逆转录-聚合酶链反应法检测消瘤保肺丸对E-cad、α-catenin及β-catenin表达的影响

目的 研究消瘤保肺丸对人肺癌PG细胞中E-cad、α-catenin及β-catenin表达的影响.方法 采用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测E-cad、α-catenin及β-catenin表达的情况.随机分为四组,即消瘤保肺丸高剂量组、消瘤保肺丸低剂量组、对照组及空白组,分析电泳凝胶的灰度值.结果 消瘤保肺丸高剂量组对3种分子的表达与空白组差异显著,(P<0.01).消瘤保肺丸低剂量组α-catenin、β-catenin表达与空白组差异显著,(P<0.05);E-cad表达与空白组无显著差异,(P>0.05).在α-catenin的表达与空白组差异显著,(P<0.05).结论 消瘤保肺丸对人肺癌PG细胞的E-cad、α-catenin及β-catenin的表达有明显影响,消瘤保肺丸对肺癌有一定的抑制作用,该实验为今后分子水平的进一步研究提供了依据.     

肺岩宁方对转移性肺癌小鼠上皮标志因子表达的影响

目的 研究上皮-间质细胞转化相关上皮细胞标志因子在C57小鼠Lewis肺癌中的表达以及肺岩宁方对其mRNA表达的影响. 方法 采用实时PCR观察C57小鼠Lewis肺癌右腋下移植瘤和远处转移灶发生的肺组织中上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)、α-连环蛋白(α-catenin)、β-连环蛋白(β-catenin)mRNA表达及肺岩宁方对其表达的影响.结果 肺岩宁治疗组较模型组肺转移率明显降低(P＜0.01);对于各组移植瘤组织中,肺岩宁治疗组及化疗阳性对照组的移植瘤组织中E-cadherin、α-catenin及β-catenin均较模型组升高(P＜0.01);模型组肺组织中E-cadherin、α-catenin、β-catenin表达明显低于正常肺组织中的表达(P<0.05),而经过肺岩宁方治疗后,三个标志因子均有显著升高(P<0.05或P<0.01).结论 肺岩宁方具有上调上皮细胞标志因子的作用,其可能通过抑制上皮-间质细胞转化过程的发生而达到抗肿瘤转移的作用.     

人肺癌细胞系PA、PG对重组基底膜侵袭的作用以及消瘤保肺丸的影响

目的:探讨人肺癌细胞系PA(人低转移性肺腺癌细胞株)、PG(人高转移性巨细胞肺癌细胞株)时重组基地膜侵袭作用及消瘤保肺丸对其侵袭能力的影响.方法:取8只健康日本大耳白兔,随机分为消瘤保肺丸高剂量组、低荆量组、清肺化痰丸对照组,生理盐水空白组4组,每组2只.每组每天早晚各给药1次,每次10 ml/kg.其中高、低荆量组分别相当于人等效剂量的10、5倍,对照组相当于人等效剂量的5倍,空白组给以等量生理盐水,连续给药3日,末次给药后2 h内分别从耳中央动脉无茵采血,制备舍药血清,采用Transwell细胞培养小室建立了人肿瘤细胞体外侵袭模型,光学显微镜观察侵袭细胞的相对数目来表示肿瘤细胞的侵袭能力.结果:消瘤保肺丸高剂量组、低剂量组对人肺癌PA、PG有明显的抑制作用,与对照组、空白组比较,组间差异有显著性(P<0.05).结论-消瘤保肺丸能明显抑制人肺癌细胞系PG、PA对重组基底膜侵袭能力.     

基因芯片技术检测消瘤保肺丸对肿瘤转移相关基因表达的影响

目的: 基因芯片技术检测消瘤保肺丸对肿瘤转移相关基因表达的影响。方法: 采用消瘤保肺丸中药灌胃、采集兔含药血清。消瘤保肺丸含药血清与PG细胞培养48 h后,观察用药后细胞肿瘤转移相关基因表达的变化。结果: PG细胞空白组与用药组比较:经药物干预后,用药组有30多个基因表达上调大于1.5倍,其中包括DCC,GPNMB,MCAM,ETV4,FN1等,无表达下调基因。结论: 消瘤保肺丸对肺癌转移的调控是多层次、多靶点的;同时也反映出该药对于转移潜能不同的细胞类型其作用靶点可能也不尽相同。     

丹参酮ⅡA对乏氧环境下人高转移性巨细胞肺癌细胞表面β1-整合素及E-cadherin表达的影响

目的 探讨丹参酮ⅡA对低氧培养的人高转移性巨细胞肺癌(PG)细胞表面黏附分子E-cadherin、β1-整合素表达的影响.方法 PG细胞复苏,按干预药物不同分为丹参酮ⅡA高、中、低剂量组及顺铂组、阴性对照组,分别置于常氧和低氧环境下培养,48 h后应用流式细胞术测定黏附分子E-cadherin、β1-整合素在各组PG细胞表面表达情况.结果 低氧环境下,PG细胞所表达β1-整合素荧光强度随丹参酮ⅡA浓度的增高而逐渐减弱,但表达β1-整合素的阳性细胞率接近100％,无统计学意义;PG细胞表达E-cadherin,随着丹参酮Ⅱ A浓度的增加,其阳性细胞数增加,但表达E-cadherin的荧光强度很弱,无统计学意义.常氧环境下,PG细胞所表达β1-整合素的荧光强度随着丹参酮ⅡA浓度的增高逐渐减弱,表达β1-整合素的阳性细胞率接近100％,无统计学意义;PG细胞表达E-cadherin,随着丹参酮Ⅱ A浓度的增加,其阳性细胞数减少,但表达E-cadherin荧光强度很弱,没有统计学意义.结论在常氧环境下,丹参酮ⅡA通过下调E-cadherin和β1-整合素表达来抑制PG细胞的浸润转移;在低氧环境下,通过下调β1-整合素来抑制PG细胞的转移而上调E-cadherin表达来增加PG细胞的浸润转移能力.     

山仙颗粒对Lewis肺癌转移过程中E—cadherin CD44V6及nm23-H1表达影响的实验研究

目的:探讨山仙颗粒对Lewis肺癌转移过程中E-cadllerin、CD44v6及nm23-H1表达的影响.方法:将45只C57BL/6小鼠随机分成空白对照组、荷瘤对照组、山仙颗粒组.给后两组接种瘤细胞,山仙颗粒组用0.5g/mL的山仙颗粒悬液0.4mL(只·天)灌胃,其他两组用生理盐水灌胃.采用免疫组化S-P法测45只小鼠肺组织、瘤组织内E-cadherin、CD44v6和nm23-H1表达情况.结果:荷瘤对照组与山仙颗粒组比较,出瘤时间短,瘤重及肺转移灶数高,差异有显著性(P＜0.05);与山仙颗粒组、空白对照组比较,E-chdherin和nm23-H1的阳性表达率低,CD44V6的阳性表达率高,差异有显著性(P＜0.05,P＜0.01).结论:E-cadherin、CD44V6和nm23-H1异常表达在Lewis肺癌形成和转移过程中发挥着重要作用,山仙颗粒能提高E-cadherin和nm23-H1的表达,降低CD44V6的表达.山仙颗粒有抗恶性肿瘤形成和转移的作用.     

双参消瘤汤调控Wnt/β-catenin信号通路防治胃癌的分子机制研究

目的：基于Wnt/β-catenin信号通路研究双参消瘤汤抑制胃癌细胞增殖防治胃癌的分子机制。方法：动物实验采用健康雄性BALB/c-nu小鼠依据MNNG喂养法建立胃癌小鼠模型，根据干预方法不同分为模型组、双参消瘤汤高剂量组、双参消瘤汤低剂量组、miR-338-3p agomir组、联合组（双参消瘤汤+miR-338-3p agomir）；连续干预8周后采用ELISA法测定血清胃动素（MTL）、胃蛋白酶原Ⅰ（PGⅠ）、胃泌素（GAS）等水平，HE染色观察肿瘤组织病理，Real-time PCR法检测肿瘤组织miR-338-3p、SIRT2、Wnt、β-catenin mRNA表达水平，Western blot检测肿瘤组织SIRT2、Wnt、β-catenin蛋白表达水平。细胞实验根据干预方法不同分为模型组、双参消瘤汤高剂量组、双参消瘤汤低剂量组、miR-338-3p mimics组、miR-Con组；干预后采用MTT法检测细胞活性，Real-time PCR法检测细胞miR-338-3p、SIRT2、Wnt、β-catenin mRNA表达水平。结果：干预后，与模型组相比，双参消瘤汤高剂量组、双参消瘤汤低剂量组、miR-338-3p agomir组和联合组小鼠血清MTL、PGⅠ及GAS水平明显升高（P <0.05）。HE染色发现，双参消瘤汤高剂量组、双参消瘤汤低剂量组、miR-338-3p agomir组和联合组的胃组织病理学较模型组得到不同程度的改善。干预后，与模型组相比，双参消瘤汤高剂量组、双参消瘤汤低剂量组、miR-338-3p agomir组和联合组肿瘤组织miR-338-3p、SIRT2、Wnt、β-catenin mRNA表达水平明显升高（P <0.05）。干预后，与模型组相比，双参消瘤汤高剂量组、双参消瘤汤低剂量组、miR-338-3p agomir组和联合组肿瘤组织SIRT2、Wnt、β-catenin蛋白表达水平明显升高（P <0.05）；干预后，与模型组相比，双参消瘤汤高剂量组、双参消瘤汤低剂量组和miR-338-3p mimics组细胞存活率均明显升高（P <0.05）；与模型组相比，双参消瘤汤高剂量组、双参消瘤汤低剂量组和miR-338-3p mimics组胃癌细胞miR-338-3p、SIRT2、Wnt、β-catenin mRNA表达水平明显升高（P <0.05）。结论：双参消瘤汤抑制胃癌细胞增殖防治胃癌的分子机制与通过miR-338-3p靶向调控SIRT2促进Wnt/β-catenin信号通路活化有关。     

健脾消癌方对人结肠癌HCT116细胞周期、凋亡及Wnt/β-catenin信号通路相关因子的影响

目的观察健脾消癌方对Wnt/β-catenin信号通路相关因子及人结肠癌HCT116细胞周期、凋亡的影响,探讨其抗大肠癌复发转移的作用机制。方法将对数生长期的HCT116细胞分为空白组、生理盐水组、5-Fu组及健脾消癌方低、中、高剂量组,分别干预48 h,收集细胞,采用流式细胞术检测细胞周期、凋亡,Western blot检测细胞核内β-catenin蛋白表达,PCR检测c-myc、cyclinD1 mRNA表达。结果与空白组及生理盐水组比较,健脾消癌方各剂量组HCT116细胞凋亡比例、G1期细胞比例增加,S期细胞比例降低,且其细胞核内β-catenin蛋白表达降低,c-myc、cyclinD1 mRNA表达降低,尤以健脾消癌方高剂量组明显,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论健脾消癌方可促进人结肠癌HCT116细胞凋亡并将其细胞周期阻滞,其机制可能与调节Wnt/β-catenin信号通路有关。     

化痰消瘤方对荷Lewis肺癌小鼠nm-23,VEGF表达的影响

目的:观察化痰消瘤方对Lewis肺癌小鼠瘤质量及肺转移灶的影响,检测瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF),nm-23 mRNA表达的情况,探究其作用机制。方法:取雄性C57BL/6J小鼠30只,随机分为空白组,化痰消瘤方组(50 g·kg~(-1)·d~(-1)),环磷酰胺(CTX)组[0.06 g·kg~(-1)·(3,7 d)~(-1)],共3组,每组10只。右腋下注射细胞悬液建立荷Lewis肺癌小鼠模型,造模后观察21 d,处死,剥离瘤组织,计算抑瘤率,摘取肺组织,固定后显微镜下观察肺转移灶个数,计算抗肺转移率,通过实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测瘤组织中nm-23,VEGF mRNA表达情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测瘤组织中nm-23,VEGF蛋白的表达情况。结果:与空白组比较,化痰消瘤方组及环磷酰胺组瘤质量、肺转移灶个数均显著降低(P0.01)。与空白组比较,化痰消瘤方及环磷酰胺能显著下调VEGF蛋白和VEGF mRNA的表达水平(P0.01),能显著上调nm-23蛋白和mRNA的表达水平(P0.01)。结论:化痰消瘤方具有抑制Lewis肺癌瘤体生长及转移的作用,其作用机制可能是通过降低VEGF的表达水平,减弱了肿瘤新生血管的生成,同时上调nm23 mRNA表达水平,抑制肿瘤生成与转移来实现的。     

丹参酮ⅡA对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中Wnt/β-catenin信号途径的影响

目的 探究高糖诱导肾小管上皮细胞转分化过程中Wnt/β-catenin信号途径的表达及丹参酮ⅡA对其影响。方法 将人近端肾小管上皮细胞(HK-2),分为正常糖组（NG组）、高糖组（HG组）、高糖+丹参酮ⅡA干预组（HG+T组）。采用免疫细胞化学观察β-catenin表达情况;Western印迹检测β-catenin、上皮细胞标志性蛋白E-钙粘蛋白(E-cadherin)、间充质细胞标志性蛋白α-SMA的表达;RT-PCR检测β-catenin、E-cadherin mRNA表达水平。结果 与NG组比较,HG组β-catenin蛋白及mRNA表达显著增强（P<0.01),E-cadherin表达显著降低（P<0.01),β-catenin蛋白在胞浆与胞核表达增强。终浓度为100 μmol/L的丹参酮ⅡA可显著减少β-catenin的异位表达;在该浓度下,β-catenin在胞核蛋白及mRNA的表达量显著下降, 而E-cadherin蛋白及mRNA的表达水平上升,同时间充质细胞标志性蛋白α-SMA的表达明显下降。结论Wnt / β-catenin信号途径参与了高糖诱导肾小管上皮细胞转分化过程,丹参酮ⅡA可能通过下调Wnt / β-catenin信号途径的活性而抑制转分化过程,进而发挥保护肾脏的作用。     

肠胃清抗结肠癌侵袭转移机制初步探讨

目的:肠胃清抗结肠癌侵袭转移的分子机制研究。方法:以人结肠癌细胞株Lo Vo为研究对象,实验分为空白组,肠胃清低、中、高剂量组(0.98,1.97,3.93 g·L-1),奥沙利铂组(9.23 mg·L-1),联合组(肠胃清中剂量联合奥沙利铂组);药物作用于结肠癌Lo Vo细胞后,采用RT-q PCR法,Western blot法检测肠胃清对侵袭转移相关的E钙黏蛋白(E-cadherin)及Wint/β-链蛋白(β-catenin)信号通路因子β-catenin,(基质金属蛋白酶-7)MMP-7 mRNA及蛋白的影响。结果:与空白组比较,肠胃清低、中、高剂量组、奥沙利铂组及联合组均升高Lo Vo细胞E-cadherin mRNA的表达(P0.01),均能降低β-catenin及MMP-7 mRNA的表达(P0.05,P0.01),联合组作用更强;与空白组比较,肠胃清低、中、高剂量组、奥沙利铂组及联合组均升高Lo Vo细胞E-cadherin蛋白的表达(P0.05),均能降低β-catenin及MMP-7蛋白的表达(P0.05,P0.01),联合组作用更强。结论:肠胃清可以增加E-cadherin的表达量,增强细胞间的黏附能力,同时肠胃清可抑制Wint/βcatenin信号通路活性,降低β-catenin,MMP-7的表达,与奥沙利铂有协同作用。     

臭牡丹总黄酮通过调控Wnt/β-catenin通路影响A549细胞上皮间质转化研究

目的探讨臭牡丹总黄酮对人肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的作用及其机制。方法将pcDNA3.1+空载体与S45位点突变的β-链蛋白(S45A-β-catenin)真核过表达载体转染A549细胞,给予臭牡丹总黄酮干预。MTT法检测细胞的相对存活率,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室侵袭实验检测细胞的侵袭能力,Western blotting法检测各组细胞β-catenin、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、转录因子Snail 2(Slug)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、p-GSK-3β的表达水平。结果转染S45A-β-catenin质粒后,A549细胞增殖、迁移、侵袭能力均明显增强,β-catenin、vimentin蛋白表达水平显著上调,E-cadherin、GSK-3β、P-GSK-3β蛋白的表达水平显著下调。臭牡丹总黄酮可抑制A549细胞的增殖、迁移与侵袭能力,对转染S45A-β-catenin质粒组的细胞作用尤为明显。对转染空载质粒的A549细胞,可上调E-cadherin、GSK-3β、P-GSK-3β表达,下调β-catenin、vimentin表达;对转染S45A-β-catenin质粒的A549细胞,可下调β-catenin、vimentin表达。结论抑制细胞中β-catenin的高表达并调控下游的一系列因子,从而影响Wnt/β-catenin通路诱导的上皮间质转化(EMT)现象可能是臭牡丹总黄酮抑制肺癌侵袭、转移的重要作用机制之一。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨血府逐瘀汤在非小细胞肺癌EGFR-TKI获得性耐药中的作用

目的:探讨血府逐瘀汤基于Wnt/β-catenin信号通路对非小细胞肺癌(NSCLC)表皮生长因子(EGFR)-酪氨酸酶抑制剂(TKI)获得性耐药小鼠模型的干预作用。方法:选取SPF级Balb/c小鼠40只,腋下接种NSCLC EGFR-TKI获得性耐药细胞株构建皮下移植瘤,随机分为空白组、TKI组、低剂量组、高剂量组、高剂量+TKI组,共五组,每组8只。各组小鼠均经灌胃给药,给药剂量:厄洛替尼(TKI)30 mg/(kg·d),血府逐瘀汤低剂量含生药15 mg/ml、30 ml/(kg·d)给药,高剂量含生药45 mg/ml、30 ml/(kg·d)给药。空白组给予0.9%氯化钠溶液(0.4 ml/只)。比较各组瘤体体积、肿瘤生长抑制率、肿瘤细胞增殖指数、Wnt3α、P-GSK3β与β-catenin的蛋白表达情况。结果:在给药第16天、第20天时,高剂量+TKI组瘤体体积小于空白组及TKI组,在给药第20天时,高剂量组瘤体体积小于空白组(P<0.05)。在给药第16天、第20天时,高剂量+TKI组瘤体生长抑制率高于TKI组、高剂量组,在给药第20天时,高剂量组瘤体生长抑制率高于TKI组(P<0.05)。空白组、TKI组、低剂量组肿瘤细胞增殖Ki67指数比较差异无统计学意义(P>0.05); 高剂量组、高剂量+TKI组肿瘤增殖Ki67指数均低于空白组,高剂量+TKI组肿瘤增殖Ki67指数低于高剂量组(P<0.05)。空白组、TKI组、低剂量组Wnt3α、P-GSK3β与β-catenin的蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05); 高剂量组、高剂量+TKI组Wnt3α、β-catenin蛋白表达均低于空白组,P-GSK3β蛋白表达均高于空白组(P<0.05)。结论:高剂量血府逐瘀汤可抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活,通过下调Wnt3α、β-catenin蛋白表达,上调P-GSK3β蛋白表达来延缓EGFR-TKI获得性耐药NSCLC小鼠肿瘤进展,抑制腋下移植瘤体积,降低肿瘤细胞增殖指数。     

川芎嗪对乏氧人肺癌细胞β1-整合素及钙依赖黏附素表达的影响

目的:探讨川芎嗪对乏氧人巨细胞肺癌(PG)细胞表达β1-整合素和钙依赖黏附素的影响。方法:PG细胞复苏,分为川芎嗪高、中、低剂量组及顺铂组、阴性对照组,置常氧和低氧环境培养,检测E-cadherin(CD324)、β1-整合素(CD29)的表达。结果:PG细胞CD324常氧组表达大于低氧组;在常氧和低氧环境中,各实验组CD324表达均大于对照组;常氧组CD29表达低于低氧组。结论:在乏氧环境下PG细胞有更高的转移能力,川芎嗪能够抑制PG细胞的转移能力。     

β-catenin、Axin在卵巢上皮细胞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨β-连环蛋白(β-catenin)和轴蛋白(Axin)在卵巢癌组织中表达情况及其临床意义。方法应用免疫组织化学染色法检测42例卵巢上皮细胞癌、20例卵巢良性肿瘤组织标本中β-catenin和Axin蛋白的表达情况,分析β-catenin、Axin表达与卵巢癌临床病理因素的关系。结果卵巢上皮细胞癌组织中β-catenin的异常表达率明显高于卵巢上皮性良性肿瘤组织(P<0.05),Axin阳性表达率明显低于卵巢上皮性良性肿瘤组织(P<0.05);β-catenin和Axin在卵巢上皮细胞癌中的表达呈负相关性(r=-0.442,P<0.05);β-catenin异常表达率和Axin阳性表达率与卵巢上皮细胞癌临床分期、组织学分级、有无淋巴结转移密切相关(P均<0.05),而与病理类型无明显关系(P均>0.05)。结论β-catenin、Axin表达与卵巢癌临床分期、组织学分级及淋巴结转移有关,β-catenin、Axin可作为预测卵巢癌侵袭转移及预后的指标。     

紫朱软膏对糖尿病溃疡小鼠创面炎症反应及上皮-间充质转化的影响

目的:观察紫朱软膏对糖尿病溃疡小鼠创面炎症反应及上皮-间充质转化的影响。方法:采用C57B/L小鼠分别制备为普通溃疡模型和糖尿病溃疡模型，分为对照组、模型组、紫朱软膏组，连续干预14 d,观察小鼠创面愈合情况及愈合率。干预后采用qRT-PCR检测局部溃疡组织炎症相关因子白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮合酶(iNOS)、白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)的表达情况，采用Western blot、qRT-PCR方法检测上皮-间充质转化相关细胞因子锌指转录因子(Snail)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、β-连环蛋白(β-catenin)表达情况。结果:干预11、14 d,紫朱软膏组小鼠溃疡创面愈合率高于模型组(均P<0.01)。与模型组比较，紫朱软膏组小鼠溃疡创面组织IL-6、TNF-α、iNOS RNA表达降低，IL-4、IL-10 RNA表达升高(均P<0.05)。与模型组比较，紫朱软膏组小鼠溃疡创面组织snail、β-catenin、α-SMA表达上调，E-cadherin表达下...     

不同剂量五福饮对大鼠尾椎间盘退变髓核β—连环素、聚蛋白多糖及Ⅱ型胶原调控作用的实验研究

目的:探索不同剂量五福饮对大鼠尾椎间盘退变(IVDD)髓核β-连环素(β-catenin)、聚蛋白多糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原(Col2)的调控作用。方法:取SD大鼠64只,随机分为空白组、模型组、五福饮低剂量组及五福饮高剂量组。除空白组外,其余各组大鼠构建IVDD模型。模型构建成功后,五福饮低、高剂量组灌服不同剂量的五福饮药液,空白组和模型组大鼠灌服生理盐水。五福饮干预8周后,检测椎间盘髓核β-catenin阳性表达细胞数及mRNA表达水平,Aggrecan及Col2 mRNA水平。结果:模型制备4周后,与空白组比较,模型组、五福饮低、高剂量组大鼠50%缩足阈值(PWT)明显降低(P<0.05);尾椎间盘髓核β-catenin阳性表达细胞数明显升高(P<0.05)。五福饮干预8周后,与空白组比较,模型组大鼠尾椎5~6椎间盘Aggrecan与Col2 mRNA表达明显降低(P<0.05),β-catenin mRNA及阳性表达细胞数明显升高(P<0.05)。与模型组比较,五福饮低、高剂量组大鼠50%PWT、尾椎5~6椎间盘Aggrecan与Col2 mRNA表达均明显升高(P<0.05),β-catenin mRNA及阳性表达细胞数明显降低(P<0.05)。与五福饮低剂量组比较,五福饮高剂量组大鼠50%PWT、尾椎5~6椎间盘Aggrecan与Col2mRNA表达均明显升高(P<0.05),β-catenin mRNA及阳性表达细胞数明显下降(P<0.05)。结论:五福饮可延缓或部分逆转大鼠尾IVDD,且五福饮对大鼠尾IVDD治疗作用存在剂量依赖性。椎间盘髓核β-catenin可能是五福饮的作用靶点。     

黄芪多糖对人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤Wnt基因转导通路的影响

目的观察黄芪多糖对人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤Wnt基因转导通路中相关因子β-连环蛋白(β-catenin)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的影响。方法将30只SPF级雌性裸小鼠(BALB/c)随机分为对照组、模型组、黄芪多糖组,每组10只。模型组和黄芪多糖组均经右侧肩胛背部皮下注射人子宫内膜癌细胞系Ishikawa肿瘤细胞悬液制作人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型。造模4周后,黄芪多糖组给予黄芪多糖肌肉注射,对照组、模型组注射等量生理盐水,均连续14 d。实验结束后处死各组小鼠,摘取瘤体,计算抑瘤率;采用免疫组化法检测子宫内膜癌组织中β-catenin、E-cadherin蛋白表达情况,RT-PCR法检测β-catenin、E-cadherin mRNA表达情况。结果黄芪多糖组瘤体积、瘤质量均明显低于模型组(P均0.05),抑瘤率明显高于模型组(P0.05);模型组β-catenin蛋白和β-catenin mRNA表达水平均明显高于正常组(P均0.05),黄芪多糖组均明显低于模型组(P均0.05);模型组Ecadherin蛋白和E-cadherin mRNA表达水平均明显低于对照组(P均0.05),黄芪多糖组均明显高于模型组(P均0.05)。结论黄芪多糖可促进E-cadherin蛋白和基因表达,抑制β-catenin蛋白和基因表达,通过调控Wnt基因转导通路而发挥抗肿瘤作用。     

止消通脉宁干预转化生长因子-β1诱导人肾小管上皮细胞表型转化的研究

目的观察止消通脉宁药物血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)表型转化的影响,并探讨其机制。方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养并分为空白对照组、TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL+10%低剂量止消通脉宁药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL+10%中剂量止消通脉宁药物血清)、干预3组(TGF-β110 ng/mL+10%高剂量止消通脉宁药物血清)。药物干预24 h后,免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。在24、48、72 h应用酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)和纤连蛋白(FN)的含量。结果正常HK-2细胞表达E-cadherin,不表达α-SMA,经TGF-β1刺激后细胞表型发生转变,E-cadherin的表达明显减弱,α-SMA表达明显增强,且ColⅠ、ColⅢ和FN的分泌明显增加,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。止消通脉宁药物血清干预后α-SMA表达明显减弱,E-cadherin表达明显增强;同时抑制了ColⅠ、ColⅢ和FN的分泌,与TGF-β1诱导组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论止消通脉宁在一定程度上能够抑制人肾小管上皮细胞表型转化,减少细胞外基质成分的分泌,具有防治肾间质纤维化的作用。     

鳖甲煎丸对HepG2裸鼠移植瘤Wnt信号通路相关分子及靶基因的影响

目的:通过研究鳖甲煎丸对人肝癌Hep G2裸鼠移植瘤组织中Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关信号分子及靶基因表达的影响,探讨鳖甲煎丸抗肝细胞癌的分子机制。方法:建立裸鼠移植瘤肝癌模型,随机分为鳖甲煎丸高、中、低剂量(2.2,1.1,0.55 g·kg-1)组,模型组,正常组,肉眼观察鳖甲煎丸对人肝癌Hep G2裸鼠移植瘤生长的抑制作用,免疫组化检测移植瘤组织中β-catenin和T-框蛋白3(TBX3)的表达水平,免疫印迹法(Western blot)检测其移植瘤组织中p19ARF,双微基因2(MDM2),p53的表达水平。结果:鳖甲煎丸对人肝癌Hep G2裸鼠移植瘤生长具有明显的抑制作用,鳖甲煎丸能够抑制其移植瘤组织中β-catenin和TBX3的表达,和模型组比较,鳖甲煎丸高、中剂量组中β-catenin和TBX3表达均明显降低(P0.05)。同时,鳖甲煎丸能够促进人肝癌Hep G2裸鼠移植瘤组织p19ARF和p53表达,并抑制MDM2表达,鳖甲煎丸高、中剂量组p19ARF,p53,MDM2表达较模型组均有明显差异(P0.05)。结论:鳖甲煎丸能通过影响Wnt/β-catenin通路,调控β-catenin和TBX3的表达,继而通过调控TBX3/p19ARF/MDM2通路激活抑癌基因p53,最终抑制肝癌细胞的增殖并诱导其出现凋亡,从而达到抗肝细胞癌的目的。