聚合酶链反应对抗-HBc、抗-HCV阳性献血者HBV DNA和HCV RNA阳性率调查

<正> 采用聚合酶链反应(PCR)对HBsAg阴性而抗-HBc或/和抗-HCV阳性献血者294人进行HBVDNA和HCVRNA阳性率调查,现将结果报告如下。1 调查对象与方法1.1 调查对象 广州市部分HBsAg阴性抗-HBc阳性或抗-HCV阳性献血者。1.2 方法 聚合酶链反应按Garson等方法改进,乙肝ELISA试剂盒按说明书进行。1.3 试剂 HBV DNA、HCV RNA PCR试剂盒均由     

微粒子酶联免疫分析法与化学发光微粒子免疫法在检测甲肝病毒抗体IgM中的比较

目的比较微粒子酶联免疫分析法（MEIA）与化学发光微粒子免疫法（CMIA）检测甲型肝炎病毒（HAV）抗体IgM。方法对中日友好医院349份门诊或体检患者血清（包括10份含干扰物质的血清）,同时用MEIA和CMIA进行甲肝病毒抗体IgM检测,结果进行卡方检验统计。结果MEIA和CMIA检测的349份标本,两者之间阳性符合率、阴性符合率及总符合率均为100％,一致性高,统计学上无差异。同时干扰实验显示：RF因子、高血脂、重度溶血、黄疸及急性乙肝感染（HBc—IgM抗体阳性）对甲型肝炎病毒抗体IgM检测无明显影响。结论MEIA法检测HAV抗体IgM与已荻认可批准上市的CMIA法具有临床等效性,可以用于HAV抗体IgM的检测,为临床甲型肝炎感染提供诊断依据。     

自身免疫性肝炎患儿丙型肝炎ELISA检测的假阳性

巳证实丙型肝炎病毒(HCV)是肠外传播的NANB 肝炎的主要病原。HC 的现代诊断试验是用ELISA 检测血清中的HCV 非结构蛋白抗体,为了解HCV-ELISA 在自免性肝炎患儿是否呈非特异性阳性反应,进行了本研究。方法:36份自免性肝炎患儿血清经ELISA 法测抗-HCV 抗体筛检。16份血清抗肝-肾微粒体抗体(LKMA)阳性。18份血清抗平滑肌抗体(SMA)阳性。4例抗细胞溶质抗体阳性。     

一起甲型病毒性肝炎暴发疫情的病原学诊断与基因分析

目的 查明引起2004年宁波局部地区甲型病毒性肝炎（甲肝）暴发疫情的病原并分析其基因特征。 方法 用酶联免疫吸附试验检测血清中的甲肝病毒IgM抗体（HAV IgM）和戊型肝炎病毒IgM抗体（HEV IgM），利用逆转录-聚合酶链反应（RT PCR）检测粪便样品中的HAV核酸（RNA）并扩增VP1基因，测序结果利用DNA star软件进行比对分析。 结果　172份血清样品中HAV IgM均为阳性，HEV IgM均为阴性。172份粪便样品中共检测到HAV RNA阳性样品74份，占43.0%。选择5份样品进行HAV VP1基因扩增并测序，测序结果经过比对后发现4株宁波株(NB2004-10、NB2004-11、 NB2004-51和 NB2004-71)的VP1基因是完全一致的；NB2004-75与以上4株的核苷酸的同源性为99.9％，氨基酸的同源性为99.7％；宁波株与HAV各基因型标准株比较， 与IA亚型毒株AH2的核苷酸和氨基酸的同源性最高， 分别为98.9％和99.7%～100.0％；与中国其他地区流行株比较，核苷酸和氨基酸的同源性波动于89.4%～96.7%和97.0％~100.0％。结论　引起这次肝炎暴发疫情的病原是甲肝病毒，其基因型为IA亚型，与日本株AH2、AH3亲缘关系最近，与中国其他地区流行株处于不同的进化簇上。     

2001～2005年江苏省盐都区病毒性肝炎血清流行病学监测

目的研究一般人群血清病毒性肝炎免疫水平。方法在省级病毒性肝炎血清流行病学监测点内分别于2001、2003、2005年对一般人群免疫水平进行血清流行病学监测,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗-HAV-IgG、HBsAg、抗-HBs、抗-HBc、抗-HCV等。结果抗-HAV-IgG总阳性检出率为82.38%,HBsAg总阳性检出率2.79%,抗-HBs总阳性检出率57.04%,抗-HBc总阳性检出率46.94%,抗-HCV总阳性检出率0.08%。结论一般人群甲型肝炎抗体较高,表明有关控制甲型肝炎的干预措施切实有效。乙型肝炎防治措施的重点应为,加强对10￣20岁年龄组的疫苗接种。     

液态蛋白芯片技术在抗-HCV、抗-TP检测中的应用

目的建立液态蛋白芯片联合检测丙型肝炎病毒(HCV)抗体和梅毒螺旋体(TP)抗体的方法,并采用已知标准品进行评估。方法 HCV和TP重组抗原分别包被在不同的羧基化珠子上,应用免疫间接法原理建立液态蛋白芯片检测抗-HCV和抗-TP的方法。利用建立的方法检测标准血清盘标本和已知结果的标本,并评估方法的敏感性和特异性。结果液态蛋白芯片法检测抗-HCV灵敏度达到1 NCU/ml,抗-TP灵敏度达到2 NCU/ml。在标准血清盘中,抗-HCV阳性符合率24/24,阴性符合率16/16;抗-TP阳性符合率19/23,有4份IgM阳性标本未检出,阴性符合率17/17。在收集的60份阳性标本、2 000份阴性标本中,抗-HCV阳性符合率100%,阴性符合率分别为99.5%。抗-TP阳性和阴性符合率均为100%。结论建立的液态蛋白芯片方法操作简便、快速,可同时检测抗-HCV和抗-TP。     

抗-HCV、HCV-RNA及ALT检测138例结果分析

目的：探讨丙型肝炎病毒（HCV）RNA与丙型肝炎抗体（抗-HCV）及丙氨酸氨基转移酶（ALT）之间的关系。方法：采用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）测定138例疑似HCV感染者血清HCV RNA,ELISA法检测抗-HCV,全自动生化分析仪测定ALT。结果：138例标本中HCV RNA和抗-HCV均阳性者108例,HCV RNA阳性而抗-HCV阴性者3例,HCV RNA阴性而抗-HCV阳性者27例。ALT水平与HCV RNA含量无显著相关性。结论：同时检测HCVRNA和抗-HCV可提高丙型肝炎患者的检出率;HCV RNA含量不能反映肝脏损伤的程度。     

类风湿因子及其浓度对甲肝、丙肝IgM抗体的影响

目的 探讨类风湿因子(RF)对甲肝、丙肝IgM抗体的影响,为分析判断临床出现的假阳性结果提供参考.方法 选用ELISA法检测甲肝、丙肝IgM抗体阳性标本,用速率法测其RF,中和RF后重新测IgM抗体.结果 两组标本(抗HAV-IgM阳性组、抗HCV-IgM阳性组)由RF引起的假阳性率分别为20%、25%.高RF浓度组引起的假阳性率为78%,低RF浓度组假阳性为16%.结论 RF对两组标本的检测均有干扰,两组标本的干扰率没有显著性差异,高浓度比低浓度干扰率大.     

对献血者作抗-HCV和高效价抗-HBc筛查作为预防输血后肝炎方法的前瞻性评价

自1989年12月以来,日本红十字会血液部已将检测抗-HCV的酶联免疫试验和筛查高效价抗-HBc引作筛选献血者的一种方法。为评价这种新筛检试验对预防输血后肝炎的效果,作了使用这种新方法之后(1989年12月至1990年12月)和之前(1982年1月至1988年12月)输血后肝炎发病率比较。 1988年12月前,检测所有受血者HBsAg并证实为阴性。1989年12月后,加第一代抗-HCV检测且第一代抗-HCV ELISA证实所有受血者为阴性。输血后肝炎的标准为:血清ALT值升高>200IU/L     

在HBsAg阴性个体中抗-HBe的意义

在乙型肝炎病人血清中出现HBsAg和抗-HBe,即表示该患者Dene颗粒消失,HBcAg阴转,肝组织正常,传染性降低。作者发现,抗-HBe在抗-HBs和抗HBc阳性血清中多半为阳性,所有抗-HBs阳性而抗-HBc阴性,以及大部分抗-HBc阳性但抗-HBs阴性血清中,抗-HBe是阴性。说明HBeAg的应答抗体较HBsAg、HBcAg的应答抗体持续时间较短。     

竞争抑制法检测抗-HBc总抗体的影响因素及对策

目的研究酶联免疫吸附试验(ELISA)待测血清标本与辣根过氧化物酶(HRP)标记的乙型肝炎病毒(HBV)核心抗体(抗-HBc-HRP)加入间隔时间对抗-HBc总抗体检测结果的影响。方法选择HBV标志物检测结果为阴性的标本分A、B、C 3组:A组,加样后延长室温放置不同时间再加入抗-HBc-HRP;B组,加样同时加入抗-HBc-HRP延长室温放置不同时间;C组,A组方式测定的阴性转阳性标本再用ELISA试剂2和化学发光(CLIA)试剂重复测定,确认阴、阳性结果。结果A组加样方式对抗-HBc总抗体检测结果影响明显,且加样和加入抗-HBc-HRP的间隔时间越长,标本的假阳性越多;B组加样方式对抗-HBc总抗体检测结果基本无影响;C组ELISA试剂1和试剂2有72.8%的检测结果一致;20例ELISA阴性转阳性标本经过CLIA方法验证仍为阴性。结论A组的不公平竞争在不同时间内可出现程度不等的抗-HBc总抗体假阳性;B组加样方式可最大限度地减少抗-HBc总抗体假阳性,保证检验质量。     

两种国产戊型肝炎病毒抗体（抗HEV-IgM）诊断试剂盒的比较

目的比较两种国产戊型肝炎病毒IgM抗体（抗HEV．IgM）诊断试剂盒（酶联免疫法）检测相符性的差异。方法对405份血清标本平行使用已获国家批准上市的抗HEV．IgM诊断试剂盒作为A试剂,与另一家公司生产的抗HEV．IgM诊断试剂盒作为B试剂进行戊肝抗体的检测。对检测结果进行分析,比较A试剂与B试剂之间的差异。结果405份血清标本进行检测,敏感性为94．1％,特异性为100％,与A试剂总符合率为99．5l％,其中甲肝抗体（抗HAV．IgM）、乙肝表面抗原（HBsAg）、丙肝抗体（抗HCV）和梅毒螺旋体抗体（TP）等阳性血清对B试剂均没有干扰。结论B试剂与目前国内临床使用的同品种试剂盒相比,有较高的符合率,适用于戊型肝炎病毒（IgM）抗体的临床检测。     

抗-HCV IgM、抗-HCV IgG与HCV RNA的相关性及临床意义

[目的]研究丙型肝炎病毒（HCV）抗-HCV IgM、抗-HCV IgG与HCV RNA的相关性。[方法]收集236例HCV患者标本，用酶联免疫吸附法检测抗-HCV IgM、抗-HCV IgG、同时用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测HCV RNA。[结果]168例HCV RNA（＋）标本中，抗-HCV IgM阳性率为72．0％（121／168）；抗-HCV IgG阳性率为85．1％（143／168），抗-HCV IgM、抗-HCV IgG与HCV RNA的关联系数均为r=1。抗-HCV IgM、抗-HCV IgG与HCV RNA的检出符合率分别为69．1％（163／236）、75．4％（178／236）。随着抗-HCV IgG抗体光密度值（OD值）的增大，HCV RNA的检出率亦增加（X^2=27.5 P〈0．001）。提示两者间存在相互关联性（r=0．93）。[结论]HCV感染者血清抗-HCV抗体与HCV RNA的阳性检出率呈正相关，血清中抗-HCV的含量越高，HCV RNA的含量越多，其传染性越强。抗-HCV IgM与HCV病毒复制亦密切相关，可以做为HCV复制的补充指标。     

小儿肺炎支原体感染的血清学检测及临床应用

目的：通过对呼吸道感染患儿血清肺炎支原体（MP）特异性抗体IgM（抗－MP－IgM)及冷凝集试验（CAT）的检测,协助临床早期诊断MP感染,及早治疗,缩短病程。方法对154例呼吸道感染患儿同时作血清冷凝集试验及用μ－捕获ELISA方法检测其肺炎支原体特异性抗体IgM。结果：154例受检样品中抗－MP－IgM阳性检测结果25例（占16．2％）;在26例临床诊断为MP感染的病例中,血清抗－MP－IgM和（CAT均阳性10例;MP－IgM阴性,CAT阳性4例;抗－MP－IgM的敏感性84．6％,冷凝集试验的敏感性53．8％,抗－MP－IgM敏感性较冷凝集试验高（P＜0．05）。结论：临床上同时检测抗－MP－IgM和冷凝集试验可提高MP敏感的早期诊断率、然而抗－MP－IgM检测阳性率也受到患儿年龄、病程及免疫功能状态等的影响。在临床诊断中不容忽视,以免误诊、漏诊。     

利用抗-GOR检测法对献血者作HCV感染筛选

抗-GOR乃是直接针对一种融合蛋白的自身抗体,这种融合蛋白由感染非A非B型肝炎的黑猩猩筛选的cDNA克隆(GOR47-1)表达的。血清中存在抗-GOR反应性,就象抗-HCV C100-3一样,也与非A非B型肝炎密切相关,此外,经逆转录酶/聚合酶连反应(RT/PCR)技术检测,可在大多数抗-GOR阳性血清包括抗-HCV阴性血清中证实存在HCVRNA。这些发现促使一些作者建议,在用来预防     

胶体金免疫层析技术同步检测甲、戊型肝炎病毒IgM抗体的研究

目的 建立胶体金免疫层析(GICA)同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒的IgM抗体的方法。方法 采用胶体金标记鼠抗人IgM单克隆抗体，制成免疫层析测试条。血清中甲、戊型肝炎的特异性抗体与测试条上金标抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动与膜上固相包被的抗原(HAAg、HEAg)、抗体(羊抗鼠IgM)结合形成肉眼可见的红色线条。结果 自制的GICA试条与EIA对比检测血清标本188份，各单项指标IgM—抗HAV、IgM-抗HEV两法总符合率依次为97．9％、98．4％，检测灵敏度可达2ng／ml。结论 用于同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒特异性抗体的GICA试条的制备条件已基本建立；其检测结果特异性强、灵敏度高、操作方法简便快捷且无需特殊仪器设备。     

病毒性肝炎血清标志物检测结果分析

目的了解血清抗-HAV IgM、HBsAg和抗-HCV的应用情况,并探讨抗-HEV IgM的临床应用。方法对2002年11月1日-2004年10月31日送检的血清标本抗-HAV IgM、HBsAg及抗-HCV检测结果进行回顾性分析,并对其中786份标本检测抗-HEV IgM。结果抗-HAV IgM阳性12例(0．43％),HBsAg阳性9673例(17．69％),抗-HCV阳性56例(0．71％),抗-HEV IgM阳性63例(8．02％)。结论应加强肝功能正常的普通人群的血清抗-HCV检测和肝功能显著异常患者的血清抗-HEV IgM检测。     

PCR-BHEL技术对血清中HCVRNA的检测

目的比较聚合酶链反应偶联印迹杂交和酶联放大（PCR-BHEL）技术与逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测血清中丙型肝炎病毒核糖核酸（HCVRNA）的结果。方法采用PCR-BHEL技术和RT-PCR对65例血清标本的HCVRNA进行检测，并将这两种检测方法的检测结果进行比较，以确定PCR-BHEL技术在检测HCVRNA中的高敏感性。结果38例抗-HCV阳性血清标本经PCR-BHEL技术和RT-PCR检测HCVRNA的检出率分别为84．21％（32／38）和55．26％（21／38）；27例抗-HCV阴性血清标本经PCR-BHEL技术检测HCVRNA的检出率为11．11％（3／27）；而经RT-PCR检测HCVRNA结果均为阴性。两种方法检测HCVRNA结果的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论PCR-BHEL技术较RT-PCR的灵敏度高，能够有效地提高HCVRNA的检出率。     

建立血站检测抗-HCV ELISA试剂参考品方法初探

目的为保证输血安全,血站对丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)酶联免疫吸附(EL ISA)试剂除注重特异性外,试剂的灵敏度要求更高,针对血站需求建立一套抗-HCV EL ISA试剂的参考品。方法收集一种或两种的抗-HCV EL ISA试剂检测阳性的血清,以抗-HCV确证试剂结果为准,选取抗-HCV抗体强阳性、非强阳性、单片断阳性血清组合建立阳性参考品,乙型肝炎病毒表面抗原(HB sA g)阳性、溶血、乳糜血及其它单或双抗-HCV EL ISA试剂阴性的标本,经确证试剂为阴性,以一定组合建立阴性参考品,检测试剂的灵敏度和特异性。结果建立参考品包括阳性参考品25份,阴性参考品25份。结论根据自身要求建立一套适合血站自身要求的抗-HCV EL ISA试剂质控品,严把试剂质量关。     

竞争抑制法检测抗-HBc总抗体的影响因素及对策

目的 研究酶联免疫吸附试验（ELISA）待测血清标本与辣根过氧化物酶（HRP）标记的乙型肝炎病毒（HBV）核心抗体（抗-HBc-HRP）加入间隔时间对抗-HBc总抗体检测结果的影响。方法 选择HBV标志物检测结果为阴性的标本分A、B、C3组：A组，加样后延长室温放置不同时间再加入抗-HBc-HRP；B组，加样同时加入抗HBc-HRP延长室温放置不同时间；C组，A组方式测定的阴性转阳性标本再用ELISA试剂2和化学发光（CLIA）试剂重复测定，确认阴、阳性结果。结果 A组加样方式对抗一HBc总抗体检测结果影响明显，且加样和加入抗-HBc-HRP的间隔时间越长，标本的假阳性越多；B组加样方式对抗-HBc总抗体检测结果基本无影响；C组ELISA试剂1和试剂2有72．8％的检测结果一致；20例ELISA阴性转阳性标本经过CLIA方法验证仍为阴性。结论 A组的不公平竞争在不同时间内可出现程度不等的抗-HBc总抗体假阳性；B组加样方式可最大限度地减少抗-HBc总抗体假阳性，保证检验质量。