存活素与辐射诱导的凋亡

存活素(survivin)是一种新发现的细胞内蛋白,属于抗细胞凋亡蛋白家族,在胚胎和各类肿瘤中均表达,但在除胸腺和睾丸以外的成人组织中未被发现。阐明存活素在细胞凋亡和增生中的分子机制及其作用,在抗癌治疗和抑制对机体有害的细胞凋亡方面具有重要意义。     

华蟾素对卵巢癌3AO细胞存活素表达的影响和意义

目的 探讨华蟾素对体外培养的卵巢痛3AO细胞存活素表达的影响和意义.方法 体外培养卵巢癌3AO细胞,采用不同浓度的华蟾素干预后,应用RT-PCR检测存活素的表达,流式细胞仪检测细胞的凋亡.结果 卵巢癌3AO细胞对照组的存活素mRNA表达为1.01±0.13,细胞凋亡率为(2.31±0.98)%;0.25 g/L华蟾素对卵巢癌3AO细胞存活素mRNA和细胞凋亡率无影响(P＞0.05);2.5 g/L华蟾素干预后,卵巢癌3AO细胞存活素mRNA表达为0.67 ±0.16,癌细胞凋亡率为(28.69±4.16)%,与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05);25 g/L华蟾素与2.5 g/L华蟾素对卵巢癌3AO细胞存活素mRNA和癌细胞凋亡率的影响差异无统计学意义(P＞0.05).结论 2.5 g/L华蟾素即可抑制卵巢癌3AO细胞存活素mRNA的表达,抑制癌细胞的增殖.     

白藜芦醇的辐射防护及其分子机理的研究

目的 研究白藜芦醇（RES）对受照射小鼠的辐射防护作用及其分子作用机理。方法 采用^60Coγ射线照射小鼠模型，观察小鼠30d存活和残废动物存活时间。用原位末端标记法观察受照射小鼠脾细胞凋亡，流式细胞仪检测脾细胞凋亡率和凋亡相关蛋白的表达水平，同时检测脾细胞内凋亡相关酶活性大小。结果 照射前给予RES能明显提高受照射小鼠的存活率，延长死亡动物存活时间。RES能明显抑制受照射小鼠脾细胞凋亡，提高Bcl-2表达水平，对于Fas表达无明显影响，同时脾细胞内的Caspase-3和Caspase-8活性明显升高。结论 RES具有明显的辐射防护途径，其作用机理与抑制加速器射敏感细胞的细胞凋亡有关。     

烟雾吸入伤大鼠肺组织细胞凋亡及凋亡调控基因表达的变化

探讨细胞凋亡及凋亡调控基因在大鼠烟雾吸入性损伤发生、发展中的作用及意义。以大鼠烟雾吸入伤为模型，应用TUNEL、免疫组化及RT－PCR技术，观察烟雾吸入伤后不同时相肺组织中Bcl-2、Bax、Fas、Fas配体（FasL)基因mRNA及蛋白的表达状态及其与细胞凋亡异常之间的关系。结果显示，烟雾吸入伤后细胞凋亡指数升高；烟雾吸入伤后可上调Bcl-2、Bax、Fas、FasL表达，mRNA表达在12h达峰值，蛋白表达在24h最高。在各时相点Bax、Fas、FasL基因表达与肺组织细胞凋亡有正相关关系。提示烟雾吸入伤后细胞凋亡增加，细胞存活同时受生存基因（Bcl-2)和死亡基因（Bax、Fas、FasL)的双重调控，凋亡相关基因参与了烟雾吸入伤过程细胞凋亡的调控。     

辐射诱导细胞凋亡的基因调控

ｐ５３和Ｂｃｌ－２家族在辐射诱导的细胞凋亡中起着中心作用，可调节许多凋亡相关基因的转录与表达，从而调控细胞凋亡；ｃ－ｍｙｃ是一个双向的调控基因，可因细胞生长条件的不同而不同；ＩＣＥ基因家族蛋白则在调控细胞凋亡过程中使一些有关蛋白底物酶解。这些基因及其它凋亡相关基因并不孤立存在，而是互相联系、互相作用，共同调节细胞的增殖、分化与凋亡。     

β辐射致大鼠血管平滑肌细胞凋亡的研究

目的 观察放射性核素^188Re辐射对平滑肌细胞凋亡的影响及其机制，探讨辐射所致平滑肌细胞凋亡在预防再狭窄中的作用。方法 ^188Re进行培养平滑肌细胞的内辐射。通过台盼蓝染色计数、流式细胞术、JAM法DNA碎裂量测定、透射电镜及免疫细胞化学检测等方法，研究辐射后平滑肌细胞的存活率、细胞凋亡率、DNA断裂量、细胞超微结构改变及相关基因表达。结果 放射性浓度＜2.96GBq/L辐射，平滑肌细胞存活率、细胞凋亡率、DNA断裂量及细胞超微结构等未发生明显改变；高剂量辐射下（放射性浓度＞2.96GBq/L），平滑肌细胞存活率显著下降，细胞凋亡率明显上升，细胞DNA断裂量增加，细胞超微结构明显破坏。辐射诱导细胞凋亡过程中，p53、bax表达上调，bcl-2/bax比值下调。结论 能够明显抑制平滑肌细胞增殖的低剂量辐射对细胞存活及细胞凋亡无明显影响，未见细胞超微结构改变及DNA的严重破坏；吸收剂量大于20Gy可导致平滑肌细胞大量凋亡；相关基因p53、bcl-2及bax参与调控辐射诱导细胞凋亡过程。低剂量及低剂量率辐射既能有效抑制细胞增殖，又不明显损伤细胞存活，是临床血管内放射治疗预防再狭窄的理想方法。     

雷公藤甲素联合高压氧处理对大肠癌SW620细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨高压氧(HBO)联合雷公藤甲素(TPL)处理对大肠癌SW620细胞凋亡及相关信号通路的影响。方法体外培养大肠癌SW620细胞完成后, 将细胞分为4组, 对照组不作处理, TPL组加入终质量浓度为2 mg/L的TPL溶液, HBO组则在高压氧舱中暴露培养90 min, HBO+TPL组将SW620细胞先在高压氧舱暴露培养90 min后用2 mg/L的TPL溶液处理。采用CCK-8法检测SW620细胞的增殖能力, 流式细胞术检测SW620细胞的凋亡情况, Western blotting实验检测SW620细胞凋亡相关蛋白及相关信号通路蛋白的表达水平。结果 HBO+TPL组SW620细胞的存活被进一步抑制, 其存活率[(52.13±2.43)%]明显低于TPL组[(78.54±2.47)%], 差异有统计学意义(P<0.05)。HBO+TPL组SW620细胞凋亡率[(38.2±3.2)%]明显高于TPL组[(28.4±2.1)%], 差异有统计学意义(P<0.05)。HBO+TPL组SW620细胞凋亡蛋白Bcl-2表达较TPL组明显降低, Bax和caspase-3的表达...     

P21蛋白和生存素在美伐他汀诱导人非小细胞肺癌凋亡中的作用

目的 研究P21蛋白和生存素（survivin）在美伐他汀诱导非小细胞肺癌（NSCLC）细胞凋亡中的作用及其分子机制。方法 应用MTT法检测美伐他汀对A549、NCI-H520细胞株的抑制作用,应用流式细胞仪、透射电镜研究美伐他汀对A549、NCI-H520细胞株的细胞周期阻滞和诱导凋亡作用,应用流式细胞仪和RT-PCR检测P21蛋白、P21mRNA、生存素mRNA的表达。结果 MTT试验表明美伐他汀对A549、NCI-H520增殖有明显的抑制作用;流式细胞仪检测显示美伐他汀诱导A549、NCI-H520细胞G0／G1期阻滞;Annexin V结果证实美伐他汀可诱导A549、NCI-H520细胞凋亡,而且凋亡率随剂量的增加而增加。美伐他汀对A549、NCI-H520细胞P21mRNA及P21总蛋白的表达无影响,但可使P21胞膜蛋白的表达下降。美伐他汀作用后生存素mRNA表达下降。加入甲羟戊酸可完全逆转美伐他汀的上述作用。结论 美伐他汀通过甲羟戊酸途径诱导NSCLC G0／G1期阻滞,抑制增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制P21蛋白异戊二烯化和下调生存素mRNA表达有关。     

辐射诱导细胞凋亡的基因调控

ｐ５３和Ｂｃｌ－２家庭在辐射诱导的细胞凋亡中起着中心作用，可调节许多凋７亡基因的转录与表达，从而调控细胞凋亡；ｃ－ｍｙｃ是一个双向的凋控基因，可因细胞生长条件的不同而不同；ＩＣＥ基因家庭蛋白则在调控细胞凋亡过程中使一些有关蛋白底物酶解。这些基因及其它凋亡相关基因并不孤立存在，而是互相联系、互相作用，共同调节细胞的增殖、分化与凋亡。     

细胞凋亡与周围神经损伤后运动神经元死亡

凋亡是一种完全不同于坏死的细胞死亡方式，是由于内、外因素激发细胞本身自杀程序引起的，又称程序性细胞死亡。细胞凋亡是多细胞生物生命过程中不可缺少的一部分，与细胞增殖、分化等一样，是个体发育成熟所必需的。这种在生理状态下发生的凋亡可以使一个组织的细胞数保持动态平衡，维持生物个体的内稳态。凋亡在脊椎动物中枢及周围神经系统发育过程中也起重要作用，多种类型的神经元在与它们的靶细胞形成突触联系后不久，约半数或更多的神经元发生凋亡。这种生理性凋亡可持续至出生后的一段时间。在发育过程中存活的运动神经元也可在幼年…     

光动力学疗法与金丝桃素联合应用对C6胶质瘤细胞的作用

目的:探讨光动力学疗法(photodynamic therapy,PDT)与金丝桃素联合应用对C6胶质瘤细胞的作用。方法:用MTT法和电镜观察PDT联合金丝桃素对体外培养的C6胶质瘤细胞存活率的影响、检测凋亡、分析对细胞形态学的影响。同时考察其联合作用对C6胶质瘤细胞Bcl2和Bax蛋白表达的影响。结果:金丝桃素和PDT单独诱导C6胶质瘤细胞凋亡作用不显著     

细胞凋亡的线粒体调控机制与电离辐射

线粒体在外界刺激(如电离辐射)诱发细胞凋亡中起中心调控作用。各种死亡信号通过Bcl-2家族蛋白或直接诱导线粒体膜通透性增加、细胞色素c释放和caspases激活，最终引起细胞凋亡。线粒体膜通透性改变的机制，目前还不完全清楚。简要综述细胞凋亡的线粒体调控机制及电离辐射在其机制中的可能作用。     

存活蛋白对胶质瘤细胞替莫唑胺敏感性的影响

目的 探讨存活蛋白(survivin)对人脑胶质瘤细胞替莫唑胺(TMZ)敏感性的影响及其可能机制.方法 构建过表达survivin的U87/sur胶质瘤细胞,以及抑制survivin表达的U87/sur si胶质瘤细胞,经100μmol/L TMZ处理后,采用MTT法检测细胞增殖情况,克隆形成实验检测细胞的克隆形成能力,异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙啶(annexin V-FITC/PI)双标记联合流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting检测活化caspase-3表达水平.结果 经TMZ处理后,与亲代细胞相比,U87/sur si细胞的增殖活性明显下降,克隆形成率明显降低,凋亡率明显增加,而U87/sur细胞的增殖活性明显增强,克隆形成率明显增高,凋亡率明显下降.经TMZ处理后,与亲代细胞相比,U87/sur si细胞中活化的caspase-3蛋白水平升高,而U87/sur细胞中活化的caspase-3蛋白水平下降.结论 抑制survivin可明显提高胶质瘤细胞对TMZ的敏感性,其机制可能与survivin促进细胞凋亡有关.     

蛇床子素抑制HaCaT细胞增殖及诱导凋亡的影响

目的探讨蛇床子素抑制HaCaT细胞的增殖及诱导凋亡的影响。方法将不同浓度蛇床子素溶液作用于HaCaT细胞24h、48h和72h,用MTT法和流式细胞仪检测其对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用。结果蛇床子素能以时间和浓度依赖性的方式抑制HaCaT细胞增殖,且能以浓度依赖性的方式诱导HaCaT细胞凋亡。结论蛇床子素可以抑制HaCaT细胞的增殖并诱导HaCaT细胞的凋亡。     

葛根黄酮的辐射防护及其机制的研究

目的研究葛根黄酮对受照射小鼠的辐射防护作用及其作用机制。方法采用^60Coγ射线照射小鼠模型，观察8Gy照射小鼠30d存活和死亡动物存活时间。在低剂量照射模型观察用药后外周血指标和脏器系数变化，用原位末端标记法观察受照射小鼠脾细胞凋亡，流式细胞仪检测脾细胞凋亡率，同时检测血清中抗氧化酶和脂质过氧化物水平。结果照前给予葛根黄酮能明显提高受照射小鼠的存活率。葛根黄酮能明显促进受低剂量（5Gy）照射后小鼠的外周血白细胞恢复，提高受照小鼠的胸腺和脾脏指数，抑制受照射小鼠脾细胞凋亡，降低脾细胞内的caspase-3活性，降低脂质过氧化物水平。结论葛根黄酮具有明显的辐射防护作用，效果明显优于愈风宁心片。葛根黄酮抗辐射作用机制可能与抑制辐射敏感细胞的细胞凋亡和抗氧化作用有关。     

核磁共振在细胞凋亡研究中的应用

综述了核磁共振波谱法在细胞凋亡研究中的应用，利用ＮＭＲ可以研究凋亡细胞的能量代谢，离子变化，跨膜电位以及与凋亡相关的蛋白在溶液中的结构，还能用来标示凋亡的发生，对于某些能诱导凋亡的抗肿瘤药物作用机制的研究具有重要意义。     

穿透肽TAT融合表达载体的优化及其靶向应用的初步研究

目的设计并构建分别位于融合蛋白氨基端和羧基端的穿透肽TAT表达载体,比较两种融合蛋白的内化差异,并利用TAT将凋亡素VP3转导入细胞内,检测其促凋亡活性。方法荧光显微镜观察His-TAT-EGFP和His-EGFP-TAT融合蛋白内化效率的差异,并利用Western blotting检测内化入细胞的蛋白量。将VP3序列插入到内化效率高的穿透肽载体pET14b-EGFP-TAT中并诱导表达蛋白,观察该蛋白在不同细胞系(HeLa、HEK293、3T3、PC-3)的内化;利用DAPI染色观察该融合蛋白诱导HeLa细胞凋亡后核小体的形成,MTT法检测细胞存活率。结果在蛋白浓度梯度实验中,荧光显微镜观察和Western blotting检测均显示His-EGFP-TAT融合蛋白的内化效率明显高于His-TAT-EGFP融合蛋白。在不同种类细胞中均可观察到His-VP3-EGFP-TAT内化的强荧光颗粒;该蛋白和对照蛋白(His-EGFP-TAT)孵育HeLa细胞48h后,His-VP3-EGFP-TAT孵育细胞中可观察到核小体形成,MTT法检测该组细胞的存活率在500、1000、2000nmol/L蛋白作用下分别为87.23%±2.09%、53.01%±1.79%和42.52%±1.90%,与His-EGFP-TAT孵育细胞存活率(分别为97.21%±1.41%、95.72%±1.26%和94.35%±1.67%)比较差异有统计学意义(P0.01)。结论 TAT位于融合蛋白羧基端的蛋白内化活性高于位于氨基端的蛋白,His-VP3-EGFP-TAT融合蛋白可以高效内化进入不同的细胞系,并能有效诱导细胞凋亡。     

移植pSVPoMcat微基因修饰雪旺氏细胞对脊髓损伤后细胞凋亡的影响

目的探讨ｐＳＶＰｏＭｃａｔ微基因修饰雪旺氏细胞（ＳＣ）移植对脊髓损伤（ＳＣＩ）后细胞凋亡的作用。方法将实验动物分为ｐＳＶＰｏＭｃａｔ微基因修饰ＳＣ组（Ａ组），ＳＣ移植组（Ｂ组），损伤对照组（Ｃ组）。移植后１２周，对ＳＣＩ区的脊髓组织切片进行细胞凋亡的检测（甲基绿－派诺宁染色法和荧光原位标记法）以及Ｂｃ１～２和Ｆａｓ蛋白表达的测定（免疫组化法）。结果在Ａ、Ｂ、Ｃ组中，均发现凋亡细胞及Ｂｃ１～２和Ｆａｓ蛋白阳性表达。体视学计量发现，细胞凋亡率为Ｃ＞Ｂ＞Ａ；Ｂｃ１～２蛋白阳性表达顺序为Ａ＞Ｂ＞Ｃ；Ｆａｓ蛋白阳性表达顺序为Ｃ＞Ｂ＞Ａ。结论ｐＳＶＰｏＭｃａｔ微基因修饰ＳＣ移植能抑制ＳＣＩ后的细胞凋亡，而创伤则可诱发细胞凋亡     

p53蛋白调节射线所致细胞凋亡

细胞凋亡的形态学特证明确，但具体生化过程尚不很清楚。抑癌基因ｐ５３的蛋白产物在射线所致的凋亡中起重要作用，它的作用机制可能与ｐ５３蛋白的①同特异的ＤＮＡ一致顺序结合，激活或抑制某些基因的表达；②使射线损伤的细胞停滞在Ｇ１期和Ｇ２期；③同其它原癌基因的蛋白相互作用，影响细胞寿命等功能相关。     

高压氧对缺氧缺血新生大鼠脑组织存活素及细胞凋亡蛋白酶-3表达的影响

目的 观察高压氧(HBO)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxia-ischemia brain damage,HIBD)后脑组织存活素(survivin)及细胞凋亡蛋白酶-3(caspase-3)表达的影响,并探讨其保护机制.方法 144只7 d龄SD大鼠随机分为对照组(n=16)、新生HIBD组(n=64)及HBO治疗组(n=64).采用经典的Rice法制作缺氧缺血性脑损伤模型,应用Epics XL流式细胞仪检测细胞凋亡情况,并应用免疫组织化学法检测Survivin和Caspase-3表达变化.结果 与对照组相比,HIBD组细胞凋亡率及Survivin、Caspase-3表达水平明显升高,组间比较差异有统计学意义(P<0.05).通过相关性分析,HBO治疗可促进存活素表达,其表达水平和caspase-3表达负相关.结论 HBO可能通过增加抗凋亡因子Survivin表达来抑制Caspase-3激活,减少缺氧缺血性脑损伤后细胞凋亡,发挥神经保护作用.