蚊虫血淋巴收集方法

<正> 蚊虫血淋巴的收集是开展有关蚊虫血淋巴研究工作的关键技术.以往,人们常采用血腔灌注法、或划破腹壁后用毛细管直接吸取的方法,也有人采用整蚊研磨成匀浆进行有关的研究.前两者,由于蚊虫体积小,血淋巴含量甚微,一旦破壁后血淋巴容易在短时间内凝固、干燥;同时,纯手工操作费时耗力,要收集较多的血淋巴十分困难.用整蚊研磨成的匀浆来代替血淋巴又不够严谨.1978年 Mack 等首先使用     

约氏疟原虫卵囊黑化期间大劣按蚊血淋巴蛋白的分析

目的　初步探讨大劣按蚊 (Anophelesdirus)黑化包被约氏疟原虫 (Plasmodiumyoelii)卵囊相关蛋白。方法　挤压法分别收集血餐后第 1、3、4、5天时不吸血组、吸正常血组和感染组的雌大劣按蚊血淋巴 ,经SDS PAGE分离后 ,银染显色。同时 ,用烟草天蛾 (ManducaSexta)前酚氧化酶 (Prophenoloxidase ,PPO)亚基 1IgG检测正常雌大劣按蚊血淋巴中的PPO。结果　SDS PAGE发现感染约氏疟原虫后 ,部分大劣按蚊的血淋巴蛋白带增强 ,而部分血淋巴蛋白带却减弱 ,免疫印迹发现大劣按蚊血淋巴PPO有 87× 10 3 、6 7× 10 3 、6 3× 10 53条蛋白带 ,而相应分子量的 3条蛋白带在约氏疟原虫感染后第 4、5天开始增强 ,其中尤以 87× 10 3 的增强最为明显。结论　大劣按蚊在对约氏疟原虫卵囊黑化包被期间诱导合成的某些血淋巴蛋白与前酚氧化酶级联反应主要成分有关联     

嗜人按蚊血淋巴氨基酸组成初步研究

应用ＬＫ１３－４４００型氨基酸分析仪检测嗜人按蚊血淋巴氨基酸含量。初羽化和吸血后５ｄ的雌蚊血淋巴，均含有相同的１７种氨基酸，吸血后有１５种氨基酸含量下降。提示，蚊虫血淋巴氨基酸组成与蚊虫营养来源和卵巢的发育有密切关系。     

两种提取家蝇幼虫血淋巴方法的比较

目的:对剪头法和瞬时破壁法提取的家蝇幼虫血淋巴粗提液进行蛋白浓度和SDS-PAGE分析比较.方法:分别采用剪头法和瞬时破壁法提取家蝇幼虫血淋巴粗提液,同时设立未诱导组和热诱导组,测定各组的蛋白浓度进行比较分析,并对各组血淋巴粗提液进行SDS-PAGE的分析比较.结果:剪头法热诱导组的血淋巴粗提液蛋白浓度高于未诱导组,瞬时破壁法提取的血淋巴粗提液蛋白浓度高于剪头法;经SDS-PAGE分析,瞬时破壁法提取的血淋巴粗提液蛋白条带明显多于剪头法.结论:瞬时破壁法提取家蝇幼虫血淋巴简便易行,所提取的血淋巴蛋白成分多于剪头法.     

淡色库蚊越冬过程中体内保幼激素和蜕皮激素的变化

本文对郑州地区（３４°４３′Ｎ，１１３°３９′Ｅ）淡色库蚊自然越冬过程中体内保幼激素和蜕皮激素的变化进行了分析。结果表明，越冬过程中血淋巴的保幼激素活性发生了显著变化。越冬前期和越冬后期蚊虫血淋巴可解除滞育卵泡的滞育状态，越冬期蚊虫的血淋巴则无此活性。根据滞育蚊在温度２６±１℃、相对湿度７０％～８５％、光照１６ｈ／天条件下饲养７２ｈ，可以解除其卵巢滞育状态这一事实，作者认为从越冬前期到越冬期蚊虫咽侧体的抑制是由于当时光照逐渐缩短、气温逐渐下降影响的结果；越冬后期咽侧体的激活则有赖于光照时间的逐渐延长和气温的逐渐回升。咽侧体的抑制或激活带来了保幼激素性的降低或升高。越冬过程中全虫及血淋巴β－蜕皮激素的水平亦发生了显著的变化。越冬前期和越冬后期该激素水平较高，越冬期显著降低。基于蜕皮激素对蚊虫卵巢发育的调节作用，作者认为蜕皮激素与保幼激素协同作用调节蚊虫卵巢的滞育过程。     

斯氏按蚊血淋巴在约氏疟原虫卵囊黑化时差异表达蛋白的SDS-PAGE分析

目的　初步了解约氏疟原虫感染后的雌斯氏按蚊成蚊吸饲硝喹蔗糖水和蔗糖水后不同时间的血淋巴蛋白差异表达。方法　挤压法分别收集两组雌斯氏按蚊成蚊 1～ 5d的血淋巴 ,经SDS PAGE ,考马斯亮蓝和银染显色 ,Bio Rad10 0 0凝胶图像分析系统进行扫描和差异蛋白条带的自动化分析。结果　用药第 2天少数蚊卵囊开始部分黑化 ,第 5～9天黑化蚊及其黑化卵囊逐渐增多。用药后第 3天处理组蚊血淋巴蛋白条带数明显多于对照组 ,两组间存在较多差异蛋白带 ,主要集中在 ( 2 0～ 40 )× 10 3、( 60～ 80 )× 10 3和 13 0× 10 3处。银染比考马斯亮蓝染色出现的蛋白条带数多。结论　约氏疟原虫感染的雌斯氏按蚊成蚊吸饲硝喹糖水后其血淋巴蛋白表达有差异 ,其差异蛋白很可能就是黑化相关蛋白     

蚊虫血淋巴中保幼激素测试方法(简报)

<正> 为了便于解蚊虫内源性保幼激素(JH)在不同生理状态的变化,还者通过收集三带喙库蚊、淡色库蚊的血淋巴,从中提取 JH,经高压液相色谱仪分析获得成功,其主要过程分以下三步:1、蚊虫血淋巴的收集将一定数量(1500～2000只)不同日龄及不同光照处理的雌性成蚊,实验前断糖水15小时,乙醚麻醉后,用解剖针在其腹部末端划一小口,置于离心套管的内管中(其下端有小孔),以2500转离心15分钟,取出内管,外管底部即为血淋巴。     

中华按蚊和白纹伊蚊涎腺及血淋巴中蛋白质的PAGE分析

比较研究了中华按蚊初羽化和吸血后的涎腺及血淋巴中蛋白质的PAGE分析。结果表明,初羽化的两种蚊虫涎腺及血淋巴蛋白质区带分别为9和15条,8和22条。吸血第12d涎腺蛋白区带分别为9和8条。吸血第5d血淋巴蛋白区带分别是15条和26条。初羽化中华按蚊和白纹伊蚊血淋巴脂蛋白区带分别有2条和4条。     

豚鼠内淋巴囊供血血管与内淋巴囊血流量的研究

目的　探讨豚鼠内淋巴囊供血血管脑膜后动脉 (PMA)、前庭后动脉 (PVA)与内淋巴囊血流量的关系。方法　分别阻断PMA与PVA并在不同供血状态下对 16只豚鼠的内淋巴囊血流量进行检测 ,数据做统计学分析。结果　不同供血状态下内淋巴囊血流量差异有显著性 (P <0 .0 1) ,其中正常内淋巴囊血流量为 (1.5 491± 0 .5 2 66) μl min ,阻断PVA后内淋巴囊血流量为(1.0 75 2 2 5± 0 .3 70 3 ) μl min ,较正常内淋巴囊血流量下降约 15 .8% ;阻断PMA后内淋巴囊血流量为 (0 .3 5 5 93 75± 0 .2 469) μl min ,较正常内淋巴囊血流量下降约 76% ;血流量之比为Q正常∶Q阻PVA∶Q阻PMA =4.3∶3∶1。结论　PMA及PVA两大分支血流量是构成整个内淋巴囊血流量的主体 ,其中以来自颈外动脉系统的PMA对内淋巴囊血流量的影响较来自内听动脉系统的PVA显著。     

中华按蚊和白纹伊蚊涎腺及血淋巴中蛋白质的PAGE分析

比较研究了中华按蚊初羽化和吸血后的涎腺及血淋巴中蛋白质的 PAGE 分析。结果表明,初羽化的两种蚊虫涎腺及血淋巴蛋白质区带分别为9和15条,8和22条。吸血第12d 涎腺蛋白区带分别为9和8条。吸血第5d 血淋巴蛋白区带分别是15条和26条。初羽化中华按蚊和白纹伊蚊血淋巴脂蛋白区带分别有2条和4条。     

温带臭虫殖(Cimex lectularius Linn.)精巢生殖细胞染色体及血淋巴蛋白和游离氨基酸型的研究

采用南京地区在实验室逐代繁殖的温带臭虫(Cimex lectularius Linn.)作样本。实验结果表明,南京地区雄性温带臭虫的精原细胞染色体数目为29个(2n=29,即26+X_1X_2Y),属非超数性染色体类型。另用不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳及岛津920薄板扫描方法,测得雌、雄成虫的血淋巴蛋白均显现带型相似的11条谱带,其中有6条主谱带明显。又用超微量氨基酸薄膜层析荧光分析法对成虫血淋巴中的11种氨基酸进行定量分析,以脯氨酸的含量最高。     

血餐感染间日疟原虫前后中华按蚊血淋巴游离氨基酸动态观察

疟原虫在按蚊体内发育增殖与按蚊的血淋巴有密切关系。研究疟原虫在蚊体内发育中蚊血淋巴的变化,有助于深入了解疟原虫和蚊媒间的相互关系,为疟疾的流行和防治研究提供基础资料。本文初次报导血餐感染间日疟原虫前后按蚊血淋巴内游离氨基酸变化情况,并与饲以正常人血     

家蝇免疫血淋巴的抑菌作用及其免疫活性的研究

目的研究家蝇幼虫免疫血淋巴抑菌作用及其机制并探讨其免疫调节功能。方法分未经诱导、针刺诱导、蘸菌液诱导三组提取家蝇幼虫免疫血淋巴,分别针对多个标准菌株做抑菌实验,并设立空白对照和药物对照,观察抑菌效果。淋巴细胞转化实验研究家蝇血淋巴的免疫调节作用。结果三种处理方法所提取的家蝇幼虫血淋巴对金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、大肠杆菌、肺炎克氏菌、铜绿假单胞菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、白色念珠菌等革兰氏阳性菌、阴性菌及单细胞真菌白色念珠菌均有强的抑菌作用,其中带菌诱导的血淋巴抑菌效果较好,并且抑菌活力具有一定的热稳定性。血淋巴对人淋巴细胞的激活作用明显,淋巴细胞的转化率与对照组比较差异有显著性。结论本研究进一步验证了家蝇血淋巴的抑菌活性和免疫功能,为家蝇血淋巴的抗菌机制及免疫调节作用的深入研究和应用提供资料。     

大劣按蚊血淋巴酚氧化酶与约氏疟原虫卵囊黑化关系的研究

目的：探讨大劣按蚊血淋巴酚氧化酶（PO）与约氏疟原虫卵囊黑化的关系。方法：以大劣按蚊/约氏疟原虫模型，利用聚丙酰凝胶电泳后的酶底物显色法，比较、分析血餐后5、7、11、15d时不吸血组、吸正常血组和感染组3组的雌大劣按蚊血淋巴酚氧化酶的单酚氧化酶（MPO）和双酚氧化酶（o-DPO)活性；同时观察感染组约氏疟原虫的感染度及其卵囊黑化比率。结果：感染组的血淋巴MPO和o-DPO酶活性明显高于不吸血组和吸正常血组（P＜0.05)；但是随着约氏疟原虫卵囊黑化比率的增高，感染组血淋巴MPO和o-DPO活性逐渐下降。另外，吸正常血组的MPO和o-DPO酶活性明显高于不吸血组（P＜0.05)。结论：吸血和约氏疟原虫的感染均能激活大劣按蚊前酚氧化酶级联反应，而大劣按蚊血淋巴酚氧化酶可能在大劣按蚊对黑化约氏疟原虫卵囊中发挥重要作用。     

两地理株中华按蚊血淋巴游离氨基酸的比较

以改良的离心法采集足够量的血淋巴,用Hitachi835—50型氨基酸分析仪对代表黄淮平原地区的山东济宁株和代表江南水网地带的上海株中华按蚊的血淋巴游离氨基酸进行了分析。两者分别测出18种和17种氨基酸,均以苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸,丙氨酸、组氨酸、脯氨酸和牛磺酸为主,即两者的氨基酸谱几乎相同。两者共有的17种氨基酸中10种存在着量上的显著差异。本文结合不同地理株中华按蚊传病能力存在的差异对结果进行了分析讨论。     

家蝇幼虫淋巴液的抑菌作用及其SDS-PAGE分析

目的 观察针刺诱导家蝇幼虫血淋巴抗菌物质抑菌作用与抗菌分子.方法 室内饲养的家蝇三龄幼虫,经针刺体壁处理后48 h,提取其血淋巴,观察单独使用血淋巴和血淋巴与氨苄青霉素混合对9种应试细菌的抑菌效果,血淋巴与抗真菌药氟康唑混合对酵母真菌抑菌效果,应用SDS-PAGE分析血淋巴抗菌分子表达.结果 针刺家蝇幼虫后48 h的血淋巴,作用于大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、福氏痢疾杆菌、变形杆菌、枯草杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、黄色小球菌,结果显示:针刺家蝇幼虫后48 h的血淋巴对试验9个标准株细菌,均产生明显抑菌环,经单因素方差分析,显示各抑菌试验组的抑菌效果,皆有显著差异(P＜0.001).其中对黄色小球菌抑菌活力最强.1 μ1氨苄青酶素与7 μ1针刺诱导家蝇幼虫淋巴液混合对白色葡萄球菌抑菌效果呈现最好的加强抑菌作用.针刺诱导家蝇幼虫血淋巴与抗真菌药物氟康唑混合对酵母真菌抑菌效果呈现明显协同增强作用.SDS-PAGE分析结果显示:针刺幼虫后发育的成蝇和针刺幼虫血淋巴的电泳条带与未针刺者相比,针刺幼虫后发育的成蝇,在24000～97000范围内表达尤为增强,在12000附近有一条特异性条带.针刺家蝇3龄幼虫血淋巴SDS-PAGE分析显示,在24 000、35000、40 000～96000范围内表达明显增强,其中35 000、12 000条带较为特异.结论 本研究进一步验证了家蝇血淋巴的抑菌活性,发现针刺诱导家蝇幼虫血淋巴对黄色小球菌抑菌活力最强,氨苄青霉素与家蝇幼虫淋巴液混合对白色葡萄球菌抑菌效果呈现最好的加强抑菌作用,针刺诱导家蝇幼虫血淋巴与抗真菌药物氟康唑混合对酵母真菌抑菌效果呈现明显增强作用,上述发现在国内外报道较少,本研究结果,为进一步开发这类抗菌物质,提供了实验资料.     

斯氏按蚊黑化包被约氏疟原虫卵囊时血淋巴蛋白的二维电泳分析

目的以斯氏按蚊-约氏疟原虫为模型,用二维电泳技术分析比较约氏疟原虫感染后雌性斯氏按蚊吸饲硝喹蔗糖水和蔗糖水蚊血淋巴蛋白差异.方法用挤压法分别收集吸硝喹糖水3 d、吸感染血和吸蔗糖水雌斯氏按蚊成蚊血淋巴,Bradford法检测血淋巴蛋白浓度,继而对血淋巴进行双向电泳,凝胶考马斯亮蓝染色,ImageMaster VDS-CL对二维电泳凝胶蛋白斑点扫描和用ImageMaster 2D Elite软件进行蛋白质斑点自动分析.结果用药组血淋巴蛋白浓度总是低于吸感染血组和吸糖水组,用药组蚊血淋巴蛋白点有101个,对照组有115个,有51个蛋白点相同.50个仅在用药组中检测到,64个仅在对照组中检测到;蛋白点的分子量和等电点主要位于(40～60)×103和碱性端.结论二维电泳技术可直接反映蛋白质的差异,其蛋白浓度和白点的差异与硝喹诱导疟原虫卵囊黑化有关.