克山病的心肌损伤与肠道病毒感染及细胞凋亡关系的研究

本文对亚急型，慢型克山病各１０例尸检心肌组织切片分别用ＣＶＢ３的ｃＤＮＡ探针作原位杂交和ｏｎｃｏｒ公司的细胞凋亡原位检测试剂进行检测。     

山东省亚急型克山病患儿与柯萨奇B组病毒的关系

为探讨山东省亚急型克山病患儿与柯萨奇Ｂ组病毒的关系，用缺口平移法制备生物素标记的ＣＯＸＢ３病毒的ｃＤＮＡ探针，与亚包型克山病病例尸检心肌组织９例及１５例脑外务，ＣＯ中毒等意外死亡的正常民人心肌组织和１０例非病区７～８个月胎儿心组织切片进行原位杂交，结果９例山东亚急型克山病的５例检测到ＣＯＸＢ组病毒的ＲＮＡ，阳性率为５５．５％（５／９），而对照组均为阴性，结果提示ＣＯＸＢ组病毒感染是山东省亚急性型克     

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇病毒与克山病的关系

为进一步探讨柯萨奇病毒与克山病的关系，采用柯萨奇Ｂ３病毒（ＣＶＢ３）制备的ｃＤＮＡ探针与黑龙江、山东、云南三省病区克山病尸检心肌组织及胎儿克山病心肌组织的石蜡切片进行了原位核酸杂交，并用脑外伤、ＣＯ中毒等意外死亡健康成人及冠心病、风心病尸检心肌组织和病区、非病区７～８个月引产胎儿心肌组织的石蜡包埋切片作为对照。结果急型克山病８／１３、慢型克山病３４／５０、亚急型克山病２２／２９呈现阳性杂交信号，提示有柯萨奇病毒ＲＮＡ的存在，冠心病２／１５、风心病１／１５、显著低于克山病，而健康成人对照组均为阴性，胎儿克山病一例呈阳性反应，病区引产胎儿心肌组织１０例中有２例也检出柯萨奇病毒ＲＮＡ，而非病区胎心则为阴性。结果提示在一些克山病的发生和发展过程与柯萨奇Ｂ组病毒的感染高度相关。     

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与克山病的关系──（黑龙江省急型克山病）

为探讨柯萨奇Ｂ组病毒感染与黑龙江省急型克山病的关系。本文用缺口平移法制备生物标记的柯萨奇Ｂ３病毒的ｃＤＮＡ探针与１３例急型克山病尸检心肌组织及脑外伤、ＣＯ中毒等意外死亡的正常成人心肌组织１０例，非病区７～８个月引产胎儿心肌组织１０例的石腊切片进行原位杂交。结果１３例急型克山病中有８例出现阳性杂交信号，即有柯萨奇Ｂ组病毒的ＲＮＡ存在，阳性率达６１．５％。对照组均为阴性，提示黑龙江省急型克山病有柯萨奇Ｂ组病毒感染，可能是急型克山病发病因素之一。     

柯萨奇病毒RNA阳性信号在克山病心肌中形态特征及其与发病的关系

目的：探讨柯萨奇病毒RNA阳性信号在克山病心肌细胞中的特征及病毒感染与发病的关系。方法：以65例不同型别克山病尸检心肌组织蜡块为研究对象，用寡核苷酸探针与组织切片进行原位核酸杂交，以检测柯萨奇B组和A组病毒RNA。结果：急型、亚急型及慢我山病的阳性杂交信号检出率分别为83．0％、87．9％及80．0％。阳性信号在急型、亚急型克山病心肌中颗粒粗大，境界较清晰，但分布比较局限；在慢型克山病中阳性信号多散在分布于各部位心肌细胞内，但颗粒较细小，境界不清。结论：心肌组织蜡块长期保存不影响杂交结果；吉林省各型克山病均与柯萨奇病毒感染密切相关，提示病毒感染是克山病复合病因的重要组成部分。     

克山病患者心肌组织细胞凋亡及结构蛋白Desmin异常表？…

探讨细胞凋亡及结构蛋白Ｄｅｓｍｉｎ异常表达与亚急型,慢型克山病的关系。方法应用原位末端标记法及免疫组化技术在亚急型和慢型克山病患者心肌石蜡包埋组织切片上进行细胞凋亡及Ｄｅｓｍｉｎ双重荧光染色,并应用共聚焦显微镜观察结果。结果克山病患者心肌组织中可见结构蛋白Ｄｅｓｍｉｎ的异常荧光染色及细胞凋亡。在Ｄｅｓｍｉｎ荧光染色变浅甚至消失,慢型克山病多表现为染色增强,或呈团状聚集于心肌细胞中间,或呈块状附于细     

克山病患者心肌组织细胞凋亡及结构蛋白Desmin异常表达的研究

目的探讨细胞凋亡及结构蛋白Ｄｅｓｍｉｎ异常表达与亚急型、慢型克山病的关系。方法应用原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ）及免疫组化技术在亚急型和慢型克山病患者心肌石蜡包埋组织切片上进行细胞凋亡及Ｄｅｓｍｉｎ双重荧光染色,并应用共聚焦显微镜观察结果。结果克山病患者心肌组织中可见结构蛋白Ｄｅｓｍｉｎ的异常荧光染色及细胞凋亡,有Ｄｅｓｍｉｎ荧光染色变浅甚至消失,慢型克山病多表现为染色增强,或呈团状聚集于心肌细胞中间,或呈块状附于细胞膜下。凋亡细胞多见于有Ｄｅｓｍｉｎ异常改变的心肌细胞、浸润的炎细胞、血管内皮细胞及一些间质细胞。结论细胞凋亡与结构蛋白Ｄｅｓｍｉｎ异常参与克山病的发生与发展。     

亚急型克山病与肠道病毒的关系

目的 用RT-PCR技术探讨亚急型克山病与肠道病毒的关系。方法 用RT-PCR技术对3例亚急型克山病尸检病例心肌组织中肠道病毒进行检测，并对所得片段进行序列分析。结果 对CVB35′NTR的序列分析表明，亚急型克山病患者心肌组织中存在的CV83RNA的5′NTR第234位点与已知的无心肌毒性的毒株CVB3/0不同，而与已知的有心肌毒性的毒株相同。结论 CVB3病毒RNA可在克山病患者心肌组织中有生存、复制，可能对克山病的发生发展起重要作用。克山病的发生可能与CV83基因组5′NTR中234点突变有关。     

用原位核酸杂交法探讨慢型克山病与柯萨奇B组病毒的关系

为探讨山东慢型克山病与柯萨奇Ｂ组病毒的关系，用缺口平移法制备生物素标记ＣｏｘＢ３病毒的ｃＤＮＡ探针与慢型克山病１４例尸检心肌组织及１０例脑外伤，ＣＯ中毒等意外死亡的正常成人心肌组织及１０例非病区７￣８个月引产胎儿的心肌组织切片进行原位杂交，１４例慢克中有９例检测到柯萨奇Ｂ组病毒的ＫＮＡ，阳性率达６４％，而对照组均为阴性。提示柯萨奇Ｂ组病毒感染可能是山东慢型克山病发病因素之一。     

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与云南慢型克山病的关系

为了探讨柯萨奇Ｂ组病毒感染与云南慢型克山病的关系，本文用缺口平移法制备生物素标记的柯萨奇Ｂ３病毒的ｃＤＮＡ探针与云南慢型克山病尸检心肌组织１５例及脑外伤等非正常死亡的尸检心肌组织１０例石腊切片及引产胎儿心肌组织１０例的石腊切片进行原位杂交。结果云南慢克１６例中有１１例出现阳性杂交信号，即有柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＶＢ）ＲＮＡ存在，阳性率达７３．３％。脑外伤等非正常死亡的心肌及胎心均为阴性。提示云南慢型克     

用原位核酸杂交技术探讨肠道病毒与急型克山病的关系

目的 探讨肠道病毒(柯萨奇病毒)与吉林省急型克山病的关系。方法 用柯萨奇病毒B3、B4、B5、A9共同序列作寡核苷酸探针对吉林省急型克山病尸捡心肌组织12例及病区与非病区尸捡正常心肌组织各7例进行原位核酸杂交。结果 吉林省急型克山病12例中有11例出现阳性杂交信号，即有肠道病毒RNA存在，阳性率为91．66％，对照组均为阴性。结论 吉林省急型克山病病人心肌组织中有肠道病毒感染，提示急型克山病的发病可能与肠道病毒感染有关。     

T-2毒素致大鼠心肌损伤的实验研究

目的 对低硒条件下,T-2毒素损伤大鼠心肌的机制进行实验研究,探讨克山病的发病原因。方法 采用低硒饲料喂养大鼠,用T-2毒素亚急性损伤心肌的动物模型,应用原位末端标记法和免疫组化技术检测大鼠心肌细胞凋亡和检测心肌中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性。结果 低硒加T-2毒素组大鼠心肌损伤较重,凋亡细胞检出较多,常硒饲料加T-2毒素与低硒饲料加T-2毒素组均可见心肌坏死;这2个组心肌组织GSH-Px活性降低,心肌中可检出凋亡细胞;而后者损伤严重。结论 T-2毒素可使大鼠心肌损伤,在低硒条件下,这种损伤加重。低硒条件下,T-2毒素损伤大鼠心肌的机制与脂质过氧化和细胞凋亡有关。     

desmin基因exon6 A360P错义突变与慢型及潜在型克山病心肌损伤的关系

目的 探讨desmin基因exon6 A360P错义突变与克山病心肌损伤的关系及exon6 A360P错义突变是否是慢型及潜在型克山病损伤的易感基因.方法 在陕西省克山病病区黄陵县店头镇和非病区西安市长安区,采用单纯随机抽样的方法,抽取年龄相匹配的慢型和潜在型克山病患者(病例组)30例及病区(内对照组)和非病区对照(外对照组)各30例.采集外周血5 ml,乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝,盐析法制备基因组DNA.采用PCR方法,用特异性的Bsp1286 Ⅰ内切酶对可能发生突变的exon6位点进行酶切.设内对照,在desmin基因exon4位点进行酶切,判定标准为在122 bp和60 bp处各出现1个条带.琼脂糖凝胶电泳分析desmin基因exon6 A360P错义突变位点,判定标准为desmin基因exon6位点酶切后在184 bp和66 bp处各出现1个条带.结果 琼脂糖凝胶电泳结果显示,内对照desmin基因exon4在Bsp1286 Ⅰ酶切前,在182 bp处仅出现1条条带;在酶切后,被切成2个片段,在122 bp和60 bp处各出现1个条带.慢型及潜在型克山病患者desmin基因exon6在Bsp1286 Ⅰ酶切前和酶切后,均在250 bp处出现了1个条带;病区和非病区对照组desmin基因酶切后,也是在250 bp处出现了1个条带.3组结果相同,desmin基因exon6没有被Bsp1286 Ⅰ酶切开,A360P没有发生错义突变.结论 慢型和潜在型克山病患者未检出desmin基因exon6 A360P错义突变位点,desmin基因exon6 A360P错义突变不是克山病心肌损伤的易感基因.     

克山病患者抗氧化能力测定

目的 探讨克山病患者体内抗氧化水平与克山病心肌损伤的关系,分析其可能的发病机制.方法 2005和2006年期间,在黑龙江省克山病重病区富裕县永进村和新发村、尚志市扶安村、五大连池市星火村选择慢型、潜在型克山病患者41名作为病例组,61名健康人作为病区对照组;在非病区望奎县厢兰三村选取48名健康人作为非病区对照组,分别采集清晨空腹外周静脉血检测全血硒水平、全血谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、血浆总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力及血浆丙二醛(MDA)水平.结果 病例组血硒水平[(34.80±13.30)μg/L]、GSH-Px活力[(104.10±34.19)U/L]、T-SOD活力[(92.16±17.98)×103 U/L]显著低于病区对照组[(41.24±13.57)μg/L、(118.57±25.49)U/L、(104.82±13.56)×103 U/L]和非病区对照组[(48.33±16.51)μg/L、(155.00±24.01)U/L、(108.48±12.73)×103 U/L],组间比较差异有统计学意义(P均<0.05);病例组MDA水平[(7.12±1.37)μmol/L]高于病区对照组[(5.36±1.18)μmol/L]和非病区对照组[(5.22±0.83)μmol/L],组间比较差异有统计学意义(P均<0.05);病区对照组血硒水平、GSH-Px活力低于非病区对照组(P<0.05),组间比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 克山病病人体内存在硒缺乏所致的抗氧化能力降低,氧化损伤增强.氧化应激障碍可能与克山病的心肌损伤有一定的关系.     

肌红蛋白在克山病诊断中的意义

目的 通过比较不同类型克山病患血清中肌红蛋白（Mb）的变化，探讨了肌红蛋白在诊断克山病心肌坏死中的意义。方法 采用固相酶免疫微量法。结果 不同类型克山病患的血清中Mb含量有所改变，但是只有亚急型克山病组与对照组相比差异显，随心肌坏死程度加重，Mb含量也随之增高。结论 血清中肌红蛋白含量变化可作为克山病急性心肌坏死早期诊断指标。     

克山病病区玉米饲料及酱块与大鼠骨骼肌、心肌病变损伤关系的实验研究

目的探讨克山病病区产玉米饲料和酱块对大鼠骨骼肌、心肌损伤的作用。方法按体重将健康雄性W istar大鼠随机分成3组,每组10只,分别饲以病区玉米、病区玉米加酱块、非病区玉米3种饲料;高效液相色谱法检测酱块中的黄绿青霉菌毒素和镰刀菌毒素;每月称量大鼠体重;1、3个月时检测大鼠尾静脉全血谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力;6个月时光镜观察大鼠心肌、骨骼肌病理改变。结果未检测到酱块中有致心肌、骨骼肌损伤的真菌毒素;1、2、3月各组大鼠体重差别均有统计学意义（F=3.49,P〈0.05;F=9.93,P〈0.05;F=6.068,P〈0.05）,总体来看病区玉米加酱块组体重状况较好;1个月和3个月两次GSH-Px活力检测结果显示,非病区玉米组均高于病区玉米组和病区玉米加酱块组;3组心肌损伤发生率两两经确切概率F isher检验,差异无统计学意义（P=1.000,P=0.545,P=1.000）,未发现明显的骨骼肌病理损伤。结论病区玉米喂养大鼠,影响其全血谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性;单独喂养病区玉米饲料6个月,未见实验大鼠有意义的心肌和骨骼肌损伤;未观察到酱块有致心肌、骨骼肌损伤的作用。     

潜在型克山病人血清中游离脂肪酸含量的初步分析

本文测定结果发现潜在型克山病人血清中游离脂肪酸含量显著高于病区正常人,说明潜在型克山病人脂肪酸代谢可能发生改变。