转染MIP-1α和B7-1基因增强小鼠抗淋巴瘤效应的初步研究

【摘要】 目的 观察转染趋化因子MIP-1α和共刺激分子B7-1基因增强小鼠抗淋巴瘤的效应。方法 将MIP-1α和B7-1基因慢病毒重组载体转染小鼠EL-4淋巴瘤细胞,应用RT-PCR检测MIP-1α和B7-1基因mRNA表达,Western blot法检测MIP-1α和B7-1蛋白表达;转基因EL-4细胞注入小鼠右腋皮下,观察成瘤情况;灭活的转基因EL-4细胞注入成瘤小鼠体内,观察其增强小鼠抗淋巴瘤效应。结果RT-PCR检测发现EL-4/MIP-1α+B7-1细胞内有MIP-1α及B7-1mRNA表达,Western blot显示MIP-1α及B7-1蛋白表达;MIP-1α组、B7-1组较对照组成瘤时间延长,成瘤率降低,肿瘤平均体积较小,而联合组成瘤性消失;MIP-1α和B7-1治疗组的肿瘤平均体积、重量及肿瘤器官转移率明显小于对照组（P＜0.05）,而联合组的肿瘤平均体积及重量明显小于MIP-1α和B7-1组（P＜0.05）,而且联合组小鼠平均生存期,均较单基因组、对照组明显延长（P＜0.05）。结论 转染MIP-1α和B7-1基因能够明显增强小鼠机体抗淋巴瘤效应,明显延长荷瘤小鼠的平均生存期,为淋巴瘤的基因治疗提供了新的思路。     

重组表达小鼠MIP-1α和B7-1基因的慢病毒载体的构建及鉴定

目的 构建重组表达小鼠MIP-1α和B7-1基因的慢病毒载体,为淋巴瘤基因治疗的实验研究奠定基础.方法 设计引物扩增获得目的基因小鼠MIP-1α和B7-1基因的全长编码序列cDNA,将目的基因与经酶切线性化的慢病毒载体进行定向连接,其产物转化感受态细胞,对长出的阳性克隆进行PCR鉴定和直接测序序列分析.MIP-1α和B7-1目的基因质粒转染293T细胞,观察绿色荧光蛋白(GFP)表达,采用Western Blot法检测其蛋白表达,实时荧光定量PCR,检测慢病毒浓缩液的滴度.结果 成功构建了重组表达小鼠MIP-1α和B7-1基因的慢病毒载体,实时荧光定量PCR证实MIP-1α、B7-1基因重组慢病毒载体的滴度均达2.00E+8 TU/mL.结论 本研究成功构建并包装出高滴度的小鼠MIP-1α和B7-1基因重组慢病毒载体,为淋巴瘤基因治疗的实验研究奠定了基础.     

重庆地区汉族人群HLA-A、B、DRB1、DQB1等位基因多态性的研究

目的 研究重庆地区人群HLA-A、B、DRB1和DQB1位点等位基因的多态性特点.方法 采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)技术对1 664名重庆籍健康人进行HLA-A、B、DRB1、DQB1等位基因的低分辨分型,并与国内其他地区汉族人群进行比较.结果 本次研究共检出HLA-A、B、DRB1、DQB1位点等位基因62种,其中A位点14种,B位点27种,DRB1位点13种,DQB1位点8种.A位点中A*11(34.62%)、A*02(28.81%)、A*24(14.93%)、A*30(5.53%)为重庆人群的优势基因.B位点中B*46(14.92%)＞B*40(12.96%)＞B*13(12.39%)＞B*51(7.26%).DRB1位点中,频率最高的为DRB1*09(15.65%),其次为DRB1*12(14.78%)、DRB1*14(14.49%)、DRB1*04(14.49%).DQB1位点中,频率最高的为DQB1*07(26.04%),其次为DQB1*05(19.94%)、DQB1*09(15.51%).与其他地区不同人群相比,HLA-A、B、DRB1、DQB1各位点等住基因的分布均有显著的差异.结论 重庆地区人群的HLA-A、B、DRB1、DQB1位点等住基因符合南方汉族人群分布特点,具有复杂的多态性,中国各地常见的基因均有分布,白血病及其他器官移植患者在重庆不难找到合适的供者.     

CYP1B1基因多态性与紫杉醇不良反应的相关性研究

目的探讨肿瘤患者CYP1B1基因多态性与紫杉醇不良反应的关系。方法选择我院2016年1月～2018年5月接受紫杉醇化疗的肿瘤患者52例作为研究对象,检测其CYP1B1基因型,并观察、收集、记录其不良反应发生情况,分析患者的不良反应发生和基因多态性的相关性。结果本研究共检测了27个基因位点,仅11个基因位点发生突变,其余16个基因位点均为野生型。其中,在CYP1B1*2/*5/*6/*7(142 CG)和CYP1B1*2/*6/*7(355GT)基因多态性中,野生型基因患者的白细胞减少不良反应发生率高于突变型基因,差异有统计学意义(P0.05);其余不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 CYP1B1基因多态性与紫杉醇的不良反应具有一定的相关性。     

广西壮族人群HLA-A、B、DRB1基因多态性与神经纤维瘤病Ⅰ型相关性研究

目的:探讨广西壮族人群的HLA-A、B、DRB1基因多态性与神经纤维瘤病Ⅰ型的相关性。方法:选取25例广西壮族神经纤维瘤病Ⅰ型患者作为病例组,98例壮族健康个体为对照组,应用直接测序法(sequence-based typing,SBT)比较两组HLA-A、B、DRB1基因多态性有无差异。结果:病例组的A*2601、B*1518、DRB1*0406、DRB1*1032的频率显著高于对照组(P<0.05)。结论:广西壮族神经纤维瘤病Ⅰ型患者HLA-A、B、DRB1的等位基因频率均与广西壮族正常人群不同。     

儿童急性白血病生存素和细胞周期素B1基因表达

目的:探讨基因生存素,细胞周期素B1的表达与儿童急性白血病(AL)的关系. 方法:采用RT-PCR对初治或复发AL患儿42例和完全缓解AL(AL-CR)患儿13例及非恶性疾病患儿15例骨髓单个核细胞进行基因生存素,细胞周期素B1表达的检测. 结果:初治和复发AL组生存素 mRNA表达水平分别为0.472和0.810,细胞周期素B1 mRNA为0.609和0.739,均高于AL-CR组(0)和对照组(0)(P＜0.01);复发AL组生存素 mRNA表达水平高于初治组,有统计学差异(P=0.025). 生存素基因的表达与白细胞总数及临床分型有关,与性别、年龄、免疫分型无明显相关性. 细胞周期素B1表达与性别、年龄、免疫分型、白细胞总数及临床分型无明显相关关系. 儿童AL中生存素与细胞周期素B1的表达呈正相关. 生存素 mRNA表达水平高者缓解率低. 结论:儿童AL中存在生存素,细胞周期素B1异常表达,两者表达存在相关性. 生存素是AL复发的高危因素;AL 生存素高表达者可以降低AL的化疗敏感性,生存素水平对AL有判断疗效和预后的价值.     

NF-κB核定位基序促进SDF-1α质粒转染的入核效率

目的:观察核因子κB(NF-κB)的核定位基序与目的基因质粒重组后,对目的基因转染入核效率的影响。方法:构建含NF-κB核定位基序的人基质细胞衍生因子1α质粒(phSDF-1α-NF-κB),用Cy3核酸荧光染料标记后用聚乙烯亚胺(PEI)转染人脐静脉血管内皮细胞,以不含NF-κB核定位基序的人基质细胞衍生因子1α质粒(phSDF-1α)作对照,比较二者的入核效率和表达效率,以评价NF-κB核定位基序对SDF-1α基因入核和转染的影响。结果:phSDF-1α-NF-κB转染组和phSDF-1α转染组胞核和细胞内Cy3荧光强度比分别为(72±15)%和(12±6)%,二者差异有统计学意义(P<0.01);ELISA结果显示前者SDF-1α蛋白表达量是后者4倍。结论:NF-κB核定位基序能显著促进SDF-1α质粒转染的入核效率,从而提高基因表达水平。     

HNF1A和HNF1B基因遗传变异与乳腺癌遗传易感性的关联研究

目的：研究肝细胞核因子（hepatocyte nuclear factor 1,HNF）1A和HNF1B基因遗传变异与乳腺癌遗传易感性之间的相关性。方法：采用病例对照研究,选取1 032例经病理组织学确诊的乳腺癌患者以及与之相匹配的1 063例健康女性对照,应用Illumina基因分型平台对HNF1A和HNF1B基因多态位点进行基因分型检测;在调整年龄、初潮年龄、绝经状态的基础上,通过Logistic回归计算OR值及95%CI,比较不同基因型与乳腺癌发病风险之间的相关性。结果：位于HNF1A基因上的3个位点与中国人群乳腺癌发病风险显著相关,其中包括HNF1A基因外显子区的rs2464196（OR=0.80,95%CI：0.71~0.91,P=7.45×10-4）,HNF1A基因内含子区的rs1183910（OR=0.87,95% CI：0.77~0.99,P=0.039）和rs7310409（OR=0.86,95% CI：0.76~0.98,P=0.023）。进一步FDR校正后,rs2464196位点与乳腺癌易感性仍然存在着显著的相关性（P=4.47×10-3）。结论：肝细胞核因子HNF1A基因上的rs2464196多态位点可能是中国人群乳腺癌的易感标志物。     

共染MIP-1α与B7-1诱导乳腺癌大鼠免疫应答能力的研究

目的探讨共染MIP-lα与B7-1诱导乳腺癌大鼠的免疫应答能力。方法采用SHZ-88乳腺癌细胞造模;每日观察SD大鼠接种乳腺癌细胞后有无肿瘤生长;将荷瘤大鼠随机分成对照组、MIP-1α组、B7-1组和联合组注射对应的转基因细胞进行治疗,分别在1~4周观察肿瘤体积变化和生存时间,收集大鼠外周血检测CD4+、CD8+百分比和CD4+/CD8+比值以及白细胞介素2(IL-2)、人γ干扰素(IFN-γ)水平并进行比较。结果对SD大鼠分别接种SHZ-88、SHZ-88/MIP-1α、SHZ-88/B7-1及SHZ-88/MIP-1α+B7-1细胞10d后,各组的致瘤率分别为100%、20%、30%及0%;对照组、MIP-1α组、B7-1组和联合组注射对应的转基因细胞治疗后,联合组的肿瘤体积在1~4周均明显小于其他组,生存时间明显长于其他组,外周血CD4+、CD8+百分比和CD4+/CD8+比值以及IL-2、IFN-γ水平均明显高于其他组,以上比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论共染MIP-lα与B7-1,可诱导乳腺癌大鼠机体的免疫应答能力,起到抗肿瘤的作用。     

CYP1B1基因多态性与食管鳞状细胞癌易感性及预后关系的研究

目的 探讨CYP1B1基因C432G及A453G两个多态性住点分布频率特征与食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)之间的相关性;分析其与临床病理指标及预后的关系.方法 以河北医科大学第四医院2004年间120例有完整随访资料的ESCC患者术后石蜡包埋组织为研究对象,以120例内镜检查的食管正常组织标本作为对照组,酚氯仿法抽提基因组DNA,PCR-SSP法检测CYP1B1基因C432G及A453G两个多态性位点基因型分布频率,分析各基因型与ESCC患者临床病理特征及其发病风险的相关性.COX回归模型进行多因素生存分析,Kaplan-Meier生存曲线进行单因素生存分析,Log-Rank法比较各基因型5年生存率的差别.结果 CYP1B1 A453G位点不具多态性;CYP1B1 C432G基因CC、CG、GG基因型在ESCC患者组与对照组的分布频率分别为67.50％、18.33％、14.17％和74.17％、17.50％、8.33％,无明显统计学差异(P＞0.05).G等位基因携带者患病风险是CC基因型.的1.477倍(OR=1.477,95％ CI=0.942～2.317).临床病理特征分析结果显示CYP1B1 C432G基因CG、GG基因型在有淋巴结转移组和临床分期较晚组分布频率较高.Kaplan-Meier单变量分析结果表明CG+GG基因型患者5年生存率明显低于CC基因型患者.而COX模型多因素生存分析结果提示CYP1B1 C432G基因多态性与ESCC5年生存率无关. 结论 食管癌组和对照组CYP1B1 A453G等位基因多态性均为AA基因型,中国河北汉族人群此位点可能不存在多态性.C432G等位基因具有多态性.CYP1B1 C432G基因多态性可能与增加ESCC的易感性无关联,但与ESCC患者是否有淋巴结转移和临床分期相关,CG+GG基因型可能是预测ESCC患者不良预后的辅助指标.     

HOXB1基因转染对HL-60细胞视黄酸代谢和α-干扰素表达的影响

目的探讨同源盒基因B1(HOXB1)转染对HL-60细胞视黄酸代谢和α-干扰素表达的影响.方法采用脂质体介导的质粒转染、RT-PCR及高效液相色谱(HPLC)分析等方法进行分析检测.结果 2.5×10-7 mol/L全反式视黄酸(ATRA)能抑制HOXB1转染及非转染HL-60细胞的增殖,HOXB1的高表达能明显减弱ATRA对HL-60细胞的增殖抑制作用;HPLC分析显示,转染细胞ATRA的代谢减慢;ATRA处理能诱导HOXB1转染及未转染HL-60细胞IFNα表达,加用外源性IFNα能上调ATRA处理HL-60细胞IFNα基因表达.结论 HOXB1转染使HL-60细胞ATRA代谢受抑,ATRA增殖抑制作用减弱,外源性IFNα能上调HL-60细胞IFNα表达.     

SH2B1基因多态性与妊娠糖尿病的相关性研究

探讨SH2 B1基因多态性与妊娠糖尿病患者胰岛素抵抗的关系。方法选取164 例妊娠期糖尿病（GDM）患者和130 例糖耐量正常孕妇。采用限制性片段多态性聚合酶链反应检测SH2B 1 基因型,并且分析相关临床资料。结果GDM 组SH2B 1（rs4788102）基因 GA型与 GG 型比较,差异有统计学意义[OR=1.531,（95%CI：1.093,2.374） =0.04],A等位基因频率与G 等位基因频率比较,差异有统计学意义[OR=1.436,（95%CI：1.091,1.972） =0.01]。GDM 组 + 基因型与 基因型比较,差异有统计学意义 [OR=1.699,（95%CI：1.185,2.479） =0.02]。GDM 组中+ 基因型体重指数、三酰甘油、瘦素及稳态模型评估胰岛素抵抗指数与基因型比较,差异有统计学意义（ p<0.05）。经Logistic回归分析显示,GA +AA 基因型为稳态模型法测定胰岛素抵抗指数升高的危险因素。结论SH2B 1（rs4788102）基因多态性可能是GDM的一个易感位点,监测孕妇该基因位点,可以用于GDM 发生风险的预测。     

飞行人员代谢综合征患者PGC-1α基因Gly482Ser位点多态性研究

摘要：目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体-1协同刺激因子-1α（peroxisomeproliferators—activatedreceptor-1coacti—vator-1α,PGC-1α）基因Gly482Ser位点多态性与飞行人员代谢综合征（metabolicsyndrome,MS）的相关性。方法采用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性技术检测42名MS飞行人员和42名健康对照飞行人员PGC-1α基因Gly482Ser位点的多态性。结果飞行人员MS组PGC-1α基因Gly482Ser位点GG、GA及AA基因型构成与对照组存在统计学差异（P〈0．05）（在MS组为28．6％、45．2％和26．2％,而在对照组为52．4％、38．1％和9．5％）,且MS组A等位基因频率明显高于对照组俨〈0．01）（在MS组为48．8％,在对照组为28．6％）。结论PGC-1α基因Gly482Ser位点多态性可能与飞行人员MS相关,A等位基因可能为一个易感基因。     

宁夏汉族Graves病与CYP27B1基因启动子-1260C/A多态性相关性研究

目的探讨CYP27B1(Cytochromo P450 CYP)基因启动子C-1260A位点多态性与宁夏汉族Graves病(GD)的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction restriction frag-ment length polymorphism,PCR-RFLP)技术,分析汉族GD 99例和正常对照83例CYP27B1基因启动子-1260C/A多态性。结果宁夏汉族CYP27B1基因-1260C/A检出GD组与对照组的基因型频率分别为37.37%、53.54%、9.09%和43.37%、40.96%、15.66%,两组差异无统计学意义(χ2=4.19,P>0.05);等位基因频率为64.16%、35.86%和63.86%、43.14%,两组差异无统计学意义(χ2=0.00,P>0.05)。结论 CYP27B1基因1260C/A的与宁夏地区汉族GD无相关性。     

宁夏汉族Graves病与CYP27B1基因启动子-1260C/A多态性相关性研究

目的探讨CYP27B1（Cytochromo P450 CYP）基因启动子C-1260A位点多态性与宁夏汉族Graves病（GD）的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（polymerase chain reaction restriction frag-ment length polymorphism,PCR-RFLP）技术,分析汉族GD 99例和正常对照83例CYP27B1基因启动子-1260C/A多态性。结果宁夏汉族CYP27B1基因-1260C/A检出GD组与对照组的基因型频率分别为37.37%、53.54%、9.09%和43.37%、40.96%、15.66%,两组差异无统计学意义（χ2=4.19,P〉0.05）;等位基因频率为64.16%、35.86%和63.86%、43.14%,两组差异无统计学意义（χ2=0.00,P〉0.05）。结论 CYP27B1基因1260C/A的与宁夏地区汉族GD无相关性。     

IL-1B及IL-1ra基因多态性与胃癌易患性的相关性研究

目的：研究白细胞介素-1（IL-1）B和IL-1受体拮抗剂（IL-1ra）基因多态性与胃癌易患性的关系。方法：应用基因芯片、聚合酶链式反应（PCR）和PCR．限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术对65例胃癌患者和71例健康对照IL-1B-31和-511及IL-1ra基因多态性进行了分析。结果：与对照组相比,胃癌患者IL-1B-31T／T携带者、IL-1B-511C／C携带者显著增加（χ^2=6．014,P〈0．01;χ^2=9．533P〈0．001）。其他等位基因或基因型未见差异。结论：胃癌的易患性与IL-1B-31TT和IL-1B-511CC基因型可能有关。     

PGC-1α基因Gly482Ser多态性与2型糖尿病的相关性研究

目的了解云南省昆明地区PGC-1α基因Gly482Ser多态性与2型糖尿病的相关性.方法采集430例2型糖尿病患者(T2DM)和431例OGTT正常的健康志愿者(NGT)的血样,提取基因组DNA.应用高分辨率熔解曲线方法 (HRM)分析PGC-1α基因Gly482Ser基因型,观察T2DM人群中基因型和等位基因的分布情况.结果 PGC-1α基因Gly482Ser AA基因型及G等位基因在T2DM组中的频率分别为0.209和0.587,在NGT组中为0.139和0.651,2组之间差异有统计学意义(P<0.05).结论 PGC-1α基因Gly482Ser多态性与云南省昆明地区2型糖尿病相关.     

组成型αB晶体蛋白在热休克蛋白核转录因子1敲除小鼠心肌中的表达

目的:了解热休克蛋白核转录因子1(HSF1)对小鼠心肌组成型αB晶体蛋白(αB-Crystallin,αBC)表达的影响.方法:用western blot和免疫组织化学的方法,测定组成型αBC在HSF1基因野生型(hsf1+/+)和HSF1基因敲除型(hsf1-/-)小鼠心肌中的表达.结果:αBC在hsf1-/-和hsf1+/+小鼠心肌表达量分别为68.42±4.16和100.00±7.58(心肌可溶性组分,P＜0.05),20.35±1.01和37.55±1.91(心肌不可溶性组分,P＜0.05);免疫组化显示αBC在hsf1-/-心肌细胞内的表达信号较hsf1+/+明显减弱.结论:HSF1基因是介导组成型αBC基因表达重要的、但不是惟一的因子.     

肝癌组织PTEN基因及其相关因子HIF-1α表达的研究

目的:研究肝癌中PTEN基因及其相关因子HIF-1α的表达与肝癌发生发展之间的关系。方法:应用RT-PCR法检测37例肝癌癌灶及非癌组织中PTEN基因mRNA表达,并通过凝胶图像系统分析其相对表达量。同时采用免疫组化方法分析肝癌组织中PTEN及HIF-1α蛋白的定位和表达。结果:RT-PCR检测PTENmRNA表达率癌灶为48.65%(18/37),非癌组织表达为100%(37/37)。PTEN基因在癌灶组织中表达显著低于非癌(P<0.001)。免疫组化检测肝癌癌灶组织中PTEN蛋白表达率为37.84%(14/37),显著低于非癌组织(P<0.001),且多为弱表达;HIF-1α蛋白表达率为97.30%(36/37),且多为强表达,两者呈负相关(r=-0.8755)。结论:PTEN基因下调或缺失可能诱导HIF-1α的过度表达,与肝癌的发生发展密切相关。