实时荧光定量PCR检测HBV DNA与ELISA检测HBV M结果的关系

目的:探讨实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测HBV DNA与ELISA检测HBV M结果的关系.方法:采用实时FQ-PCR和ELISA方法分别对240例乙肝患者进行HBV DNA定量测定和HBV M检测.结果:240例HBsAg阳性血清中HBV DNA阳性率为74.58%.HbsAg、HbeAg、HBcAb和HbsAg、HbeAg阳性组的HBVDNA含量及HBV DNA阳性率均明显高于HbsAg、HbeAb、HBcAb和HbsAg、HBcAb组(P＜0.05,P＜0.01).122例HBeAg阳性的血清中97.54%的HBV DNA阳性;118例HBBeAg阴性的血清中有50.85%HBV DNA阳性.结论:实时FQ-PCR检测HBV DNA准确灵敏,是HBV感染及复制的直接证据.HBV M和HBV DNA的检测各有其独特的临床检测意义,在乙型肝炎的诊断治疗中均具有重要的临床价值.     

乙型肝炎病毒表面抗原阳性孕妇前S1抗原检测分析

目的检测乙型肝炎表面抗原(HbsAg)阳性孕妇血清乙型肝炎前S1抗原(PreS1Ag)与乙肝病毒DNA(HBV DNA)的结果,探讨PreS1Ag在妇幼保健工作的使用价值。方法对288名HbsAg阳性孕妇血清用酶联免疫吸附法检测PreS1Ag,用荧光定量PCR法检测HBVDNA。结果288名HbsAg阳性孕妇PreS1Ag总阳性率为76.4%(220/288)、PCR总阳性率为82.6%(238/288);HbeAg(-)血清学模式组PreS1Ag阳性率为73.4%(160/218)、HbeAg(+)血清学模式组PreS1Ag阳性率为85.7%(60/70),两组PreS1Ag阳性率无显著性差异(P>0.05);PCR(-)组PreS1Ag阳性率为26%(13/50)、PCR(+)组PreS1Ag阳性率为87%(207/238),两组PreS1Ag阳性率有显著性差异(P﹤0.05)。结论PreS1Ag与HBeAg无明确相关,与HBVDNA有较好的一致性,基层妇幼保健机构可通过检测PreS1Ag补充了解孕妇乙肝病毒的复制状态,做好防治措施。     

乙型肝炎表面抗原阳性孕、产妇护理

乙型肝炎表面抗原阳性是指人体已受乙肝病毒感染的血清素标记.我国是乙肝高发地区,至少有6亿人感染过乙型肝炎.约1 亿多人为乙型肝炎病毒健康携带者.我国孕妇乙型肝炎表面抗原 (HbsAg)阳性率为10%左右,其中HbeAg阳性率为50%.HbeAg 阳性母亲传播给婴儿机率为40-50%而HbsAg(+)HbeAg(+)双阳性的母亲传播给婴儿机率为90-100%.     

血清HBV DNA定量检测的临床应用价值

目的了解慢性乙肝患者 HBV DNA 定量检测结果与 HbsAg,抗 HbsAg,HbeAg,抗 HbeAg 和抗 HBc 检测以及肝穿免疫组化 HbsAg 和 HbcAg 检测结果的相互关系。方法临床确诊的慢性乙肝患者173例,经 ELISA 测定 HBV—M(HBsAg,抗Hbs,HbeAg,抗 Hbe 和抗 HBc)后,采用 HBV DNA PCR 分子杂交定量检测技术,测定患者血清 HBV DNA 含量,并对部分患者进行了肝穿免疫组化 HbsAg 和 HbcAg 测定。结果 173例慢性乙肝患者 HBV DNA 定量结果,阳性率为83.24%。其中:(1)HbsAg( ),HbeAg( ),抗 HbcAg( )患者78例,HBV DNA 定量检1测结果>10E4拷贝/L 76例,总阳性率97.44%。(2)HbsAg( ),抗 HbeAg( )和抗 Hbc( )27例,HBV DNA 定量检测结果,>10E4拷贝/L 16例,总阳性率59.25%。(3)HbsAg( ),抗Hbc( )16例,HBV DNA 定量检测结果>10E4拷贝/L 8例,总阳性率50.0%。(4)HbsAg(-),其他均阳性10例,HBV DNA 定量检测结果总阳性率100%。(5)HbsAg( ),抗 Hbs( ),和抗 HBc( )26例,HBV DNA 定量检测结果,>10E4拷贝/L 22例,总阳性率84.62%。(6)抗 Hbs( ),其余均阴性11例,HBV DNA 定量检测结果,>10E4拷贝/L 7例,总阳性率63.64%。(7)其他5例。其中共20例患者进行了肝穿免疫组化 HbsAg 和 HbcAg 检测,结果阳性率为90%,与 HBV DNA 定量结果吻合率90%。结论乙肝患者 HBV DNA 定量检测结果可以直观的反应患者血清中 HBV DNA 含量,可以作为慢性乙肝患者发病情况和治疗效果观察的良好指标。     

乙型肝炎病毒表面抗原阳性孕妇前S1抗原检测分析

目的检测乙型肝炎表面抗原（HbsAg）阳性孕妇血清乙型肝炎前S1抗原（PreSlAg）与乙肝病毒DNA（HBV DNA）的结果,探讨PreS1Ag在妇幼保健工作的使用价值。方法对288名HbsAg阳性孕妇血清用酶联免疫吸附法检测PreS1Ag,用荧光定量PCR法检测HBVDNA。结果288名HbsAg阳性孕妇PreSiAg总阳性率为76．4％（220／288）、PCR总阳性率为82．6％（238／288）;HbeAg（－）血清学模式组PreS1Ag阳性率为73．4％（160／218）、HbeAg（＋）血清学模式组PreS1Ag阳性率为85．7％（60／70）,两组PreS1Ag阳性率无显著性差异（P〉O．05）;PCR（－）组PreS1Ag阳性率为26％（13／50）、PCR（＋）组PreS1Ag阳性率为87％（207／238）,两组PreS1Ag阳性率有显著性差异（P〈0．05）。结论PreS1Ag与HBeAg无明确相关,与HBVDNA有较好的一致性．基层妇幼保健机构可通过检测PreS1Ag补充了解孕妇乙肝病毒的复制状态,做好防治措施。     

乙肝患者血清HBV-DNA与HBV-M、PreS1的相关性分析

目的探讨乙型肝炎患者血清HBV-DNA与血清标志物(HBV-M)和前S1抗原(PreS1)的相关性。方法HBV-DNA采用BIO-RADiCycler荧光PCR检测仪,HBV-M检测用ELISA法,PreS1采用ELISA双抗体一步法。结果大三阳组(HbsAg 、HbeAg 、HbcAb )的HBV-DNA阳性率最高,为96.1%,PreS1阳性率为90.5%。小三阳组(HbsAg 、HbeAb 、HbcAb )的HBV-DNA阳性率为73.3%,PreS1阳性率为60.3%。另外,HbsAg、HbcAb阳性组的HBV-DNA阳性率为66.0%,PreS1阳性率为50.0%。结论大三阳患者病毒高复制,与HBV-DNA、PreS1相关性最大,HBV-DNA检测更能反映乙肝病毒复制情况,对病情预后及疗效具有指导意义,值得临床推广。     

β-L-2',3'-双脱氧-5-氟胞苷在体外对乙型肝炎病毒复制的抑制作用

研究β-L－2'，3'-双脱氧-5-氟胞苷的抗乙型肝炎病毒作用。方法：从2．2．15细胞培养液中提取乙肝病毒DNA，用DNA印迹法分析药物对乙肝病毒DNA复制的影响。观察药物对人T-成淋巴样细胞的生长抑制作用，用狭线印迹法检测人T-成淋巴样细胞的线粒体DNA。结果：β-L-2'，3'-双脱氧-5-氟胞苷对乙肝病毒DNA合成的半数抑制浓度为0．05μmol／L，但其抗乙肝病毒作用是可逆的。对人T-成淋巴样细胞的半数生长抑制浓度为67μmol／L。选择指数远高于2'，3'-双脱氧胞苷。在浓度高到足以抑制乙肝病毒复制达90％以上时，对细胞线粒体DNA合成并无影响。结论：β-L-2'，3'-双脱氧-5-氟胞苷在体外有较强的选择性抗乙肝病毒作用。     

血清HBV DNA定量检测的临床应用价值

目的了解慢性乙肝患者HBVDNA定量检测结果与HbsAg，抗msAg，HbeAg，抗HbeAg和抗HBc检测以及肝穿免疫组化HbsAg和HbcAg检测结果的相互关系。方法临床确诊的慢性乙肝患者173例，经ELISA测定HBV-M（HBsAg，抗Hbs，HbeAg，抗Hbe和抗HBc）后，采用HBV DNA PCR分子杂交定量检测技术，测定患者血清HBV DNA含量，并对部分患者进行了肝穿免疫组化HbsAg和HbcAg测定。结果 173例慢性乙肝患者HBV DNA定量结果，阳性率为83．24％。其中：（1）HbsAg（＋），HbeAg（＋），抗HbcAs（＋）患者78例，HBV DNA定量检1测结果〉10E4拷贝／L 76例，总阳性率97．44％。（2）HbsAg（＋），抗HbeAg（＋）和抗Hbc（＋）27例，HBV DNA定量检测结果，〉10E4拷贝／L 16例，总阳性率59．25％。（3）HbsAg（＋），抗Hbc（＋）16例，HBV DNA定量检测结果〉10E4拷贝/L 8例，总阳性率50．0％。（4）HbsAg（-），其他均阳性10例，HBV DNA定量检测结果总阳性率100％。（5）HbsAg（＋），抗Hbs（＋），和抗HBc（＋）26例，HBV DNA定量检测结果，〉10E4拷贝/L 22例，总阳性率84．62％。（6）抗Hbs（＋），其余均阴性11例，HBV DNA定量检测结果，〉10E4拷贝／L 7例，总阳性率63．64％。（7）其他5例。其中共20例患者进行了肝穿免疫组化HbsAg和HbcAs检测，结果阳性率为90％，与HBV DNA定量结果吻合率90％。结论乙肝患者HBV DNA定量检测结果可以直观的反应患者血清中HBV DNA含量，可以作为慢性乙肝患者发病情况和治疗效果观察的良好指标。     

乙型肝炎患者血清中HBV cccDNA、HBV DNA、HbsAg与HbeAg定量关系的分析

目的:检测乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)、HBV DNA、乙型肝炎表面抗原(HbsAg)和乙型肝炎e抗原(HbeAg)分析其相互关系,探讨定量检测血清中HBV cccDNA的临床应用价值。方法:收集乙型肝炎患者120例,对照组为20例正常人群,采用实时荧光定量PCRJ检测HBV DNA、HBV cccDNA,采用微粒子分析法检测HbsAg和HbeAg。进行比较分析。结果:慢性乙型肝炎(CHB)轻中度组与CHB重度及重型组HBV cccDNA水平分布位置差异无统计学意义(P>0.05),定量值与HBV DNA、HbsAg和HbeAg呈正相关。结论:HBV cccDNA、HBV cccDNA、HBV DNA、HbsAg与HbeAg定量检测对掌握乙型肝炎患者病情轻重、病情进展,对乙型肝炎患者的治疗和预后都具有很重要的临床应用价值。     

乙肝标志物模式与病毒载量的相关性研究

目的研究慢性乙肝患者血清标志物和病毒载量之间相关性。方法血清HBV DNA测定用荧光定量分析PCR法和乙肝标志物采用化学发光酶免疫定量法,分别对222例慢性乙肝患者血清HBV DNA和乙肝标志物检测并比对分析。结果血清学检测乙肝表面抗原(HBsAg)+乙肝病毒e抗原(HBeAg)+乙肝病毒核心抗体(HBcAb)组与乙肝表面抗原(HBsAg)+乙肝病毒e抗原(HBeAg)组其病毒载量显著高于其它组(病毒载量高于105拷贝/m l分别达91.9%和77.8%)。结论 HbeAg与HBV DNA定量水平具有良好的相关性,同时检测乙肝标志物和HBV DNA才能准确反映不同个体HBV感染状态及病毒复制情况。     

天花粉提取物对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg表达的影响

目的:探讨天花粉水提取物、醇提取物对HepG2.2.15细胞的增殖及培养细胞上清中HBsAg与HBeAg表达的影响。方法:用MTT方法检测HepG2.2.15细胞的存活率,以酶联免疫法(ELISA)检测HepG2.2.15细胞上清液HBsAg和HBeAg的表达量。结果:天花粉水提取物和醇提取物处理HepG2.2.15细胞后HBsAg和HBeAg的表达均呈时间依赖性和浓度依赖性抑制,但天花粉水提物的治疗指数明显优于醇提物。结论:天花粉水提物较醇提物有更好的抗HBV活性。     

抗HBV反义寡核苷酸的筛选

目的 筛选出对HBV有抑制作用的反义寡核苷酸(AS-ONs),为HBV的预防和治疗提供基础.方法 合成5条与HBV互补的反义寡核苷酸,转染HepG2.2.15细胞,运用荧光定量PCR和酶联免疫法测定反义寡核昔酸对细胞培养液中HBVDNA和HBsAg、HBeAg的抑制作用.结果 寡核苷酸序列Ⅰ(TAC CTC TYG T...     

VP22融合型显性负性突变体抑制乙肝病毒复制

目的: 了解VP22融合型显性负性(DN)突变体对抑制乙肝病毒(HBV)复制的作用. 方法: 将VP22全长及其不同区段融合于HBV核心蛋白(HBc)的C端,克隆入pcDNA3.1(-)构成DN突变体真核表达质粒. 转染HepG2.2.15细胞后,免疫荧光鉴定DN突变体在细胞内的表达,并以培养上清HBV表面抗原(HBsAg)的浓度为指标,观察DN突变体对HBV病毒复制的抑制效应. 同时以MTT比色法观察转基因的表达对宿主细胞生长状态的影响. 结果: VP22及其不同区段构建的DN突变体可在HepG2.2.15细胞中进行表达,且对宿主细胞无毒性. VP22融合型DN突变体可有效地抑制HBV的复制,具有蛋白转导特性的DN突变体比无转导特性的DN突变体具有更强的抗病毒能力. 其中VP22全长构成的DN突变体具有最强的抑制效应,可使上清HBsAg浓度下降81.94%. 结论: VP22融合型DN突变体可以增强DN突变体对HBV复制的抑制.     

siRNA抑制乙型肝炎病毒在HepG2.2.15细胞中的复制与表达

目的 探讨靶向HBV S基因的siRNA表达质粒在HepG2.2.15细胞中对HBV病毒的复制与表达的抑制效应及其抗病毒活性.方法 设计并构建了两个靶向HBV S基因的siRNA表达质粒S1和S2,随机设计的用于对照的非同源siRNA表达质粒S3.首先在HepG2.2.15细胞中通过实时荧光定量PCR评估该siRNA表达质粒对HBV mRNA表达的抑制效应,接着在HepG2.2.15细胞中通过ELISA方法进一步枪测它们的抗病毒活性细胞上清液中HBV标志性蛋白HBsAg、HBeAg的表达水平.结果 在siRNA表达质粒转染HepG2.2.15细胞后48 h,HBV S基因mRNA表达量下降64%～88%,HBsAg和HBeAg的表达水平分别降低了60%～82%和56%～78%.S1+S2联合使用转染细胞中显著抑制HBV病毒的复制与表达的效率,而对照组S3无抑制效果.结论 发现靶向HBV S基因的siRNA表达质粒能够在HepG2.2.15细胞中有效的抑制HBV病毒的复制与表达,并能够降低细胞上清液中HBsAg和HBeAg的表达水平.S1+S2联合使用转染细胞中可以显著抑制HBV的复制与表达的效率.RNAi可能成为防治HBV感染有效的全新的抗病毒防御策略.     

APOBEC3G真核表达载体构建及抗HBV复制的初步研究

目的构建人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G（APOBEC3G）真核表达载体,并探讨其抗乙型肝炎病毒（HBV）复制的作用。方法采用RT-PCR法从健康人外周血单个核细胞中克隆APOBEC3G基因编码区片段,构建pcDNA3.1-A3G真核表达载体,利用脂质体转染法将pcDNA3.1-A3G转染HepG2.2.15细胞,分别于转染后第24、48、72 h收集细胞培养上清液和细胞总蛋白,Western blot检测HBx蛋白表达情况,ELISA法检测细胞上清液中HBsAg和HBeAg表达情况。结果测序结果显示pcDNA3.1-A3G真核表达载体中APOBEC3G编码区序列存在1处碱基同义突变;HepG2.2.15细胞经APOBEC3G蛋白干扰后,HBx、HBsAg和HBeAg表达量逐渐降低,于72h表达量显著降低。结论成功构建了APOBEC3G真核表达载体pcDNA3.1-A3G;APOBEC3G在体外可以抑制HBV复制,为深入研究APOBEC3G作为抗HBV药物提供了实验基础。     

HBVPreS2反义寡核苷酸对HepG 2.2.15细胞系HLA-I类抗原表达及生物活性的影响

目的 :观察针对乙型肝炎病毒 (HBV)PreS2 基因特异性反义寡核苷酸 (asON)对转基因细胞HepG2 .2 .15表面的人类白细胞I类抗原 (HLA I)基因表达的影响。方法 :设计合成互补于HBVPreS2 翻译起始区的反义寡核苷酸即序列I ,并设非互补序列作对照即序列II ,免疫细胞化学染色观察asON对HepG2 .2 .15表面表达的HLA I类抗原的影响 ,用ELISA法动态检测细胞上清液中HBsAg和HBeAg的变化 ,放射免疫测定法检测asON对宿主细胞自身分泌蛋白 血清铁蛋白的影响。结果 :HepG2 .2 .15细胞表面HLA I类抗原表达降低 ,用药组和对照组相比有统计学意义 (P <0 .0 5 )。asON能够抑制HBV表达HBsAg和HBeAg ,对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为 6 6 %和 91% ,而序列II对HBsAg和HBeAg的抑制率均为 11%。asON对宿主细胞自身分泌蛋白无影响 ,即对宿主细胞无毒性作用。结论 :asON以序列特异性方式抑制HBV基因表达而对宿主细胞无毒性作用 ,HLA I类抗原表达降低 ,这对减轻过度炎症反应 ,阻止慢性肝炎至重症肝炎的发生具有重要意义     

小干扰RNA分子对乙肝病毒复制的抑制作用研究

目的 筛选特异高效抗乙型肝炎病毒(HBV)的小干扰RNA分子(siRNA),评价其干扰效果.方法 在HepG2.2.15细胞内导入筛选的3条特异抗HBV的siRNA分子,用实时荧光定量RT-PCR的方法,检测干扰后HBV的mRNA表达水平;Western blot检测细胞上清中乙肝表面抗原(HBsAg),分析siRNA对HBV基因表达的抑制作用.结果 导入特异siRNA分子细胞中HBV的mRNA表达量明显降低(P＜0.05),上清中HBsAg含量显著减少.阴性对照细胞中HBV的mRNA含量和上清中HBsAg含量基本不变(P＞0.05).结论 所筛选的siRNA分子能特异性抑制HBV的mRNA和蛋白的合成.     

YTHDF1对HBV蛋白表达和HBsAg和HBeAg抗原分泌的作用

目的:探讨YTH N6-甲基腺苷RNA结合蛋白1(YTHDF1)对乙型肝炎病毒(HBV)蛋白表达和抗原分泌的影响.方法:分别以pCD3/Flag-KBE和pSilencer2.1-U6 neo为载体,构建过表达和敲降YTHDF1质粒.在Huh7细胞中过表达HBV蛋白质粒的同时表达pshR-YTHDF1和对照质粒,通过W...     

知母宁抗乙肝病毒作用的体内外实验研究

目的:观察知母宁的抗乙肝病毒作用。方法:观察不同浓度知母宁对体外培养的2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的抑制作用及对乙肝模型鸭DHBV-DNA的影响。结果:知母宁浓度为4mg/mL时对2.2.15细胞分泌HBeAg有明显的抑制作用;以200mg/kg治疗乙肝模型鸭10d后DHBV-DNA水平明显降低。结论:知母宁有抗乙肝病毒的作用,其机制可能与抑制HBV-DNA的复制有关。     

筛选调节HBV增殖和HBsAg产生的宿主细胞的miRNA

目的筛选调节乙型肝炎病毒(HBV)增殖和乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)产生的宿主细胞的miRNA。方法用328种miRNA的反义链转染HepG2 2.2.15细胞,72 h收获上清,MTS检测细胞的增殖活性,ELISA检测表面抗原和e抗原的表达水平,实时定量PCR检测其中HBV DNA的拷贝数。构建筛选到的miRNA的过表达载体,转染HepG22.2.15细胞,也分别用MTS、ELISA和实时定量PCR进行检测。结果 miR-199a-3pASO、miR-210ASO和miR-185ASO促进了HBsAg产生和HBV增殖(P<0.05);miR-199a-3p、miR-210、miR-185的过表达,分别抑制了HBsAg的产生和HBV的增殖(P<0.05);miR-199a-3p、miR-210和miR-185的ASO转染组与对照组相比,分别降低了细胞内miR-199a-3p、miR-210和miR-185的表达水平(P<0.05);miR-199a-3p、miR-210和miR-185的过表达载体转染组与对照组相比,分别增加了细胞内miR-199a-3p、miR-210和miR-185的表达水平(P<0.05)。结论在没有对细胞的增殖活性产生影响的情况下,miR-199a-3p、miR-210和miR-185抑制了HBV表面抗原的产生和HBV的增殖,miRNA作为病毒与宿主细胞相互作用中的调节因子,在HBV的生命活动周期中具有重要作用。