B组链球菌的耐药性及红霉素耐药基因检测研究

目的探讨北京和广州地区B组链球菌（GBS）抗生素耐药菌谱及对红霉素耐药机制。方法GBS菌193株,其中140株和47株GBS分别来自北京和广州地区正常妇女阴道拭子标本,6株GBS菌株来自北京地区新生儿感染性肺炎和脑膜炎患儿体液标本中培养分离。应用标准的KB纸片法对临床常用7种抗生素耐药性检测。应用PCR法对102株（包括57株敏感株及45株耐药株）GBS进行红霉素耐药基因ermB、mefA检测。结果193株GBS菌均对青霉素类、头孢菌素类抗生素敏感;但青霉素和氨苄青霉素中介率均为17％;北京地区GBS的红霉素和林可霉素耐药率从1998年到1999年分别从8％增加到16％和从20％增加到28％;广州地区1999年分离的GBS菌株对红霉素和林可霉素耐药率分别为45％和26％,与北京地区1998、1999年分离的GBS菌株的红霉素耐药率比较,差异有统计学意义（P=0．000）。在45株红霉素耐药GBS菌中有40株同时对林可霉素耐药,5株表现为红霉素耐药而林可霉素敏感。20株GBS红霉素耐药仅含有ermB基因;13株红霉素耐药株仅含有mefA基因;同时含有ermB和mefA基因有6株。6株耐药株未能检测到ermB和mefA基因。结论青霉素、氨苄青霉素可作为治疗GBS感染首选药物;头孢菌素类抗生素可作为二线的选择药物。而红霉素和林可霉素作为预防和治疗GBS感染的药物应用价值应重新给予评价。在我国ermB基因介导的核糖体靶位点改变在GBS耐药机制中可能起主要作用。     

北京地区儿童鼻咽部肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药的检测

目的 研究北京地区儿童携带肺炎链球菌(SP)对大环内酯类抗生素的耐药特点。方法 对2002～2003年上呼吸道感染儿童鼻咽部200株SP分离株对4种大环内酯类抗生素、青霉素和克林霉素的最低抑菌浓度进行检测;耐药诱导试验分析部分耐药菌株大环内酯类耐药表型;PCR检测红霉素耐药基因ermB和mefA。结果 200株SP中179株对红霉素耐药。红霉素和青霉素的药敏结果无明显关连性。耐红霉素的147株SP中,阿奇霉素、克拉霉素、乙酰螺旋霉素和克林霉素的耐药率分别是100％,100％,95．2％,95．9％。耐药表型以结构型大环内酯类、林可酰胺类和链阳性菌素B耐药表型(cMLS)为主,占红霉素耐药株的95．9％。耐药基因检测中,仅携带ermB基因的菌株为79．6％,同时携带ermB和mefA基因菌株为17．7％,仅携带mefA基因的菌株为2．7％。结论 2002～2003年北京上呼吸道感染患儿携带的SP对红霉素耐药率达89．5％,分离株在对红霉素耐药同时也对其他大环内酯类药物和克林霉素耐药。耐大环内酯SP表型以cMLS为主,基因型以ermB为主。     

儿童肺炎链球菌分离株红霉素耐药性与相关耐药基因研究

目的检测儿童肺炎链球菌(SP)红霉素耐药性和相关耐药基因。方法对肺炎儿童进行痰培养,分离、鉴定SP菌株,经红霉素药敏试验检测SP药敏,通过PCR检测红霉素核糖体甲基化酶基因(ermB、ermA/B)、主动外排转运基因(mefA)3种基因表达。结果临床分离的31株SP,29株对红霉素耐药(93.5%),ermB基因阳性12株(38.7%),ermA/B基因阳性19株(61.3%),mefA基因阳性7株(22.6%),24株检出erm或和mef基因(77.4%),其中1株ermA/B、mefA基因表达均为阳性,1株ermB、ermA/B、mefA基因表达均为阳性。结论erm基因在SP有高表达,mef基因也有相当的表达,SP对红霉素具有高度耐药。     

193株B组链球菌对抗菌药物的耐药性研究

目的　了解我国北京和广州地区B组链球菌 (GBS)抗生素耐药菌谱情况。方法　采用标准K B纸片法测定GBS菌对临床常用 7种抗生素耐药性。结果　 193株GBS菌均对青霉素类、头孢菌素类抗生素敏感 ;但青霉素和氨苄青霉素中度敏感率分别为 17%和 19% ;北京地区 1998年到 1999年分离GBS菌株对红霉素耐药率从8%增加到 16 % ,对克林霉素耐药率从 2 0 %增加到 2 8% ;广州地区 1999年分离的GBS菌株对红霉素和克林霉素耐药率分别为 4 5 %和 2 6 % ,与北京地区 1998年和 1999年分离的GBS菌株对红霉素的耐药率比较 ,经统计学处理P <0 0 5 ,差异有显著性。结论　青霉素、氨苄青霉素可作为治疗GBS感染首选药物 ;头孢菌素类抗生素可作为二线的选择药物。红霉素和克林霉素作为预防和治疗GBS感染的药物在国内会受到一定的限制。     

5岁以下健康儿童鼻咽部肺炎链球菌的流行病学研究

目的了解武汉地区儿童肺炎链球菌携带率、耐药性、耐药基因及血清型流行状况。方法采集鼻咽拭子,以琼脂稀释法测定肺炎链球菌对12种抗菌药物的最低抑菌浓度,聚合酶链式反应检测红霉素耐药基因,荚膜肿胀试验进行血清学分型。结果武汉地区儿童肺炎链球菌携带率为22．31％（135／605）。存活的133株细菌中,青霉素不敏感肺炎链球菌（PNSSP）发生率为45．9％（61／133）;头孢菌素第一代（头孢氨苄）、二代（头孢克洛）、三代（头孢克肟、头孢泊肟、头孢曲松）敏感率依次为6．0％、45．1％、54．9％、56．4％、88．7％;除1株环丙沙星低耐株外,未发现氟喹诺酮类耐药株。大环内酯类敏感率仅为14．3％～15．8％。在114株红霉素耐药株中,检出ermB基因76株（66．7％）,2株（1．8％）低耐株含有mefA基因,46株（40．4％）同时具有ermB和mefA基因。血清分型涉及17个血清群,主要分布在19、23、6、15和14血清群,7株细菌未能分群。PNSSP分布在19、23、6和未分型血清群。结论武汉地区肺炎链球菌耐药严重,红霉素耐药主要为核糖体修饰（ermB介导）引起。流行血清群以19、23、6为主。     

56株B族链球菌血清型耐药性及多位点序列分型研究

目的研究B族链球菌(GBS)的血清型、耐药性和多位点序列分型,供防治GBS感染参考。方法 2012—2013年间共收集到56株GBS菌株,自就诊于北京市妇产医院和北京大兴医院的妊娠35~37周孕妇的阴道和直肠拭子的分离培养。采用乳胶凝集试验检测菌株的血清型,E-test法和纸片扩散法检测细菌对9种抗生素的敏感性,PCR方法检测红霉素耐药基因erm B和mef A,管家基因测序确定菌株的序列型(ST),e BURST软件分析菌株间亲缘性关系。结果 56株菌共鉴定出5种血清型,常见型为Ⅲ型(32.1%)、Ⅰa型(17.9%)、Ⅰb型(16.1%)和Ⅴ型(14.3%)。分离株对青霉素和头孢曲松均敏感,对左氧氟沙星、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、泰利霉素、克林霉素和四环素的不敏感率依次为39.3%、85.7%、92.9%、98.2%、30.4%、73.2%和91.0%。56株菌株共检测出14种STs,ST19(30.4%)最为常见。Ⅲ型菌株主要属于ST19(14/18),92.9%的Ⅲ/ST19型菌株对左氧氟沙星耐药,75%的左氧氟耐药菌株属于CC19。44株红霉素耐药菌株中,32株(72.7%)erm B阳性。结论北京GBS菌株以Ⅲ、Ⅰa、Ⅰb、Ⅴ型常见;GBS菌株对青霉素和头孢曲松敏感,对红霉素和克林霉素等耐药率高,超过90%的Ⅲ/ST19型菌株耐左氧氟沙星;红霉素耐药菌株多携带erm B。     

儿童肺炎链球菌分离株青霉素、红霉素耐药性与耐药相关基因研究

目的了解苏州地区儿童肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae,Sp)临床分离株青霉素、红霉素耐药的状况。方法对呼吸道感染患儿痰标本中分离到的26株Sp进行青霉素、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟、红霉素E test药敏试验,和与青霉素、红霉素耐药相关的pbp2B、ermB、ermA/B、mefA基因PCR检测,测得pbp2B基因产物进行测序并与SpR6株(青霉素敏感株,登录号:NC003098)序列比较。结果(1)pbp2B基因突变15株(58%),均为点突变,突变类型有A型11株(73%)、B型2株(13%)、C型1株(7%)、D型1株(7%);(2)11株无突变菌中青霉素、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟敏感株分别为9株(82%)、10株(91%)、11株(100%)、11株(100%);15株突变菌中青霉素、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟不敏感株分别为13株(87%)、11株(73%)、1株(7%)、1株(7%);11株A型突变株对青霉素均不敏感,10株对二代头孢不敏感;(3)ermB基因阳性9株(35%)、ermA/B基因阳性16株(62%)、mefA基因阳性7株(27%)、erm或(和)mef基因阳性21株(81%);(4)erm或(和)mef基因阳性株红霉素最低抑菌浓度为2～>256mg/L。结论pbp2B基因突变是本地区Sp青霉素耐药机制的主要遗传学基础之一;突变株中,A类突变率最高,表现对青霉素、二代头孢不敏感;ermA、ermB和mefA3种红霉素耐药基因单独或共同表达     

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目的研究北京儿童医院脓疱疮患儿临床分离A组β溶血性链球菌(GAS)及其对抗菌药物的敏感性情况。方法收集北京儿童医院2003—2008年收治的1735例脓疱疮儿童皮损部位分离出的52株GAS菌株,采用琼脂稀释法测定9种抗菌药物的最低抑菌质量浓度(MIC)值;用聚合酶链反应方法对上述菌株进行大环内酯类抗生素耐药基因ermB、ermA和mefA检测以及emm分型情况。结果分离株对四环素及大环内酯类抗生素耐药率均为100%,MIC>256mg/L;对青霉素、头孢拉啶及氧氟沙星的敏感率高达100%。大环内酯类抗生素耐药基因ermB、ermA和mefA和阳性率分别为92.30%、7.70%和0;分离株的emm分型最常见的为emm12.0(53.85%),emm1.0(36.54%)。结论北京儿童医院收治的脓疱疮儿童GAS感染流行菌株对大环内酯类抗生素耐药率很高,主要耐药机制为ermB编码的23SrRNA甲基化酶导致靶位改变,在北京地区青霉素类和头孢菌素类抗生素仍是治疗GAS感染首选药物。     

金黄色葡萄球菌儿童株耐药性研究和mecA基因检测

目的了解金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）儿童株对常用抗生素的耐药特点,评价苯唑西林耐药性相关基因raecA-PCR的临床价值。方法用金葡菌乳胶凝集试验和Vitek系统GPI卡鉴定金葡菌,用纸片扩散法完成12种常用抗生素的药敏试验,同时用E-test法进行苯唑西林和万古霉素耐药性检测,并对所有菌株采用PCR技术检测mecA基因。结果金黄色葡萄球菌共259株,包括185株临床株和74株健康携带株,其中95．8％的菌株产生B内酰胺酶而对青霉素G耐药,91．1％的菌株对苯唑西林敏感,对头孢噻肟和头孢曲松的敏感率均为91．9％;对红霉素、四环素、克林霉素、甲氧苄啶磺胺甲基异恶唑、氯霉素、氧氟沙星和利福平的耐药率分别为48．3％、30．9％、21．6％、11．2％、10．0％、2．3％和1．5％;所有菌株均对万古霉素敏感。临床株对苯唑西林、头孢噻肟和头孢曲松的耐药率高于携带株（P〈0．05）,对红霉素的耐药率低于携带株（P〈0．01）。mecA-PCR结果显示：标准株ATCC25923和所有苯唑西林敏感株mecA基因均阴性,中介株mecA基因阳性1株,耐药株中均阳性。结论本研究中金葡菌对苯唑西林的耐药率不高,而mecA-PCR技术可以作为快速检测耐苯唑西林金葡菌的有效方法。     

12种抗生素对B族链球菌体外抗菌活性研究

目的：探讨B族链球菌（GBS）对十二种常用抗生素的敏感性，以指导临床用药，方法：采用K－B法测定117株GBS菌对12种抗生素的敏感性。结果，所有GBS菌对青霉素和氨苄青霉素敏感或中度敏感，对头孢霉素类及阿莫西林／棒酸，苯唑青霉素均敏感，红霉素，庆大霉素，克林霉素药率分别为8．5％，12．0％，20．5％，对丁胺卡那的耐药率为90．6％。结论：青霉素，氨苄青霉素，阿莫西林／棒酸可作为治疗GBS感染首选药物，头孢霉素类抗生素可作为二线的选择药物，实验室常规准确报告GBS敏感性结果对指导临床医师合理选择抗生素治疗GBS感染具有重要意义，加强抗生素对GBS菌株连续药敏感监测，了解耐药变迁，对临床具有重要指导意义。     

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??Abstract??Objective To investigate the genetic structure of Streptococcus pneumoniae serotype 19F isolates from children in Beijing. Methods A total of 130 isolates were identified as serotype 19F among 1033 S. pneumoniae strains collected from 1997 to 2006 and 2010. There were 120 isolates characterized by antibiotic susceptibility?? macrolide resistance gene and multilocus sequence typing??MLST??. Results Among the 120 strains?? only five strains were nonsusceptible to penicilln and the nonsusceptibility rate to cephalosporins increased from 1997 to 2010. There were 119??99.2%?? strains resistant to erythromycin?? 115??96.6%?? carried the ermB gene and 64??53.8%?? carried mefA gene?? 60??50.4%?? carried both genes. All isolates belonged to 31 sequence types?? ST983 was the most prevalent ST?? followed by ST271. From 1997 to 2010?? the percentage of CC271 increased from 14.3% in 1997-1998 to 92% in 2010?? whereas CC983 decreased from 64.3% to 0%. CC271 showed higher nonsuscetibility rate to β-lactam antibiotics than CC983. Conclusion The prevalence of serotype 19F of S.pneumoniae increases from 1997 to 2010 in Beijing. The increase of nonsusceptibility rate to β-lactam antibiotics is associated with the spread of international resistance clone CC271 due to the
selection of antibiotics overuse.     

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目的了解广州地区对红霉素耐药的肺炎链球菌中ermB及mefE基因的分布,比较ermB基因与mefE基因对红霉素耐药的肺炎链球菌的耐药性。方法2001—2004于广州市儿童医院用克林霉素纸片法检测239株对红霉素耐药的肺炎链球菌,并用浓度梯度法检测其耐药性。结果239株对红霉素耐药的肺炎链球菌中,ermB、mefE基因介导的耐药率分别为70·3%(168/239)和29·7%(71/239)。168株ermB基因介导对红霉素耐药的肺炎链球菌,对青霉素(MIC500·19μg/mL、MIC901·5μg/mL)、阿莫西林/克拉维酸(MIC500·19μg/mL、MIC901·0μg/mL)、头孢曲松(MIC500·19μg/mL、MIC900·75μg/mL)、头孢呋辛(MIC500·38μg/mL、MIC902·0μg/mL)、头孢克洛(MIC502·0μg/mL、MIC9032·0μg/mL)的不敏感率分别为58·4%、1·2%、20·8%、46·5%和51·7%。71株mefE基因介导对红霉素耐药的肺炎链球菌,对青霉素(MIC500·5μg/mL、MIC901·5μg/mL)、阿莫西林/克拉维酸(MIC500·38μg/mL、MIC901·0μg/mL)、头孢曲松(MIC500·38μg/mL、MIC900·75μg/mL)、头孢呋辛(MIC501·0μg/mL、MIC903·0μg/mL)、头孢克洛(MIC506·0μg/mL、MIC9048·0μg/mL)的不敏感率分别为67·6%、0、19·7%、59·2%和61·9%。结论广州地区对红霉素耐药的肺炎链球菌其耐药机制以ermB基因介导为主;ermB基因介导的红霉素耐药性高于mefE基因介导的耐药性;ermB和mefE基因介导对红霉素耐药的肺炎链球菌对β-内酰胺类药物存在不同程度的耐药。     

儿童呼吸道感染肺炎链球菌耐药性及pbp2B与TEM基因的研究

目的：了解广州地区儿童呼吸道感染肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,SP)的耐药情况以及SP中青霉素耐药相关基因TEM与pbp2B的流行分布及突变情况。方法：采用E-test和K-B纸片法对44株SP分离株进行药敏试验;PCR扩增SP中的TEM基因及pbp2B,并对pbp2B基因进行测序,结果与SP青霉素敏感株R6进行序列比对分析。结果：①44株SP对青霉素的敏感率仅为11.4％,不敏感率高达88.6％。对红霉素耐药率已达100％,对克林霉素、复方新诺明的耐药性也在90％以上。但对头孢曲松、阿莫西林、亚胺培南仍敏感,耐药率分别为0,2.6%和3.9%。未发现对氧氟沙星、万古霉素耐药菌株。②44株SP的pbp2B基因扩增序列与R6敏感株相比较,5株青霉素敏感株99%以上的核苷酸序列相同,未发生氨基酸的替换。39株青霉素不敏感株均发生核苷酸序列的改变,核苷酸序列突变率为13.2％～23.1%,约6.5％～10.9%的氨基酸发生了替换。根据氨基酸在Ser391-Thr492片段之间的突变情况,可将39株青霉素不敏感株分为四型,其中Ⅰ型突变30株,Ⅱ型突变7株,Ⅲ型和Ⅳ型各1株。44株SP均未检出TEM型β-内酰胺酶耐药基因。结论：广州地区儿童呼吸道感染SP多重耐药情况较严重,青霉素、红霉素已不适宜作为SP感染的临床一线用药,阿莫西林及第三代头孢菌素可作为SP感染的经验用药。pbp2B基因突变是广州地区儿童SP对青霉素耐药的主要机制之一。［中国当代儿科杂志,2009,11（8）：623-626］