归芪补肾颗粒对足细胞损伤中nephrin、desmin表达的影响

目的:探讨归芪补肾颗粒对阿霉素导致的足细胞损伤的保护作用。方法:以0.5μg·mL^-1阿霉素复制足细胞损伤模型,再分别以低、中、高剂量归芪补肾颗粒含药血清(2%,4%,8%)干预24 h后,分别检测各组细胞nephrin、p-cadherin、desmin、α-SMA mRNA(RT-PCR法)和蛋白(Western Blot法)表达。结果:RT-PCR结果显示:与空白对照组(C组)比较,阿霉素模型组(Model)nephrin、P-cadherin mRNA表达(0.342±0.140,0.094±0.012)显著降低(P=0.000),desmin、α-SMA mRNA表达(0.517±0.096,1.242±0.198)显著增高(P=0.001,0.000);与模型组比较,归芪补肾颗粒中(M-GQBS)、高剂量组(H-GQBS)nephrin、P-cadherin mRNA表达(0.536±0.086,0.254±0.060,0.546±0.113,0.274±0.069)显著降低(P=0.007,0.005,0.001,0.000),desmin、α-SMA mRNA表达(0.393±0.084,0.819±0.067,0.375±0.084,0.764±0.125)显著增高(P=0.024,0.010,0.000,0.000)中、高剂量组之间没有差异(P>0.05)。Western Blot结果显示,model组nephrin及P-cadherin蛋白含量显著降低(P=0.000),demin、α-SMA蛋白含量显著增高(P=0.000);与Model组比较,M-GQBS及H-GQBS组nephrin、P-cadherin蛋白表达显著增高(P=0.002,0.003,0.005,0.002),demin、α-SMA含量显著降低(P=0.000)。结论:归芪补肾颗粒能减轻阿霉素引起的足细胞损伤,减缓足细胞上皮-间充质转分化。     

甘草甜素及地塞米松对体外培养足细胞增殖的影响研究

目的通过建立嘌呤霉素(PAN)诱导小鼠足细胞MPC5损伤模型,观察甘草甜素(GL)及地塞米松(DEX)对足细胞及受损足细胞增殖的影响作用,探讨GL在体外培养足细胞损伤中是否具有类似DEX的防护作用。方法体外培养小鼠足细胞,分为对照组、PAN组、GL组、DEX组、PAN+GL组、PAN+DEX组。对照组采用RPMI-1640培养液培养;PAN组加入终浓度50mg/LPAN;GL组加入不同浓度的GL,终浓度分别为50、100、200、400、600、800mg/L;DEX组加入终浓度1μmol/LDEX;PAN+GL组同时加入PAN(终浓度50mg/L)和GL(终浓度分别为50、100、200、400、600、800mg/L);PAN+DEX组同时加入PAN(终浓度50mg/L)和DEX(终浓度1μmol/L),培养24h及48h,采用MTT检测细胞的增殖活性。结果与对照组相比,PAN组24h及48h时足细胞增殖的光密度(A)值均明显降低(P<0.01),抑制率(IE)分别为55.56%、59.10%;GL组中不同浓度组24h时A值较对照组均明显降低(P<0.01),48h时GL50mg/L组A值与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),其余各组A值较对照组均明显降低(P<0.01);低浓度GL组(100～400mg/L)对足细胞的IE48h较24h明显下降,高浓度GL组(600～800mg/L)对足细胞的IE48h较24h明显升高。DEX组24、48h足细胞增殖A值较对照组均明显降低(P<0.01),48h时足细胞的IE较24h时差异无统计学意义(P>0.05)。PAN+GL组50～600mg/L浓度范围内,24h、48h时足细胞增殖A值均呈剂量依赖性升高(P<0.01),但PAN+GL组800mg/L浓度时足细胞增殖活性不再增加。PAN+DEX组24、48h时足细胞增殖A值均明显升高(P<0.01)。结论 PAN能显著抑制足细胞增殖,GL及DEX对体外培养的正常足细胞增殖有轻微抑制作用,但二者均能促进受损足细胞的增殖,且GL在一定范围内呈剂量依赖性关系,对PAN诱导足细胞损伤具有类似DEX的防护作用。     

高同型半胱氨酸对小鼠足细胞CD2AP表达的影响

目的观察α-硫辛酸对高同型半胱氨酸(Hcy)作用下小鼠足细胞胞CD2AP mRNA表达的影响,探讨α-硫辛酸对足细胞的保护作用。方法将体外培养的足细胞分为正常组、Hcy组、Hcy+α-硫辛酸组,培养24、48、72h时分别收集细胞,RT-PCR法检测CD2APmRNA表达。结果 Hcy组,足细胞CD2AP mRNA表达自24h开始下调(P<0.05),且有一定的时效性,72h达到下调高峰(P<0.01);Hcy+α-硫辛酸组,48h时,CD2AP mRNA表达较Hcy组增高(P<0.05),72h仍有上述差异(P<0.05)。结论α-硫辛酸对足细胞有一定的保护作用,可能与其可对抗高同型半胱氨酸下CD2AP mRNA表达下调有关。     

IL-17对足细胞Nephrin和Podocalyxin的表达变化

目的 探讨Th17细胞主要效应因子IL-17对足细胞特异性标记蛋白Nephrin和Podocalyxin及凋亡蛋白Caspase 8和Caspase 3的表达变化.方法 分别以不同浓度(2,5,10,15 ng/mL)重组IL-17刺激培养足细胞48 h,采用实时荧光定量(Q-PCR)及Western blot在基因和蛋白水平分别检测足细胞标志性蛋白Nephrin和Podocalycin的表达,免疫荧光技术检测足细胞凋亡蛋白Caspase 8和Caspase 3的表达.结果 不同浓度IL-17刺激足细胞,与对照组比较,足细胞特异性标记蛋白Nephrin和Podocalycin的mRNA和蛋白水平表达降低(P＜0.05),足细胞凋亡蛋白Caspase 3和Caspase 8表达升高(P＜0.05),不同浓度刺激组间无显著性差异.结论 重组IL-17体外刺激培养足细胞导致足细胞损伤及凋亡,此研究结果提示或可在肾小球疾病患者中通过采用IL-17抗体或IL-17 siRNA抑制内源性IL-17的表达从而抑制足细胞的损伤及凋亡,从而降低肾小球疾病蛋白尿的产生,为深入研究肾脏疾病的病因和发病机制提供突破口,进而找到特异有效的治疗,有重要的基础和临床研究价值.     

罗格列酮对阿霉素肾病大鼠足细胞nephrin表达的影响

目的建立阿霉素肾病模型,探讨罗格列酮对阿霉素肾病大鼠足细胞nephrin的表达的影响。方法21只大鼠随机分为3组。阿霉素肾病组和罗格列酮组大鼠予0.1%阿霉素溶液7 mg·kg~(-1)一次性尾静脉注射,罗格列酮组次日予罗格列酮5 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃,每日1次,共8 wk。另外2组每日予等量自来水灌胃。检测各组大鼠24 h尿蛋白定量、血清清蛋白、血脂、肾功能及肾脏病理改变,并检测肾组织nephrin和TCFβ_1的表达。结果给药后2、4、6、8 wk,罗格列酮组大鼠24 h尿蛋白定量明显低于阿霉素肾病组(P<0.05),8 wk时其血清清蛋白高于阿霉素肾病组[(26.7±s 2.6)g·L~(-1)vs(21±4)g·L~(-1),P<0.05],血三酰甘油和胆固醇水平低于阿霉素肾病组(P<0.05)。与阿霉素肾病组比较,罗格列酮组大鼠肾组织中nephrin蛋白表达增高19%(P<0.05),而TGFβ_1蛋白表达明显降低(P<0.01),肾脏病理损害也明显减轻。结论罗格列酮可上调阿霉素肾病大鼠肾组织nephrin表达,减少尿蛋白排泄,抑制其TGFβ_1表达,从而减轻肾组织病理损害。     

来氟米特对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠足细胞Nephrin表达的影响

目的 观察来氟米特对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠足细胞相关蛋白nephrin表达的影响及机制.方法 体外培养大鼠足细胞,间接免疫荧光法鉴定nephrin、WT-1表达阳性的细胞为足细胞,建立AngⅡ足细胞损伤,RT-PCR法检测来氟米特治疗后nephrin mRNA表达变化.结果 Nephrin沿胞膜、细胞骨架、胞核分布,WT-1位于细胞核,ANGⅡ刺激足细胞后nephrin表达呈剂量及时间依赖性降低,来氟米特纠正这一下调作用,呈剂量依赖性.结论 AngⅡ下调大鼠足细胞nephrin表达导致足细胞损害,来氟米特阻断这一损害.     

血管紧张素Ⅱ对足细胞Notch通路及Nephrin表达的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激小鼠足细胞对Notch通路、Nephrin表达的影响。方法 AngⅡ刺激小鼠足细胞并给予缬沙坦干预,采用免疫荧光化学、Western blot、Real-time PCR方法检测Notch1、Notch胞内域1(NICD1)、Hes1、Nephrin的表达情况。结果 AngⅡ呈时间依赖性增加足细胞Notch1、NICD1、Hes1表达,抑制Nephrin表达(P<0.01);缬沙坦可抑制AngⅡ对Notch通路的活化,增加Nephrin的表达(P<0.01)。结论 AngⅡ通过激活Notch通路降低足细胞Nephrin表达。     

活血降糖胶囊对糖尿病肾病大鼠足细胞相关分子蛋白表达的影响

目的：探讨活血降糖胶囊对糖尿病肾病（DN）大鼠足细胞相关分子蛋白Nephrin、Podocin、CD2AP表达的影响。方法：应用单侧肾脏切除结合小剂量STZ单次腹腔注射方法建造DN大鼠模型,随机分为模型组（M组）、假手术正常对照组（N组）、活血降糖胶囊干预治疗组（H组）,每组6例。H组给予活血降糖胶囊的剂量折合生药2.5 g·kg^-1·d^-1灌胃,M组和N组给予等量纯化水灌胃。8周后检测各组大鼠的24 h尿蛋白定量、血生化等指标,应用免疫组化技术检测肾组织Nephrin、Podocin、CD2AP蛋白表达的情况。结果：8周后,与N组比较,M组出现24 h尿蛋白定量增多,内生肌酐清除率（Ccr）下降（P<0.05）,肾组织Nephrin、Podocin、CD2AP蛋白表达水平均下调（P<0.05）;与M组比较,H组24 h尿蛋白定量降低（P<0.05）,Ccr升高（P<0.05）,肾组织Nephrin、Podocin、CD2AP蛋白表达水平均上调（P<0.05）。采用直线相关分析后发现,24 h尿蛋白定量与肾组织Nephrin、Podocin、CD2AP蛋白表达水平呈负相关;Ccr与肾组织Nephrin、Podocin、CD2AP蛋白表达水平呈正相关。结论：DN时存在足细胞相关分子Nephrin、Podocin、CD2AP蛋白表达异常,活血降糖胶囊对DN大鼠肾脏的保护作用机制可能是通过增加足细胞相关分子nephrin、podocin、CD2AP蛋白表达,减少蛋白尿而实现的。     

氟伐他汀对高糖诱导人足细胞Nephrin和血管紧张素Ⅱ表达的影响

目的探讨氟伐他汀对高糖诱导的人足细胞nephrin和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)表达的影响。方法体外培养人足细胞,随机分为正常糖对照组(A组)、DMSO组(B组)、高糖组(C组)、氟伐他汀10-7、10-6、10-5 mmol/L处理组(分别为D1、D2、D3组)及高糖+氟伐他汀组(E组)。用Westernblot和放射免疫法分别检测足细胞nephrin和AngⅡ的表达水平。结果 B组、D1组、D2组nephrin表达与A组比较差异无统计学意义(P>0.05),而D3组nephrin表达较A组明显减少(P<0.05)。与A组相比,C组人足细胞AngⅡ表达增加,nephrin表达减少,并呈时间依赖性(P<0.05);而E组能明显逆转C组上述指标的变化(P<0.05)。结论氟伐他汀能抑制高糖环境下足细胞AngⅡ表达,上调nephrin表达,起到保护足细胞的作用。     

白藜芦醇对嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨白藜芦醇(RSV)对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)引起的足细胞氧化应激损伤的保护作用及可能机制.方法 将小鼠肾脏足细胞系MPC5分为空白对照组(A组)、PAN处理组(B组)和PAN+RSV处理组(C组).采用台盼蓝染色法和流式细胞术分别检测足细胞活力和凋亡情况,共聚焦显微镜下观察细胞骨架排列情况,DCFH-DA染色检测足细胞内活性氧(ROS)含量,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,羟胺法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量.结果 与A组相比,B组小鼠足细胞活力、SOD和GSH-Px活性降低(P＜0.05),足细胞凋亡以及ROS、LDH和MDA含量增加(P＜0.05),足细胞骨架出现紊乱、重组和降解,并向边缘聚集;而C组经RSV干预后各项观察指标均得到有效改善(P＜0.05).结论 RSV可以部分逆转PAN诱导的足细胞损伤,其保护作用可能与抑制氧化应激、改善线粒体功能障碍相关.     

Protective effects of antithrombin on puromycin aminonucleoside nephrosis in rats

We investigated the effects of antithrombin, a plasma inhibitor of coagulation factors, in rats with puromycin aminonucleoside-induced nephrosis, which is an experimental model of human nephrotic syndrome. Antithrombin (50 or 500 IU/kg/i.v.) was administered to rats once a day for 10 days immediately after the injection of puromycin aminonucleoside (50 mg/kg/i.v.). Treatment with antithrombin attenuated the puromycin aminonucleoside-induced hematological abnormalities. Puromycin aminonucleoside-induced renal dysfunction and hyperlipidemia were also suppressed. Histopathological examination revealed severe renal damage such as proteinaceous casts in tubuli and tubular expansion in the kidney of control rats, while an improvement of the damage was seen in antithrombin-treated rats. In addition, antithrombin treatment markedly suppressed puromycin aminonucleoside-induced apoptosis of renal tubular epithelial cells. Furthermore, puromycin aminonucleoside-induced increases in renal cytokine content were also decreased. These findings suggest that thrombin plays an important role in the pathogenesis of puromycin aminonucleoside-induced nephrotic syndrome. Treatment with antithrombin may be clinically effective in patients with nephrotic syndrome.     

Fluvastatin protects against puromycin aminonucleoside-induced podocyte injury by inhibiting TRPC6

In the present study, we aimed to investigate the effect of puromycin aminonucleoside (PAN) on the expression and distribution of transient receptor potential canonical 6 (TRPC6) of murine podocytes and further study the protective mechanism of fluvastatin on podocyte injury by TRPC6 in vitro. Podocytes were treated by PAN at different doses and at different time points. The expressions of TRPC6 at mRNA and protein levels were assessed. An immunofluorescent assay was used to observe the distribution of TRPC6. Cultured podocytes were then divided into four groups. The expressions of TRPC6 at mRNA and protein levels were measured. The intracellular calcium concentration of podocytes was measured with a laser-scanning confocal microscope. The paracellular permeability to BSA was evaluated using Millicell-PCF Inserts. The expressions of TRPC6 at mRNA and protein levels were increased in a dose and time-dependent manner after exposure to PAN. Immunofluorescence showed that the expression intensity of TRPC6 was significantly increased, and the distribution of TRPC6 was changed after PAN was applied to podocytes. With fluvastatin intervention, PAN-induced up-regulation of TRPC6 was significantly reversed. The ratio of the peak value of intracellular calcium to the basic calcium value in the PAN group was significantly higher after TRPC6 was activated by OAG, while it is obviously reversed under the action of fluvastatin. The podocyte permeability was significantly increased after 48 h of PAN treatment, while the above situation was effectively improved after fluvastatin intervention. The changes of distribution and expression of TRPC6 were related to podocyte injury induced by PAN. Fluvastatin could exert its protective effects on podocytes by down-regulating TRPC6.     

柴黄益肾方对嘌呤霉素氨基核苷诱导大鼠慢性肾病的治疗作用

目的:研究柴黄益肾方对嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)诱导大鼠慢性肾病的治疗作用。方法:60只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、福辛普利钠阳性对照组(0．833 mg·kg-1)、柴黄益肾方小、中、大剂量组(0．55,1．1和2．2 g·kg-1),每组10只,除假手术组外其余各组动物均经颈静脉插管一次性注射PAN 50 mg·kg-1,制作大鼠肾病综合征伴局灶节段性肾小球硬化模型,假手术组给予生理氯化钠溶液。各给药组于手术次日起连续灌胃给药23周。观察药物对大鼠24 h尿蛋白定量及血清总蛋白、白蛋白、血清胆固醇、三酰甘油、血清尿素氮、血清肌酐等生化学指标的影响,对肾组织进行病理学观察并对损害程度进行评分,采用免疫组化的方法,观察柴黄益肾方对α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和转化生长因子(transforming growth factor-β1,TGF-β1)蛋白在肾脏组织表达的影响。结果:柴黄益肾方能明显抑制大量尿蛋白排泄,提高血清总蛋白和白蛋白含量,改善脂代谢紊乱,降低血清尿素氮,改善肾脏病理损伤,降低α-SMA和TGF-β1蛋白在肾脏组织表达。结论:柴黄益肾方能减轻由PAN诱导的肾组织损伤,改善肾功能障碍和脂蛋白代谢紊乱,降低α-SMA和TGF-β1蛋白在肾脏组织表达。     

Effects of glycyrrhetinic acid on aminonucleoside nephrosis in rats

The effects of glycyrrhetinic acid (GA), an aglycon of glycyrrhizin extracted from the roots of Glycyrrhizae radix, on puromycin aminonucleoside (PA) nephrosis were studied in rats. Urine protein excretion in female rats (130g–150g) receiving PA (50 mg/kg) alone was significantly elevated on the 2nd day after injection of PA and reached a peak on the 14th day. Urinary protein on the 14th day was reduced to 74% in animals treated with GA (20 mg/kg) starting on the 2nd day after injection of PA. The increase in serum cholesterol and the decrease in serum protein were also suppressed by GA. Observation by electron microscopy revealed that the degree of abnormality in glomerular epithelial cells, i.e. loss or fusion of foot processes, was lower in the rats treated with GA after PA injection than in the rat treated with PA alone. Moreover, pretreatment with GA did not suppress urinary protein excretion but when it was given at the same time as PA and after PA a significant decrease in urinary protein excretion was observed. Correspondence to: H. Abe at the above address     

全反式维甲酸对高糖培养的人肾小球足细胞synaptopodin蛋白表达的影响

目的 探讨高糖培养的人肾小球足细胞synaptopodin蛋白表达的变化以及全反式维甲酸对其表达的干预效应.方法 以体外培养的条件性永生人肾小球足细胞为研究对象,平均分为正常糖(NG)组、高糖(HG)组、HG+5tmol/L全反式维甲酸干预组、HG+ 15 μmol/L全反式维甲酸干预组.蛋白质印迹法检测HG组足细胞培养0、3、6、9d时和其他各组足细胞培养9 dsynaptopodin蛋白的表达.结果 HG组足细胞培养3、6、9d时synaptopodin蛋白表达灰度值与培养0d时比较明显降低[(1.15±0.04)％、(0.78±0.04)％、(0.41±0.05)％比(1.49±0.07)％,P＜0.05].培养9d后,与NG组比较,HG组、HG+5μmol/L维甲酸干预组、HG+ 15 μmol/L维甲酸干预组足细胞synaptopodin蛋白表达灰度值均明显下降[(0.41±0.05)％、(0.86±0.04)％、(0.90±0.07)％比(1.47 ±0.08)％,均P＜0.05].结论 高糖可以使体外培养的足细胞synaptopodin蛋白表达下降,全反式维甲酸具有潜在的保护足细胞和防治糖尿病肾病的作用.     

依普利酮联合替米沙坦对自发性高血压大鼠肾脏足细胞Nephrin表达和肾脏保护作用的影响

目的：研究依普利酮、替米沙坦对自发性高血压大鼠肾脏保护作用和足细胞Nephrin蛋白表达的影响。方法：5只12周雄性Wistar-Kyoto（WKY）大鼠为对照组（A组）、20只自发性高血压大鼠（SHR）随机分为高血压组（B组）和替米沙坦治疗组（C组）,依普利酮治疗组（D组）,替米沙坦、依普利酮联合治疗组（E）。A、B组用等量饮用水灌胃,C组用替米沙坦[10mg/（kg·d）]灌胃,D组用依普利酮[100mg/（kg·d）]灌胃,E组依普利酮[100mg/（kg·d）]＋替米沙坦[10mg/（kg·d）]灌胃8周。测定治疗前后24h尿蛋白量,肌酐,尿素氮水平,并观察肾脏病理改变;免疫组化法检测肾脏nephrin表达变化。结果：B组血压和尿蛋白较A组逐渐升高（P〈0.05）。B组肾小球硬化指数和间质纤维化指数均明显高于A组（P〈0.05）,nephrin蛋白表达较A组降低。C、D和E组血压、尿蛋白和病理损伤较B组减轻,nephrin表达显著高于B组（P〈0.05）。结论：依普利酮联合替米沙坦通过上调足细胞nephrin表达,减轻自发性高血压大鼠肾损伤。     

黄芪当归合剂对慢性肾病鼠肾脏细胞表型及MAPK信号转导通路的影响

目的　在慢性嘌呤霉素肾病 (PAN)大鼠模型中观察黄芪当归合剂 (A&A)对肾脏固有细胞表型及MAPK信号通路各亚类激酶 (ERK、JNK和p38)表达与活性的影响 ,初步探讨A&A治疗作用的细胞生物学机制。方法　肾组织标本来源于对照组、PAN组、A&A组和ACEI组大鼠。采用常规病理染色和免疫组化技术 ,观察各组肾组织不同部位的病理改变、细胞数量、细胞外基质积聚程度、不同部位α SMA表达变化及肾组织内MAPK表达及活化情况。结果　PAN大鼠肾小球内的α SMA表达量与肾小球系膜细胞增殖、细胞外基质的积聚程度密切相关 ;肾小管间质区的α SMA表达量与肾间质浸润细胞数相关 ,同时伴有肾小管上皮变性、萎缩和扩张。A&A治疗可使PAN大鼠上述部位的α SMA表达和病理变化明显减轻。在本实验条件下 ,PAN组与对照组肾组织内JNK、ERK、p38的蛋白表达量及表达部位无差别 ,肾组织内ERK、p38亦未被激活 ;PAN大鼠肾小球、肾小管及肾间质细胞的JNK均明显活化 ,A&A可明显抑制上述部位的JNK活化。结论　黄芪当归合剂可显著减轻嘌呤霉素肾病的肾脏损伤 ,它对肾脏固有细胞 (尤其是系膜细胞 )表型转化的抑制作用可能是其作用的主要环节之一 ,该作用可能与其下调JNK信号通路活化有关     

氟伐他汀对高糖诱导人足细胞血管内皮生长因子表达的影响及机制

目的探讨氟伐他汀对高糖诱导的人足细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及机制。方法体外培养人足细胞,随机分为A组(正常糖组)、B组(高糖组)、C组(高糖+氟伐他汀10-7mol/L组)、D组(高糖+氟伐他汀10-6mol/L组)、E组(高糖+氟伐他汀10-5mol/L组)和F组[高糖+胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059组]。用Western blot检测VEGF和磷酸化ERK1/2(pERK1/2)蛋白表达。结果 B组VEGF、pERK1/2表达较A组明显升高,并呈时间依赖性(P<0.05)。F组VEGF、pERK1/2表达较B组显著降低(P<0.01)。与B组比较,C、D、E组VEGF及pERK1/2表达亦明显减少,并呈浓度依赖性(P<0.05)。结论高糖刺激体外培养人足细胞VEGF表达增加,氟伐他汀可减少高糖诱导的VEGF表达,其机制可能与氟伐他汀抑制ERK信号通路有关。