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相似文献
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1.
Yu X  Deng XH  Chao L  Yu HL  Liu WJ 《中华妇产科杂志》2008,43(3):213-217
目的 探讨冻融后移植的小鼠卵巢组织对促性腺激素的反应.方法 将36只性成熟雌性小白鼠随机分为新鲜移植组、冻融移植组和对照组,每组12只.新鲜移植组小鼠切除双侧卵巢,将卵巢切成小组织块,立即移植人双侧肾被膜下;冻融移植组小鼠切除双侧卵巢,将卵巢切成小组织块,采用玻璃化冷冻方法冷冻保存,2周后将冷冻卵巢组织复苏,移植入小鼠双侧肾被膜下.卵巢组织移植2周后,新鲜移植组和冻融移植组每组随机取6只小鼠应用7.5 IU人绝经期促性腺激素及10 IU绒毛膜促性腺激素,观察移植后的卵巢组织对促性腺激素的反应.同时应用免疫组化染色方法观察各组卵泡中卵泡刺激素受体的表达情况.结果 新鲜移植组、冻融移植组和对照组未应用促性腺激素小鼠卵巢组织内近成熟卵泡百分率分别为2.3%、2.3%和2.6%,应用促性腺激素小鼠卵巢组织内近成熟卵泡百分率分别为4.2%、4.0%和5.8%,各组内分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05);新鲜移植组和冻融移植组与对照组比较,差异均元统计学意义(P>0.05).新鲜移植组、冻融移植组和对照组卵泡刺激素受体表达积分吸光度值在窦状卵泡中分别为9408±2777、9175±3093和8838±2064,在窦前卵泡中分别为4531±1903、4808±1386和5516±1136,各组间分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 卵巢组织冷冻保存、复苏及移植过程未影响卵巢卵泡刺激素受体的表达,冻融后移植的小鼠卵巢组织对外源性促性腺激素的反应未受冷冻、复苏及移植等过程影响.  相似文献   

2.
兔卵巢组织玻璃化冷冻的实验研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的:探讨玻璃化冷冻法保存兔卵巢组织的效果。方法:随机将25只新西兰雌兔分为对照组(5只)、慢速冷冻组(10只)和玻璃化冷冻组(10只),比较各组冻融前后卵巢组织学、超微结构、卵泡凋亡(原位末端标记法,TUNEL)和子宫系膜内移植后卵巢功能的恢复情况。结果:新鲜组织、慢速冷冻复苏组织和玻璃化冷冻复苏组织中正常形态卵泡比例分别为87.36%、81.96%和82.72%,两冷冻组正常卵泡比例均低于对照组,差异有统计学意义?P(0.05),但玻璃化冷冻组与慢速冷冻组差异无统计学意义(P>0.05)。3组间卵泡凋亡比率分别为21.4%、13.5%和17.1%,差异无统计学意义(P>0.05);3组移植后兔动情周期出现率均为100%,动情周期出现天数差异无统计学意义?P>0.05);移植存活的卵巢组织内可见各级形态正常的卵泡发育。结论:玻璃化冷冻可有效保存卵巢组织的结构和功能,是一种简单、可行的兔卵巢组织冷冻保存法。  相似文献   

3.
目的:探讨玻璃化冷冻和慢速冷冻何者更适于冻存人卵巢组织。方法:将10例因卵巢良性囊肿剔除术获取的人卵巢皮质组织切成薄片后随机分配到新鲜卵巢组(A组)、玻璃化冷冻组(B组)和慢速冷冻组(C组),通过光学显微镜和透射电子显微镜观察比较卵泡形态变化,免疫组织化学检测组织细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达变化。结果:A、B、C组中形态正常的原始卵泡比例分别占71.4%、70.1%、52.3%;形态正常的初级卵泡比例分别占76.0%、43.5%、31.8%;C组中形态正常的原始卵泡比例和初级卵泡比例均明显低于A、B组(P<0.05);B组形态正常的原始卵泡比例和初级卵泡比例与A组相比无统计学差异(P>0.05)。A、B组中形态正常的原始卵泡超微结构无明显改变,但B组中初级卵泡和C组中原始卵泡和初级卵泡的超微结构存在一定程度的改变。PCNA阳性表达主要见于卵母细胞、颗粒细胞和卵巢组织间质细胞,3组中均有PCNA表达,且表达无统计学差异。结论:玻璃化冷冻较慢速冷冻对人卵巢组织影响小,是一种较适宜的人卵巢组织冷冻保存方法。  相似文献   

4.
目的:评价抗冷冻蛋白Ⅲ(AFPⅢ)对玻璃化冷冻家兔卵巢组织的影响。方法:收集家兔卵巢30只,随机分为新鲜卵巢组、添加AFPⅢ玻璃化冷冻组(AFPⅢ终浓度为500 ng/ml)和常规玻璃化冷冻组,各组10只,解冻后分析各组卵巢的组织学结构、卵泡形态正常率、卵巢组织超微结构、卵母细胞凋亡率及卵泡存活率。结果:新鲜卵巢组的卵泡形态正常率(91.6%)、卵泡存活率(81.75%)显著高于两冷冻组(P0.01),卵母细胞凋亡率(12.0%)显著低于两冷冻组(P0.01);添加AFPⅢ玻璃化冷冻组卵泡形态正常率(77.5%)、卵泡存活率(45.31%)显著高于常规玻璃化冷冻组(分别为62.1%、37.25%)(P0.01),卵母细胞凋亡率(25.8%)显著低于常规玻璃化冷冻组(41.2%)(P0.01)。结论:家兔冷冻卵巢组织的卵泡形态正常率、卵泡存活率显著低于新鲜组织,冷冻保护剂中加入AFPⅢ可减少家兔卵巢组织冷冻损伤。  相似文献   

5.
目的探讨应用自制冷冻环进行人卵巢组织玻璃化冷冻的效果。方法2008年5月至9月在华中科技大学同济医学院附属同济医院收集5例人卵巢组织标本,以乙二醇、二甲基亚砜、蔗糖作为冷冻保护剂,自制冷冻环为载体进行玻璃化冷冻。并观察卵巢新鲜组织和冻融后组织始基卵泡和初级卵泡的形态学变化、凋亡情况、超微结构变化及体外培养内分泌功能。结果新鲜及冻融后组织形态正常卵泡比值分别是89.46±4.94、84.47±4.66,无统计学意义(P>0.05)。凋亡面积分别是(0.07±0.02)%、(0.10±0.05)%,无明显增加(P>0.05)。超微结构无明显改变。新鲜组织及冻融后组织体外培养上清液雌二醇含量分别(2549.73±711.87)pmol/L、(2514.87±714.66)pmol/L,无统计学意义(P>0.05)。结论自制冷冻环可作为一种便宜、方便、可行的人卵巢组织低温保存的可替代方法。  相似文献   

6.
3种玻璃化液对新生鼠卵巢的渗透反应及冻存效果的比较   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的:探索适宜新生鼠卵巢保存的玻璃化液和冷冻方案。方法:观察新生SD大鼠卵巢在预平衡液及3种玻璃化液中不同时间段的表面积变化,冻融后进行组织学观察和成年SD大鼠肾被膜下异体移植后在体活力分析。结果:新生鼠卵巢在预平衡液中出现渗透性脱水变化,移入EFS40(A组)、EG5.5(B组)、EG5.5/30(C组)3种玻璃化液中,再次剧烈皱缩。3min后,卵巢表面积分别为等渗液对照组表面积的63.2%、82.4%、70.8%。此脱水状态的卵巢玻璃化冻融后形态完整的卵泡百分率均与新鲜移植组(D组)无显著性差异(P>0.05);异体移植后,动情周期出现率和动情周期出现时间均与D组无显著性差异(P>0.05)。各冷冻移植组存活移植物均可见不同发育阶段的各级卵泡,但卵泡数目少于D组,移植20d时A组与D组间有显著性差异(P<0.05);移植60d时B组卵泡数少于D组,组间有差异(P<0.05);C组在各时间点上取材的卵泡数与D组均无差异(P>0.05)。结论:在预平衡液中15min、改良的EG5.5/30液中3min的二步渗透平衡法适宜新生鼠卵巢的玻璃化冷冻。  相似文献   

7.
两种冷冻保护剂玻璃化冷冻小鼠卵巢的比较研究   总被引:4,自引:0,他引:4  
目的:探讨两种玻璃化冷冻保护剂对小鼠卵巢组织学和功能的影响。方法:将23只4周龄ICR雌鼠随机分为新鲜卵巢移植组(6只)、去势组(5只)、EG40组(6只)和ED20组(6只)。EG40组和ED20组分别应用乙二醇(EG)和联合应用EG与二甲基亚砜(DMSO)玻璃化冷冻小鼠卵巢组织,一周后解冻,将一部分复苏卵巢组织自体移植入小鼠肾被膜下,另一部分组织行组织学观察。移植术后5d开始观察所有小鼠的动情周期,一个月后处死小鼠,对存活的卵巢组织行组织学观察。结果:EG40组、ED20组和新鲜卵巢移植组小鼠动情周期出现率均为100%,出现动情周期的天数分别为10.2±1.2d、8.0±0.9d和6.8±1.0d,EG40组动情周期出现天数明显多于新鲜卵巢移植组(P<0.01);ED20组与新鲜卵巢移植组差异无显著性(P>0.05)。移植存活的卵巢组织内可见不同发育阶段的卵泡,形态正常,但冻融卵巢组织内卵泡数量比新鲜组织少。结论:联合应用玻璃化冷冻保护剂EG和DMSO对小鼠卵巢组织学和功能的影响较小。  相似文献   

8.
目的:观察重组人卵泡刺激素(r FSH)对小鼠卵巢血管内皮生长因子(VEGF)以及整合素αvβ3表达的影响。方法:将4周龄C57BL/6J小鼠卵巢随机分为新鲜对照组(FCG)、玻璃化冻存对照组(VCG)、300 IU/L r FSH干预玻璃化冻存组(r FSH-VG)。通过对冻融卵巢内各级卵泡计数、免疫组织化学观察VEGF和整合素αvβ3在卵巢不同细胞中的定位,Western blotting检测VEGF、整合素αv和整合素β3蛋白表达量。结果:各级卵泡计数、VEGF及整合素β3的蛋白表达均为r FSHVG组优于VCG组(P0.05),整合素αv的表达组间均无统计学差异(P0.05)。结论:玻璃化冻融过程中添加r FSH可以上调VEGF及整合素β3蛋白的表达。  相似文献   

9.
目的:探讨冷冻保存对人卵巢组织E2分泌功能的影响。方法:收集20例卵巢良性肿瘤手术患者的正常卵巢皮质,随机分为新鲜对照组和玻璃化冷冻组,冻融后行体外培养,比较冻融前、后人卵巢组织的内分泌功能。结果:①在体外培养期间,所有卵巢组织均能持续分泌E2。新鲜对照组E2分泌水平始终高于冷冻组,培养前10d,差异有统计学意义(P<0.05);培养12d之后,组间E2水平无统计学差异(P>0.05)。②体外培养初期E2分泌水平较平稳,随培养时间延长E2水平呈波动性变化。结论:人卵巢组织冷冻解冻后仍具有内分泌功能,随着培养时间的延长,新鲜组与冷冻组间E2分泌水平可能无差异。  相似文献   

10.
热休克蛋白10、27和47在多囊卵巢综合征患者卵巢中的表达   总被引:2,自引:0,他引:2  
樊璐  刘嘉茵  马翔 《生殖与避孕》2007,27(6):393-398,409
目的:探索热休克蛋白(heat shock protein,HSP)10、27和47在多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢组织中的表达及其意义。方法:采用荧光实时定量PCR(SYBR GREEN Iassay)、Western blot和免疫组织化学技术分别对3例正常妇女(对照组)、3例无排卵PCOS患者(PCOS组)卵巢组织的HSP10、HSP27和HSP47的mRNA及蛋白进行测定。结果:①HSP10 mRNA在PCOS患者卵巢组织的表达与对照组相比,差异无显著性(P>0.05);HSP10蛋白在PCOS患者卵巢组织的表达与对照组相比,表达降低,差异有显著性(P<0.05);免疫组化结果显示HSP10表达于对照组卵巢的所有细胞,而在PCOS组仅在卵泡膜细胞表达水平较高。②HSP27 mRNA和蛋白在PCOS患者卵巢组织的表达降低与对照组相比,差异有显著性(P<0.05);免疫组化结果显示HSP27高表达于对照组卵巢原始卵泡的卵母细胞。③HSP47 mRNA和蛋白在PCOS患者卵巢组织的表达高于对照组,PCOS组卵巢,差异有显著性(P<0.05);免疫组化结果显示HSP47高表达于PCOS组卵巢的卵母细胞、颗粒细胞和间质细胞。结论:HSP10、HSP27和HSP47在PCOS患者卵巢和正常人卵巢中存在差异表达。  相似文献   

11.
目的:探讨小鼠植入前胚胎对输卵管上皮细胞DNA甲基转移酶I(Dnmt1)mRNA表达的影响。方法:采用免疫组织化学方法检测Dnmt1在小鼠输卵管的组织学定位;Real- timeRT- PCR检测正常妊娠和假孕小鼠在胚胎2细胞期、4细胞期和8细胞期时,输卵管上皮细胞Dnmt1mRNA表达水平的变化。结果:Dnmt1主要表达在小鼠输卵管的上皮细胞层;妊娠组小鼠各期输卵管上皮细胞Dnmt1mRNA表达水平均显著低于同期假孕组(P<0 05)。结论:小鼠植入前期的胚胎对母体输卵管上皮Dnmt1mRNA表达具有降调节作用,胚胎可能通过此作用间接调控输卵管上皮某些基因的表达。  相似文献   

12.
付正英  卢建荣  苏晓华 《生殖与避孕》2012,32(7):438-442,463
目的:研究GnRH-a长方案控制性超促排卵(COH)对小鼠妊娠率、胚胎着床率及着床期HOXA-10基因表达的影响,探讨COH影响胚胎着床的机制。方法:实验动物随机分为实验组(GnRH-a+hMG+hCG)和对照组(生理盐水),雌、雄合笼后观察小鼠阴栓率,于着床期取小鼠子宫,观察妊娠率及胚胎着床数,计算着床率;应用RT-PCR、Real-time PCR方法及免疫组织化学法分别检测小鼠着床期子宫内膜Hoxa-10 mRNA及蛋白的表达。结果:实验组小鼠阴栓率及妊娠率均明显低于对照组(P<0.01),实验组胚胎着床数高于对照组(P<0.01),但胚胎着床率较对照组显著降低(P<0.05),着床期小鼠子宫内膜Hoxa-10mRNA及蛋白表达下降,与对照组比较均有明显差异(P<0.05)。结论:GnRH-a长方案COH可引起小鼠着床期子宫内膜Hoxa-10表达下降,导致子宫内膜容受性降低,从而影响小鼠妊娠及胚胎着床。  相似文献   

13.
目的:探讨血管细胞黏附分子(VCAM-1)和细胞间黏附分子(ICAM-1)在子宫内膜异位症(EMT)发病中的作用及意义。方法:采用荧光定量聚合酶链反应技术(Real-Time PCR)和免疫印迹法(Western-Blot)分别检测EMT(15例)患者异位内膜、在位内膜和对照组(15例)子宫内膜中VCAM-1、ICAM-1mRNA及蛋白的表达情况。采用双抗夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)检测EMT组(44例)与对照组(28例)中可溶性VCAM-1(s VCAM-1)和可溶性ICAM-1(s ICAM-1)的水平,并对VCAM-1、ICAM-1在不同组中的mRNA、蛋白及血清中的表达行相关性分析。结果:1EMT异位内膜组VCAM-1、ICAM-1mRNA的表达均明显高于在位内膜组及对照组(P0.01);在位内膜组VCAM-1、ICAM-1mRNA的表达与对照组差异无统计学意义(P0.05)。2EMT异位内膜组VCAM-1、ICAM-1蛋白的表达明显高于在位内膜组及对照组(P0.01),在位内膜组VCAM-1蛋白表达高于对照组(P0.01);EMT在位内膜组ICAM-1蛋白的表达与对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。3EMT患者血清中s VCAM-1和s ICAM-1水平均明显高于对照组(P0.01),Ⅲ、Ⅳ期患者血清中s ICAM-1水平较Ⅰ、Ⅱ期患者明显升高(P0.01)。4EMT异位内膜组组织中VCAM-1与ICAM-1在mRNA、蛋白表达及血清中的水平均无相关性(P0.05)。结论:异位内膜的VCAM-1和ICAM-1的表达异常可能在EMT的发生发展中具有重要作用,但ICAM-1与VCAM-1在EMT中可能具有各自的信号通路及蛋白表达的途径。  相似文献   

14.
目的:研究细胞因子信号抑制因子SOCS1、SOCS2、SOCS3基因在正常人早孕蜕膜基质细胞的表达及其意义。方法:体外分离培养人早孕蜕膜基质细胞,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blotting法检测SOCS表达,酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法检测细胞IL-10、IFN-γ的分泌。结果:无血清培养蜕膜基质细胞未见SOCS1表达,但表达SOCS2、SOCS3;细胞培养14h所分泌的IL-10高于细胞培养2h时的水平(P<0.05),IFN-γ分泌则无明显变化(P>0.05);IL-10(0.1ng/ml)作用蜕膜基质细胞14h内,不同程度上调SOCS2、SOCS3表达。结论:人早孕蜕膜基质细胞自分泌、旁分泌的IL-10可能诱导细胞SOCS2、SOCS3的表达。  相似文献   

15.
目的:构建小鼠热休克蛋白(heat shock protein 10,HSP10)基因重组腺病毒载体,为更好地研究HSP10蛋白在PCOS发病中的作用。方法:用RT-PCR的方法从小鼠卵巢组织中扩增HSP10基因全长,经T/A克隆后,亚克隆至AdEasy腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV上,构建穿梭质粒pAdTrack-HSP10。PmeI酶切pAdtrack-HSP10,然后分别将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1和穿梭质粒pAdtrack-HSP10转化至BJ-5183感受态细菌中进行同源重组。PacI酶切线性化重组质粒AdCMV-HSP10后转染AD-293细胞进行病毒包装和扩增。通过GFP报告基因观察重组病毒的产生。用获得的重组腺病毒感染小鼠卵泡,Western blotting方法检测HSP10基因的表达。结果:从小鼠卵巢组织中扩增出309bp的cDNA,PCR和测序分析证实为小鼠HSP10基因。构建的小鼠HSP10基因的重组腺病毒载体,PacI酶切重组质粒见30000bp和4500bp的特征性条带。制备出高滴度重组腺病毒,病毒上清PCR反应同样扩出309bp的目的条带。分离并培养小鼠卵泡,感染重组的腺病毒,Western blotting检测到显著的HSP10条带。结论:本文成功构建了小鼠HSP10基因重组腺病毒载体,并且在小鼠卵泡中有效表达。  相似文献   

16.
梁策  高慧  张腾 《生殖与避孕》2016,(5):359-364
目的:探讨补肾调冲方对雷公藤多苷片(GTW)致卵巢早衰(POF)的治疗作用。方法:雌性SD大鼠42只,随机分为正常组、模型组、结合雌激素片(雌激素组)和补肾调冲方治疗高、中、低剂量组。运用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中雌二醇(E_2)、卵泡刺激素(FSH)、抑制素B(INHB)水平。Western blotting法和RT-PCR法检测卵巢组织中Bcl-2、Bax蛋白及mRNA的表达水平。结果:正常组和各给药组E_2的含量均高于模型组(P0.01)。正常组和各给药组FSH含量均低于模型组(P0.01);正常组和各给药组INHB含量均高于模型组(P0.01)。低剂量组INHB的含量与雌激素组比较,差异有统计学意义(P0.05)。模型组大鼠卵巢中Bcl-2蛋白和mRNA水平的表达显著低于正常组(P0.05);各给药组Bcl-2蛋白和mRNA水平的表达显著高于模型组(P0.01)。模型组大鼠卵巢中Bax蛋白和m RNA水平的表达显著高于正常组(P0.05);各给药组Bax蛋白和mRNA水平的表达显著低于模型组(P0.01)。低剂量组Bax蛋白的表达与雌激素组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:中药补肾调冲方对卵巢性激素水平具有调节作用,能提高卵巢对性激素的敏感性,促进卵巢排卵;通过上调Bcl-2和下调Bax的表达,抑制卵巢中颗粒细胞的过度凋亡,减少卵泡闭锁,促进卵巢功能的恢复。  相似文献   

17.
目的:观察自然周期排卵、促排卵与控制性超促排卵(COH)状态下小鼠卵巢生长分化因子-9(growth differentiation factor,GDF-9)表达水平的变化情况。方法:成年雌性小鼠随机分为3组每组10只,分别为自然排卵组(对照组)、孕马血清(PMSG)促排卵组(PMSG组)、控制性超促排卵组(COH组),各组小鼠取排卵期卵巢组织,采用免疫组织化学方法检测GDF-9的表达与定位,并分别采用Western blottting和实时荧光定量PCR法,定量检测GDF-9蛋白与mRNA的含量。结果:各组小鼠卵母细胞与颗粒细胞中均检测到GDF-9的表达,PMSG组与COH组GDF-9蛋白与mRNA的表达水平均显著高于对照组(P<0.05),PMSG组的表达也明显弱于COH组(P<0.05)。结论:促排卵可促进小鼠卵巢GDF-9的表达,但COH降低促排卵小鼠卵巢GDF-9的表达。  相似文献   

18.
目的:探讨机械力对小鼠成纤维细胞L929细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅠ、CollagenⅢ)表达的影响及其可能机制。方法:选取L929细胞为研究对象,使用四点弯曲细胞力学加载系统对细胞进行机械力干预,加力时间为4小时,加力频率为1 Hz;L929细胞分别经0、1333μ和5333μ机械力干预后,采用CCK8检测不同大小机械力对细胞活性的影响。L929细胞分别经0和5333μ机械力干预后,采用Western blot检测两组细胞转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad蛋白(Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3)和CollagenⅠ、CollagenⅢ的表达,采用实时荧光定量PCR检测两组细胞TGF-β1、Smad2、Smad3、CollagenⅠ和CollagenⅢmRNA的表达,采用细胞免疫荧光检测细胞内Smad2/3的核转移情况。结果:与对照组相比,L929细胞经1333μ机械力干预后细胞增殖活性明显上升,而5333μ机械力干预后细胞增殖活性显著下降(P0.05)。与对照组相比,5333μ组细胞TGF-β1、pSmad3、CollagenⅠ、CollagenⅢ水平及TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢmRNA表达均明显降低(P0.05),且Smad2/3核转移被明显抑制;而细胞Smad2、Smad3、p-Smad2蛋白及Smad2、Smad3 mRNA表达差异均无统计学意义(P0.05)。结论:5333μ机械力可降低小鼠成纤维细胞CollagenⅠ、CollagenⅢ的表达,其机制可能与TGF-β1/Smads信号转导通路抑制有关。  相似文献   

19.
目的:探索HOXA10与分娩发动的相关性。方法:采用免疫组织化学、RT-PCR方法和Western blotting方法检测正常自然分娩组(临产组,n=11)和足月未临产组(选期剖宫产组,n=15)胎盘绒毛中HOXA10mRNA和蛋白的表达水平。结果:免疫组织化学结果显示,HOXA10在临产组胎盘绒毛中仅有弱表达,而在剖宫产组胎盘绒毛中呈较明显的阳性表达。RT-PCR和Western blotting检测均显示,HOXA10mRNA和蛋白在临产组胎盘绒毛中仅有弱表达,而在剖宫产组中呈较明显的阳性表达(P<0.05)。结论:临产时HOXA10基因表达下调可能引起孕激素的效应减弱,即"功能性孕激素撤退",从而参与分娩发动。  相似文献   

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