知母宁抗乙肝病毒作用的实验研究

目的 观察知母宁抗乙肝病毒的作用.方法 观察不同浓度知母宁对体外培养的2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的抑制作用及对乙肝模型鸭DHBV-DNA的影响.结果 知母宁浓度为4mg/ml时对2.2.15细胞分泌HBeAg有明显的抑制作用;以200mg/kg治疗乙肝模型鸭10d后DHBV-DNA水平明显降低.结论 知母宁有抗乙肝病毒的作用,其机制可能与抑制HBV-DNA的复制有关.     

复方虎杖方体内外抗乙肝病毒的活性评价

目的 研究复方虎杖方体内外抗乙肝病毒作用.方法 体外实验采用CCK-8染色法检测复方虎杖方水提物、醇提物对HepG2.2.15细胞株的抗增殖活性,采用化学发光微粒子免疫检测法测定HBsAg、HBeAg含量,采用实时荧光定量PCR法检测HBV-DNA含量;体内实验采用血清斑点杂交法(Dot blot)测定给药5、10 d...     

知母宁抗乙肝病毒作用的体内外实验研究

目的:观察知母宁的抗乙肝病毒作用。方法:观察不同浓度知母宁对体外培养的2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的抑制作用及对乙肝模型鸭DHBV-DNA的影响。结果:知母宁浓度为4mg/mL时对2.2.15细胞分泌HBeAg有明显的抑制作用;以200mg/kg治疗乙肝模型鸭10d后DHBV-DNA水平明显降低。结论:知母宁有抗乙肝病毒的作用,其机制可能与抑制HBV-DNA的复制有关。     

三叶青乙酸乙酯提取物对肝癌细胞HepG2凋亡的影响及机制

目的:研究三叶青乙酸乙酯提取物对肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响,并探究其作用机制。方法:HepG2细胞体外培养,在不同浓度三叶青提取物的作用下,采用CCK8法检测细胞增殖,应用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,运用Western Blot法检测蛋白表达情况。结果:三叶青乙酸乙酯提取物能显著抑制HepG2细胞增殖和诱导凋亡(P<0.05);上调Caspase-3和Bax表达量,下调Bcl-2表达,但细胞周期结果不显著。结论:三叶青乙酸乙酯提取物对HepG2细胞有抑制增殖作用,其机制可能与调控细胞信号通路诱导凋亡有关。     

吉西他滨促进HepG2.2.15细胞系中乙肝病毒pgRNA转录和病毒复制及相关分子机制研究

目的：探讨吉西他滨对HepG2.2.15细胞中乙肝病毒前基因组RNA（pregenomic RNA,pgRNA）转录以及乙肝病毒复制的影响及其可能的作用机制。方法：使用不同浓度吉西他滨处理HepG2.2.15细胞,分别使用CCK-8法、流式细胞术、实时定量聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction,RT-PCR）、酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA）法检测细胞活性、细胞凋亡、细胞周期、细胞内乙肝病毒pgRNA、细胞培养上清液中乙型肝炎表面抗原（hepatitis B sur－face antigen,HBsAg）、乙型肝炎e抗原（hepatitis B e antigen,HBeAg）、乙肝病毒DNA（hepatitis B virus DNA,HBV DNA）;实时定量PCR法检测吉西他滨作用下HepG2.2.15细胞中与pgRNA转录有关的调控基因肝细胞核因子4α（hepatocyte nuclear factor 4,HNF4α）、P38蛋白激酶（P38 mitogen-activated protein kinase,P38MAPK）、环磷酸腺苷效应元件结合蛋白1（CAMP responsive element binding protein 1,CREB1）、核转录因子 p65（nuclear factor-kappa B p65,NF-?资b p65）、组蛋白去乙酰化酶1（histone deacetylase 1,HDAC1）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1α（peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1-alpha,PGC-1α）、叉头转录因子O1（forkhead box protein O1,FOXO1）、相关调控基因沉默信息调节因子2相关酶1（sirtuin 1,SIRT1）、P53 mRNA水平以及pgRNA的表达量,分析这些基因随吉西他滨浓度变化与pgRNA随浓度变化的相关性,找出与pgRNA变化相关性最高的基因,并使用Western blot在蛋白质水平验证吉西他滨对此基因蛋白质表达量的影响。结果：吉西他滨对HepG2.2.15细胞的生长显示出浓度以及剂量依赖性的抑制作用;吉西他滨使细胞凋亡率增高;吉西他滨使细胞更多的细胞停滞在G0G1期,而处于S期细胞比例降低;吉西他滨明显增加HepG2.2.15细胞内乙肝病毒 pgRNA,72 h之内呈现明显的时间与剂量依赖性;吉西他滨作用细胞24 h会使细胞培养上清液中的HBeAg增加;吉西他滨促进HNF4α mRNA、HNF4α蛋白质表达量增加,且在所检测的与乙肝病毒转录调节有关的基因中,HNF4α mRNA变化趋势与HBV pgRNA变化趋势相关性最高。结论：吉西他滨可在细胞水平促进乙肝病毒pgRNA转录以及乙肝病毒的复制,其机制为通过促进乙肝病毒转录因子HNF4α的表达实现的。     

三叶青提取物抗ANIT所致小鼠肝损伤作用的研究

目的研究三叶青提取物对α-异硫氰酸萘酯(ANIT)所致肝损伤小鼠的保护作用。方法 2017年1月~2018年2月选择60只小鼠并随机分为6组,分别为对照组、联苯双酯阳性药物组、模型组、三叶青提取物低、中、高剂量组[(1.0、2.0、4.0)g/kg]。采用灌胃ANIT的方式复制急性黄疸型肝炎模型,造模48 h后测其血清中ALT、AST、TBA、TBIL、TNF-α的含量;检测肝组织匀浆中SOD、MDA、GSH-Px的水平。结果三叶青提取物各剂量组均可显著降低TBIL和TNF-α水平(P0.05),中、高剂量组可以降低血清中ALT、AST、TBA、TBIL、TNF-α含量(P0.05),各剂量组均显著降低MDA含量,中、高剂量组可显著提高SOD活性(P0.05),而GSH-Px水平无显著变化。结论三叶青提取物对ANIT所致小鼠肝损伤有一定的保护作用,其保护作用可能与减轻炎症因子产生、促进总胆红素的代谢、降低脂质过氧化程度有关。     

乙肝病毒疫苗鸡蛋抗体HBsAg-IgY的制备及体外中和作用

目的:制备特异性的乙肝病毒疫苗鸡蛋抗体(HBsAg-IgY),探索抗体检测条件并进行体外中和作用试验。方法:用重组酵母乙型肝炎疫苗(HBsAg)免疫产蛋母鸡,收集鸡蛋,用鸡卵黄抗体IgY提取系统提取鸡卵黄抗体IgY;用改进的ELISA法检测抗体IgY含量,探索最佳检测条件;采用ELISA法研究IgY对Hepg2.2.15细胞系分泌HBsAg的中和试验。结果:在免疫后第1～3周,鸡卵黄抗体IgY含量开始上升,第6周达到高峰,并可持续2个月。抗HBsAg IgY可中和HepG2.2.15细胞系分泌的HBsAg,抗体在稀释度为1∶200时中和作用最强。结论:采用重组酵母乙型肝炎疫苗免疫母鸡,可持续性获得特异性抗HBsAg IgY;体外实验证实,抗HBsAg-IgY对HepG2.2.15细胞HBsAg具有中和作用。     

抗乙肝病毒药物的研究现状

乙型肝炎是一种发病率高,死亡率高的传染病,本文对抗乙肝病毒药物研究现状按类别进行阐述,并展望了其研究开发的应用前景。     

树突状细胞抗乙肝病毒免疫和抗肝癌免疫

Ｔ细胞介导的免疫应答在抗肿瘤免疫和抗病毒免疫中起主导作用 ,Ｔ细胞的致敏激活和扩增依赖于抗原提呈细胞(ＡＰＣ)提呈相应的抗原多肽和提供共刺激信号 ,分泌Ｔｈ1型应答主导因子 ,诱导机体生成抗原特异性ＣＴＬ ,并通过细胞溶解机制和非细胞溶解机制对肿瘤或病毒产生杀伤或抑制 ,因而ＡＰＣ是启动机体产生抗肿瘤免疫和抗病毒免疫的中心环节 ,能否进行有效的抗原提呈直接关系到免疫激活或免疫耐受的诱导。ＡＰＣ包括树突状细胞 (Ｄｅｎｄｒｉｔｉｅｃｅｌｌｓ,ＤＣ)、巨噬细胞、Ｂ细胞等 ,其中ＤＣ是机体最有效、功能最强的抗原提呈细胞 ,…     

三叶青乙酸乙酯提取物诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡

目的:评价三叶青乙酸乙酯提取物(ethyl-acetate fraction of extracts from Tetrastigma hemsleyanumDiels et.Gilg,EAFT)诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用。方法:体外培养HT-29细胞。FITC标记annexinⅤ/PI染色流式细胞术分析细胞凋亡率。ELISA法测定细胞组蛋白/DNA碎片。Western Blotting分析细胞Bax蛋白和细胞色素C的表达。结果:EAFT以浓度依赖方式诱导annexinⅤ染色阳性细胞百分率和组蛋白/DNA碎片增加(P<0.01)。10.0 mg/L EAFT分别作用HeLa细胞6 h、12 h和24 h,细胞色素C和Bax蛋白表达上调。结论:EAFT具有诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用,其作用机制与激活线粒体途径有关。     

浙江三叶青与广西三叶青的生药学鉴别

从性状特征、显微特征及一般理化鉴别等方面对两种不同产地(浙江及广西)三叶青进行生药学鉴别,为鉴别三叶青及制定三叶青药材质量标准提供实验依据。     

观辣树水提物体外抗乙肝病毒的实验研究

目的:通过HepG2.215细胞体外药物评价模型,观察观辣树水提物对乙肝病毒的抑制作用。方法:利用HepG2.215细胞模型,以噻唑兰染色法(MTT法)检测观辣树水提物对细胞的毒性作用,以酶联免疫(ELISA)法检测观辣树水提物对HepG2.215细胞乙肝表面抗原(HBsAg)、e抗原(HBeAg)分泌的抑制作用。结果:观辣树水提物在HepG2.215细胞上的最大实验浓度200mg/mL时对细胞的破坏率仅为48.65%,而对HBsAg的半数抑制浓度IC50为57.82mg/mL,治疗指数TI>3.46;对HBeAg的半数抑制浓度IC50为51.68mg/mL,治疗指数TI>3.87。结论:观辣树水提物体外对乙肝病毒有较好的抑制作用。     

天花粉提取物对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg表达的影响

目的:探讨天花粉水提取物、醇提取物对HepG2.2.15细胞的增殖及培养细胞上清中HBsAg与HBeAg表达的影响。方法:用MTT方法检测HepG2.2.15细胞的存活率,以酶联免疫法(ELISA)检测HepG2.2.15细胞上清液HBsAg和HBeAg的表达量。结果:天花粉水提取物和醇提取物处理HepG2.2.15细胞后HBsAg和HBeAg的表达均呈时间依赖性和浓度依赖性抑制,但天花粉水提物的治疗指数明显优于醇提物。结论:天花粉水提物较醇提物有更好的抗HBV活性。     

苦参碱脂质体抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的评价苦参碱脂质体的体外抗乙型肝炎病毒(HBV)作用。方法通过苦参碱脂质体、苦参碱作用于体外培养的2.2.15细胞,观察和比较二者对2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的影响及药物的细胞毒性,初步评价苦参碱脂质体的抗HBV作用。结果苦参碱脂质体、苦参碱作用于2.2.15细胞11 d后,对细胞的半数毒性浓度(TC50)分别为7.29mg/ml和1.33rage/ml,对HBsAg和HBeAg抑制的半数有效浓度(IC50)分别为0.078 mg/ml、3.35mg/ml、<0.078mg/ml和>10mg/ml,苦参碱脂质体对HBsAg和HBeAg的治疗指数(TI)分别为93.46和2.17,高于苦参碱的治疗指数。结论苦参碱脂质体在体外细胞培养中对HBsAg和HBeAg的分泌有较好的抑制作用,可以提高苦参碱的抗HBV作用。     

TLR7配体Loxoribine抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的 探讨TLR7配体Loxoribine对乙型肝炎病毒的抑制作用。方法 采用MTT法观察Loxoribine药物对体外培养HepG2.2.15细胞的毒性作用,ELISA及荧光定量PCR法分析药物对细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg及HBV DNA含量的影响。结果 低浓度Loxoribine对体外培养的HepG2.2.15细胞生长有一定抑制作用,但随着药物浓度增高,对细胞生长并无明显毒性作用。Loxoribine可有效地抑制HepG2.2.15细胞HBV DNA的复制及HBsAg的分泌,并随着药物浓度的增加和作用时间的延长,对HBsAg抑制率增大,而对HBeAg的分泌无抑制作用。结论 Loxoribine在体外具有抗乙型肝炎病毒的作用。     

紫丁香叶提取物对HepG2.2.15细胞中HBeAg及HBsAg表达的影响

目的 :观察紫丁香叶提取物对 Hep G2 .2 .1 5细胞分泌 HBe Ag和 HBs Ag的影响。方法 :采用酶联免疫吸附法 ( ELISA)检测培养上清中 HBe Ag和 HBs Ag表达的变化并以抑制率来表示。结果 :紫丁香叶提取物对 HBe Ag和 HBs Ag的分泌具有抑制作用 ,该作用呈现剂量依赖性和时间依赖性。结论 :紫丁香叶提取物对 HBe Ag和 HBs Ag分泌的抑制作用提示其在体外具有抗乙型肝炎病毒的作用     

金樱根醇提取液耐缺氧作用的研究

目的：研究金樱根醇提取液的耐缺氧作用。方法：采用常压耐缺氧法、对抗特异性心肌缺氧法、对抗脑缺血缺氧法、游泳实验法观察金樱根醇提取液对小鼠存活时间的影响。结果：金樱根醇提取液明显延长小鼠常压缺氧、特异性心肌缺氧、脑缺血缺氧及游泳的存活时间。结论：金樱根醇提取液有显著耐缺氧作用。     

岗梅水提取物抗流感病毒的实验研究

目的研究岗梅水提取物体内外抗流感病毒的活性。方法体外抗病毒试验采用CPE法,按Reed-Muench方法计算TC50、IC50和TI,观察岗梅水提取物体外对流感病毒引起的细胞病变的影响;体内抗病毒试验采用小鼠经滴鼻感染流感病毒造成肺炎模型,以肺部炎症、死亡率和生命延长率为指标,观察岗梅水提取物体内抗流感病毒的活性。结果岗梅水提取物在体外对流感病毒引起的细胞病变有明显的抑制作用,其IC50为88.2μg/ml,TI为5.82;在给药剂量为8g生药/kg和16g生药/kg时,对流感病毒所致的小鼠肺部炎症有明显抑制作用,并能明显降低流感病毒感染小鼠的死亡率和延长其存活时间。结论岗梅水提取物在体内外均具有明显抗流感病毒的作用。     

板蓝根正丁醇部位对免疫细胞增殖及体外抗氧化活性的研究

目的?对板蓝根药材中提取的正丁醇部位各组分进行小鼠腹腔巨噬细胞和淋巴细胞体外增殖活性及体外抗氧化活性的研究。方法?从板蓝根中提取分离出12个正丁醇组分,采用HPLC法明确各组分在正丁醇部位色谱峰的归属。MTT法检测各组分对两种免疫细胞的增殖作用,同时采用清除DPPH、ABTS自由基和铁离子还原/抗氧化能力（FRAP）测定法,评价各组分的抗氧化活性。结果?2、6、7、11号组分对2种免疫细胞的增殖作用最强,最高增殖指数均大于3。2、6号组分的抗氧化活性最强,其清除DPPH自由基的IC₅₀分别为0.366、0.729?mg/mL,清除ABTS自由基的IC₅₀分别为0.164、0.338?mg/mL,对Fe3+还原性相当于1.441?mmol/g和0.812?mmol/g的FeSO₄当量。结论?板蓝根正丁醇部位的提取物中存在促进免疫细胞增殖及抗氧化能力较强的活性成分,深入研究其结构,将有助于阐明板蓝根抗病毒药效物质基础。