重组蝎毒抗神经兴奋肽的ELISA分析方法建立及稳定性的初步研究

目的建立重组蝎毒抗神经兴奋肽(ANEP)的ELISA分析方法并对ANEP的稳定性进行初步研究。方法以分别建立的间接ELISA和间接竞争ELISA分析方法进行ANEP含量测定,并通过方法学的优化,最终以建立的间接法ELISA方法测定了温度、pH值、反复冻融、超声对ANEP稳定性的影响。结果间接ELISA相对于间接竞争ELISA有着更好的线性关系和灵敏度,线性范围0.025~1.60μg/mL。检测限为10 ng/mL。稳定性实验表明ANEP在37,60℃的条件下放置24 h含量基本不变,pH 5~11的缓冲液中保持稳定,反复冻融、超声4 min后含量降低。结论所建立的间接ELISA方法能很好的用于ANEP的测定。ANEP的热稳定性较好,强酸性下不稳定,对反复冻融与超声等稳定性较差。     

金标快速法与ELISA法检测HBV的对比分析

目的：探讨金标快速法与酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测HBV的效果,为临床选择一种经济、快速准确、敏感检测HBV的新方法。方法：将2008年9月本院门诊体检的东莞市一所中学5980例新生,并随机分为金标快速法组（210例）和ELISA法组（210例）,对两种检测方法进行测定,并对测定结果分别进行比较分析。结果：用金标快速测试法与ELISA法平行检测乙肝HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc,差异尢统计学意义（Χ^2=0．25、0．10、0．13,P〉0．05;∑Χ^2=0．48,v=5,P〉0．05）;两种方法检测结果HBV五项指标的总符合率分别为98．57％、99．52％、98．10％、95．23％、96．19％以ELISA法为常规法验证金标快速测试法,则金标法的敏感性分别为99．50％、100．00％、98．95％、94.20％、95．65％．特异性为85．17％、99．51％、97．48％、96．03％、96．64％。用金标快速测试条进行乙肝五项指标重复检测,两次检测结果具有较高的一致性。结论：两种方法比较,金标快速测试法较酶联免疫试验法具有简单便捷、快速准确的特点,是一种较好的乙肝病毒五项指标快速测定方法．值得在基层医院大力推广。     

血红蛋白酶联免疫测定的建立及应用研究

目的 建立方便、灵敏、特异性强的针对人血红蛋白(HGB)的快速ELISA法.方法 用自制的抗人血红蛋白单克隆抗体(HGBMcAb)常规包被聚乙烯反应板,建立快速ELISA法,与愈创木酯法和免疫胶体金检测试纸法、常规ELISA法相比较,并作相关性分析.结果 动物肉类、含过氧化物酶的新鲜蔬菜、铁剂、维生素C及对化学法有干扰作用的某些药物,对此法检验结果均无影响,对消化道出血和肿瘤等疾病的诊断和检测,本法较其他方法优点明显,易于推广.结论 本法特异性强、灵敏度高、稳定性好、简易快速、无需特殊仪器设备,有广泛的应用价值.     

Studies on neurosteroids XV. Development of enzyme-linked immunosorbent assay for examining whether pregnenolone sulfate is a veritable neurosteroid

An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) of pregnenolone sulfate (PREGS) has been developed for examining whether it is a veritable neurosteroid. 11-Hemiglutaryloxy-PREGS was newly synthesized and conjugated with bovine serum albumin (BSA), which was injected to rabbits for the production of anti-PREGS antibodies. A bridge-heterologous ELISA system employing the sequential saturation method exhibited a high sensitivity with a midpoint of 30 pg. Although the antibody showed some cross-reactivity with PREG (4.4%), it easily discriminated other related steroids reported to exist in the mammalian brain. The rat brain homogenate was treated with hexane and subjected to an OASIS HLB cartridge, which was washed with AcOEt to remove the unconjugated steroids, and then the desired sulfate was eluted with EtOH. The recovery rate of PREGS through the pretreatment was satisfactory, but its brain levels in the preliminary experiments were much lower than those previously measured by gas chromatography (GC)–mass spectrometry (MS) after solvolysis. These results practically agreed with our previous results by liquid chromatography (LC)–electrospray ionization (ESI)–MS without deconjugation.     

以精子抗原肽为抗原的抗精子抗体ELISA检测方法的建立

目的建立组合多个精子抗原肽为抗原的检测抗精子抗体的酶联免疫吸附测定(ELISA)法。方法用PS3全自动多肽合成仪合成4个特异精子肽,并经反相高效液相色谱(RP-HPLC)纯化和质谱鉴定。用ELISA检测4个合成肽的抗原性,基于对这些合成肽抗原活性的评价,将4个精子抗原肽混合后(组合肽)作为抗精子抗体(AsAb)检测用抗原。结果合成了实验所需要的抗原性肽段,RP-HPLC结果显示纯度达95%以上。以组合肽为抗原建立的检测AsAb的间接ELISA方法,与商品化试剂盒相比符合率为95.6%。结论固相多肽合成技术可用于合成高纯度的精子抗原肽,以组合的精子抗原肽作为包被抗原建立的ELISA方法可提高AsAb检测的灵敏度。     

核酸检测与酶联免疫吸附试验在血液标本内乙肝病毒检测中的价值

目的 研究核酸检测(NAT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)在血液标准内乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)检测中的价值.方法 20140例无偿献血者的血液标本为研究对象,先进行ELISA检测,对ELISA无反应性的标本再进行NAT,跟踪随访并分析检测结果.结果 20140份血液标本中,ELISA检测双试剂阳性6份,单试剂阳...     

抗人T细胞猪免疫球蛋白药代动力学检测方法的建立、验证及应用

目的 建立抗人T细胞猪免疫球蛋白（porcine anti-human T cell immunoglobulin,p-ATG）药代动力学检测方法并验证,以检测用药后患者血清总p-ATG浓度。方法 采用兔抗猪IgG F(ab')₂包被酶标板、辣根过氧化物酶标记的羊抗猪IgG作为二抗,建立人血清p-ATG含量的双抗体夹心ELISA,并验证该方法的标准曲线拟合范围、平行性、精密度、准确度、专属性。用建立的方法对13例患者的不同用药剂量的临床血样进行检测并分析药代动力学。结果 从0.44 μg/ml起始浓度稀释2¹〜2⁷倍的参考品浓度与吸光度值之间呈现S曲线,决定系数(R²)大于0.99,回收率为89.91%〜112.96%;平行性样品斜率与参考品斜率变异系数（coefficient of variation,CV）绝对值<10%,R²>0.99,R²的CV<5%;板间、板内曲线CV<10%;重复性CV<10%,回收率为94.23%〜101.80%;加标回收率均在99.87%〜104.94%之间;输注p-ATG后患者血清与健康人血清以及输注前患者血清p-ATG浓度间差异有统计学意义（F=1.48,P <0.05）。20、25、30 mg剂量用药患者的血样中,p-ATG半衰期分别为20.6、16.6、16.2 d。结论 建立的p-ATG药代动力学检测方法具有良好的重复性、准确度及专属性,可以用于p-ATG临床用药后血清浓度的检测。     

抗线粒体抗体和抗核抗体对血清抗-HIV酶联免疫吸附试验结果的影响

目的探讨抗线粒体抗体（AMA）、抗核抗体（ANA）对血清抗-HIV酶联免疫吸附试验（ELISA）结果的影响。方法根据抗-HIV ELISA阳性标本蛋白印迹法确认结果的不同分为A、B两个试验组和正常对照组，对以上三组标本进行AMA、ANA检测。结果A组AMA、ANA阳性率较正常对照组明显升高，差异有显著意义（P〈0．01）。结论抗-HIV ELISA假阳性结果的出现与AMA、ANA有关。     

ELISA法对神经生长因子在大鼠体内药代动力学的研究

目的研究神经生长因子（ＮＧＦ）在大鼠体内的药代动力学。方法制备兔抗ＮＧＦ抗体,用双抗体夹心酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）法测定大鼠血浆ＮＧＦ浓度。结果大鼠ｉｖ３２μｇ·ｋｇ－１后血药浓度时间曲线符合二室开放模型,Ｔ１／２α为０３３０ｈ,Ｔ１／２β为１５ｈ。大鼠ＮＧＦｉｍ３２μｇ·ｋｇ－１后血药浓度时间曲线符合一室一级吸收,血浆ＮＧＦ浓度达峰时间为３７１ｈ,Ｔ１／２（Ｋｅ）为４３０ｈ,２４ｈ吸收百分率为６９１％。结论ＮＧＦ肌注吸收良好,血浆ＮＧＦ浓度可在较长时间内维持在有效浓度以上。     

酶联免疫吸附试验诊断梅毒螺旋体感染的临床价值

目的 探究梅毒螺旋体(TP)感染中应用酶联免疫吸附试验(ELISA)诊断的临床价值.方法 150例疑似梅毒螺旋体感染患者,分别采用酶联免疫吸附试验及快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)进行诊断,以梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)检测结果为金标准,分析梅毒螺旋体感染阳性和阴性患者的检测结果,并对比酶联免疫吸附试验及快速...     

电化学发光法和ELISA法检测HBsAb的结果分析

目的探讨电化学发光法（ECLIA）和酶联免疫吸附实验法（ELISA）检测乙肝表面抗体的结果差异。方法选取沈阳医学院奉天医院2011年8～11月门诊和住院部送检的HBsAb为阳性的血液标本536份,分别进行ECLIA法和ELISA法进行检测,并对结果进行分析。结果ECLIA检测HBsAb在10～50IU,L时,ELISA的阳性率只有6．62％,说明ELISA方法的灵敏度不如电化学发光法高。与电化学发光法比较,ELISA方法的敏感性为41．24％,特异性为98．04％,符合率为46．64％,阳性预测值为99．50％,阴性预测值为12．99％。结论在临床常规检测标本中,电化学发光法和ELISA法检测结果相似。但电化学发光法的灵敏度高于ELlSA法。电化学发光法检测HBsAb对乙肝疫苗接种是否成功是非常有意义的。     

ELISA法对神经生长因子在大鼠体内药代动力学的研究

目的研究神经生长因子（ＮＧＦ）在大鼠体内的药代动力学。方法制备兔抗ＮＧＦ抗体,用双抗体夹心酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）法测定大鼠血浆ＮＧＦ浓度。结果大鼠ｉｖ３２μｇ·ｋｇ－１后血药浓度 时间曲线符合二室开放模型,Ｔ１／２α为０３３０ｈ,Ｔ１／２β为１５ｈ。大鼠ＮＧＦｉｍ３２μｇ·ｋｇ－１后血药浓度 时间曲线符合一室一级吸收,血浆ＮＧＦ浓度达峰时间为３７１ｈ,Ｔ１／２（Ｋｅ）为４３０ｈ,２４ｈ吸收百分率为６９１％。结论ＮＧＦ肌注吸收良好,血浆ＮＧＦ浓度可在较长时间内维持在有效浓度以上。     

血筛酶联免疫吸附法HIV-HBV-HCV阴性标本再行核酸检测的安全性分析

目的 探讨在无偿献血者血液筛选过程中,对酶联免疫吸附法(ELISA)筛查人类免疫缺陷病毒(HIV)-乙型肝炎病毒(HBV)-丙型肝炎病毒(HCV)阴性标本再实施核酸检测(NAT)的安全性.方法 选取37997例无偿献血者,对其血液样本实施ELISA检查,并针对ELISA呈阴性样本再行NAT,统计分析两次检测结果.结果 ...     

Establishment of indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of platycodin D in Radix Platycodonis

Platycodin D (PD) has been used as the quality control marker of Radix Platycodonis for its high content and various pharmacological properties. In this study, a specific polyclonal antibody against PD (PD–pAb) was developed, and PD–pAb-based indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (icELISA) was established for the detection of PD in Radix Platycodonis. The 50% inhibition concentration (IC₅₀) of PD was 2.70 μg/mL and the linearity range for PD was from 0.032 μg/mL to 100 μg/mL. No cross reactivity with PD–pAb was found in five PD analogs except for platycodin D2 (PD2, 0.93%). The average recovery of PD by icELISA was 97.14% (RSD = 1.17%). The icELISA was used for the detection of PD in different Radix Platycodonis samples and the results were confirmed by high performance liquid chromatography (HPLC). The correlation coefficient between the two assays was 0.9654. Taken together, the established icELISA might be a simple, cheap, rapid, sensitive, reliable and high-throughput method for determining the contents of PD in Radix Platycodonis.     

荧光免疫层析法和酶联免疫吸附法检测英夫利西单抗血药浓度的比较研究

目的:探讨荧光免疫层析法(fluorescence immunochromatography assay,FICA)与酶联免疫吸附法(ELISA)检测英夫利西单抗(infliximab,IFX)血药浓度结果的相关性与一致性。方法:采用已上市的IFX药物浓度测定试剂盒(荧光免疫层析法)与实验室建立的检测IFX浓度的ELISA方法测定克罗恩病患者血液样本IFX浓度。通过Spearman相关分析、Passing-Bablok回归、单样本t检验、Bland-Altman散点图和Cohen's Kappa系数等对检测结果统计分析。结果:共收集到44份血液样本,FICA和ELISA法检测IFX结果的Spearman系数为0.87(P＜0.01)。Passing-Bablok回归分析显示,FICA和ELISA法检测IFX结果的回归方程为C_FICA＝0.5071C_ELISA+0.6230。单样本t检验提示2种方法检测IFX结果差值与0有显著差异。Bland-Altman散点图显示FICA与ELISA法所测IFX血药浓度的差值中有91.43%(32/35)在一致性界限内(差值均值±1.96 SD)。对2种分析方法检测IFX结果定性分析表明一致性为68.18%(30/44),Cohen's KAppa系数为0.51。结论:FICA与ELISA法检测IFX结果高度相关,但一致性存在差异。ELISA法所测IFX浓度结果高于FICA,提示运用IFX检测结果进行临床决策时要关注检测方法。     

酶联免疫吸附法测定人血清舒芬太尼浓度

目的建立酶联免疫吸附法(EUSA)检测人血清舒芬太尼浓度。方法应用舒芬太尼试剂盒(美国Neogen公司)拟合标准曲线,测定其检测限、精密度、回收率和交叉反应率,并检测开胸手术后行舒芬太尼自控静脉镇痛(PCIA)患者的血清样本36份。结果舒芬太尼浓度为0.07～1.50μg·L~(-1)时线性良好(R~2=0.996),检测限0.06μg·L~(-1),方法回收率100.5%,日内和日间RSD分别<10%和15%,与麻醉期间常用药物的交叉反应率低,羟乙基淀粉130/0.4存在时吸光度增加。结论ELISA测定人血舒芬太尼简便、快捷,可用于临床药动学研究。     

胃癌患者血浆纤溶酶原激活剂抑制物-1活性与肿瘤转移的关系

目的:探讨胃癌患者血浆纤溶酶原激活剂抑制物-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)含量变化特点及临床意义.方法:采用酶联免疫吸附法分别测定30例胃癌患者术前和术后的PAI-1的含量,进行统计分析.结果:胃癌患者术后PAI -1含量较术前明显增高,术前术后差异有统计学意义(P＜0.05);胃癌患者Ⅰ期与(Ⅱ、Ⅲ)期相比,术前术后血浆PAI -1值均增高,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:术前术后血浆PAI-1值是否明显增高,作为评估切除胃癌组织疗效的判断指标;PAI-1含量增高与胃癌的病理分型、分期、病程有密切的关系.     

检测大肠杆菌菌体蛋白的夹心ELISA试剂盒的建立及应用研究

目的  建立特异、敏感的检测大肠杆菌菌体蛋白的夹心ELISA试剂盒。方法  采用大肠杆菌菌体蛋白免疫家兔,制备得到高效价抗菌体蛋白抗血清。将经饱和硫酸铵盐析、阴离子交换柱层析和亲和层析纯化的兔抗大肠杆菌菌体蛋白特异性多克隆抗体作为包被抗体和检测抗体,用生物素标记检测抗体,并加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素。结果　建立的大肠杆菌菌体蛋白夹心ELISA检测方法的敏感性为0.32 μg/L,检测范围为1~100 μg/L,与国际同类商品化试剂盒相当。此法具有良好的稳定性,其批内变异系数小于7.7%,批间变异系数小于6.2%。结论  建立了特异、敏感、稳定的检测大肠杆菌菌体蛋白的夹心ELISA试剂盒,为生物制品中残留大肠杆菌菌体蛋白的质量控制提供了一种重要的检测方法。     

双抗体夹心酶联免疫法检测不同样品中的蓖麻毒素

目的应用酶联免疫吸附分析方法（ELISA）检测待测样品中的蓖麻毒素。方法用蛋白G亲和层析柱纯化蓖麻毒素单克隆抗体（4C13,3D74,5E4和5H6）,以3D74及辣根过氧化物酶（HRP）标记的4C13建立的双抗体夹心ELISA对含有蓖麻毒素的多种样品进行检测。结果抗蓖麻毒素的单克隆抗体经亲和层析纯化后具有较高的蛋白纯度,应用HRP标记的4C13与3D74建立双抗体夹心ELISA,对于溶解于磷酸缓冲液中的蓖麻毒素标准品的检测灵敏度可达2．5μg·L^-1;对于土壤、面粉、牛奶、咸菜汁、雪碧、可乐和腐乳汁．中的蓖麻毒素样品检测的灵敏度为2．5-5．0μg·L^-1;与磷酸缓冲液样品相比较,含有相同浓度蓖麻毒素的小鼠和人血清样品ELISA的阳性结果明显减弱．结论双抗体奕心酶联免疫法能够有效用于含有蓖麻毒素样品的检测分析。     

孕妇血清风疹病毒抗体IgM检测的临床意义

目的探讨孕妇血清风疹病毒IgM抗体检测的临床价值。方法采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测230例孕妇血清中的风疹病毒特异性抗体IgM。结果230例中IgM阳性20例，阳性率为8．70％；多次妊娠者IgM阳性率（25．93％）明显高于初次妊娠者（6．40％）（χ^2=11．43，P〈0．05）；IgM阳性孕妇的早期流产率为31．58％（6／19），而IgM阴性孕妇的早期流产率为8．53％（11／129），两者比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论孕妇血清风疹病毒IgM抗体的测定有助于预测妊娠结局、降低先天性风疹综合征患儿的出现率。