新型阿片受体不可逆结合的激动剂—7α-二(β-氯乙基)胺基-6,14-乙烯撑基-四氢奥利文的合成

我们设计和合成了一个新的亲和标记配基:7α-二(β-氯乙基)胺基-6,14-乙烯撑基-四氢奥利文(简称α-CAO)。镇痛试验表明它的活性为吗啡的2～7倍,并具有作用时间长和毒性低等优点。经抑制豚鼠回肠纵肌(GPI)和小鼠输精管(MVD)收缩试验以及大鼠脑(去小脑)P_2膜制备的亲和力试验,发现其分别是吗啡的3、12和21倍,通过洗涤和纳洛酮反转试验证实α-CAO为阿片受点不可逆结合的激动剂。     

一种新的阿片受点不可逆激剂:7α-二(β-氯乙基)胺甲基-6.14-乙烯撑基四氢奥利文(简报)

研究阿片受点不可逆配体对阐明阿片受点的结构及发现超长效镇痛药有很大意义,日益受到国内外重视。作者对刘懋勤等1986年首次合成的7α-二(β-氯乙基)胺甲基-6.14-乙烯撑基四氢奥利文(α-CAM)进行了药理研究,结果表明它是镇痛时间很长的阿片受点不可逆激剂。①镇痛作用:小鼠侧脑室注射α     

阿片受点不可逆部分激动剂A—α—CAM的药理作用机理

N-烯丙基-7α二(β-氯乙基)胺甲基-6,14-乙烯撑四氢奥利文(A-α-CAM)是阿片受点不可逆部分激动剂,与大鼠脑P_2膜及离体组织(GPI,MVD,RVD和RbVD)均表现为不可逆结合反应。A-α-CAM对豚鼠回肠(GPI)呈完全激剂效应,IC_(50)为2.6μmol/L,反复冲洗激剂效应不消失,亦不能被纳洛酮(Nx)翻转;对小鼠输精管(MVD)呈部分激剂效应,Ke值为0.153μmol/L,对大鼠输精管(RVD)和兔输精管(RbVD)呈抗剂效应。PA_2值分别为7.4和7.7,且此抗剂效应不易冲洗除去。巯基烷化剂-N-乙基顺丁烯二酰亚胺(NEM)可使阿片受点的结合能力降低,表明其结合活性与巯基有关。用吗啡预处理P_2膜以保护其阿片受点内巯基不被NEM烷化,再反复冲洗以暴露阿片受点内巯基,A-α-CAM仍可与之形成不可逆的结合反应,表明A-χ-CAM与阿片受点内巯基形成共价结合可能是其不可逆药理作用的生化机理之一。     

阿片受体不可逆结合的部分激动剂A-α-CAO的合成

我们设计和合成了α-CAO的N-烯丙基类似物,N-烯丙基-7α-二(β—氯乙基)氨基—6,14-乙烯撑基—去甲四氢奥利文(简称A-α-CAO)。整体和离体试验研究表明它具有较高的受体亲和力,是一个新型的广谱阿片受点不可逆配体,且对不同受体亚型表现不同作用。未见成瘾倾向。     

梭曼对大鼠中枢M样受体发生直接作用吗?

应用放射配体受体结合试验观察梭曼对[~3H]QNB与大鼠脑组织匀浆和P_2膜制备结合的影响。结果显示,[~3H]QNB与P_2膜制备的结合具有受体与配体结合的典型特征:特异性与饱和性,其K_D=1.03nmol/L,B_(max)=0.16Pmol/mg蛋白,Hill系数~nH=1.0。对于[~3H]QNB与大鼠脑匀浆结合,梭曼在10~(-9)～10~(-7)mol/L浓度时对结合计数有轻度抑制,但没有实际意义,对于[~3H]QNB与大鼠脑组织P_2膜制备结合,梭曼在10~(-13)～10~(-3)mol/L范围内各浓度对结合计数均无明显影响。由此表明,梭曼对放射配体[~3H]QNB与大鼠中枢M-AChR的结合没有竞争抑制作用,从而说明梭曼不与大鼠中枢M-AChR发生直接作用。     

阿片受体不可逆配体（α—CAO）药理作用的分子学基础

阿片受体不可逆配体(α-CAO)使小鼠大脑组织内cAMP含量呈双相变化,此变化分别与α-CAO给药初期的镇痛和持续作用后的成瘾效果相一致.进一步研究证明,在给予α-CAO急性期,见小鼠大脑组织中腺苷酸环化酶活性被抑制48％,且能被纳洛酮部分拮抗,在延迟相α-CAO能使小鼠大脑组织中AC活性显著增加,可能是产生成瘾作用机制之一.成瘾形成的调节因素可能是由于CaM含量的增加.     

一个简捷的甾体5α-还原酶抑制剂体外筛选模型

通过模拟睾丸酮经甾体5α-还原酶催化,从NADPH(辅酶)中获得H~ 还原成双氢睾丸酮(DHT)这一反应,参照文献资料以酶动力学原理,分别测定反应底物NADPH和产物[~3H]-DHT含量变化的初始速率以代表酶活性,建立了“分光光度计法”和“同位素法”体外筛药模型,通过这两种模型对比,以非那甾胺为阳性对照药物,对爱普列特进行了体外模型验证研究。两种筛选模型结果一致,确定非那甾胺和爱普列特的抑制常数:用测定OD_(340)nm值的“分光光度计法”求得爱普列特抑制常数Ki=24.9±1.3nmol/L,半数抑制浓度IC_(50)=39.0 nmol/L;非那甾胺Ki=15.3±2.3 nmol/L,IC_(50)=58.6 nmol/L。用测定[~3H」-DHT dpm值的“同位素法”求得爱普列特Ki=67.4±13.2 nmol/L,IC_(50)=49.6nmol/L;非那甾胺Ki=25.0±1.9 nmol/L,IC_(50)=5.1nmol/L。该结果与国外文献中报道的爱普列特Ki=5～23 nmol/L,非那甾胺Ki=23.6 nmol/L相接近。     

新型阿片受体配基的生物鉴定

目的研究新合成的阿片受体配基对μ阿片受体的激动作用.方法采用生物鉴定的方法,检测新型阿片受体配基、DAMGO和吗啡对豚鼠回肠(GPI)纵行肌收缩的抑制作用和所激动的阿片受体亚型,评价效价强度,测定IC50值.结果新型阿片受体配基、DAMGO和吗啡都可抑制GPI的电刺激收缩,在GPI上显示纯激动剂作用.新型阿片受体配基与阿片受体的结合为可逆性结合.新型阿片受体配基1#、2#、3#、6#、8#、9#和12#以及典型的阿片受体激动剂DAMGO和吗啡的IC50值分别为(11.57±0.71)、(1255.00±407.00)、(9.40±1.41)、(240.60±146.40)、(453.00±7.07)、(130.60±10.61)、(7.68±0.71)、(12.04±0.61)和(72.15±22.63)nmol/L.竞争性拮抗剂纳洛酮可拮抗配基的激动作用,使新型阿片受体配基、DAMGO和吗啡的量效曲线平行右移.结论新型阿片受体配基可激动μ阿片受体,是典型的μ受体激动剂.     

TNFα对体外培养的人脂肪细胞葡萄糖摄取和IRS-1酪氨酸磷酸化的影响

[目的]探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)对体外培养的人脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取和胰岛素受体底物1(IRS-1)酪氨酸磷酸化的影响,为多囊卵巢综合征(PCOS)的胰岛素抵抗(IR)病因学研究提供新的实验依据.[方法]脂肪细胞葡萄糖摄取的测定采用3H标脱氧右旋葡萄糖(2-[3H]DG)吸收法,IRS-1酪氨酸磷酸化的检测采用免疫沉淀、Western印迹和增强化学发光蛋白免疫印迹法及图像分析.[结果]①胰岛素(100nmol/L)作用下,TNF α刺激浓度分别为0、5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL时,脂肪细胞2-[3H]DG的摄取分别为(652±203)U,(609±172)U,(511±135)U和(404±168)U,当TNFα刺激浓度达20 ng/mL时,脂肪细胞对葡萄糖摄取的降低有显著性差异(P＜0.05).②胰岛素(100nmol/L)刺激下IRS-1的酪氨酸磷酸化在TNFα(5 ng/mL)作用时(74.50%±16.86%)较无TNFα作用(94.00%±14.70%)有所降低,但无显著性差异;当TNFα刺激浓度分别为10 ng/mL(31.16%±10.44%)和20 ng/mL(27.33%±9.63%)时,胰岛素(100nmol/L)刺激后IRS-1的酪氨酸磷酸化明显降低(P＜0.001).[结论]①TNFα刺激浓度的升高可抑制体外培养的人脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取.②TNFα可抑制体外培养的人脂肪细胞胰岛素刺激的IRS-1的酪氨酸磷酸化,并存在一定的量效关系,可能阻碍了胰岛素的受体后信号传导并与IR有关.     

大白鼠肾缺血时α_1肾上腺素受体的改变

作者通过肾α_1受体拮抗剂[3H]Prazosin,采用放射配体结合分析法观察大白鼠缺血60min时肾脏α_1肾上腺素受体的变化。结果发现大白鼠肾α_1受体具有高、低亲和力两个位点。正常组高亲和力位点的平衡解离常数Kd_1为0.185±0.022nmol/L,[~3H] Prazosin的最大结合量Bmax_1为3.298±0.131nmol/mg蛋白;     

山莨菪碱抑制酵母多糖刺激小鼠巨噬细胞释放前列腺素及白三烯

酵母多糖刺激[~3H]AA预标的小鼠腹腔巨噬细胞可释放[~3H]AA代谢物LTC_4,LTB_4,TxB_2,6—keto—PGF_(1α)及PGE_2。山莨菪碱可以显著抑制上述刺激释放作用。使总~3H释放量及各[~3H]AA代谢物释放量均显著减少,这种抑制作用随山莨菪碱剂量增加而增强。当其浓度为0.5mmol/L时,总~3H释放量下降     

氚标记阿片受体配基N-烯丙基-6,14-内乙烯撑基-7α-二(β-氯乙基)胺甲基四氢奥利文的制备

N-烯丙基-6,14-内乙烯撑基-7α-二(β-氯乙基)胺甲基四氢奥利文(简称A-α-CMO)是新设计合成的阿片受体不可逆配基。本文以蒂巴因为原料通过八步有机合成反应制得A-α-CMO的炔丙基前体(Ⅵ),然后通氚气部分还原反应制备~3H-A-α-CMO,经氚核磁共振测定,氚标记位置在N-烯丙基上。纯化后,~3H-A-α-CMO的放化纯度为96％以上,放射性比度为1.332TBq/mmol,初步放射受体分析显示,特异结合与非特异结合之比为5.6:1。     

山莨菪碱(654-2)抑制M-、α1-及α2-受体结合(简报)

临床经验提示,山莨菪碱(654-2)对心血管系统功能有比较明显的影响,但确切的作用机理尚未充分阐明。鉴于654-2的结构与经典的M-阻断剂阿托品相似,我们应用放射性配基结合试验检测了654-2对M-;α_1-、α_2-及β-受体结合的影响,并与阿托品,酚妥拉明,心得安等进行了比较。实验结果经计算机拟合,654-2阿托品及酚妥拉明抑制~3H-QNB与鼠心M-受体结合的IC_(50)分别为4.41×10~(-7),1.44×10~(-8)及2.60×10~(-8)抑制~3H-Prazosin与鼠心α_1-受体结合的IC_(50)分别为2.34×10~(-5),1.20×10~(-5)及5.70×10~(-8)M;抑制~3H-yohimbine     

核苷酸对大鼠心肌[3H]格列本脲结合位点的影响

目的：研究核苷酸类物质对心肌膜[^3H]格列本脲([^3H]Gli)特异性结合位点的影响。方法：制备心肌膜标本，采用竞争结合和／或动力学试验，分别研究ATP、ADP、UDP、AMP和腺苷(Ade)等核苷酸物质对心肌[^3H]Gli结合特性的影响。结果：[^3H]Gli与心肌膜标本呈特异性、可逆性结合，非标Gli可剂量依赖性地取代[^3H]Gli与心肌膜标本的结合，IC50值为195nmol／L。在相同条件下，ATP、ADP和LIDP均可抑制[^3H]Gli结合，IC50值分别为1．68、O．80和2．08mmol／L，；而AMP和Ade对心肌[^3H]Gli结合无明显影响。动力学试验表明：[^3H]Gli与心肌膜标本的结合和解离均符合一级动力学，ATP、ADP和UDP能减慢[^3H]Gli与心肌膜结合，并降低最大结合容量，但不影响解离动力学过程。结论：ATP、ADP和UDP可诱导SUR构象的改变，从而对心肌[^3H]Gli特异性结合位点具有负性变构调节作用。     

5α-双氢睾酮对前列腺癌LNCaP细胞钙离子移动和细胞生长的影响

目的:探讨5α-双氢睾酮(DHT)对前列腺癌LNCaP细胞钙离子移动的影响及其机制.方法:应用Fura-2/AM Ca2 荧光探针法结合MiraCal荧光成像系统动态检测DHT刺激以及Ca2 通道阻滞剂干预后LNCaP细胞内钙离子浓度(Ca2 ]i) 的变化.应用MTT法观察细胞活力.流式细胞仪观察早期细胞凋亡率.结果:DHT浓度为1、10、100和1000 nmol/L时,能快速诱导[Ca2 ]i升高,在20 s～3 min升至峰值.细胞外液无(Ca2 ,1000 nmol/L DHT未能诱导[Ca2 ]i升高.细胞膜L一型电压门控Ca2 通道阻滞剂维拉帕米(50 ìmol/L)、地尔硫革(100 ìmol/L)或硝苯地平(5 mmol/L)37℃孵育细胞5 min后,能完全抑制1 000 nmol/L DHT诱导的[Ca2-]i升高.磷脂酶C抑制剂新霉素(1mmol/L)37℃孵育细胞5min或兰尼定受体阻滞剂普鲁卡因(50 mmol/L)37 C孵育细胞3 min后.对1 000 nmol/L DHT诱导的[Ca2 ]i升高没有影响.1000 nmol/LDHT作用细胞48 h后,与1 000 nmol/L DHT作用前用维拉帕米预孵细胞相比.细胞光密度(D)值[(0.67士0.10)VS(2.13士0.16))和早期细胞凋亡率[(14.3l±2.29)%VS(1.07士0.1 9)%]差异有统计学意义(P<0.01).结论:DHT可快速地、剂量依赖性地诱导I.NCaP细胞[Ca2 ]i升高;DHT诱导的LNCaP细胞[Ca2 ]i的升高是通过细胞外Ca2 经细胞膜L-型电压门控Ca2 通道流入细胞内实现的.细胞内贮钙库未释放Ca2 .DHT诱导的LNCaP细胞[Ca2 ]i升高促进细胞凋亡、抑制细胞生长.     

电刺激孤束核对大鼠心脏伤害性感受的作用及其脊髓机制的探讨

目的 观察电刺激孤束核(nucleus tractus solitarius,NTS)对心包内注射辣椒素诱发的心脏-躯体运动反射(cardiac-somatic motor reflex,CMR)的影响,以及脊髓鞘内注射受体拮抗剂对NTS这一电刺激效应的影响,探讨参与NTS对心脏伤害性信息调控的脊髓机制.方法 SD大鼠随机分为电刺激组、对照组、育亨宾组、纳洛酮组.分别单独电刺激NTS或电刺激NTS结合脊髓鞘内注射溶媒、生理盐水、去甲肾上腺素α2受体阻断剂(育亨宾)或阿片受体阻断剂(纳洛酮),观察以背斜方肌肌电(electromyogram,EMG)活动为指标的CMR变化.结果 与对照比较,电刺激(10、20、50μA)NTS,CMR呈强度依赖性的减少(P＜0.05);鞘内注射育亨宾的溶媒或生理盐水10 μL,对20 μA电刺激的抑制效应没有明显影响(P＞0.05);鞘内注射育亨宾(20、50μg)或纳洛酮(50、100 μg),电刺激对CMR的抑制效应被翻转(P＜0.05);鞘内注射小剂量的纳洛酮(10μg),使电刺激对CMR的抑制效应增强(P＜0.05).结论 电刺激NTS对心脏伤害性感受信息有下行抑制作用,脊髓的α2去甲肾上腺素受体和阿片受体介导NTS的下行抑制作用,小剂量的纳洛酮对该下行抑制有协同作用.     

在心肌细胞中核转录因子E47与α-平滑肌肌动蛋白的关系初探

目的:观察缺氧/复氧(H/R)刺激对心肌细胞核转录因子E47及α-平滑肌肌动蛋白(SMA)表达影响及两者间关系,以探索H/R刺激对心肌纤维化影响。方法:用原代心肌细胞和心肌细胞株(H9c2)建立H/R模型,观察不同H/R时间点E47和α-SMA表达。用凝胶迁移实验在E47表达最高时间点检测其与α-SMA启动子E-box序列的结合活性。结果:E47蛋白及m RNA表达水平在原代心肌细胞和H9c2 H/R后均表达增高,以H3 h/R2 h时间点最高,随着复氧时间的延长,E47表达逐渐降低,而α-SMA及m RNA表达水平则无明显变化;即在心肌细胞E47与α-SMA启动子E-box序列无结合活性。结论:在心肌细胞中,E47与包含α-SMA启动子序列的E-box序列CAr G无结合活性,H/R诱导其短时表达增高并不能引起α-SMA表达增高。     

新型钒配合物双(α-呋喃甲酸)氧钒的降糖作用及机理分析(摘要)

目的双(α-呋喃甲酸)氧钒(VO-FA)系课题组自行设计合成的一种新型有机羧酸氧钒配合物·本实验旨在研究其对四氧嘧啶性糖尿病小鼠的降糖作用,初步探讨其降糖作用机理·方法采用小鼠尾静脉注射四氧嘧啶60 mg·kg造成糖尿病动物模型,观察VO-FA灌胃给药对四氧嘧啶性糖尿病小鼠和正常小鼠血糖水平的影响·利用2-脱氧-D-[3H]葡萄糖和D-[3H]葡萄糖作为示踪物,观察VO-FA对大鼠脂肪细胞摄取葡萄糖及合成脂质的作用;采用肾上腺素刺激脂肪细胞释放游离脂肪酸以测定VO-FA对脂肪分解的影响·结果VO-FA(28·9mg/(kg·d),59·8 mg/(kg·d)灌胃给…     

手性钌配合物Δ-[Ru(bpy)2IPBP]2+的合成及其细胞毒作用

目的采用Δ-[Ru(bpy)2(py)2][o,o′-dibenzoyltartrate].12H2O和3-醛基色酮为原料,制备手性钌多吡啶配合物Δ-[Ru(bpy)2IPBP]2 (Δ-1)(bpy=bipyridine,IPBP=2-(4-甲苯并吡喃-2-酮)咪唑[4,5-f][1,10]菲咯啉),并对其体外抗肿瘤活性进行初步评价。方法采用元素分析,电喷雾质谱(ESI-MS),核磁共振(NMR)等对目标化合物进行了表征,并采用MTT法初步研究了配合物Δ-1对人肝癌细胞Bel-7402,肺腺癌细胞HCT-8有明显的抑制作用。结果与结论目标化合物的元素分析、电喷雾质谱实验结果与理论值基本一致;当配合物浓度为50μg/mL时,配合物Δ-1对人肝癌细胞Bel-7402,肺腺癌细胞HCT-8有明显的抑制作用。     

胆囊收缩素对抗维生素B_(12)的镇痛作用

本文报道了胆囊收缩素(CCK)对抗维生素B_(12)(VitB_(12))的镇痛作用。结果表明,采用小剂量(ng级)侧脑室注射CCK-8,可明显对抗VitB_(12)的镇痛作用,而且表现有剂量效应关系。从而证明小剂量CCK-8在痛觉调制中,有较强的抗阿片的镇痛作用;从另一角度证明,VitB_(12)的镇痛作用是通过与脑内阿片受体结合而实现的。