５８．５％，胃癌旁正常粘膜上皮的阳性率分别为１．２％，１４．６％，９．８％，与肿瘤区相比较有显著差异（Ｐ＜０．０１）。ｐ５３阳性细胞的染色部位在细胞核内，ｐ２１及ｐ１８５阳性细胞的染色部位在胞浆及／或胞膜。ｐ５３、ｐ１８５阳性表达与肿瘤的分化程度有关，即分化越差，其阳性表达越高。８２例胃癌中有３６例显示ｐ５３与ｐ２１协同阳性。而无１例单独ｐ５３表达阳性。     

P63和P73基因在神经胶质瘤中的表达

目的探讨p53家族新成员p63及p73在脑胶质瘤中的表达情况,以及在不同病理分级的表达变化.方法采用免疫组化S-P方法检测66例不同病理分级胶质瘤p63及p73蛋白的表达情况,与置换-抗的蛋白对照组比较,并同时进行组间对照.结果p63及p73在66例脑胶质瘤病人中明显表达,p63表达阳性率为42.42%,p73表达阳性率为31.82%.组间对照p63组Ⅱ～Ⅳ级与Ⅰ～Ⅱ级比较P＜0.01;p73组Ⅲ～Ⅳ级与Ⅰ～Ⅱ级比较P＜0.05,Ⅱ～Ⅲ级与Ⅰ～Ⅱ级比较x2=2.268,P＞0.05.结论p63及p73作为p53家族的新成员可能是候选的抑癌基因.     

INK4系列抑癌基因(p16、p15、p18、p19)在白血病中的甲基化

目的 探讨p16基因家族失活与白血病发生、发展及预后的关系，进一步阐明白血病发病机制，监测发病过程。方法 采用甲基化敏感限制内切酶Hpa Ⅱ或Msp Ⅰ结合PCR技术研究白血病患者p16、p15、p18、p19基因甲基化状况：(1)研究不同类型、不同阶段白血病p16基因家族外显子1和／或外显子2纯合子缺失，(2)用REP-PCR分别对上述病例中无外显子1缺失的病例进行甲基化研究，探讨甲基化发生频率，分析与白血病发病关系。结果 p16、p15基因外显子1在急性白血病(AL组)甲基化率分别为35．29％，48．65％，急性非淋巴细胞白血病(ANLL组)为25％，37．5%，急性淋巴细胞白血病(ALL组)为60％，69．23％，初治AL组为29．09％，42．10％，复发AL组为61．54％，70．59％，慢性粒细胞白血病(CML)慢性期、急变期、白血病完全缓解(CR-AL)、对照组均无甲基化。p18、p19基因无论在AL组、ALL组、ANLL组、复发AL组、初治AL组，或是在CML的慢性期、急变期、CR-AL、对照组均无甲基化。结论 (1)在p16基因家族中，p16、p15基因甲基化在AL的发生频率较高，ALL甲基化率明显高于ANLL，以复发ALL组最高。p18、p19基因在AL组中未见甲基化。(2)在ALL中，p15甲基化率高于p16甲基化率，在ANLL中，p16、p15基因的甲基化率高于对照组。(3)p16、p15基因甲基化可作为AL病程进展、复发、预后的指标之一。(4)p16、p15基因甲基化在CML病程中(慢性期、急变期)意义不大。     

p16、p21、p27基因多态性与上皮性卵巢癌易感性关联的研究

目的探讨抑癌基因p16、p21和p27的多态性与上皮性卵巢癌易感性的关联.方法选取2007年3月-2011年4月间120例卵巢癌患者作为考察对象,同时选取120例健康女性人群作为对照组.分别采集外周静脉血5ml,提取基因组DNA,分析每个样本的基因型,并做统计学分析.结果两组的p16基因C540G的C/C、C/G和G/G基因型频率分布无显著性差异(P>0.05);两组的p16基因C580T的C/C、C/G和G/G基因型频率分布无显著性差异(P>0.05);两组p21基因的T/T、T/C和C/C基因型频率分布无显著性差异(P>0.05);两组的p27基因的V/V、V/G和G/G基因型频率分布有显著性差异(P<0.05).结论 p16基因和p21基因型的多态性上皮性卵巢癌的易感性有关;p27基因的V/V纯合型可能会增加卵巢癌的发病风险,值得临床关注.     

p53 p63及 p73在鼻咽癌患者组织中的表达及临床意义

目的：研究 P53、P63和 P73在鼻咽癌患者组织中的表达情况及临床意义。方法：选择2012年8月至2014年8月在我院确诊的鼻咽癌患者89例为观察组。并选择同期在我院接受治疗的鼻咽黏膜慢性炎症患者50例为对照组。对比两组组织中 P53、P63和 P73表达情况,并分析其不同临床病例特征的意义。结果：观察组 P53、P63和 P73阳性率为67．4％（60／89）、87．6％（78／89）以及53．0％（48／89）,均高于对照组的28．0％（14／50）、36．0％（18／50）、20．0％（10／50）,差异均具有统计学意义（P＜0．05）。不同性别、年龄中 p53、p63和 p73表达阳性率差异均无统计学意义。在具有颈淋巴转移的鼻咽癌患者中 p53、p63表达阳性率更高、在 TNM 分期为Ⅲ～Ⅳ期的鼻咽癌患者中 p63、p73表达阳性率更高以及病理类型为非角化癌鼻咽癌患者中 p63表达阳性率更高。差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论：鼻咽癌患者组织中 P53、P63和 P73基因高表达,并且对临床分期、淋巴转移以及病理分型有显著的相关性。通过对 P53、P63和 P73在两种基因的监测,对鼻咽癌临床治疗和预后都有较好的指导作用。     

Evaluation of p53 gene mutation and loss of heterozygosity of 3p, 9p and 17p in precancerous lesions of 29 lung cancer patients

To assess the multiple steps involved in carcinogenesis we evaluated p53 gene mutation frequencies, and loss of heterozygosity (LOH) of chromosomes 3p, 9p and 17p in hyperplasia, squamous metaplasia, dysplasia, squamous cell carcinoma in-situ and early squamous cell carcinoma of the bronchial epithelium, using immunohistochemical, polymerase chain reaction-single strand conformational polymorphism (PCR-SSCP) and microsatellite analysis. Overexpression of p53 oncoprotein was observed in 31% of mild dysplasia, 50% of moderate and 67% of severe dysplasia. Mutation of the p53 gene, however, was confirmed only in 2 severe dysplasias. LOH of 3p, 9p and 17p were detected in 8% of mild and 6% of moderate dysplasias. Among other types of bronchial lesions, two columnar cell hyperplasias showed LOH of 3p and 17p, respectively. These results suggest that LOH of 3p or 9p may be a rare but early event in the development of squamous cell carcinoma of the lung. In particular, deletion of 3p21.3 is a relatively common event in premalignancy. The results also suggest that p53 gene abnormalities occur during the following stage of carcinogenesis.     

胃癌及其癌前病变中ras, c-erbB-2, p53癌基因产物的表达

目的 探讨胃癌及其癌前病变中ras,c-erbB-2,p53癌基因蛋白产物的表达分布特点及其在胃癌发生发展中的作用。方法 应用免疫组化ABC方法,对58例胃癌、31例胃粘膜上皮异型增生和11例正常胃粘膜组织中,鼠抗人mAb ras基因p21蛋白、兔抗人c-erbB-2原癌基因产物多克隆抗体p185,鼠抗人mAb p53蛋白进行了检测。结果p21在正常胃粘膜和轻、中、重度异型增生和胃癌中的表达率分别为27．3％,30．0％,46．2％,75．0％和72．4％;其表达率在重度异型增生和胃癌中显著高于正常胃粘膜和轻、中度异型增生（P＜0．05）;p185在正常胃粘膜和轻、中度异型增生中无表达,在重度异型增生和癌中的阳性表达率分别为25．0％,18．9％,各组间无显著性差异（P＞0．05）;p53仅在癌中有表达,表达率29．3％,明显高于非癌组织（P＜0．05）。胃癌中两种以上癌基因蛋白同时表达率明显高于非癌组织（P＜0．05）。结论 ras基因可能作用于胃癌发生的早期阶段,c-erbB-2,p53基因可能作用于胃癌发生的较晚期。并认为胃癌发生需要多基因协同作用。