β—缆香烯对不同分化程度胃癌细胞株端粒酶活性及细胞凋亡的影响

目的：探讨β－缆香烯治疗胃癌的作用机制。方法：应用四唑蓝（MTT）比色法、端粒重复扩增（TRAP）－微孔板杂交法、光镜检查和DNA末端原位标记染色法（TUNEL）研究β－缆香烯对胃癌细胞株SGC－7901（中分化）、MKN－45（低分化）和MKN－28（高分化）的细胞毒作用及其对端粒酶活性、细胞形态变化和细胞凋亡的影响。结果：β－缆香烯对不同分化程度的胃癌细胞均具有较强的细胞毒作用;其抗癌作用与抑制端粒酶活性和诱导凋亡有关。β－缆香烯抑制端粒酶活性及诱导凋亡的数量与作用时间、浓度及细胞分化程度相关。结论：β－缆香烯对胃癌细胞具有很强的细胞毒作用,这一作用与抑制端粒酶活性和诱导凋亡有关。     

人端粒酶反义寡核苷酸抑制三种不同分化程度胃癌细胞生长及作用机制研究

目的 研究特定序列人端粒酶反义寡核苷酸(AS-0DN)抑制三种分化程度不同的胃癌细胞(MKN-45、SGC-7901、MKN-28)生长的可能性，并阐述其抑制胃癌细胞生长的作用与胃癌细胞分化程度的相关性。方法 在指定的作用时问和浓度等条件下，以AS-0DN作用于不同分化程度的三种胃癌细胞，用改良端粒酶活性定量检测法测定AS-0DN片段作用前后胃癌细胞的端粒酶活性；用锥虫蓝染色法观察细胞活力；用倒置显微镜、电镜、流式细胞仪和原位末端标记(TUNEL)法观察细胞凋亡情况。结果以指定浓度的AS-ODN作用后，MKN-45和SGC-7901细胞出现明显的端粒酶活性和细胞生长抑制(P＜0．05)，但在同样浓度条件下，MKN-28胃癌细胞只出现端粒酶活性抑制。错义序列对照组则无明显变化。以10 μmol／L的AS-ODN连续作用三种胃癌细胞96h后，光镜、电镜和TUNEL法检测均发现MKN-45和SGC-7901细胞表现出特有的凋亡征象，流式细胞仪检测证实MKN-45和SGG-7901细胞的平均凋亡率在44．75％和33．56％，错义序列对照组则无明显变化(P＜0．05)。结论 AS-0DN能有效抑制胃癌细胞生长，其作用机制主要是抑制端粒酶活性和诱导细胞凋亡。AS-0DN对中分化胃癌细胞的生长抑制最显著，对低分化胃癌细胞的抑制作用略强于高分化胃癌细胞，提示端粒酶反义核酸的抑制作用不依赖于胃癌细胞的分化程度。     

羟基喜树碱诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的 研究羟基喜树碱(HCPT)诱导胃癌细胞的凋亡作用,探讨其治疗胃癌的作用机制.方法 应用MTT、TUNEL染色、流式细胞仪技术研究HCPT对胃癌细胞SGC-7901、MKN-45、MKN-28的细胞毒和诱导凋亡的作用.结果 HCPT具有很强的细胞毒作用,对三株不同分化程度胃癌细胞的SGC-7901(中分化)、MKN-45(低分化)、MKN-28(6高分化)的IC50为0.008～0.012mg/ml.HCPT作用于细胞后,可看到较为典型的细胞凋亡的形态学变化:细胞核固缩,染色质凝集,呈新月型紧贴于核膜周边,核碎裂,染色质片断化,凋亡小体形成等.流式细胞仪DNA直方图上出现典型的亚二倍体"凋亡峰".流式细胞仪计数显示,HCPT诱导胃癌细胞SGC-7901、MKN-45、MKN-28的凋亡率分别为21.88%、12.35%、30.26%.HCPT诱导胃癌细胞的凋亡率与胃癌的分化程度有关.TDT染色法显示,细胞凋亡指数在12.35%～30.26%之间.HCPT的作用表现为细胞周期特异性,HCPT主要作用于细胞周期的S期,抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡,使细胞阻滞于S期.结论 HCPT对胃癌细胞具有很强的细胞毒作用,诱导凋亡是其主要作用机制之一.     

β-榄香烯对胃癌及胃癌耐药细胞杀伤作用的实验研究

目的 研究β-榄香烯联合或不联合化学治疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)对人胃癌细胞株SGC-7901和相应耐药细胞株SGC-7901/5-FU的杀伤作用及机制.方法 用不同剂量β-榄香烯(20、40或80μg/ml)联合或不联合5-FU (100 μg/ml)作用于SGC-7901和SGC-7901/5-FU细胞,采用四甲基偶氮唑盐实验、透射电镜观察、流式细胞仪和DNA原位末端标记(TUNEL)法检测药物对细胞的杀伤作用及其诱导细胞凋亡的情况.通过建立SGC-7901和SGC-7901/5-FU细胞裸鼠移植瘤模型观察β-榄香烯对这两种细胞的体内杀伤作用.结果 β-榄香烯在体内、外均具有抑制SCA3-7901和SGC-7901/5-FU细胞生长的作用(P值均<0.05),一定剂量范围内具量效关系(P=0.02).透射电镜、流式细胞仪和TUNEL实验均显示β-榄香烯抑制两种胃癌细胞生长的作用与其诱导细胞凋亡有关.结论 β-榄香烯在体内外对SGC-7901和SGC-7901/5-FU细胞均具杀伤作用,该作用可能与其诱导细胞凋亡有关.     

氧化砷对胃癌细胞的细胞毒和诱导凋亡作用

目的:研究三氧二化砷(氧化砷)对胃癌细胞的细胞毒和诱导凋亡作用。方法:应用MTT、TUNEL染色、流式细胞仪技术研究氧化砷对不同分化程度的胃癌细胞的细胞毒和诱导凋亡的作用。结果:氧化砷对不同分化程度的胃癌细胞均具有较强的细胞毒作用.10μmol/L氧化砷作用24小时细胞杀伤率为24.6％ 48小时接近50％,氧化砷作用于不同分化程度的胃癌细胞后,可看到较为典型的细胞凋亡的形态学变化:细胞核固缩,染色质疑集.呈新月型紧贴于核膜周边.核碎裂.染色质片断化,凋亡小体形成等,流式细胞仪DNA直方图上出现典型的亚二倍体的“凋亡峰”TU-NEL染色法显示,细胞凋亡指数为1.4％～9.5％。氧化砷的细胞毒作用呈时间和剂量依赖性,且表现为细胞周期特异性,作用48小时后,SGC-7901细胞的细胞周期变化明显,G0/G1期细胞从54.2％下降到17.7％ 而G2/M期细胞则从20.2％上升到63.4％,说明氧化砷主要作用于细胞周期的G2/M期,抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡。结论:氧化砷对胃癌细胞具有较强的细胞毒和诱导细胞凋亡的作用.具有治疗胃癌的潜在价值。值得进一步研究     

紫杉醇体外诱导人胃癌细胞凋亡及对端粒酶活性的影响

目的研究紫杉醇诱导人胃癌细胞凋亡及端粒酶活性变化.方法采用0.001～1 μmol·L-1的紫杉醇处理SGC 7901细胞后,用MTT法测定胃癌细胞的生长抑制率,通过形态学观察及流式细胞术检测细胞凋亡率,半定量TRAP-银染法测定端粒酶活性变化.结果不同浓度的紫杉醇对胃癌细胞均有明显抑制作用,且呈时间依赖性及剂量依赖性.光镜及流式细胞术分析表明,0.01μmol·L-1的紫杉醇处理后24 h,细胞即出现明显的凋亡形态特征及凋亡峰,对端粒酶活性的同步检测结果显示,紫杉醇在诱导细胞凋亡的同时伴随端粒酶活性下调,且随紫杉醇浓度增大,抑制作用逐渐增强,12 h相对端粒酶活性为96,24 h为58,48 h为28,72 h起变为阴性.结论紫杉醇对胃癌细胞具有明显抑制作用,诱导细胞凋亡并抑制端粒酶活性可能是其发挥抗癌作用的机制之一.     

人端粒酶反义寡脱氧核苷酸对胃癌细胞系SGC-7901的生长抑制和诱导凋亡的研究

背景端粒酶活性在胃癌组织中表达率很高,在正常胃黏膜组织中则基本不表达.因此,以端粒酶为靶点的反义治疗有望成为胃癌治疗的有效途径之一.目的检测特定的人端粒酶反义寡脱氧核苷酸(AS-ODN)对胃癌细胞系SGC-7901生长的抑制作用,并证明其主要机制为抑制端粒酶活性和诱导细胞凋亡.方法用改良的聚合酶链反应(PCR)-端粒重复扩增协议(TRAP)法定量检测端粒酶AS-ODN作用前后SGC-7901细胞的端粒酶活性;台盼蓝染色法观察SGC-7901细胞活力;光镜和电镜观察凋亡细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果SGC-7901细胞有端粒酶活性表达.不同浓度的端粒酶AS-ODN作用于SGC-7901细胞48～96 h后,细胞端粒酶活性和生长受到明显抑制,光镜、电镜观察和流式细胞仪检测均证实有细胞凋亡存在.错义AS-ODN(N-ODN)处理组SGC-7901细胞则无显著变化(P＜0.05).结论端粒酶AS-ODN通过抑制胃癌细胞的端粒酶活性和诱导细胞凋亡,最终抑制胃癌细胞生长,其抑制作用呈剂量、时间依赖性和序列特异性.端粒酶AS-ODN对端粒酶活性的抑制比对细胞生长的抑制更敏感,两种抑制作用并不完全平行.     

榄香烯体内外抑制小鼠肝癌H_（22）细胞增殖与诱导凋亡作用的研究

[目的]研究中药莪术提取物榄香烯制剂（Elemene）对小鼠肝癌H22细胞增殖的抑制及诱导凋亡的作用。[方法]体内实验,通过建立H22小鼠肝癌实体瘤模型,观察榄香烯对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用,TdT酶介导的原位缺口末端标记法（TUNEL）检测凋亡细胞。体外进行细胞培养,采用MTT法检测榄香烯对细胞增殖的影响,Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞的凋亡。[结果]不同实验组对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用程度不同,5-氟脲嘧啶组抑制肿瘤生长最明显,榄香烯高剂量组较低剂量组抑瘤效果明显;MTT检测到榄香烯对H22细胞株具有抑制作用,呈剂量和作用时间的依赖性;Annexin V-FITC/PI法检测到早期凋亡细胞;TUNEL法检测到凋亡细胞。[结论]榄香烯可有效抑制小鼠肝癌H22细胞的增殖,其抑制癌细胞增殖的途径是通过诱导细胞发生凋亡而完成的。     

紫杉醇诱导胃癌细胞凋亡及对端粒酶活性调节的关系

目的;研究紫杉醇对人SGC－7901胃癌细胞的诱导凋亡作用及对端粒酶活性调节的关系。方法：0．001－1μM的紫杉醇处理SGC－7901细胞后,用MTT法测定胃癌细胞的生长抑制率,甲苯胺蓝染色后光镜下观察细胞凋亡形态变化,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率及bcl-2水平,半定量TRAP－银染法测定端粒酶活性变化。结果：0．01－1μM的紫杉醇对胃癌细胞均有明显抑制作用。抑制作用首先表现为G2／M期阻滞,继而出现细胞凋亡,且呈时间依赖性及剂量依赖性。对端粒酶活性的同步检测结果显示,紫杉醇在诱导细胞凋亡的同时伴随端粒酶活性下调,且抑制作用逐渐增强,24小时酶活性开始受抑制,72小时变为阴性。在这一过程中,bcl-2表达水平下降。结论：紫杉醇对胃癌细胞具有明显抑制作用,诱导细胞凋亡并抑制端粒酶活性可能是其发挥抗癌作用的机制之一,bcl-2参与了紫杉醇诱导的胃癌细胞凋亡过程中端粒酶活性的调控。     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸诱导人胃癌细胞凋亡过程中端粒酶活性的测定

目的 :观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞株的作用。方法 :用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与人胃癌细胞株共同孵育一定时间后 ,观察细胞形态变化 ,观察细胞DNA含量的分布 ,测定端粒酶活性。结果 :端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导人胃癌细胞凋亡 ,抑制端粒酶活性。在形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成。电泳呈凋亡特征性Ladder带 ;流式细胞仪分析显示 ,在G1期前出现亚 2倍体凋亡峰 ;端粒酶活性抑制。结论 :端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导胃癌细胞凋亡 ,抑制端粒酶活性 ,抑制端粒形成 ,从而抑制胃癌细胞的生长。     

全反式维甲酸及香龙散含药血清对胃癌细胞端粒酶活性的影响

目的 分析全反式维甲酸及中药香龙散含药血清对胃癌细胞端粒酶活性的影响，并探讨端粒酶活性和细胞凋亡的关系。方法 用纯种新西兰家兔制备中药香龙散含药血清，应用TRAP分析全反式维甲酸及中药香龙散含药血清对培养的胃癌细胞端粒酶活性的影响，应用DNALadder分析及流式细胞仪观察全反式维甲酸及中药香龙散含药血清对培养的胃癌细胞凋亡的影响。结果 首先全反式维甲酸和中药香龙散含药血清对培养的胃癌细胞生长的抑制有协同作用，其次，全反式维甲酸处理胃癌细胞24小时，即可见端粒酶活性下调，中药香龙散含药血清无此作用，也不能加强全反式维甲酸对端粒酶活性下调的作用。最后，在全反式维甲酸处理的胃癌细胞保，第3天出现了细胞凋亡，并且中药香龙散含药血清对全反式维甲酸诱导的细胞凋亡有加强作用。结论 全反式维甲酸或/和中药香龙散含药血清对培养的胃癌细胞生长有抑制作用，其中全反式维甲酸可能通过抑制端粒酶活性表达而诱导了胃癌细胞凋亡，中药香龙散含药血清有加强全反式维甲酸诱导细胞凋亡的作用，其机制不清楚。     

舒林酸抑制人胃腺癌细胞增殖及诱导凋亡

目的在体外对舒林酸抗人胃腺癌细胞增殖和凋亡诱导作用及其机制进行初步研究.方法采用人胃腺癌细胞株MKN45,MKN28作为研究对象.体外药物敏感试验(MTT)检测不同浓度和作用时间的舒林酸对细胞的增殖抑制效应;分别用Hoechst33258细胞核荧光染色、透射电镜和DNA琼脂糖凝胶电泳观察舒林酸诱导的细胞凋亡改变;应用Western斑点免疫印迹法观察经舒林酸2mmol·L-1和4mmol·L-1作用24 h后细胞内环氧化酶-2(COX-2)和凋亡抑制蛋白Bcl-2表达程度的变化.结果舒林酸对人胃腺癌细胞MKN45,MKN28的杀伤率随着剂量的增大和作用时间的延长而增加,舒林酸对不同类型的细胞杀伤率不同.舒林酸能够诱导人胃腺癌细胞MKN45,MKN28产生凋亡,凋亡诱导作用的强弱同样具有时间和剂量依赖性,而且对不同类型胃癌细胞的凋亡诱导效应有显著差异.经舒林酸2 mmol·L-1和4 mmol·L-1作用24 h后,MKN45细胞内COX-2和Bcl-2蛋白比未经舒林酸作用的细胞表达明显减少,而MKN28细胞内COX-2和Bcl-2蛋白的表达未出现明显变化.结论舒林酸在体外对人胃腺癌细胞株MKN45和MKN28有良好的增殖抑制作用,诱导凋亡是其抑制胃癌细胞增殖的重要作用机制.舒林酸对人胃腺癌细胞的抑制和凋亡诱导作用与其抑制细胞内环氧化酶-2,并进而抑制Bcl-2的表达有关,并可能与胃癌细胞的分化状态有关.     

下调XIAP表达增强化疗药物诱导胃癌细胞凋亡的作用

目的:观察下调X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因表达对胃癌细胞化疗敏感性的影响.方法:构建XIAP基因反义真核表达载体,稳定转染胃癌细胞株MKN-45,RT-PCR和Western blot法检测癌细胞XIAP基因表达.选用顺铂、丝裂霉素分别处理转染前后的胃癌细胞,采用MTT比色法、克隆形成抑制实验检测癌细胞体外生长活性:透射电镜、流式细胞术、TUNEL检测癌细胞凋亡及比率;Western blot和比色法检测细胞内caspase-3蛋白表达和活性水平.结果:RT-PCR和Western blot证实,稳定转染反义XIAP基因的胃癌细胞MKN-45的XIAP mRNA和蛋白表达水平分别降低84.75%(P<0.01)和89.75%(P<0.01),各浓度顺铂、丝裂霉素处理24 h后,转染反义XIAP基因的MKN-45细胞生长抑制率分别增加7.3%-25.3%(P<0.01),12.3%-16.3%(P<0.01).透射电镜下可见部分细胞发生典型的凋亡形态学改变,凋亡率分别为34.12%和32.5%,显著高于未转染对照组MKN-45细胞的凋亡率(14.2%,P<0.05).与MKN-45细胞比较,稳定转染反义XIAP基因的MKN-45细胞内caspase-3表达水平增高2.45倍(P<0.01),活性水平提高3.68倍(P<0.0 1).结论:通过反义RNA技术下调XIAP基因表达,能提高癌细胞中caspase-3的表达和活性,增强化疗药物对癌细胞的诱导凋亡作用.     

β-榄香烯对肾癌786-0细胞凋亡的影响及其机制探讨

目的观察β-榄香烯对肾癌786-0细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法使用不同浓度β-榄香烯作用于786-0细胞24 h,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,W estern b lot法检测细胞内磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）及总Akt。结果随β-榄香烯浓度增大,细胞存活率逐渐降低,细胞凋亡率明显增加,细胞内p-Akt表达水平逐渐降低,均呈一定浓度依赖性（P均〈0.05）。结论β-榄香烯可诱导肾癌细胞凋亡,其机制可能为抑制PI3K/Akt通路活性。     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸诱导人胃癌细胞凋亡过程加端粒酶活性的测定

目的：观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞株的作用。方法：用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与人胃癌细胞株共同孵育一定时间后,观察细胞形态变化,观察细胞DNA含量的分布,测定端粒酶活性。结果：端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导人胃癌细胞凋亡,抑制端粒酶活性。在形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成。电冰呈凋亡特征性Ladder带;流式细胞仪分析显示,在G1期前出现亚2倍体凋亡峰;端粒酶活性抑制。结论：端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导胃癌细胞凋亡,抑制端粒酶活性,抑制端粒形成,从而抑制胃癌细胞的生长。     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人肝癌细胞株端粒酶活性作用的实验研究

观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对肝癌细胞株的作用。用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与肝癌细胞株共同孵育一定时间后,观察细胞形态变化、细胞DNA含量的发布,测定端粒酶活性。端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导肝癌细胞凋亡,抑制端粒酶活性,在形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成;电泳呈凋亡特征性Ladder带;流式细胞仪分析显示,在G1期前出现亚2倍体凋亡峰;端粒酶活性抑制,端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导肝癌细胞凋亡,抑制端粒酶活性,抑制端粒合成,从而抑制肝癌细胞的生长。     

全反式维甲酸和5-Fu对胃癌细胞端粒酶活性和细胞生长的影响

目的观察ATRA,5-Fu单独和联合应用对体外培养的胃癌细胞端粒酶活性及细胞生长的影响.方法分别用ATRA,5-Fu单独和联合处理胃癌MGC-803细胞,采用MTT法测定细胞活力,采用端粒重复序列扩增法测定端粒酶活性.结果胃癌细胞活力随ATRA,5-Fu浓度增高、作用时间的延长其细胞活力逐渐下降,ATRA d1,d3,d 5的IC50分别为>40μmol/L,(20～40)μmol/L,(10～20)μmol/L;5-Fu d1,d3,d5的IC50分别为>25μmol/L,(2～5)μmol/L,(2～5)μmol/L;40μmol/L ATRA,5μmol/L 5-Fu及40μmol/LATRA+5μmol/L 5-Fu处理胃癌细胞3 d其细胞活力分别为46%,47%,8%(P<0.01),端粒酶活性分别为45.68%(P<0.01),100.00%,46.10%(P<0.01).结论ATRA,5-Fu均能抑制胃癌细胞的生长,其抑制作用具有时间和浓度依赖性,且二者合用具有协同抑制作用;ATRA能抑制胃癌细胞端粒酶活性,而5-Fu对胃癌细胞端粒酶活性无影响,二者合用对胃癌细胞端粒酶活性无协同抑制作用.抑制端粒酶活性可能是ATRA抗癌机制之一.     

药物诱导胃癌细胞凋亡的初步探索

目的:了解羟基喜树碱和氧化砷体外诱导胃癌细胞凋亡的能力.探索最佳诱导时间和剂量.并初步阐明其作用机制。方法:利用HE染色法、流式细胞仪和DNA末端原位标记染色法(TUNEL)观察羟基喜树碱和氧化砷在体外对胃癌细胞MKN-28(高分化腺癌)。SGC-7901(中分化腺癌)。MKN-45(低分化腺癌)的作用 结果:药物作用48小时后,羟基喜树碱0.01mg/ml组胃癌细胞MKN-28、SGC-7901、MKN-45的凋亡率分别为30.26％、21.88％和12.35％,氧化砷10μmol/L组胃癌细胞MKN-28、SGC-7901、MKN-45的凋亡率分别为22.52％、13.83％和9.68％其中羟基喜树碱在细胞周期的S期诱导胃癌细胞发生凋亡,而氧化砷则主要作用于G2/M期。     

β-榄香烯对肝星状细胞凋亡相关蛋白Bcl-2家族的影响

[目的]研究β-榄香烯对肝星状细胞(HSC)凋亡及凋亡相关蛋白的影响。[方法]传代培养的大鼠HSC系HSC-T6与不同剂量β-榄香烯(终浓度为10、5、2.5 mg/L)共同培养48 h后,应用Annexin-V-碘化丙锭染色检测β-榄香烯对HSC凋亡的影响,免疫组化检测凋亡相关蛋白BcL-2/Bax。[结果]β-榄香烯可使HSC凋亡率明显增多,同时可使凋亡抑制分子Bcl-2表达下调,促凋亡分子Bax表达增强(P<0.01)。[结论]β-榄香烯可通过下调Bcl-2/Bax比率,促进HSC凋亡。     

β-榄香烯对胃癌MGC803细胞凋亡的影响及机制探讨

目的观察β-榄香烯对胃癌MGC803细胞凋亡的影响,并探讨其机制c用不同浓度β-榄香烯作用于MGC803 24～48 h,MTT法检测细胞活力,流式细胞术测算细胞凋亡率,Western blot法检测MGC803中的磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK）及总ERK。结果随着药物浓度增加,细胞存活率逐渐降低（P均〈0.05）,细胞凋亡率明显增高（P均〈0.05）;随着药物浓度增加、作用时间延长,MGC803中p-ERK表达量显著下降（P均〈0.05）。结论β-榄香烯可诱导胃癌MGC803凋亡,其机制可能与抑制细胞ERK通路活性有关。