多西紫杉醇诱导卵巢癌细胞凋亡及对PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨多西紫杉醇诱导卵巢癌细胞凋亡及对磷脂酰肌醇 3-激酶（phosphoinositide 3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,AKT）信号通路的影响。方法选择人卵巢癌细胞株HO-8910,按照多西紫杉醇药物浓度分为Ho组（0 μg/mL）、Hd组（10 μg/mL）、Hz组（20 μg/mL）、Hg组（80 μg/mL）,RT-PCR、Western Blot法分别检测PI3K、AKT水平、蛋白表达变化,Transwell法、MTT法检测HO-8910细胞的迁移、活力变化,流式细胞仪测定HO-8910细胞凋亡率。结果Ho组PI3K、AKT水平高于其他3组,4组差异有统计学意义（P<0.05）;Ho组PI3K、AKT蛋白最高,其余3组PI3K、AKT蛋白表达从低至高依次为Hg组、Hz组、Hd组,4组差异有统计学意义（P<0.05）;Hg组细胞凋亡率最高,其次为Hd组、Hz组、Ho组,4组调亡率差异有统计学意义（P<0.05）;Ho组细胞迁移能力最高,其次为Hd组、Hz组、Hg组,4组细胞迁移能力差异有统计学意义（P<0.05）;Ho组细胞增殖能力最高,其次为Hd组、Hz组、Hg组,4组增殖能力差异有统计学意义（P<0.05）。结论多西紫杉醇可促进HO-8910细胞大量凋亡,其作用机制可能为通过抑制PI3K/AKT信号通路活性来实现的。     

分割剂量电离辐射对卵巢癌细胞多药耐药的影响

目的 研究不同分割剂量电离辐射方案对卵巢癌细胞多药耐药性的影响.方法 采用卵巢癌亲本细胞SKOV3及其耐药细胞株SKVCR,分别进行假照射、单次照射(10 Gy)、常规分割照射(2 Gy ×5)和超分割照射(1 Gy×2 ×5).MTT方法检测细胞对4种化疗药物硫酸长春新碱( vincristine,VCR)、依托泊苷(etoposide,VP-16)、盐酸吡柔比星(pirarubicin,THP)和顺铂(cisplatin,DDP)敏感性的变化.Western blot检测P-gp蛋白表达量.结果 与SKOV3相比,SKVCR倍增时间增加为1.8倍,P-gp糖蛋白表达增高,4种药物对SKVCR的IC50浓度明显增加(P＜0.05).在SKOV3中,与假照组相比,单次照射后细胞对THP、DDP药敏性降低,常规分割照射后细胞对VCR、THP、VP-16药敏性降低,超分割照射使VP-16药敏性降低;在SKVCR中,与假照组相比,3个照射组对VCR、VP-16的药敏性增高,对DDP的药敏性无明显改变,单次和分割照射均可降低P-gp表达.结论 单次、分割和超分割照射在SKOV3亲本细胞中诱导多药耐药,在耐药株SKVCR中逆转对VCR、VP-16的耐药性.     

紫杉醇联合用药治疗卵巢癌的疗效比较

目的探讨紫杉醇联合化疗药物对卵巢癌的治疗效果。方法对2002年3月～2006年3月间收治的40名卵巢上皮癌进行治疗。对照组20例,采用环磷酰胺联合卡铂治疗,治疗组20例,采用紫杉醇联合卡铂治疗。观察患者病变缓解情况,两次探查癌灶的大小,病理检查阳性率,药物的毒副作用,合并症的缓解情况,生存质量等,分析紫杉醇联合化疗药物的治疗效果。结果紫杉醇联合卡铂组完全缓解6例,部分缓解9例,有效率75%。生存质量评定（KPS）改善加稳定为80%,两次探查癌灶大小,病理检查阳性率为3.1%;环磷酰胺联合卡铂治疗组耐药5例,完全缓解4例,部分缓解6例,有效率50%,KPS改善加稳定为50%,两次探查癌灶大小,病理检查阳性率为6.1%。结论紫杉醇联合卡铂治疗优于环磷酰胺联合卡铂治疗,可以提高患者的生存质量和生存时间,并可增加患者对化疗药物的敏感性。     

GST-π、BCL-2在上皮性卵巢癌的表达

卵巢恶性肿瘤病死率高居妇科癌症首位〔1〕,其早期症状不明显 ,初治患者 60 % 70 %为晚期就诊 ,难以实施成功的肿瘤细胞减灭术 ,化疗在卵巢恶性肿瘤综合治疗中居重要地位 ,化疗耐药是治疗失败的关键因素之一。肿瘤耐药涉及多种因素。近年发现 ,细胞凋亡的调节在化疗耐药中起重要作用 ,机制不明。关于凋亡调节基因与耐药相关基因之间关系的研究较少见 ,因此作者对耐药相关基因ＧＳＴ π和凋亡调节基因Ｂｃｌ 2在卵巢恶性肿瘤中的表达及其相关性进行了探讨。1　材料与方法1.1　标本来源　收集解放军总医院妇产科 1994～1998年手术切除的卵巢石…     

miR-1285对卵巢癌OVCAR3细胞侵袭迁移的影响及其机制

目的 探讨微小RNA(miR)-1285对卵巢癌OVCAR3细胞侵袭、迁移的影响及其作用机制.方法 取对数生长期人卵巢癌OVCAR3细胞,随机分为对照组(仅加入脂质体)、miR-1285-NC组(转染随机无义序列)、miR-1285-mimics组(转染miR-1285拟似物)、miR-1285-mimics+Yes相...     

紫杉醇联合顺铂治疗晚期卵巢癌的临床分析

目的 评价紫杉醇联合顺铂化疗治疗晚期卵巢癌患者的疗效和不良反应。方法 对25例晚期或复发性卵巢癌患者予以紫杉醇加顺铂联合化疗。结果 初治组9例,CR1例,PR5例,总有效率为66. 7％。不良反应主要是骨髓抑制,特别是白细胞下降明显。结论 紫杉醇加顺铂联合化疗对晚期卵巢癌应是首选的治疗方法。     

基于基因表达谱印记的癌症激酶抑制剂获得性耐药分析

目的 利用GEO数据库中的小分子激酶抑制剂在癌症中引发获得性耐药的基因表达谱,探究获得性耐药的机制和模式.方法 经数据预处理后,将涉及14种激酶抑制剂和11种癌症的42个获得性耐药实例基因表达谱中的上下调印记基因集构成数据集.根据Jaccard相似性距离,利用ward.D法进行层次聚类及模式划分.结果 通过计算分析,将...     

PARP-1抑制剂AG014699对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖及凋亡的影响

目的探讨PARP-1抑制剂AG014699对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖及凋亡的影响。方法①采用MTT法测定AG014699在不同浓度、不同时间对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖作用的影响;②用流式细胞仪测定AG014699在50μmol/L浓度下对人卵巢癌细胞株SKOV3作用24h后对细胞周期及凋亡的影响。结果①MTT测定：在24、48、72h时AG014699在10μmol/L分别测得的OD值与对照组相比,P〈0.05,有统计学差异;②流式细胞仪测定：AG014699在50μmol/L浓度下对SKOV3作用24h能明显改变细胞的周期分布,诱导细胞凋亡。结论 AG014699能明显抑制人卵巢癌细胞株SKOV3的增殖并诱导其凋亡。     

电离辐射对卵巢癌细胞SKOV3中Beclin 1基因的影响

自噬(autophagy)是指细胞通过溶酶体对自身结构的吞噬降解,实现细胞的代谢需要和某些细胞器的更新.当自噬调控机制发生异常时,将导致细胞功能改变,甚至引起细胞死亡,即自噬性细胞死亡[1-3].Beclin 1又称BECN1,是最早被发现的哺乳动物调控自噬性死亡的基因,与酵母自噬基因ATG6同源,位于人染色体17q21上,编码一个含有450个氨基酸、相对分子质量为60×103的蛋白质[4].Beclin 1是自噬调节通路中重要的自噬调节基因,是一种双等位抑癌基因,与传统的抑癌基因不同,只有在双等位基因都表达时才能够发挥抑癌作用,其杂合性缺失可明显导致肿瘤的发生[5].有研究表明,Beclin 1在人类散发性前列腺癌中下降40％,在乳腺癌中下降50％,在卵巢癌中下降达到了75％[6].本实验中,通过基因工程的方式构建Beclin 1基因的过表达模型和干扰模型,在基因水平改变Beclin 1的表达,通过检测电离辐射后Beclin 1的表达变化,探讨其在自噬中的作用,从而为辐射联合基因治疗提供理论依据.     

蛋白酶体抑制剂Oprozomib对顺铂耐药卵巢癌细胞的作用及机制研究

目的探讨蛋白酶体抑制剂Oprozomib (OZ)对顺铂(DDP)耐药卵巢癌细胞的作用,并初步揭示其机制。方法体外培养DDP耐药卵巢癌细胞SKOV3/DDP、A2780/DDP,传代后选取对数生长期细胞进行实验。研究OZ对耐药卵巢癌细胞活力的影响时,OZ浓度设为0、3、9、27、81、243、729、2181、6561 nmol/L,与细胞共培养;研究DDP对耐药卵巢癌细胞活力的影响时,DDP浓度设为0、3、9、27、81、243、729、2181、6561 nmol/L,另加入125 nmol/L OZ,采用CCK-8法检测细胞活力;采用流式细胞术检测DDP+OZ联用时的细胞凋亡情况。将实验分为对照组和OZ组,检测OZ对蛋白酶体糜蛋白酶(CT-L)活性和谷胱甘肽(GSH)合成的影响;采用Western blotting检测胞内谷胱甘肽合成酶(GSS)蛋白的表达。将实验分为对照组、DDP组、OZ组、DDP+OZ、DDP+OZ+GSH组和DDP+OZ+Tempol组,检测胞内活性氧簇(ROS)水平;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 OZ对SKOV3/DDP、A2780/DDP细胞的I...     

模拟微重力对NIH-3T3细胞clock及bmal1基因表达的影响

目的探讨模拟微重力对NIH-3T3细胞节律基因clock与bmal1 mRNA表达的影响。方法 NIH-3T3细胞采用回转器分别回转培养6 h,12 h,18 h,24 h,30 h,36 h,42 h和48 h,同时设置1 G静置培养为对照组。Trizol试剂提取细胞总RNA,实时定量PCR法检测节律基因clock及bmal1 mRNA在各时间点的相对表达量。通过余弦法获取节律参数,并经振幅检验分析是否存在昼夜节律。结果 clock及bmal1基因mRNA的表达趋势相近。对照组clock与bmal1 mRNA相对水平呈现节律性表达,而回转组表达无节律性。回转组mRNA相对水平最大值出现于约6 h时间点,最小值出现在约18 h,而对照组分别出现于约18 h与24 h。与对照组比回转组的周期延长了约16 h。回转后clock与bmal1的峰值相位前移。结论 NIH-3T3细胞中clock与bmal1的表达存在同步化的转录特征。模拟微重力可影响clock与bmal1节律的周期长度及峰值相位。     

模拟失重对大鼠心肌组织细胞因子基因表达谱的影响

目的 研究模拟失重对大鼠心肌组织中部分细胞因子基因表达谱的影响,探讨模拟失重条件下心脏结构/功能可能发生的变化机制.方法 将成年雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(Con)及尾部悬吊模拟失重组(SUS),应用包含96种基因的细胞因子基因芯片检测各组细胞因子表达水平,选取部分表达变化细胞基因,应用Real time-PCR给予验证.结果与Con组相比,模拟失重可导致心肌组织中17种细胞因子基因表达差异超出2倍,5种(IFNA4、IL-15、IL-1b、LT-b、FGF7)被上调,12种(IGF-1、IGF-II、FGF5、VEGF-D、VEGF-C、IFN r、IL-11、IL-12B、IL-13、IL-17、IL-18、CD40L)被下调.其中,生长因子呈现较普遍下调趋势,炎性类细胞因子表达水平变化不一.结论 模拟失重2 wk可导致心肌组织中细胞因子网络调控平衡偏移,促生长性、保护性细胞因子普遍下调,而致病性、炎性细胞因子部分明显上调,其可能是失重/模拟失重条件下心肌组织功能结构重塑的重要调控机制.     

紫杉醇、顺铂及丝裂霉素对3种人卵巢癌细胞株体外作用的研究

 目的 观察临床常用抗肿瘤药紫杉醇、顺铂和丝裂霉素对3种人卵巢癌细胞株体外生长的影响.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,测定紫杉醇、顺铂和丝裂霉素对人卵巢癌细胞株3AO、SKOV3和OVCAR3生长的抑制作用,并与空白组进行对比.结果 药物浓度达到10及100 μmol/L时,紫杉醇、顺铂及丝裂霉素对3种卵巢癌细胞均具有较好的抑制作用;顺铂和丝裂霉素的抑制作用较紫杉醇强(P<0.05).结论 在治疗卵巢癌时可采用不同种类的抗肿瘤药物的联合治疗方法.     

节律基因mPeriod2过表达对体外Lewis肺癌细胞γ射线敏感性的影响

目的评价mPeriod2(mPer2)基因转染后过表达对小鼠Lew is肺癌细胞(LLCs)60Coγ-射线放射敏感性的影响。方法采用脂质体介导方法将mPer2基因转染至LLC细胞,以空白组及空载体质粒pcD-NA3.1为对照,采用RT-PCR及流式细胞术检测mPer2基因在LLC细胞中的表达,给予60Coγ-射线4Gy单次照射后,流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡,采用增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化、细胞集落形成实验检测细胞增殖及存活情况。结果60Coγ-射线照射后,与转染空载体质粒组及空白组比较,转染mPer2基因细胞表现为G2/M期阻滞,凋亡率下降(contro l:8.10±0.03;pcDNA3.1-vector:11.20±0.07;pcDNA3.1-mPer2:4.40±0.02;P<0.05),细胞克隆形成增加(contro l:14%;pcDNA3.1-vec-tor:11%;pcDNA3.1-mPer2:32%;P<0.01)及PCNA阳性表达增加(contro l: ,pcDNA3.1-vector: ,pcDNA3.1-mPer2: ,P<0.05)。结论节律基因mPer2过表达使60Coγ-射线照射的小鼠Lew is肺癌细胞凋亡下降,细胞增殖明显,降低了该细胞对放射损伤的敏感性。     

Effects of Simulated Microgravity on Clock and Bmal1 Gene Expression in NIH-3 T3 Cells

目的 探讨模拟微重力对NIH-3T3细胞节律基因clock与bmal1 mRNA表达的影响.方法 NIH-3T3细胞采用回转器分别回转培养6h,12 h,18h,24 h,30 h,36 h,42 h和48 h,同时设置1G静置培养为对照组.Trizol试剂提取细胞总RNA,实时定量PCR法检测节律基因clock及bmal1 mRNA在各时间点的相对表达量.通过余弦法获取节律参数,并经振幅检验分析是否存在昼夜节律.结果 clock及bmal1基因mRNA的表达趋势相近.对照组clock与bmal1 mRNA相对水平呈现节律性表达,而回转组表达无节律性.回转组mRNA相对水平最大值出现于约6h时间点,最小值出现在约18h,而对照组分别出现于约18 h与24 h.与对照组比回转组的周期延长了约16 h.回转后clock与bmal1的峰值相位前移.结论 NIH-3T3细胞中clock与bmal1的表达存在同步化的转录特征.模拟微重力可影响clock与bmal1节律的周期长度及峰值相位.     

骨形态发生蛋白4重组腺病毒的构建及其对NIH3T3细胞成骨分化作用的研究

目的:构建骨形态发生蛋白4(BMP4)重组腺病毒,探讨其对NIH3T3成纤维细胞向成骨方向分化的影响。方法:将BMP4基因克隆连接到载体pAdTrack-CMV中,在细菌BJ5183中与pAdEasy腺病毒基因组进行同源重组,得到BMP4重组腺病毒基因组,通过转染HEK293细胞包装出重组腺病毒。利用BMP4重组腺病毒转染NIH3T3细胞,采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和western-blot检测BMP4在细胞中的mRNA和蛋白表达。Gomori改良钙钴法检测BMP4重组腺病毒转染后的NIH3T3细胞碱性磷酸酶表达;von kossa染色检测BMP4重组腺病毒转染后NIH3T3细胞的成骨分化情况。结果:获得了BMP4转移质粒pAdTrack-BMP4和BMP4重组腺病毒基因组,并包装出重组腺病毒。BMP4在转染后的NIH3T3细胞中得到表达,表达的BMP4蛋白具有生物学活性。转染后的NIH3T3细胞碱性磷酸酶表达增加。BMP4促进了NIH3T3细胞向成骨方向分化,形成钙结节。结论:本实验成功构建了BMP4重组腺病毒;BMP4重组腺病毒可促进NIH3T3细胞向成骨方向分化。     

失重对成骨细胞基因表达和细胞功能影响的研究进展

骨骼可以适应包括重力在内的各种机械刺激，并对骨形成与骨吸收之间的平衡进行调整。失重状态下的骨质减少主要归因于骨形成的减少，这与成骨细胞功能下降有关，表现为细胞增殖粘附能力下降，与分化成熟相关的物质(碱性磷酸酶，骨钙素和I型胶原)的mRNA及蛋白合成均减少，多种生长因子的分泌量以及细胞对其反应性下降。成骨细胞功能下降的机制尚不明确，有假说认为失重时细胞形态的改变导致了基因表达与功能的变化。     

外源性PTEN基因体外转染C6胶质母细胞瘤株及稳定表达蛋白产物的鉴定

目的 探讨外源性PTEN抑癌基因转染胶质母细胞瘤株并表达活性蛋白产物的可行性.方法 对获赠的包含有人PTENcDNA全长序列的PRK-PTEN质粒进行扩增和酶切鉴定后,用脂质体介导PRK-PTEN质粒转染大鼠C6胶质母细胞瘤株,荧光染色检测转染细胞中PRK-PTEN质粒携带的绿色蛋白荧光报告基因,免疫组化染色鉴定稳定转染后C6细胞中PTEN功能蛋白.结果 转染后的C6胶质母细胞瘤株稳定表达绿色荧光蛋白和PTEN功能蛋白.结论 PRK-PTEN质粒载体在脂质体的介导下可以将PTEN基因整合到C6胶质母细胞瘤的基因序列中去,并且通过宿主基因序列的表达稳定地产生PTEN功能蛋白,为以PTEN基因为靶点的胶质瘤基因治疗提供了实验理论依据.     

细胞电穿孔联合低浓度顺铂作用卵巢癌SKOV3细胞体外生长实验研究

目的 探讨细胞电穿孔联合低浓度顺铂对卵巢癌SKOV3细胞株体外生长作用的影响.方法 选用电场600 V/cm,脉冲个数5个,电容11μF作用于SKOV3细胞株.根据作用不同分为电穿孔＋药物（E＋M）组;电穿孔（E）组,药物（M）组和空白（C）组.每3 d一次观察处理后的生长细胞共24 d.描绘细胞生长曲线,观察各组细胞生长变化.结果 不同方式处理后细胞生长情况表明电穿孔＋药物组对SKOV3细胞的体外生长有良好抑制作用,差异显著（P〈0.01）;单纯电穿孔组对肿瘤细胞的抑制大于单纯药物组,低于电穿孔＋药物组;单纯药物组的低浓度顺铂对卵巢癌SKOV3细胞仅有微弱生长抑制.结论 以电场600 V/cm,脉冲个数5个,电容11μF作为细胞电穿孔参数并同时联合低浓度顺铂作用卵巢癌SKOV3细胞株时,有明显加强非细胞抑制剂量顺铂对体外SKOV3细胞生长的抑制作用.     

CHIP基因及其突变体的克隆及在人卵巢癌细胞SKOV3中的表达

目的：热休克蛋白70羧基端作用蛋白（CHIP）是近年来新发现的同时具有辅助伴侣分子和E3泛素连接酶活性的特殊蛋白分子。但其对相应底物蛋白代谢和活性的调控机制尚不十分清楚。本研究拟构建含CHIP全长编码基因的真核表达栽体。并在此基础上构建含CHIP不同功能结构域突变体和缺失体基因的表达栽体，以实现这些基因在真核细胞中的高效表达，为后续探讨CHIP相关功能的实验奠定基础。方法：从高表达CHIP的人非小细胞肺癌H322细胞中提取总RNA，以此为模板，采用逆转录巢式PCR（RT-nested-PCR）获得CHIP全长编码基因，经测序确定序列正确后将CHIP基因连入带有myc标签的克隆载体pCMV-Tagl中，并以此为模板采用点突变的方法构建CHIP基因N端TPR结构域突变体K30A和C端U-box结构域的突变体H260Q以及U-box结构域缺失体U-box（-）。结果：钓取的CHIP基因经测序鉴定序列与GenBank报道完全一致，瞬时转染证实所构建的CHIP及其突变体表达载体可以在人卵巢癌SKOV3细胞中实现高效表达。结论：成功地构建并获得能够在真核细胞内高表达的CHIP及其功能域突变体的表达载体，为进一步探讨真核细胞内CHIP对相关蛋白分子的调控机制奠定了前期基础。