康莱特抑制肝癌细胞侵袭能力及其对相关基因MMP-9表达的影响

目的探讨康莱特（Kanglaite,KLT）对肝癌细胞株BEL-7404侵袭能力的抑制作用及其对相关基因MMP-9mRNA和蛋白表达水平的影响。方法据前期MTT实验结果选用A组（含KLT80μL/mL）、B组（含DDP10 mg/L）和C组（DMEM空白对照）对BEL-7404细胞进行48小时处理,用细胞迁移实验及Transwell小室法检测细胞的侵袭能力的变化,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot法检测各组BEL-7404细胞中MMP-9mRNA及蛋白的表达水平。结果对BEL-7404细胞作用48小时后,A、B两组细胞的迁移速率及侵袭穿膜细胞数、MMP-9 mRNA及蛋白表达水平均较C组明显降低,差异均有统计学意义（P〈0.001）;而A、B两组之间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 KLT可通过下调MMP-9表达而抑制肝癌BEL-7404细胞株的侵袭能力;同时对BEL-7404细胞侵袭能力的抑制,80μL/mL KLT与10 mg/L DDP显示同样的抑制效果与机制。     

NDRG 1基因转染对HT-29人结肠癌细胞株增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的研究NDRG1基因转染对HT-29人结肠癌细胞株体外增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法将重组真核表达质粒pEGFP-NDRG1-N3和空载体pEGFP-N3采用阳离子脂质体Lipofectamine转染HT-29人结肠癌细胞株,通过荧光倒置显微镜检测绿色荧光蛋白的表达。免疫组织化学染色检测转染前后HT-29细胞NDRG1的表达。并通过多种体外实验（流式细胞术法、24-transwell法、扫描电镜和透射电镜等）研究NDRG1对HT-29人结肠癌细胞株体外增殖、侵袭和迁移能力及表面和超微结构的影响。结果流式细胞术结果显示,与未转染组和转染pEGFP-N3空载体组比较,pEGFP-NDRG1-N3组细胞生长周期G0/G1期比例增高,S期明显减低,差异有统计学意义（P〈0.05）。细胞侵袭和迁移实验的结果显示,转染pEGFP-NDRG1-N3组细胞与空载体和空白对照组比较,穿过微孔膜的细胞数均明显减少,差异有统计学意义（P〈0.05）。扫描和透射电镜结果显示,转染pEGFP-NDRG1-N3组HT-29细胞生长增殖受抑制,细胞分化程度有增高趋势。结论 NDRG1基因可明显抑制HT-29人结肠癌细胞的体外增殖活性,降低其侵袭和迁移能力,促进其分化,提示其可作为一种候选的肿瘤转移抑制基因。     

microRNA沉默SMYD3基因对乳腺癌细胞侵袭能力影响及其机制的探讨

目的:研究沉默SMYD3对人乳腺癌细胞MCF-7体外侵袭能力的影响及可能作用机制.方法:构建携带绿色荧光蛋白(GFP)的SMYD3-microRNA真核表达载体,脂质体法稳定转染乳腺癌MCF-7细胞.通过RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染前后SMYD3 mRNA及蛋白的表达变化;Matrigel侵袭实验检测细胞体外侵袭能力;平板集落形成实验检测细胞转染前后增殖抑制率;RT-PCR检测转染前后细胞WNT10B mRNA表达的变化.结果:经测序证明所构建干扰序列正确插入pcDNA6.2-GW/EmGFPmiR真核表达载体,序列完整.两干扰组SMYD3 mRNA及蛋白表达水平显著受到抑制,P<0.05;阴性对照组SMYD3的表达与空白组相比几乎无变化,P>0.05.Matrigel侵袭实验结果显示,两干扰组穿膜细胞数分别为(7.53±2.00)和(9.13±2.50),与空白组(63.40±6.85)和阴性对照组(66.69±4.63)相比显著减少,P<0.05.平板克隆形成实验显示,两干扰组集落形成率分别为(16.5%)、(18.7%),与空白组(79.4%)相比显著减少,P<0.05;阴性对照组(76.6%)和空白组相比差异无统计学意义,P>0.05.结论: SMYD3的高表达可明显增强乳腺癌MCF-7细胞的侵袭性,引起细胞转移.这可能与其异常激活下游癌基因WNT10B表达、引起细胞上皮间质化有关.     

KISS-1基因在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的研究KISS-1基因在人乳腺癌组织表达及其与转移的关系。方法采用逆转录聚合酶链式扩增反应和免疫组化技术对56例人乳腺癌组织中KISS-1 mRNA及其蛋白metastin的表达进行检测。结果乳腺癌组织的KISS-1 mRNA及metastin阳性表达率均显著低于正常乳腺组织（P=0．000），且与乳腺癌的淋巴结转移显著相关（P〈0．01）；而与乳腺癌的肿块大小、组织学分级等临床病理因素无关（P〉0．05）。结论KISS-1基因表达降低与人乳腺癌转移密切相关，可能参与人乳腺癌转移的调控。     

阿司匹林对HER-2阳性乳腺癌细胞SKBR3侵袭和迁移能力的影响

目的探讨阿司匹林对乳腺癌细胞SKBR3侵袭和迁移能力的影响。 方法先采用MTT法检测不同浓度(2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 mmol/L)阿司匹林及DMSO(对照组)对SKBR3细胞生长抑制的影响。然后,将乳腺癌细胞SKBR3分为3组,即2.5 mmol/L阿司匹林组、10.0 mmol/L阿司匹林组和对照组(DMSO处理),采用Transwell实验、划痕实验分别检测细胞的侵袭和迁移能力,实验重复3次。Transwell实验和划痕实验结果数据比较,采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD法。 结果MTT结果显示,随着阿司匹林浓度的增大,SKBR3细胞生长抑制明显增加,其半数抑制浓度(IC₅₀)为7.91 mmol/L。Transwell实验显示,对照组侵袭细胞染色570 nm吸光度值为2.232±0.054,2.5 mmol/L组为1.648±0.069,10.0 mmol/L组为0.372±0.019,3组间相比,细胞侵袭能力的差异有统计学意义(F＝338.1, P<0.001);并且,与对照组相比,2.5 mmol/L和10.0 mmol/L阿司匹林组细胞侵袭能力明显受到抑制(P均<0.001)。划痕实验显示,24 h后对照组细胞迁移愈合率为(69.78±2.87)%,2.5 mmol/L阿司匹林组为(50.16±3.10)%,10.0 mmol/L阿司匹林组为(16.08±2.10)%,3组间相比,细胞迁移能力的差异也有统计学意义(F＝100.8, P<0.001);并且,与对照组相比,2.5 mmol/L和10.0 mmol/L阿司匹林组细胞迁移能力均明显受到抑制(P均<0.050)。 结论阿司匹林能够抑制乳腺癌细胞SKBR3的侵袭和迁移能力。     

鼻咽癌细胞中Survivin基因的转录和表达

目的研究新的凋亡抑制因子Survivin基因在人鼻咽癌高分化上皮细胞株CNE-1和低分化上皮细胞株CNE-2Z中的转录和表达.方法分别提取2种细胞总RNA,用逆转录PCR检测Survivin基因的转录;同时制备2种细胞的蛋白质样品,经免疫印迹检测Survivin基因的表达.结果Survivin基因在人鼻咽癌高、低分化细胞株中均有表达,其表达量差异无显著意义.结论Survivin的表达可能与鼻咽癌细胞分化程度无明显关系,但Survivin基因可能与鼻咽癌的发生、发展和预后不良有关.     

鼻咽癌细胞中Survivin基因的转录和表达

目的：研究新的凋亡抑制因子Survivin基因在人鼻咽癌高分化上皮细胞株CNE-l和低分化上皮细胞株CNF-2Z中的转录和表达。方法：分别提取2种细胞总RNA，用逆转录PCR检测Survivin基因的转录；同时制备2种细胞的蛋白质样品，经免疫印迹检测Survivin基因的表达。结果：Survivin基因在人鼻咽癌高、低分化细胞株中均有表达，其表达量差异无显著意义。结论：Survivin的表达可能与鼻咽癌细胞分化程度无明显关系，但Survivin基因可能与鼻咽癌的发生、发展和预后不良有关。     

细丝蛋白A在浸润性乳腺癌中的表达及意义

目的:探讨细丝蛋白 A(filamin A,FLNa)在浸润性乳腺癌组织中的表达及其与临床特征之间的关系.方法:采用免疫组织化学和FCM法检测46例浸润性乳腺癌标本中FLNa的表达情况,并统计分析FLNa表达与患者临床病理学特征的相互关系.结果:FLNa在浸润性乳腺癌组织中的表达水平随分化程度的降低而增高,中、高分化组与低分化组之间的差异有统计学意义(P<0.05);有淋巴结转移组的FLNa表达水平较无淋巴结转移组高(P<0.05).结论:FLNa表达水平与浸润性乳腺癌的侵袭和转移有关,可作为浸润性乳腺癌预后判断的辅助指标,也有望成为临床治疗的新靶点.     

STYK1/NOK基因转染对肺腺癌细胞迁移和侵袭的影响

目的:探讨STYK1/NOK基因对肺腺癌细胞迁移和侵袭的影响。方法:运用电穿孔仪将含STYK1/NOK全长基因的重组真核表达质粒(pcDNA3.1/NOK)转染入肺腺癌细胞系A549,筛选出稳定表达NOK蛋白的单克隆株A549-NOK。蛋白质印迹法检测转染前后细胞内NOK蛋白的表达效果。划痕实验、Transwell迁移实验检测转染前后细胞的迁移能力,Matrigel侵袭实验检测细胞的侵袭能力,MTT法绘制细胞生长曲线。结果:蛋白质印迹法显示,A549-NOK细胞中NOK蛋白表达量明显增高。划痕实验结果显示,A549-NOK细胞的迁移速度加快。在Transwell迁移实验中,A549-NOK组的穿膜细胞数较A549及空质粒对照组增多(95.7±9.5vs69.1±8.3、70.5±7.5),P值分别为0.003和0.004。Matrigel侵袭实验中A549-NOK组的穿膜细胞数较A549及空质粒对照组增多(67.8±6.7vs36.0±4.1、38.3±5.1),P值分别为0.000和0.001。MTT结果显示,A549-NOK细胞较A549和空质粒对照组细胞生长曲线上移。结论:STYK1/NOK基因能够促进肺腺癌细胞的迁移和侵袭,可能在肺癌的转移中发挥重要作用。     

FTY720对人类肝癌细胞HepG-2侵袭能力的影响

Objective To explore the effect of FTY720 on human hepatocellular carcinoma cell line HepG-2 of invasion ability. Methods HepG-2 cells were cultured,and divided into 4 groups,namely control and FTY720 (0.05 g/ml,0.10 g/ml,0.15 g/ml) groups.The cell invasion ability was observed by the cell invasion assay.mRNA expression of MMP-2,MMP-9 was measured by RT-PCR.MMP-2,MMP-9 protein expression was measured by ELISA method.Results The invasive ability of cancer cells in each group significantly weaken,with the FTY720 concentration increased.The number of control group was (110±3)(P<0.05),the number of O.05 g/ml FRY720 treatment group cells was (74±4),while the number of cells of O.10 g/ml,0.15 g/ml the drug treated group,Was (42±3),(25±5)(P<0.01).Compared with control group,the MMP-2,MMP-9 expression of different concentrations of FTY720 groups decreased significantly (P<0.05).As the expression of FTY720 concentration increased,the MMP-2,MMP-9 expression decreased (P<0.01).Compared with control group,the MMP-2,MMP-9 protein expression of different concentrations of FTY720 groups decreased significantly (P<0.05), but the protein expression and concentration of FTY720 is inversely proportional in a certain range. Conclusion The invasive ability of HepG-2 cells can be inhibited by FTY720,and with FTY720 concentration increased,the invasive ability decreased gradually.One of the mechanisms may be related to reduce the MMP-2,MMP-9 protein and gene expression.     

人乳腺癌组织p53基因突变及过度表达的临床意义

应用聚合酶链反应－单链构象多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析和流式细胞术（ＦＣＭ），研究３０例患者乳膛癌组织Ｐ５３基因５￣８外显子的突变情况、Ｐ５３蛋白免疫组化检出情况、ＤＮＡ倍体及雌激素受体（ＥＲ）含量；并与各生物学参数进行了相关研究，以探讨Ｐ５３基因与乳腺癌发生、发展的关系。结果提示：１．全组１４例（４６．７％）发现Ｐ５３基因突变，其中１例为原位导管癌。２．Ｐ５３蛋白检出阳性率为５３．３％（１６／３     

乳腺癌组织中趋化因子5的表达及其临床意义

目的:检测趋化因子CCL5mRNA在乳腺癌组织中的表达并探讨其临床意义。方法:应用SYBR GreenⅠreal ti me-PCR定量检测40例乳腺癌组织及其癌旁正常组织CCL5mRNA的表达。结果:各期乳腺癌组织中CCL5 mRNA的相对表达量均高于癌旁正常组织(P<0.05),Ⅰ期和Ⅱ期乳腺癌组织中CCL5mRNA表达量的差异无统计学意义,P>0.05,Ⅳ期乳腺癌组织中CCL 5mRNA的相对表达量最高3.695。结论:趋化因子CCL5 mRNA在Ⅳ期乳腺癌组织中的表达水平最高,CCL5可能在促进乳腺癌的生长和发展中起关键作用。     

Anxa2和P-gp蛋白相互作用对多药耐药乳腺癌细胞迁移与侵袭影响的研究

目的:探讨Anxa2和P-gp蛋白相互作用对多药耐药乳腺癌细胞迁移与侵袭的影响.方法:采用小干扰RNA技术下调人多药耐药乳腺癌细胞MCF-7/ADR中P-gp的表达,并筛选稳定的单克隆细胞株;利用噻唑蓝(MTT)比色法和Transwell实验研究P-gp的表达对MCF-7及其耐药细胞MCF-7/ADR的增殖、迁移和侵袭能力的影响;利用免疫沉淀和免疫荧光分析多药耐药细胞中Anxa2和P-gp的相互关系.结果:蛋白印迹法检测发现,Anxa2和P-gp在耐药乳腺癌细胞中均高表达;MCF-7/ADR与其亲本细胞MCF-7相比,迁移和侵袭能力明显增强;MCF-7/ADR细胞中P-gp的表达被抑制后,其迁移和侵袭能力显著下降,并且差异有统计学意义,P＜0.05.免疫沉淀证实,Anxa2和P-gp之间存在相互作用;免疫荧光发现,Anxa2和P-gp在细胞膜上存在很好的共定位.结论:降低P-gp的表达可以明显抑制耐药乳腺癌细胞MCF-7/ADR的迁移和侵袭能力,Anxa2和P-gp之间存在较好的共定位和相互作用.提示Anxa2和P-gp的相互作用有可能对增强多药耐药乳腺癌细胞的侵袭转移能力起到一个重要的作用.     

hMAM mRNA的定量检测对乳腺癌外周血微转移的诊断价值

目的:建立SYBR Green I实时定量逆转录PCR(Real-Ti me QuntitativeRT-PCR,Q-RT-PCR)技术定量检测人乳腺珠蛋白(human mammaglobin,hMAM)mRNA的技术,并应用于检测外周血hMAM mRNA,探讨其诊断乳腺癌患者外周血微转移的可行性及意义。方法:应用自行建立的SYBR Green I Q-RT-PCR检测技术,检测61例乳腺癌、33例乳腺良性肿瘤患者以及11例健康志愿者外周血hMAM mRNA的表达量,分析其表达水平与乳腺癌临床病理特征及ER、PR及HER-2表达的关系。结果:61例乳腺癌患者外周血中10例检出hMAM mRNA表达,其癌组织HER-2阳性者占8例,HER-2阴性组未见hMAM mRNA阳性表达。HER-2阳、阴性组间外周血hMAM mRNA表达,差异具有统计学意义,P=0.028;与其他临床、病理特征无相关性,P>0.05。HER-2阳性患者外周血中hMAM mRNA表达量范围1.98×102~6.21×103,中位数4.0×102,在临床、病理特征间差异无统计学意义,P>0.05。乳腺良性肿瘤及健康志愿者外周血hMAM mRNA均阴性。结论:SYBR GreenI Q-RT-PCR技术可定量检出乳腺癌患者外周血hMAM mRNA;乳腺癌患者外周血hMAM mRNA表达与其乳腺癌组织HER-2表达相关。定量检测hMAM mRNA可作为乳腺癌外周血微转移的重要方法。     

靶向干预N-WASP蛋白功能区对大肠癌细胞侵袭转移能力的影响

目的研究靶向干预N-WASP蛋白的VCA功能区对大肠癌细胞侵袭转移能力的影响。方法构建含有N-WASP蛋白CA结构区域信息但缺乏V结构区域信息的重组表达质粒（CA质粒）,脂质体转染法将重组质粒及空质粒导入人高侵袭性大肠癌细胞株LoVo细胞内,G418筛选获得稳定转染的细胞株。采用Transwell侵袭小室和制备裸鼠结肠癌肝转移模型检测转染后LoVo细胞侵袭转移能力的变化。结果Transwell侵袭小室实验结果显示,重组质粒转染组LoVo细胞的穿膜细胞数量较空质粒转染组及未转染组明显减少（P〈0.05）。动物实验结果显示,重组质粒转染组的裸鼠肝脏表面的转移瘤结节数较空质粒转染组及未转染组明显减少,生存率明显提高,差异均具有统计学意义（P〈0.05）;而空质粒组和未转染组两者无明显差别（P〉0.05）。结论靶向干预N-WASP蛋白的VCA功能区能有效抑制大肠癌细胞的侵袭转移能力。     

AMAP1蛋白在结直肠癌中的表达及临床意义

目的检测结直肠癌组织中Myc-binding protein-associated protein 1(AMAP1)蛋白的表达,并探讨AMAP1与结直肠癌浸润和转移的相关性。方法应用免疫组织化学法检测76例结直肠癌组织及癌旁正常组织中的AMAP1蛋白表达,并分析其与临床病理特征的关系。结果 AMAP1在结直肠癌中表达率为61.8%,与癌旁正常组织(2.6%)比较差异有统计学意义(P<0.05)。AMAP1阳性表达在肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移、脉管转移、临床分期和分化程度方面差异有统计学意义(均P<0.05),在性别、年龄方面差异无统计学意义(均P>0.05)。结论 AMAP1的表达与结直肠癌的浸润和转移密切相关。     

RASSF1A基因在乳腺癌组织中的表达及临床病理意义

目的:探讨RASSF1A基因在乳腺癌组织中的表达以及与乳腺癌临床病理特征的关系。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测49例乳腺癌组织及癌旁非肿瘤组织中RASSF1A基因的表达。应用条带密度分析软件,定量分析RT-PCR产物电泳带密度。结果:49例癌旁非肿瘤组织中RASSF1A全部表达,RASSF1A校正值(RASSF1A/β-actin)为0.6902±0.1179;49例乳腺癌组织中仅19例RASSF1A表达,校正值为0.1833±0.2441;癌组织与癌旁非肿瘤组织中RASSF1A基因表达差异有统计学意义(t=-14.199,P=0.000)。随着临床分期的增高,腋淋巴结转移率的增加,RASSF1A基因阳性表达率降低(χ2=7.201,P=0.027;χ2=3.893,P=0.048);病理组织学分级增加,RASSF1A基因呈现低表达(χ2=6.479,P=0.039);c-erbB-2蛋白表达阳性伴随RASSF1A基因的低表达(χ2=13.437,P=0.000);即RASSF1A基因高表达与临床分期、淋巴结转移、病理组织学分级、c-erbB-2蛋白表达呈负相关。而与患者年龄(χ2=0.002,P=0.962)、病理组织学类型(χ2=0.549,P=0.908)及其雌、孕激素受体(ER/PR;χ2=0.330,P=0.566/χ2=1.464,P=0.226)状况无关。结论:乳腺癌旁非肿瘤组织中RASSF1A基因表达高于癌组织,随着临床分期的增高、病理组织学分级的上升以及c-erbB-2蛋白的高表达,RASSF1A基因表达率降低。提示RASSF1A基因丢失与乳腺癌的发生、发展及乳腺肿瘤较差的生物学特性相关。