结核分枝杆菌DNA两种提取方法比较

目的 :比较能够满足内切酶分析的结核分枝杆菌染色体DNA提取的两种方法 ,并结合实验室条件加以改进。方法 :称取结核分枝杆菌培养物 ,灭活后以溶菌酶和蛋白酶K消化后 ,分别以CTAB/NaCl和酚 /氯仿 /异戊醇 (2 5∶2 4∶1)抽提 ,无水乙醇沉淀 ,紫外分光光度计测定DNA的含量。结果 :酚抽提法和CTAB抽提法提取的基因组DNA的得率分别为0 47± 0 0 71,0 41± 0 10 (‰ ,W/W )。A2 60 /A2 80 的值分别为 1 83± 0 12 ,1 89± 0 0 72。结论 :用CTAB/NaCl抽提结核分枝杆菌基因组DNA均能满足内切酶及杂交操作的要求 ,酚抽提法得率稍高 ,但无统计学意义。CTAB法污染少 ,省时省材 ,可代替酚抽提DNA。     

快速鉴定人肺部感染中非结核分枝杆菌的一种简单方法

目的 建立一种快速鉴别结核分枝杆菌(tuberculous mycobaetefia,TIM)和非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacteria.NTM)的简单方法.方法 收集165例诊断为肺结核病人的痰标本,经除污染杂菌处理后各取0.1 ml的痰液沉淀物.分别加入到含不同浓度对硝基苯甲酸(para-nitro benzoic acid,PNB)的未成熟椰汁液体培养基和罗氏培养基中培养.对在含PNB的培养基中生长的阳性培养物进行烟酸检测.结果 所测样本菌株中有18株在含PNB的培养基中生长.其培养物中检测不含烟酸.形态学检查18例未成熟椰汁液体培养基中阳性培养物都不同于典型的结核分枝杆菌.结论 含PNB的未成熟椰汁液体培养基,可作为一种快速鉴定人肺部感染中非结核分枝杆菌的简单筛选方法.     

关于结核分枝杆菌定量方法的研究

目的:比较荧光定量PCR法和培养法在结核分枝杆菌定量上是否有差异及探讨应用DNA拷贝浓度替代菌液浓度的可能性。方法:将6种不同浓度的H37Rv标准菌株悬菌液各分为两组:PCR法组和培养法组,并在同一个721型可见光分光光度仪上测定其OD600值。然后,采用荧光定量PCR法,建立结核分枝杆菌DNA拷贝浓度-OD标准曲线,同时对同一标本进行培养并行菌落计数,比较PCR方法和培养法对结核分枝杆菌定量结果是否一致。结果:两种方法对结核分枝杆菌定量无显著性差异(P>0.05)。OD值与DNA拷贝浓度和悬菌液浓度均呈正相关,相关系数分别为1,P<0.01。其回归方程PCR法为:C(H37Rv)=-0.0189+6.991OD,培养法为:C(H37Rv)=-0.0201+6.757OD,OD范围0.1~0.9。结论:荧光定量PCR法和培养法所得结果基本一致,是一种结核分枝杆菌定量新的方法,可替代菌液浓度法应用于动物实验。     

结核分枝杆菌稳定L型变异的聚合酶链反应研究

目的：探讨结核分枝杆菌稳定L型变异的分子机制。方法：采用结核分枝杆菌聚合酶链反应(PCR)诊断试剂扩增结核分枝杆菌稳定L型纯培养物的染色体DNA，琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyscrylamid gel electrophoresis，PAGE)薄层凝胶扫描分析。结果：结核分枝杆菌稳定L型比细菌型多一DNA条带。结论：结核分枝杆菌稳定L型的形成可能与基因突变有关，在特异性PCR反应中可形成与其亲代细菌型有差异的产物。     

微阵列芯片技术在耐多药结核病临床诊断中的应用研究

目的 探讨微阵列芯片技术在耐多药结核病（multidrug resistant tuberculosis,MDR-TB）临床诊断中的应用。方法 收集2020年6月至2021年5月经滨州市中心医院确诊的245例住院肺结核患者的标本（痰液标本125例和痰培养分离菌株120例）。痰液标本同时采用DNA微阵列芯片技术和传统培养法检测其结核杆菌阳性率。痰液标本和分离菌株均采用DNA微阵列芯片技术进行肺结核耐多药检测和分枝杆菌菌种鉴定。结果 125例痰液标本经DNA微阵列芯片技术和痰培养法检测,阳性率分别为58.4%（73/125）和24.8%（31/125）,两种方法比较差异有统计学意义（2=14.520,P<0.001）。采用DNA微阵列芯片技术检测125例痰液标本和120例分离菌株,共检出结核分枝杆菌复合群192例,非结核分枝杆菌7例。结核分枝杆菌复合群192例检出耐药者41例,其中耐异烟肼15例,耐利福平19例,同时耐两种药物7例。非结核分枝杆菌包括胞内分枝杆菌4例,堪萨斯分枝杆菌2例,鸟分枝杆菌1例。结论 DNA微阵列芯片技术检测周期短,能同时进行结核分枝杆菌耐多药检测和菌种鉴定,对MDR-TB的早期诊断和治疗有较大的临床应用价值。     

大鼠肠内容物细菌基因组DNA提取方法的比较

目的 比较两种肠内容物前处理和两种提取方法对清洁级SD大鼠肠内容物细菌基因组DNA提取效率.方法 分别选用PBS多次离心漂洗、液氮破细胞两种前处理方法和酚/氯仿抽提、试剂盒过柱法两种提取方法进行组合分析,对4份肠内容物和16份含金黄色葡萄球菌肠内容物进行随机提取.结果 大鼠肠内容物细菌基因组DNA含量和纯度测定结果显示,与PBS反复离心相比,液氮研磨前处理能显著提高大鼠肠内容物基因组DNA.荧光定量PCR表明,液氮研磨前处理较PBS反复离心能更好地收集细菌基因组DNA,其Ct值最低.结论 研究结果表明,采用液氮研磨试剂盒法在大鼠肠内容物DNA提取中是较为优良的方法,该方法为建立实验动物中微生物的定量PCR检测方法打下了基础.     

分子信标荧光定量PCR技术检测结核分枝杆菌方法建立及其临床应用

目的 建立结核分枝杆菌的分子信标荧光定量PCR检测方法 ,探讨该方法 检测结核分枝杆菌的临床应用价值.方法 针对结核分枝杆菌Ag85B DNA特异保守序列设计引物和分子信标探针,并构建标准品.采用分子信标荧光定量PCR法、抗酸染色法、集菌培养法检测158例肺结核患者痰液标本,比较3种方法 的检出率.结果 所建立方法 最低检测限度为2个基因拷贝/反应,在2×10~2～2×10~8基因拷贝/mL范围内,Ct值同DNA量的对数呈线性关系.该方法 检测5株非分枝杆菌和6株非结核分枝杆菌结果 均为阴性,检测结核分枝杆菌H37Rv出现75 bp特异条带.分子信标荧光定量PCR法、抗酸染色法、集菌培养法阳性检出率分别为60.13%、16.46%、31.01%,荧光定量PCR法检出率明显高于抗酸染色法和集菌培养法.结论 分子信标荧光定量PCR法具有较高的灵敏度和特异度,对结核病的诊断有一定的临床意义.     

结核分枝杆菌复苏因子D的克隆及测序分析

目的 克隆结核分枝杆菌Rv2389c基因.方法 常规方法提取结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA,PCR扩增结核分枝杆菌Rv2389c基因,经内切酶酶切、胶回收,将片段亚克隆到T载体中,转化至DH5α.以PCR鉴定的阳性菌落转至LB中培养,菌液进行质粒提取、酶切、胶回收,回收片段再克隆至表达载体pET30a中,转化至DH5α中.PCR阳性菌落转至LB中培养,测序确定插入片段的正确性.结果 构建了Rv2389c重组表达质粒PET30a-Rv2389c.结论 成功克隆了结核分枝杆菌复苏因子Rv2389c基因.     

雾化吸入灭活草分支杆菌用于防治中度支气管哮喘的临床效果

目的 观察雾化吸入灭活草分枝杆菌对于治疗中度支气管哮喘的临床效果.方法 采用随机对照的方法,将19例中度支气管哮喘患者分为两组.A组,常规治疗组9例.B组,雾化吸入灭活草分枝杆菌组10例.A组根据病情进行常规的解痉、抗炎、去除气道粘液栓的治疗,B组仅用灭活草分枝杆菌加入5%的氯化钠5ml 雾化吸入,每天一次,7天为一疗程,同时两组病人随身配备硫酸沙丁胺醇气雾剂(必要时使用).通过对比分析两组治疗前后对支气管哮喘的防治效果.结果 经治疗后B组哮喘症状较前得到明显改善,患者的生活质量得到明显提高.结论雾化吸入灭活草分枝杆菌可防治中度支气管哮喘,甚至不依赖激素.     

病毒RNA提取试剂对甲型流感病毒的灭活效果

目的测试病毒RNA提取试剂（硅胶柱法和改良异硫氰酸胍法）灭活甲型流感病毒的能力,以评估在低防护区操作甲型流感病毒核酸提取过程的可能性。方法根据试剂盒操作指导分别用两种提取试剂的裂解液Bufier AVL（德国QIAGEN）MGTC溶液（广州华银）处理一甲型流感2009年大流行株（105．67TCID50／ml）;系列对数稀释病毒处理液后接种于MDCK细胞单层进行分离培养;倒置显微镜每日观察细胞生长状态,出现75％以上病变后收获培养物进行血凝实验测定。同时设置试剂对照以了解试剂的细胞毒性,病毒对照以确定病毒的感染能力。结果未稀释和10倍稀释的两种裂解液都可引起MDCK大范围死亡,两病毒对照感染细胞的终点稀释度都为10^4,而所有10^2稀释度以上的病毒处理液培养孔细胞生长良好,血凝实验阴性。结论两种病毒RNA提取试剂可以完全灭活高滴度的甲型流感病毒,标本裂解处理后可在低防护区域操作。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

喉癌主癌灶手术切缘的临床特点分析

目的探讨研究喉癌主癌灶手术的安全切缘在临床上的特点。方法回顾性分析2007年6月—2011年3月已经确诊喉癌的患者100例,随机分成A、B两组,A组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取镜下观察分析;B组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取肉眼观察分析,将结果进行临床特点分析比较。结果早期的喉癌患者和晚期的喉癌患者的阳性切缘例数,差异无统计学意义（P〉0.05）;晚期的阳性切缘发生次数高于早期的阳性切缘发生次数,差异有统计学意义（P〈0.05）。声门上区[SG]2、3和5、10mm;跨声门型[TG]2、3mm和5、10mm的切缘对比,差异有统计学意义（P〈0.05）。SG、G、TG、IG的2mm和3mm,5mm和10mm对,差异无统计学意义（P〉0.05）。肉眼阳性切缘观察39个,镜下阳性切缘观察43,两者差异无统计学意义（P〉0.05）。结论依据原发不同部位、不同分期和不同范围选取适合的切线,就可以有效地减少阳性切缘的发生。     

儿童腹痛328例病因诊断及分析

目的：根据儿童急性腹痛的特点,诊断儿童腹痛应综合临床及相关检查提供的依据,做出准确诊断,给予适当治疗。方法：对临床328例腹痛患儿进行选择性辅助检查和分析。结果：小儿腹痛病因复杂,腹腔内疾病占64．63％,共17种病因;腹腔外疾病占35．37％,共6种病因。结论：仔细询问病史、认真体格检查、密切观察病情、针对性地选择辅助检查,在儿童腹痛的诊断上具有重要的意义。