用cDNA微阵列研究内毒素休克小鼠基因表达谱的改变

感染性休克的发病机制十分复杂 ,涉及多种组织、细胞的激活及大量炎症介质的表达。以往的研究常限于测定单个炎症介质的表达或分析单一细胞内信号转导途径的作用 ,难以获得对感染性休克的全面而系统的认识。因此 ,其发病机制至今尚未完全阐明 ,死亡率仍高达 40 %～ 6 0 %。本研究采用Ｃｌｏｎｔｅｃｈ公司生产含 1176个基因的ｃＤＮＡ微阵列膜 (ＡｔｌａｓＴＭ Ｍｏｕｓｅ 1.2Ａｒｒａｙ)研究内毒素休克小鼠基因表达谱的改变。Ｂａｌｂ/ｃ小鼠经腹腔注射大肠杆菌内毒素 (15ｍｇ·ｋｇ 1) 2 0ｈ后 ,摘取心、肝、肺、肾、脑等组织 ,提取总ＲＮＡ ,经反转录及α 3 2 ｐ ｄＡＴＰ掺入合成ｃＤ     

内毒素休克小鼠肺组织ICAM-1的表达及p38 MAPK的调控作用

脂多糖 (ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ,ＬＰＳ)是引发内毒素休克的关键因子 ,在内毒素休克病人血浆中可达 10 0～ 10 0 0ｎｇ/ｍｌ(正常人为 10ｎｇ/ｍｌ) [1] 。ＬＰＳ可诱导内皮细胞胞间粘附分子 1(ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ 1,ＩＣＡＭ 1)的表达 ,促进白细胞粘附到内皮细胞。研究表明ＩＣＡＭ 1在肺部炎症级联的激活中起重要作用 ,并导致白细胞的募集[2 ] 。已证实ｐ38丝裂原活化蛋白激酶 (ｐ38ｍｉｔｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ ,ｐ38ＭＡＰＫ)在ＬＰＳ激活或…     

HSF1调控的炎症相关基因的筛选及SOCS3基因的实验验证

目的：筛选热休克因子1（HSF1）调控的炎症相关基因,初步探讨HSF1对下游基因的调控作用。方法：采用HSF1基因敲除小鼠,制备内毒素腹腔注射以及热休克反应后再给予内毒素腹腔注射的内毒素血症模型,分别抽提HSF1缺失突变纯合子和HSF1野生型小鼠肺组织总RNA,用微阵列进行筛选;用转录元件搜索软件分析差异表达基因的启动子区;选取启动子区含有热休克元件的基因：细胞因子信号转导抑制子3（SOCS3）,采用热休克反应（HSR）和HSF1过表达的RAW264,7巨噬细胞给予内毒素刺激,抽提总RNA进行RT—PCR,Northern印迹实验,观察HSR和HSF1过表达对内毒素诱导的SOCS3基因表达的影响。结果：用微阵列的方法筛选到HSF1可能抑制表达的炎症介质基因15个,其中9个基因的启动子区含有热休克元件;HSF1可能促进表达的炎症介质基因11个,其中8个基因的启动子区含有热休克元件;HSR和HSF1过表达可明显抑制小鼠RAW264．7巨噬细胞内毒素诱导的SOCS3mRNA的表达。结论：HSF1可抑制炎症介质SOCS3mRNA的表达。     

山莨菪碱对内毒素休克兔血压及NO生成的影响

目的 观察并比较山莨菪碱与地塞米松对内毒素休克兔血压及血浆一氧化氮（ＮＯ）水平的影响。方法 采用静脉注射细菌内毒素复制内毒素休克模型,颈动脉,颈静脉插管法测定平均动脉压（ＭＡＰ）与中心静脉压（ＣＶＰ）,用硝酸还原酶法加Ｇｒｉｅｓｓ法测定血浆中ＮＯ２＾－与ＮＯ３＾－的总含量间接反映ＮＯ的水平。结果 给予内毒素后,模型组的ＭＡＰ迅速下降,在低水平纸维持;ＣＶＰ在２ｈ后开始下降,４ｈ后进一步下降,山莨菪     

氯胺酮对内毒素诱导HSP70在肝组织表达的影响

目的　观察氯胺酮对感染性休克大鼠肝热休克蛋白 (HSP70 )表达的影响。方法　 64只大鼠随机分为对照组、内毒素组及氯胺酮组 ,于内毒素处理后 2小时及以内毒素组临终为时点测定肝 HSP70表达及肿瘤坏死因子 - α(TNF- α)血浆水平 ,并观察各组生存时间。结果　内毒素明显提高肝 HSP70的表达及 TNF- α血浆水平(P<0 .0 5 ) ,氯胺酮组 HSP70表达明显上调 ,TNF- α明显减少 ,存活率明显升高 (P<0 .0 5 )。结论　氯胺酮能提高感染性休克大鼠肝 HSP70的表达 ,抑制内毒素刺激的 TNF- α的释放 ,提高大鼠存活率。     

热应激对热休克蛋白70mRNA的诱导

用＾３２Ｐ标记的热休克蛋白７０（ｈｓｐ７０）ｃＤＮＡ为探针，检测了热应激时完整及人骨肉瘤细胞（ＨＯＳ－８６０３）的ｈｓｐ７０ ｍＲＮＡ。结果表明，大鼠体温在４２℃３０ｍｉｎ后，脑、肝、肺、脾中ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ的表达明显增加，以脑最为显著。ＨＯＳ－８６０３细胞经４２℃热处理３０ｍｉｎ，置３７℃培养２～４ｈ后，ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ的表达，且在整体动物上有组织特异性。     

多脏器危像综合征、机体损伤反应综合征之分子生物学机制:Ⅲ内毒素与细菌其他成份之作用--"泛内毒素血症"概念的提出

关于内毒素在感染性休克与ＤＩＣ等发病中的作用已被人们广泛接受。至于内毒素如何致病的分子生物学机制则尚未写进本科教材。近年来的研究证明 :全身炎症反应综合征 (ＳＩＲＳ)、败血症休克等涉及“多脏器危像综合征 (Ｍｏｅｓ)”[包括“多脏器功能不全(ＭＯＤＳ)”与“多脏器衰竭 (ＭＯＦ)”]之发病机制 ;而内毒素与细菌其他成份显然又脱离不了干系。本文拟就内毒素以及其他细菌成份在多脏器危像综合征、机体损伤反应综合征(ＢＩＲＳ)发病机制中的分子生物学机制做一阐述。必须强调指出 :按照我们提出的“广义生命时空场论”学说 ,鉴于机…     

血脂、粘附分子与冠心病

近年来冠心病 (ＣＨＤ)发病机制的研究有了长足的进展 ,但其确切机制复杂。病理学研究证实在粥样硬化斑块区的脂质核心及破裂斑块的“肩区”均有大量炎症细胞的浸润 ,提示炎症反应参与了ＣＨＤ的发生发展过程[1] 。炎症细胞与血管内皮细胞 (ＶＥＣ)发生粘附是炎症反应的关键步骤。这一过程是双方细胞膜表面黏附分子 (ｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅｓ,ＣＡＭｓ)介导的[2 ,3 ] ,因此ＣＡＭｓ在ＣＨＤ发病机制中有重要作用。血脂异常是ＣＨＤ的重要危险因素 ,血脂异常与ＣＡＭｓ间有无必然的联系成为目前研究的热点。1　ＣＡＭｓ概…     

单磷酰脂质A预处理对内毒素血症小鼠的保护作用观察

单磷酰脂质Ａ(ＭｏｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｌｉｐｉｄＡ ,ＭＰＬＡ)预处理能诱导内毒素耐受性 ,提高机体对内毒素的耐受力 ,从而预防内毒素血症的发生、发展 ,降低脓毒症休克的发生率和死亡率。本实验旨在探讨ＭＰＬＡ对内毒素血症的预防性保护作用及其可能的机制。1　材料和方法1.1　主要试剂　　单磷酰脂质Ａ[Ｅ .ＣｏｌｉＦ 5 83 (Ｒｄｍｕｔａｎｔ)Ｓｉｇｍａ] ;ＬＰＳ (Ｅ .ＣｏｌｉＬｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅＯ111∶Ｂ4,Ｓｉｇｍａ) ;ＭＤＡ测定试剂盒ＴＮＦα测定试剂盒均为北京邦定生物医学公司产品。1 .2　实验方法　…     

热休克基因表达对过氧化氢所致肺泡巨噬细胞损伤的保护作用

经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析发现热休克预处理（４２℃，２ｈ）使肺泡巨噬细胞（ＰＡＭｓ）中热休克蛋白（ＨＳＰ）７０ｍＲＮＡ增多，ＨＳＰ７０合成增加，且获得抵抗Ｈ２Ｏ２损伤的能力。用放线菌酮和放线菌素Ｄ分别从蛋白合成及基因转录水平阻断热休克蛋白基因的表达，能取消热休克对Ｈ２Ｏ２所致ＰＡＭｓ损伤的保护效应。提示热休克系通过使热休克蛋白基因表达增强，ＨＳＰ７０合成增多，从而保护Ｈ２Ｏ２所致的ＰＡＭｓ损伤。     

TNF在内毒素/感染性休克发病机理中的作用

本研究采用系列休克动物模型家兔(251只)和临床败血症/感染性休克病人(15例)相结合,体内和体外实验相印证,多个相关指标动态观察等实验设计和研究手段,试图阐明TNF在内毒素/感染性休克发病机理中的作用。 主要研究结果如下: (1)建立了轻重两种程度家兔内毒素、绿脓杆菌败血症休克模型,而且,设计并成功建立了家兔ALP感染性休克模型,该模型较之大鼠CLP休克模型,具有可以动态取血和更符合临床发病特征     

胸腺素β4治疗脂多糖诱导小鼠内毒素休克的实验研究

目的研究胸腺素β4(thymosin β4,Tβ4)对内毒素休克小鼠72 h存活率的影响,并初步探讨Tβ4治疗内毒素休克的机制.方法选用清洁级昆明小鼠腹腔注射脂多糖(LPS)制备内毒素休克动物模型,(1)观察内毒素休克前后Tβ4变化情况;(2)观察注射LPS后不同时间给予Tβ4对内毒素休克小鼠存活率的影响;(3)观察不同剂量Tβ4对内毒素休克小鼠存活率的影响;(4)ELISA法检测Tβ4对内毒素休克小鼠血浆TNF-α及IL-1β变化情况的影响;(5)用RT-PCR的方法检测外周血单核细胞(PBMC)的TNF-α mRNA及IL-1β mRNA表达情况.结果 Tβ4在内毒素休克小鼠的血浆中明显降低,A、B、C组内毒素休克小鼠72 h存活率均明显低于D组(P＜0.01,P＜0.05),Tβ4预处理LPS组TNF-α及IL-1β血浆水平明显低于LPS组(P＜0.01),LPS组TNF-α mRNA及IL-1α mRNA的表达明显高于Tβ4预处理LPS组(P＜0.01).结论 Tβ4治疗内毒素休克应在LPS腹腔注射后0 h、2 h、4 h连续注射Tβ4(5 mg/kg),Tβ4可降低PBMC表达TNF-α mRNA及IL-1β mRNA.实验提示Tβ4可能是通过下调炎症介质的基因表达来治疗内毒素休克的.     

多脏器功能不全综合征的研究进展

1　问题的提出1 )Ｇ- 菌感染引起感染性休克已发现 50余年 ,但其死亡率 (40 %～ 6 0 % )无明显的下降 ,炎症反应是否只是保护性的防御过程 ?2 )过度炎症反应 (ｅｘａｇｇｅｒａｔｅｄｉｎｆｌａｍｍａ ｔｏｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅ)一经启动 ,便出现失控炎症反应(ｕｎｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅ)形成如下三个阶段 :始动 (Ｉｎｉｔｉａｌ)→放大 (Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ)→损伤 (Ｉｎｊｕｒｙ) ?2　历史的回顾　　 1 973年Ｔｉｌｎｅｙ[1 ] 首先报道一组腹主动脉破裂患者术后相继出现肾、肺、肝、心、…     

肿瘤坏死因子在内毒素休克中的作用

本报告了肿瘤坏死因子在内毒素休克中的作用。雄怀Ｗｉｓｔａｒ大鼠静脉注射大肠杆菌内毒素复制内毒素休克模型。应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交技术分析肝脏组织ＴＮＦ－ｍＲＮＡ表达水平，放免法测定血浆ＴＮＦ含量。     

细胞粘附分子在炎症角膜中的表达

目的 研究细胞粘附分子（ｃｅｌｌｕｌａｒａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅｓ,ＣＡＭｓ）在炎症角膜中的表达,探讨其在角膜炎症发生机制中的作用,方法 采用冰冻切片免疫组织化学染色方法检测了１８只炎症角膜,３只正常角膜和２只圆锥角膜组织中细胞间粘附分子－１（ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ－１,ＩＣＡＭ－１）人类白细胞抗原ＤＲ（ｈｕｒｍａｎｌｅｕｋｏｃｙｔｅａｎｔｉｇｅｎＤｒ,     

磷脂酶A_2抑制剂对家兔内毒素休克血中血小板活化因子活性的调节作用观察

通过家兔内毒素休克模型重点观察了磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）抑制剂磷酸氯喹和地塞米松对血中ＰＬＡ２及其相关脂介质的影响。实验分成４组：（１）假手术组（ＳＯ）；（２）内毒素休克组（ＥＳ）；（３）磷酸氯喹预处理组（ＣＱ）；（４）地塞米松预处理组（ＤＸＭ）．分别于给药前、内毒素或生理盐水注射后５、３０ｍｉｎ，１、３、５、８ｈ取血测ＰＬＡ２血小板活化因子（ＰＡＦ）、ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ，同时连续监测平均动脉压（ＭＡＰ）、心率和呼吸，观察动物８ｈ存活率、ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ浓度均明显升高，ＰＬＡ２抑制剂能显著抑制ＰＬＡ２及ＰＡＦ活性，其中磷酸氯喹对ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ的抑制最为显著。此外，ＰＬＡ２抑制剂可使家兔８ｈ存活率由４８％提高到７５％（ＣＱ组）和７０％（ＤＸＭ组）。提示，用ＰＬＡ２的抑制剂磷酸氯喹和地塞米松均能显著抑制内毒素休克时ＰＬＡ_２的活性及相关脂介质如ＰＡＦ、ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ的升高，提高动物存活率，有效地改善休克动物的预后。     

休克病人心电图30例分析

休克可由多种原因引起。无论是失血性休克、心源性休克、过敏性休克或感染性休克等 ,都可引起严重心律失常 ,严重者可出现酷似急性心肌梗塞(ＡＭＩ)样心电图改变。现将我院各型休克病人 30例心电图变化分析如下。临床资料　 30例患者均为我院住院病人 ,发病年龄 9～ 75岁 ,平均年龄 4 2岁。其中男 2 4例 ,女 6例。感染性休克 12例 ,失血性休克 6例 ,心源性休克 9例 ,过敏性休克 3例。心电图改变 :窦性心动过速 (窦速 ) 12例 ,ＳＴ Ｔ改变者 10例 ,窦速伴室性期前收缩 (室早 ) 4例 ,窦速伴ＱＲＳ波群低电压以及酷似ＡＭＩ样心电图改变者 2例 …     

丝裂原活化蛋白激酶信号途径在热休克蛋白90基因表达？…

目的 研究丝裂原活化蛋白激酶－（ＭＡＰＫ）信号传导途径对Ｊｕｒｋａｔ细胞中热休克蛋白９０基因（ｈｓｐ９０）表达的影响。方法 用Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹－增强型化学光系统（ＥＣＬ）检测热休克前后Ｊｕｋａｔ细胞外信号调节激酶（ＥＲＫ）、ｐ３８激酶及ｃ－Ｊｕｎ Ｎ－末端蛋白激酶（ＪＮＫ）的底物ｃ－Ｊｕｎ的磷酸化程度;分别用ＪＮＤ１的显性负突变质粒ＤＮ－ＪＮＫ１、ｐ３８ｃＤＮＡ反应表达质粒ａｎｔｉ－ｐ３８及     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后Hsp70的表达及与细胞凋亡的关系

目的：研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后热休克蛋白（ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｔｅｉｎ,Ｈｓｐ）７０的表达及与细胞凋亡的关系。方法：用线栓法制备ＭＣＡＯ模型,用免疫组化法测定Ｈｓｐ７０阳性细胞及用ＴＵＮＥＬ法测定凋亡细胞。结果：缺血２ｈ即有Ｈｓｐ７０阳性细胞,６～２４ｈ明显,４８ｈ减弱,３ｄ消失。ＴＵＮＥＬ阳性细胞于再灌注后２ｈ出现,２４～４８ｈ达高峰,７２ｈ减弱。结论：脑缺血再灌注后早期即有Ｈｓｐ７０表达及细胞凋亡发生。     

氨胺酮对内毒素诱导HSP70在肝组织表达的影响

目的 观察氯胺酮对感染性休克大鼠肝热休克蛋白（HSP70）表达的影响。方法 64只大鼠随机分为对照组、内毒素组及氯胺酮组,于内毒素处理后2小时及以内毒素组临终为时点测定肝HSP70表达及肿瘤坏死因子－α（TNF-α）血浆水平,并观察各组生存时间。结果 内毒素明显提高肝HSP70的表达及TNF－α血浆水平（P＜0．05）,氯胺酮组HSP70表达明显上调,TNF－α明显减少,存活率明显升高（P＜0．05）。结论 氯胺酮能提高感染性休克大鼠肝HSP70的表达,抑制内毒素刺激的TNF-α的释放,提高大鼠存活率。