免疫酶技术在修饰的安卡拉痘苗病毒感染性滴度检测中的应用

 修饰的安卡拉痘苗（modified vaccinia Ankara，MVA）是MVA病毒在原代鸡胚成纤维细胞（CEF）中经过一系列的传代得到^[1]，在人体内可以表达 MVA 病毒蛋白及其携带的外源基因蛋白，但却不形成完整的病毒颗粒，为人体内复制缺陷性病毒^[2]，安全性好，即使在免疫功能缺陷病人和免疫抑制的恒河猴体内也未显示出明显的副作用^[3]。近年来，重组 MVA 病毒广泛地用于预防性疫苗和感染性疾病、癌症治疗的基础与临床研究^[4]，其中以 MVA 病毒作为载体的疫苗是最有希望用于预防人类艾滋病的活载体疫苗之一^[5]。由于 MVA 病毒本身的繁殖特点，其滴度的检测不适合采用常规的蚀斑法进行^[6]；而常规微量细胞病变（cytopathic effect，CPE）法相对耗时，对细胞培养要求高，往往受到主观因素的影响，因而不稳定且精确度降低^[7]，给检测工作带来不便。上世纪 90 年代初 Usuba 等^[8]建立了免疫酶技术测定流感病毒感染性滴度的方法，较常规方法省时、结果准确﹑重复性好。我们就免疫酶技术在 MVA 病毒感染性滴度检测中的适用性进行了探讨，旨在建立一种准确、快速的 MVA 病毒感染性滴度检测方法。......     

ABO血型不合异基因造血干细胞移植后继发纯红细再生障碍性贫血研究进展

 同种异基因造血干细胞移植（allogeneic hematopoietic stem cell transplantation，allo-HSCT）是目前治愈多种恶性肿瘤、先天遗传性疾病和自身免疫性疾病的重要手段。ABO血型和HLA抗原在遗传上是独立的，20%～40% 的异基因造血干细胞供受者之间存在ABO血型不合^[1-4]。ABO血型不合分为主要不合（受者血浆含有抗供者红细胞的凝集素）、次要不合（供者血浆含有抗受者红细胞的凝集素）及主次均不合。供受者ABO血型不合不影响粒系、巨核系的植活，对移植物抗宿主病（GVHD）发生率及长期生存率等也没有影响，但是可以造成红系造血延迟，重者可发生纯红细胞再生障碍性贫血（PRCA），主要表现为粒细胞（≥ 0.5×109/L）和血小板（≥ 20×109/L）植活后，网织红细胞比例低于1%，同时骨髓增生良好而红系前体细胞缺如^{[1, 3, 5]}。国外学者[^{3, 6]}报道ABO血型主要不合allo-HSCT 患者 PRCA 的发生率为15%～20%，黄晓军等[2]报道的发生率为12%。目前无关供者allo-HSCT的开展使供受者ABO血型不合比例增加，加之非清髓性预处理方案的广泛应用，将使其发生率有所增高。相关问题如新型GVHD预防药物的应用是否对 PRCA发生产生影响，PRCA 治疗时机及最佳治疗方案等等，目前尚不明确，因此，ABO 血型不合问题在移植领域值得进一步研究。本文就相关研究进展做一综述。......     

以Pin1为靶点的肿瘤反义基因治疗研究进展

 肽基脯氨酰顺反式异构酶 1（peptidyl-prolyl cis/trans isomerase 1，Pin1）是进化上非常保守的肽基脯氨酰异构酶（peptidyl-prolyl isomerase，PPIase）家族的成员，属微小菌素蛋白^[1]，最初报道于 1996 年，在分离与 NIMA（never in mitosis gene A）相互作用的蛋白时得到^[2]。一些研究发现，Pin1 的作用靶点可以是参与细胞增殖、细胞凋亡和转录的蛋白，如细胞周期蛋白 E（cyclin E）、cyclin D1、β-连环蛋白（β-catenin）等，其中多数蛋白在肿瘤形成过程中会失调^[3-5]；并且 Pin1 在多种肿瘤中过表达（如宫颈癌、乳腺癌、前列腺癌等）^[6-14]，因此认为 Pin1 与肿瘤发生有关。有学者已经对 Pin1 在肿瘤治疗方面的应用进行了研究，包括靶向 Pin1 的小分子化合物和反义基因。本文主要就靶向 Pin1 的肿瘤反义基因治疗方面的研究进展做简要综述。 ......     

银屑病生物治疗研究进展

 当前医学界一致认为，银屑病是一种 T 细胞引发并维持的自身免疫性疾病，病人机体免疫系统紊乱，健康细胞受到攻击，造成临床上典型的皮肤鳞屑性炎症病变^[1]。这种慢性炎症性疾病的病理过程包括T细胞浸润、真皮血管的改变、表皮角质细胞过度增生和异常分化 。其中参与银屑病发病的 T 细胞大致经历3个阶段的变化：T细胞（CD45RO+）的初始活化；T 细胞迁移至病变皮肤；活化T 细胞释放细胞因子发挥促增殖功能。真皮内的 CD4+ T细胞及其产生的细胞因子是银屑病发病的中心环节，角质细胞与血管内皮细胞的变化只是继发于细胞免疫机制异常的一种改变^[2]。随着对银屑病发病机制及免疫学机制研究的不断深入，人们陆续开发出多种生物制剂。这些生物制剂与传统的化学制药制造出来的具有严格化学分子式的小分子药品完全不同，它们都是蛋白质大分子，可以特异性作用于T细胞活化过程中不同的信号转导分子及途径，从而阻断疾病进程。此类生物制剂均通过生物工程技术获得，按性质大致可以划分为重组单克隆抗体（单抗）、重组抗体融合蛋白、重组细胞因子或生长因子等 3 大类；根据作用于 T 细胞活化靶点的不同，又可以分为针对原发性刺激、阻断共刺激分子作用、抑制T细胞增殖、抑制有炎症介导活性细胞因子和平衡有免疫调节活性的细胞因子等 5 大类^[3-4]。生物制剂的出现，为银屑病治疗提供了新的选择，正逐步改变着皮肤科医师治疗银屑病的传统模式。本文就近几年来银屑病生物治疗方面的最新研究进展做一综述。......     

混合骨髓移植后过继免疫治疗小鼠白血病

背景：急性白血病自体造血干细胞移植后复发率高,异基因造血干细胞移植后移植相关病死率高,混合造血干细胞移植及移植后过继免疫治疗有可能取长补短,提高疗效。 目的：观察自体骨髓混合H-2半相合异体骨髓移植后供体淋巴细胞输注+白细胞介素2治疗对小鼠白血病的疗效。 方法：将Balb/c小鼠经直线加速器照射3 Gy后分为白血病模型组、白血病模型照射组、混合移植组、自体骨髓移植组,均尾静脉注射5×10⁵ K562(GFP+/NeoR+)或K562(GFP-/NeoR-)细胞。7 d后6 Gy照射,自体骨髓移植组移植自体骨髓细胞或联合白细胞介素2治疗;混合移植组移植小鼠自体骨髓细胞混合1/10的H-2半相合异体骨髓细胞后应用白细胞介素2或联合供体淋巴细胞输注治疗。4周后行小鼠外周血及骨髓细胞形态检查,外周血细胞亚群、GFP及NeoR基因测定,肝、脾匀浆细胞GFP和NeoR基因测定。 结果与结论：白血病模型组小鼠因骨髓造血功能衰竭于20 d内全部死亡,白血病模型照射组小鼠因造血功能衰竭于14 d内全部死亡;自体骨髓移植组、混合移植组均有多少不等小鼠无白血病存活超过28 d,且混合骨髓移植后及自体骨髓移植后应用白细胞介素2治疗可提高白血病小鼠长期无病生存率,在此基础上联合供体淋巴细胞输注可更进一步提高白血病小鼠长期无病生存率。     

自噬及其在肿瘤中的作用研究

 自噬（autophagy）是由 Ashford 和 Porter 在 1962 年发现细胞内有“自己吃自己”的现象后提出的，是指从粗 面内质网的无核糖体附着区脱落的双层膜包裹部分胞质 和细胞内需降解的细胞器、蛋白质等成分形成自噬体（autophagosome），并与溶酶体融合形成自噬溶酶体，降解其所包裹的内容物，以实现细胞本身的代谢需要和某些细胞器的更新^[1]。自噬在机体的生理和病理过程中都能见到，其所起的作用是正面还是负面的尚未完全阐明，对肿瘤的研究尤其如此，值得关注。 1 自噬的功能与作用机制 自噬主要的生理功能是将胞质中的大分子物质（如 蛋白质、RNA、过量储存的糖原等）和一些细胞内源性底物（包括由于生理或病理原因引起的衰老、破损的细胞器）在单位膜包裹的囊泡中大量降解，实现再循环，以维持细胞自身的稳定。这个过程对于细胞成分更新、保持旺盛的生理状态是至关重要的^[2]。在此过程中，自噬体的形成是关键，其直径一般为 300 ~ 900 nm，平均 500 nm，囊泡内常见的包含物有胞质成分和某些细胞器如线粒体、内吞体、过氧化物酶体等。与其他细胞器相比，自噬体的半衰期很短，只有 8 min 左右，说明自噬是细胞对于环境变化的有效反应。根据细胞物质运到溶酶体内的途径不同，自噬分为以下几种。①大自噬：由内质网来源的膜包绕待降解物形成自噬体，然后与溶酶体融合并降解其内容物^[3]；②小自噬：溶酶体的膜直接包裹长寿命蛋白等，并在溶酶体内降解；③分子伴侣介导的自噬（CMA）：胞质内蛋白结合到分子伴侣后被转运到溶酶体腔中，然后被溶酶体酶消化。CMA 的底物是可溶的蛋白质分子，在清除蛋白质时有选择性，而前两者无明显的选择性^[4]。     

脂肪源间充质干细胞治疗aGVHD分子机制的初步研究

目的初步探讨成人脂肪源间充质干细胞（adult adipose tissue-derived mesenchymal stem cells．AMSC）治疗急性移植物抗宿主病（acute graft-versus-host disease，aGVHD）的分子机制。方法3例行异基因造血干细胞移植术后发生aGVHD患者，以每公斤体质量2×10^6个细胞剂量静脉输注AMSC；应用RT-PCR扩增患者AMSC使用前后外周血单个核细胞的TCR Vβ 24个亚家族的CDR3，了解患者TCR Vβ T细胞的分布情况；应用尼龙毛柱分离外周血T淋巴细胞，再经CD8磁珠分选出CD8^＋ T淋巴细胞．应用流式细胞术检测发生aGVHD患者使用AMSC前后外周血CD8^＋T细胞亚群的变化。结果患者发生aGVHD时，有TCR Vβ3及其他亚家族基因表达，输注AMSC后，GVHD得以有效控制。Vβ3不表达；当患者GVHD复发时，Vβ3基因又表达，治疗后不表达；与输注AMSC前相比，输注AMSC后，CD8^＋T细胞中的CD8^＋CD28^-亚群显著上调（P〈0．05），同时．患者的aGVHD得以有效控制。结论AMSC治疗aGVHD的分子机制可能与其抑制TCR Vβ亚家族基因表达有关，TCR Vβ3可能是AMSC作用的靶基因；同时，AMSC治疗aGVHD的作用机制可能与其上调CD8^＋CD28^-T细胞亚群有关．CD8^＋T细胞可能是AMSC作用的靶细胞。     

生长因子微囊化缓释制剂研究进展

 生长因子是由多种细胞分泌的通过细胞间信号传递影响细胞活动的一类多功能调节肽，具有调节细胞分裂、增殖、迁移及其基因表达等重要功能^[1]。生长因子主要通过与相应的受体结合发挥作用，在正常的生理状态下即可发挥显著的生物学效应，具有微量高效的特点。研究表明，不同生长因子联合应用可产生协同或拮抗效应，如联用血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）可明显促进血管新生^[2]，而联用转化生长因子 β1（TGF-β1）和 TNF- β1 时，TGF-β1 对细胞有丝分裂的促进作用明显降低^[3]。但生长因子还存在稳定性差、半衰期短等不足，限制了其临床应用。为此，国内外众多学者将生长因子微囊化制备成缓释制剂，提高了生长因子的稳定性，并且降低了其在体内的降解速度。例如，VEGF、神经生长因子（NGF）、胰岛素样生长因子（IGF）等生长因子微囊化缓释制剂，都取得了较好的缓释效果^[4-6]。生长因子微囊化缓释制剂的剂型主要有微球、纳米粒和由复合材料构建的缓释体系等。本文就生长因子微囊化缓释制剂的制备方法做一综述。 1 生长因子缓释微球 生长因子缓释微球是指将生长因子溶解或分散在高分子材料基质中形成的粒径为 1 ~ 250 mm 的骨架型微小球状实体，其制备方法主要有复乳液中干燥法、乳化交联法、乳化冷凝法等。......     

人源化NOD/SCID小鼠免疫细胞的动态变化与鉴定

目的： 比较脐血干细胞与单个核细胞移植NOD/SCID鼠所建立的人源化SCID模型，分析人源化淋巴细胞重建。方法： 磁珠分选法分离脐血中CD34⁺细胞，淋巴细胞分层液分离脐血单个核细胞，分别经尾静脉输入NOD/SCID小鼠。每隔2周采血至10周，流式细胞术动态检测人源淋巴细胞CD45、CD19、CD3抗原。第10周处死小鼠收集外周血、骨髓、胸腺组织，RT-PCR检测模型鼠组织中人β₂M基因及RAG2基因。结果： 两种类型细胞移植均可重建人源免疫细胞，人源淋巴细胞表达水平均在第8周达高峰。骨髓中人源淋巴细胞表达水平明显高于外周血。RT-PCR在外周血与骨髓检测到人β₂M基因及RAG2基因标志。结论： CD34⁺细胞移植重建人源化NOD/SCID免疫系统模型效果要好于脐血单个核细胞。人源T淋巴细胞在模型鼠骨髓中分化成熟。     

大鼠骨髓间质干细胞对同种骨髓移植后造血重建和免疫重建的作用

目的：探讨大鼠骨髓间质干细胞（MSC）对 同种异体骨髓移植造血重建和免疫重建的影响。方法:建立大鼠同种异 体骨髓移植模型，通过生存率分析、外周血象检测、免疫细胞计数和受体免疫功能检测，综 合评价MSC对骨髓移植(bone marrow transplantation,BMT)后造血重建和免疫重建的作用。 结果：(1) MSC可促进BMT后造血重建：移植后30 d，共移植组外周血白 细胞、淋巴细胞和血小板数均高于单纯骨髓移植组；共移植组骨髓细胞数也高于对照组。(2 )MSC可促进BMT后免疫重建：移植后30 d，共移植组胸腺细胞数、脾细胞总数均高于骨髓单 纯移植组；共移植组对ConA、LPS 刺激的淋巴细胞增殖反应以及对第三体来源的同种混合淋 巴细胞反应均强于单纯BMT组。结论：大鼠MSC与骨髓共移植对同种异体 骨髓移植造血重建和免疫重建有一定促进作用。