二乙基亚硝胺诱发小鼠肺肿瘤的酶组织化学及肺组织γ-GT活性的研究

用二乙基业硝胺(DEN)皮下注射诱发小鼠肺肿瘤。组化观察表明:给小鼠DEN后,支气管上皮细胞γ-GT活性较对照组显著增强;生化测定全肺组织γ-GT活性,在部分时相点实验组较对照组略有增高。所诱发的肺肿瘤组织γ-GT反应结果都是阴性。作者对这些变化的意义进行了简要的讨论。     

二乙基亚硝胺诱导大鼠肝细胞癌过程中明胶酶的动态变化

目的：观察肝癌形成过程中明胶酶表达（蛋白及mRNA水平）的动态变化，探索明胶酶在肝癌生长浸润中的作用。方法：应用免疫组化法、明胶酶谱法和RT-PCR法对大鼠肝癌形成过程中各期明胶酶表达情况进行观察，并与正常对照组进行比较分析。结果：正常肝组织及肝硬化组织内明胶酶有表达，肝癌形成后主要在癌细胞内表达；明胶酶原在正常肝组织中有低表达，诱癌过程中呈持续增高趋势；明胶酶-2mRNA与其酶蛋白表达趋向一致。结论：在肝癌形成过程中明胶酶转录和翻译水平均呈持续增高趋势。     

口服避孕药对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌癌前病变的影响

采用大鼠腹腔注射单剂量二乙基亚硝胺(DEN)作为启动剂结合部份肝切除的短期实验模型,观察复方十八甲基炔诺酮对肝癌癌前病变的影响。实验结果发现单剂量DEN冲击后,再投以复方十八甲基炔诺酮的大鼠,其肝组织γ-GT( )灶的面积、体积、数量(mm~2/个、mm~3/个、mm~2/cm~2、个/cm~2和个/cm~3)均高于单纯受DEN冲击的大鼠。提示复方十八甲基炔诺酮具有促肝癌作用。另外,若以生理盐水代替DEN,再投以复方十八甲基炔诺酮的大鼠,实验始终未出现γ-GT( )灶,表明复方十八甲基炔诺酮无启动肝细胞的致癌作用。     

二乙基亚硝胺诱导大鼠肝细胞癌过程中明胶酶的动态变化

目的观察肝癌形成过程中明胶酶表达(蛋白及mRNA水平)的动态变化,探索明胶酶在肝癌生长浸润中的作用。方法应用免疫组化法、明胶酶谱法和RT-PCR法对大鼠肝癌形成过程中各期明胶酶表达情况进行观察,并与正常对照组进行比较分析。结果正常肝组织及肝硬化组织内明胶酶有表达,肝癌形成后主要在癌细胞内表达;明胶酶原在正常肝组织中有低表达,诱癌过程中呈持续增高趋势;明胶酶-2 mRNA与其酶蛋白表达趋向一致。结论在肝癌形成过程中明胶酶转录和翻译水平均呈持续增高趋势。     

二乙基亚硝胺诱导小鼠肝癌的时钟基因表达变化

目的探讨在二乙基亚硝胺诱导的小鼠肝癌情况下时钟基因表达的变化。方法采用二乙基亚硝胺和CCL来诱导C57BL／6J小鼠肝癌,于16w后10：00处死小鼠取正常肝组织、癌旁组织和癌组织。提取总RNA并采用real—timeRT—PCR方法来检测肿瘤标志基因AFP,时钟基因Bmall、Dbp和Rev-Erba的表达。结果与正常组相比较,肿瘤标志基因AFP在肿瘤组织中明显上升;正常肝组织中Bmall表达较高,而Dbp和Rev—Erba表达较低,相比之下时钟基因Bmall在癌旁组织和癌组织中表达下降,降到正常组的1／3;时钟基因Dbp和Rev—Erba在癌旁组织和癌组织中表达则上升,达到正常组的2～4倍,癌旁组织与癌组织差异无统计学意义。结论小鼠正常肝组织时钟基因符合24h节律变化,在由二乙基亚硝胺诱导的肝癌情况下时钟基因表达发生紊乱。     

硒对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌生长的抑制作用的观察

观察硒对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌的影响。方法；在诱癌过程中，大鼠分别投予含０．２，１．０，３．０×１０＾－６硒的饲料，检测血，肝组织ＬＰＯ，ＧＳＨ－ＰＸ活性，观察诱癌率及癌结节面积。结果：补Ｓｅ后对诱癌率无显著影响，但补充３．０×１－０＾－６Ｓｅ可使癌结节面积显著减少。补Ｓｅ可显著地减轻诱癌早期血和肝组织中ＬＰＯ的形成及诱癌过程中血和肝组织中ＧＳＨ－ＰＸ活性的降低。     

性别对二乙基亚硝胺诱发Wistar大鼠肝癌的影响

参照peraino方法用二乙基亚硝胺Diethylnisamine建立新生Wislar大鼠肝癌模型，同时对诱癌方法适当改进．通过对肝重、体重及肝／体比的分析，并采用病理组织学观察和六种酶组织化学染色比较了不同性别大鼠在癌前期病变、诱癌率等方面的差异．结果表明，本方法诱癌雌性大鼠较雄性犬鼠敏感性高，根据诱癌率、癌前期病变、两种性别大鼠及两组处理方法的比较，证实Wjstar大鼠性别对DEN致癌作用有一定的影响；其影响机制可能与大鼠机体的性激素水平有关．     

二乙基亚硝胺对大鼠肾代谢通路的影响

目的：探讨与二乙基亚硝胺(diethyl nitrosamine,DEN)肾毒性有关的肾代谢标志物及其参与的代谢通路。 方法：将19只大鼠随机分为两组：健康对照组(n=9),给予大鼠灭菌食用水自由饮用;DEN给药组(n=10),给予大鼠 0.1 mg/mL DEN溶液自由饮用。18周后麻醉并处死大鼠采集肾组织进行磁共振代谢组学检测和病理学检测。结果： 与健康对照组比较DEN给药组大鼠肾代谢物的含量变化比较明显,如丙氨酸、牛磺酸、醋酸盐、丙酮酸、胆碱含 量显著减少,而肌酸、甘氨酸、氧化三甲胺、蛋氨酸、脯氨酸、乳酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸含量显著增加。 结论：DEN给药组大鼠肾组织有5种代谢通路发生了明显的变化,包括缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸生物合成通路,甘 氨酸,丝氨酸和苏氨酸代谢通路,丙酮酸代谢通路,糖酵解和糖异生通路及半胱氨酸和蛋氨酸代谢通路。     

二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌过程中肝脏胶原的动态观察

目的 动态观察大鼠肝脏癌变过程中胶原纤维的变化特点,为肝癌发病机制的研究提供参考。 方法 将50只雄性Wistar大鼠（体质量100～120 g）随机分为模型组和对照组,分别腹腔注射二乙基亚硝胺（DEN）50 mg/kg（加生理盐水至0.1 mL）或生理盐水（0.1 mL）,均每周2次,连续4周后改为每周1次,至14周停止。处死大鼠,取肝脏病变组织及周边正常组织,通过H-E染色、Masson染色、网状纤维染色观察其形态学改变;采用荧光定量PCR技术检测大鼠肝组织Ⅰ型及Ⅲ型胶原mRNA的动态表达;采用明胶酶谱法检测大鼠肝组织中基质金属蛋白酶（MMP）含量变化。 结果 DEN诱癌开始5周后大鼠肝组织肝硬化形成,14周后诱导出肝癌。相应地,肝组织内胶原沉积持续增加,癌灶内胶原含量则明显少于癌周组织,并呈进行性减少;MMP-2、MMP-9在癌周组织和癌组织中的变化趋势则与胶原含量变化相反。 结论 DEN诱导的大鼠肝脏癌变过程中,胶原纤维在肝组织中沉积增加,在肝癌组织中则减少,随着肝癌的进展,癌组织内胶原进一步减少,提示肝硬化组织癌变过程中胶原纤维可能被降解。     

茅台酒与乙醇影响二乙基亚硝胺致小鼠肝脏MMP2表达的差异

目的：研究茅台酒与乙醇影响二乙基亚硝胺（DEN）致小鼠肝脏金属基质蛋白酶2（MMP2）表达的影响。方法：将54只C57BL／6J小鼠随机分为正常对照组、茅台酒干预组、乙醇干预组,分别给予无菌生理盐水、茅台酒和乙醇灌胃处理,茅台酒干预组和乙醇干预组用DEN腹腔注射,35周后取小鼠肝脏,采用实时荧光定量PCR（RT—PCR）、免疫组化染色及Westernblot检测肝组织内MMP2mRNA及蛋白的表达。结果：MMP2基因在乙醇干预组中的mRNA表达显著高于正常对照组、茅台酒干预组,差异有统计学意义（P〈0．05）;MMP2mRNA水平在茅台酒干预组与正常对照组之间的差异无统计学意义（P〉0．05）;乙醇干预组MMP2蛋白表达比茅台酒干预组高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：乙醇协同DEN致小鼠肝脏MMP2表达上调,含同样乙醇浓度的茅台酒没有这种作用。     

人参对二乙基亚硝胺致大鼠实验性肝癌发生发展的影响

应用组织化学并结合光镜,对人参抑制二乙基亚硝胺(DEN)诱发大白鼠肝癌的动态研究表明:人参对DEN大白鼠肝癌发生发展有显著的抑制作用。早、中期阶段,实验组鼠肝细胞变性坏死及肝硬变比对照组显著减轻;晚期对照组肝癌发生率达100％,实验组仅为14.3％,两组间的差异有显著性意义。组织化学显示,各期实验组的DNA、RNA和糖原的含量及γ-谷氨酰转肽酶,琥珀酸脱氢酶和5'-核苷酸酶的活性均保持在相对正常的水平,对照组则异常地降低或增高。说明人参能够抑制DEN所引起的肝细胞损害,使DEN肝癌发生率明显降低。     

二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌癌变过程中肝细胞超微结构的变化

报道二乙基亚硝胺诱发Sprague-Dawley(SD)大鼠肝癌发生过程中肝细胞超微结构的动态改变。发现早在肉眼和光镜发现肿瘤之前,肝细胞就发生了一系列超微结构改变,且观察到卵圆细胞向高度嗜硷性肝细胞、肝细胞肝癌转化的连续变化谱。     

肝次全切除对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝硬变及肝细胞癌的影响

作者将大鼠作肝次全(3/4)切除后,腹腔注射DENA28mg/kg,每周一次,与不切肝组动物相比,寿命缩短,患肝硬变、肝细胞异型性增生及肝细胞癌的大鼠发生数明显增多,病变程度加重,诱发病变的时间缩短。     

PELP1在二乙基亚硝胺诱导糖尿病小鼠肝癌形成中的表达及意义

目的 探讨谷氨酸-脯氨酸-亮氨酸富集蛋白1(PELP1)在二乙基亚硝胺(DEN)诱导糖尿病小鼠肝癌形成中的表达及意义.方法 6～8周龄雄性C57BL/6小鼠32只,随机分为4组:正常对照组(Control组),糖尿病组(DM组),二乙基亚硝胺组(DEN组),糖尿病联合二乙基亚硝胺组(DM+ DEN组),每组8只.采用高...     

茅台酒与乙醇影响二乙基亚硝胺引发小鼠肝细胞癌的比较

目的：观察茅台酒与乙醇在协同二乙基亚硝胺（DEN）引发小鼠肝细胞癌（HCC）的差异。方法：74只雄性C57BL／6J小鼠随机分为正常对照组、茅台酒组、乙醇组、DEN组、茅台酒干预组及乙醇干预组,实验35周末检测各组小鼠血清谷氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）与肝组织匀浆中丙二醛（MDA）水平,观察肝组织病理学变化和HCC相关磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC3）表达。结果：肝功能检测发现,茅台酒干预组与正常对照组比较,ALT和MDA差异无统计学意义（P〉0．05）,而AST高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）;乙醇干预组ALT、AST与ADM高于正常对照组、茅台酒组、乙醇组、DEN组、茅台酒干预组,均P〈0．05;病理组织学检查发现乙醇干预组小鼠肝纤维化程度和GPC3表达明显高于其他各组,P〈0．05。茅台干预组肝脏细胞学检查未见癌前病变及HCC,仅在汇管区有少量PGC3表达。结论：乙醇可以协同DEN诱发小鼠HCC,茅台酒没有这种协同作用。     

间断给予S-腺苷蛋氨酸对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌的保护作用

目的 探讨间断给予S-腺苷蛋氨酸(SAMe)对二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌的保护作用.方法 将36只雄性SD大鼠随机分为3组,各12只.观察组大鼠给予0.2% DEN灌胃,按体质量10 mg/kg给药,5次/周,连续14周,同时给予5% SAMe溶液腹腔注射,按体质量200 mg/kg给药,1次/周,每周第1天注射,连续14周.模型组大鼠给予0.2% DEN溶液灌胃,按体质量10 mg/kg给药,5次/周,连续14周,同时给予0.9%氯化钠注射液腹腔注射,注射量及频率同观察组的SAMe溶液.正常组大鼠给予0.9%氯化钠注射液灌胃,用量同模型组的DEN,同时给予0.9%氯化钠注射液腹腔注射,用量及频率同模型组.第15周第1天收集肝脏组织和血液标本,做肝组织病理检查,并检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肝细胞生长因子(HGF)水平.结果 模型组大鼠肝癌模型制备成功.病理结果显示观察组大鼠肝组织癌病程度轻于模型组.观察组和模型组大鼠血清ALT、HGF水平显著高于正常组,而观察组大鼠血清ALT、HGF水平显著低于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 间断给予SAMe对DEN诱发大鼠肝癌有保护作用,这种保护作用可能是通过降低HGF水平达到的.     

二乙基亚硝胺诱发C3H/HeN小鼠肝癌模型的研究

[目的]建立C3H/HeN小鼠诱发性肝癌动物模型,为研究肝癌发病机理及开展肝癌药物治疗提供小鼠诱发性肝癌模型。[方法]取20只C3H/HeN小鼠作为模型组,每日喂予含30μg.mL-1二乙基亚硝胺(DEN)的饮水,连续23周后,观察其肝癌的发生情况。另取6只C3H/HeN小鼠作为正常组。[结果]造模23周后,模型组小鼠血清中ALP、ALT、AST、TBIL、肝脏指数、结节数和γ-GT活力显著增加(P<0.01),小鼠体重、血清中TP、ALB、BUN、CREA和肝脏中TP含量显著降低(P<0.01),存活15只小鼠中有13只肉眼能观测到肝癌发生,肝癌发生率为86.67%,小鼠肝脏表面较多结节,体积增大,表面粗糙、色彩暗淡,多个大小不一的灰白色圆形结节,组织学类型为肝细胞癌,其中以梁状型和腺样型居多。[结论]应用DEN诱发的小鼠肝癌,与人肝癌的发生过程相似,是一种较为理想的诱发性肝癌动物模型,但具体实验方法需进一步改良和研究。     

蒸馏白酒对二乙基亚硝胺引发小鼠肝细胞超微结构及金属硫蛋白表达的影响

目的：了解长期、适量饮用蒸馏白酒对二乙基亚硝胺（ DEN）引发小鼠肝细胞超微结构的影响及金属硫蛋白家族（MTs）表达的变化,探讨该酒对肝细胞癌发生的影响机制。方法125只雄性C57BL／6J小鼠,随机分为正常对照组、蒸馏白酒组、乙醇组、蒸馏白酒＋DEN组、乙醇＋DEN组及DEN组。分别于实验13、35周末处死小鼠,收集肝组织样本进行超微结构观察;提取肝组织总RNA,运用Super－Array实时PCR芯片检测金属硫蛋白1（MT1）和金属硫蛋白2（MT2）基因表达水平;运用原子吸收光谱石墨法检测肝组织样本中金属硫蛋白（MT）的含量。结果35周后,乙醇＋DEN组小鼠肝细胞结构及细胞器发生显著改变,而蒸馏白酒＋DEN组少见。 PCR芯片检测发现,无论13周末还是35周末,蒸馏白酒＋DEN组具有比正常对照组和乙醇＋DEN组显著增加的MT1转录水平（ P＜0.01）,其MT1的转录水平分别是正常对照组的14倍、148倍,而乙醇＋DEN组MT1转录水平分别是正常对照组的3倍、5倍（ P＜0.05）;35周末时,蒸馏白酒＋DEN组、乙醇＋DEN组分别能够比正常对照组31倍、4倍地增加MT2的转录水平。 MT含量检测结果也显示蒸馏白酒＋DEN组具有比乙醇组、乙醇＋DEN组及DEN组显著高的MT含量（ P＜0.05）。结论适量饮用蒸馏白酒与单纯的乙醇不同,不会与DEN协同引起肝细胞的明显损伤,其影响机制可能与MT转录表达的显著激活有关。