腋淋巴结阳性乳腺癌MMP-2的表达及预后

目的：研究有腋窝淋巴结受累乳腺恶性肿瘤患者中基质金属蛋白酶－2（MMP－2）的表达情况，探讨MMP－2表达与淋巴结受累及患者5年生存率间的关系。方法：采用单克隆抗体LsAB法，检测肿瘤组织中MMP－2的表达情况，并与腋淋巴结受累及5年生存率进行相关分析。结果：MMP－2阳性表达与腋窝淋巴结受累呈正相关。rs=0.248,P＜0．05。阳性者5年生存率明显小于阴性者（P＜0．05）。结论：MMP－2阳性对腋窝淋巴结转移和预后的预测有重要参考价值。     

MMP2、MMP9在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的　探讨基质金属蛋白酶MMP 2和MMP 9在乳腺癌中表达与淋巴结转移和预后的关系。方法　应用免疫组化S P方法检测 34例乳腺癌组织和 12例乳腺良性病变组织中MMP 2和MMP 9表达与乳腺癌的浸润及转移的关系。结果　①在 34例乳腺癌组织中 ,MMP 2和MMP 9阳性表达率分别为 5 5 9% (19/ 34)和 5 8 8% (2 0 / 34) ,明显高于乳腺良性病变 (P <0 0 1)。②淋巴结转移组MMP 2和MMP 9的阳性表达明显高于无淋巴结转移组 (P <0 0 1)。结论　乳腺癌中MMP 2和MMP 9的表达显著高于乳腺良性病变 ;MMP 2和MMP 9的表达与乳腺癌淋巴结转移密切相关 ,可作为判断乳腺癌转移和预后的指标     

MMP-2和FAK在甲状腺乳头状癌中的表达及其相互关系

目的：检测基质金属蛋白酶2（MMP－2）和黏着斑激酶（FAK）在甲状腺乳头状癌中的表达，并探讨其相关性。方法：采用免疫组织化学En Vision方法，观察70例甲状腺乳头状癌及其癌旁正常组织中MMP－2和FAK的表达情况。结果：70例甲状腺癌组织中MMP－2和FAK的阳性表达率分别为84．3％（59／70）和80．0％（56／70）；70例相应癌旁正常滤泡上皮中，阳性表达率分别为35．7％（25／70）和14．3％（10／70）。两者阳性表达率和阳性强度均以甲状腺乳头状癌中为高（P＜0．05及P＜0．01）。MMP－2分别在肿瘤直径大于或等于1cm组和伴淋巴结转移组中呈高表达，而AK分别在40岁以上组和伴淋巴结转移组中呈高表达。MMP－2阳性表达强度与FAK的阳性表达强度之间呈显著正相关（P＜0．01）。结论：甲状腺乳头状癌中MMP－2与FAK的表达密切相关，可作为甲状腺乳头状癌生物学行为预测的辅助指标。     

MMP-2，TIMP-2，MMP-9的表达与胃癌侵袭转移的关系

目的检测胃癌组织以及癌旁胃组织中MMP．2、TIMP．2、MMP．9的表达差异,并分析其对胃癌侵袭转移能力的影响及其可能机制。方法将97例胃癌组织以及89例癌旁胃组织制作成组织芯片,用免疫组织化学半定量的方法检测MMP-2、TIMP-2、MMP-9在胃癌组织及癌旁胃组织中的表达程度并分析其与临床病理参数的关系。结果MMP-2、TIMP-2、MMP-9在89例胃癌组织和配对的癌旁胃组织中的表达均有显著差异（P〈O．01）,其中MMP-2在胃癌组织的表达大于其在癌旁非肿瘤胃组织,而TIMP．2、MMP．9在胃癌组织的表达小于其在癌旁非肿瘤胃组织。MMP-2的高表达率与胃癌组织的临床分期,浸润深度,淋巴结转移显著正相关（P〈0．01）;TIMP．2与胃癌组织的临床分期,浸润深度（P〈0．01）,淋巴结转移（P〈0．05）显著负相关。MMP．9在肠型胃癌的表达要显著高于弥漫型胃癌（P〈O．05）。MMP-2的高表达与TIMP-2的高表达显著负相关（P〈O．01）。结论MMP-2可促进胃癌的侵袭转移,在胃癌组织高表达;TIMP-2抑制胃癌的侵袭转移,在胃癌组织低表达;MMP-2的表达与TIMP-2的表达显著负相关。MMP-9在胃癌组织表达低,．在肠型胃癌中的表达显著高于弥漫型胃癌,与TIMP-2的表达无显著相关性。     

MMP2和nm23蛋白在胃癌中的表达和意义

应用免疫组化SP法检测MMP2和nm23蛋白在66例胃癌中的表达。结果:66例胃癌中,MMP2的阳性表达率为71．2％(47/66),nm23蛋白的阳性表达率为68．2％(45/66)。MMP2与淋巴结转移呈正相关(P＜0．05),而与胃癌组织学分级和浸润深度无明显相关(P＞0．05)。nm23与胃癌浸润深度及淋巴结转移呈负相关(P＜0．05),而与组织学分级无明显相关(P＞0．05)。认为MMP2和nm23与胃癌的生物学行为、预后和淋巴结转移上存在关系,可以作为什计患者预后及术后治疗的生物学指标。     

乳腺癌组织中Midkine、Survivin、MMP2基因用于预测预后

目的：探讨Midkine、Survivin、MMP2表达与乳腺癌预后的关系。方法：通过免疫组化方法检测临床随访病例的乳腺癌组织中Midkine、Survivin、MMP2的表达,并分析与临床随访资料的关系。结果：62例乳腺癌病例中23例（37.1%）3项表达均阳性,18例（29.0%）2项表达阳性,21例（33.9%）仅1项表达阳性或均阴性。随肿瘤分期上升,表达阳性率增加。以阳性率作为危险度,显示阳性率与远处转移发生（P〈0.001）,及5年存活率下降相关（P〈0.01）。结论：联合检测乳腺癌组织中的Midkine、Survivin、MMP2有助于判断预后。     

COX-2、VEGF-C在乳腺癌中的表达及临床意义

目的研究环氧化酶．2（COX-2）、血管内皮生长因子c（VEGF-C）蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学SP法分别检测64例乳腺浸润性导管癌及15例乳腺纤维腺瘤组织中COX-2和VEGF-C蛋白的表达。结果乳腺癌组织中COX-2和VEGF-C蛋白阳性表达率分别为73．4％和65．6％,均明显高于乳腺纤维腺瘤组织（P〈O．01）。COX．2和VEGF．C蛋白表达与乳腺癌的临床分期、组织学分级和淋巴结转移密切相关（P〈0．05）,且两者表达成明显正相关（P〈0．05）。结论COX．2和VEGF．C在乳腺癌的发生发展中起着重要的作用,检测其表达可作为反映乳腺癌生物学行为和判断预后的有效指标之一。     

酪氨酸激酶2与P53在乳腺癌中表达的相关性及与临床病理特征之间的关系

目的探究酪氨酸激酶2(TYK2)与P53在乳腺癌(MC)中表达的相关性及与临床病理特征之间的关系。方法回顾性选择2014年11月至2017年11月眉山市人民医院收治并确诊的87例乳腺癌患者的癌组织及癌旁正常乳腺组织,另收集42例乳腺纤维腺瘤患者的腺瘤组织。采用免疫组化法检测TYK2、P53在MC组织、乳腺纤维腺瘤组织及癌旁正常乳腺组织中表达水平;分析TYK2、P53在乳腺癌中表达的相关性;比较TYK2、P53表达水平与各临床病理特征的关系。结果 TYK2在MC组织、乳腺纤维腺瘤组织、癌旁正常乳腺组织中阳性表达率分别为57. 47%(50/87)、6. 90%(6/87)、2. 38%(1/42),P53在MC组织、乳腺纤维腺瘤组织、癌旁正常乳腺组织中阳性表达率分别为40. 23%(35/87)、3. 45%(3/87)、2. 38%(1/42),TYK2和P53在MC组织中阳性表达率明显高于乳腺纤维腺瘤组织、癌旁正常乳腺组织,差异均具有统计学意义(P 0. 05);三阴性乳腺癌中TYK2阳性表达率略高于HER-2过表达型、Luminal B型及Luminal A型乳腺癌,差异无统计学意义(P 0. 05);三阴性乳腺癌中P53阳性表达率显著高于HER-2过表达型、Luminal B型及Luminal A型乳腺癌,差异具有统计学意义(P 0. 05);肿瘤直径、临床分期不同的MC患者癌组织中TYK2表达水平差异具有统计学意义(P 0. 05);淋巴结转移不同的MC患者癌组织中P53表达水平差异具有统计学意义(P 0. 05); TYK2与P53在乳腺癌中的表达呈正相关(P 0. 05)。结论 TYK2与P53在乳腺癌中呈高表达趋势;且TYK2的表达水平与肿瘤直径、临床分期有关; P53的表达水平与乳腺癌分子分型、淋巴结转移有关; TYK2与P53在乳腺癌中的表达呈正相关。     

组织微阵列检测结直肠癌组织中MMP-2、MMP-9和TIMP-2蛋白的表达

目的 探讨MMP-2、MMP-9 和TIMP-2蛋白表达与结直肠癌侵袭转移的关系,寻找用于预测结直肠癌侵袭转移的分子标记物.方法 组织微阵列结合免疫组化技术检测结直肠癌及其癌旁正常肠黏膜上皮中的MMP-2、MMP-9 和TIMP-2蛋白表达.结果 结直肠癌组织中,MMP-9蛋白阳性表达率显著高于癌旁肠黏膜组织(P<0.001),TIMP-2蛋白阳性表达率显著低于癌旁黏膜组织(P<0.05).浸润至肠壁浆膜层的结直肠癌和Dukes'C、D期癌组织的MMP-2蛋白阳性表达率显著高于浸润肠壁浅、深平滑肌层和Dukes'A、 B期结直肠癌(P<0.05);肠壁局部淋巴结转移的结直肠癌中MMP-2、MMP-9 蛋白阳性表达率显著高于无淋巴结转移癌(P<0.05);Dukes'A、B期结直肠癌TIMP2蛋白阳性表达率显著高于Dukes'C、D期(P<0.05).TIMP2蛋白阳性的结直肠癌生存时间显著长于TIMP2阴性的结直肠癌(P<0.05).结直肠癌中MMP-2蛋白阳性表达与MMP-9表达呈正相关(P＜0.001),但TIMP-2蛋白阳性表达与MMP-2表达呈显著负相关(P<0.05).二变量多因素回归分析显示,MMP-2蛋白表达、癌组织的浸润深度和Dukes分期可作为预测结直肠癌淋巴结转移的独立指标.结论 结直肠癌MMP-9和TIMP-2蛋白共同高表达及MMP-2与TIMP-2蛋白的表达失衡在结直肠癌侵袭、转移中起重要作用.MMP-2蛋白表达可作为结直肠癌淋巴结转移的独立预测指标.     

乳腺癌雌孕激素受体与C—erbB—2基因、多药耐药基因MDR1（P—gp）蛋白表达及相关分析研究

目的：观察乳腺癌组织中雌孕激素受体（ER、PR）与C-erbB-2基因、多药耐药基因MDR1（P－gp)的蛋白表达并探讨其相互关系。方法：用免疫组织化学法（EnVision法）对109例术前未行化疗的乳腺癌手术切除标本福尔马林固定，石蜡包埋组织进行ER、PR、C-erbB-2、MDR1(P-gp)检测，结果作统计学分析。结果：（1）ER、PR阳性表这率分别为55．0％和43．％；（2）C-erbB-2、MDR1（P-gp)的阳性表达率各为54．1％和15．6％，乳腺导管内癌患者的C-erbB-2阳性表达高于浸润性导管癌的患者（P＜0．05）；（3）ER、PR均阳性患者的C-erbB-2阳性表达明显低于ER、PR均阴性患者（P＜0．05），ER阳性组的C-erbB-2阳性表达明显低于ER阴性组（P＜0．05）。结论：ER、PR与C-erbB-2基因乳腺癌中有一定的内在联系，C-erbB-2表达与ER表这呈负相关，多药耐药基因MDR1（P-gp）的表达与ER、PR无关。     

Dynamic changes of matrix metalloproteinases and their tissue inhibitors in severe sepsis

Purpose

Little is known about the dynamic changes of matrix metalloproteinases (MMPs) and their inhibitors (TIMPs) in sepsis. Our aim was therefore to investigate the time course of MMPs and their inhibitors in patients experiencing severe sepsis.

Methods

Our prospective controlled analysis included 38 patients with severe sepsis. Plasma levels of MMP-2, MMP-9, TIMP-1, and TIMP-2 were measured daily at a 5-day-long period with enzyme-linked immunosorbent assay. Seventeen healthy volunteers were invited as controls.

Results

MMP-2 showed no difference compared to controls, whereas significantly elevated MMP-9 levels were detected on admission (P < .005). Significantly elevated but declining TIMP-1 levels were measured during the whole trial (P < .002-.004). Except for the second day, TIMP-2 levels were significantly lower than controls (P < .05-.009). MMP2/TIMP-1 ratios were significantly lower in septic patients (P < .03-.006), whereas MMP-2/TIMP-2 ratios were elevated throughout our study (P < .03-.006). MMP-9/TIMP-1 ratios were significantly lower at the first 3 days (P < .05-.008). MMP-9/TIMP-2 was significantly elevated on admission (P < .006).

Conclusions

Our research is the first follow-up study dealing with MMPs, TIMPs, and their ratios in severe sepsis. Our results indicate that MMPs and TIMPs may play a crucial role in severe sepsis, especially TIMP-1, MMP-9, and possibly TIMP-2, after an extensive study.     

基质金属蛋白酶及其组织抑制剂与滋养细胞侵袭性生长关系的研究

目的了解基质金属蛋白酶（MMPs）和组织抑制剂（TIMPs）在滋养细胞中的定位及其在不同滋养细胞病变中的表达和相互调节作用.方法采用免疫组化方法检测MMP-2、MMP-9和TMP-1、TIMP-2在绒毛膜癌、侵袭性水泡状胎块、水泡状胎块、胎盘植入和超常反应胎盘部位等病变以及胎盘着床部位中的表达.结果MMP-2、9和TIMP-1、2主要在中间滋养细胞和合体滋养细胞表达.滋养细胞在胎盘着床部位仅表达MMP-2;超常反应胎盘部位和胎盘植入不但表达MMP-2,而且多数病例MMP-9（＋）,但阳性强度弱,TIMP-1和TIMP-2（-）;水泡状胎块较强表达MMP-2,伴持续性滋养细胞疾病MMP-9和TIMP-1、2（＋）;侵袭性水泡状胎块和绒毛膜癌MMP-2和MMP-9表达明显增强,TIMP-1和TIMP-2多数（＋）.结论在病理性妊娠中MMP-9活性增强可导致滋养细胞发生过度浸润.MMP-9的过度表达和TIMP-1、2的轻微增加,可能共同增强了肿瘤细胞的侵袭能力.     

基质金属蛋白酶及CD15在肺癌浸润、转移中的作用

目的 探讨基质金属蛋白酶（MMP-2,MMP-9）及其抑制剂（TIMP-1,TIMP-2）和细胞粘附分子CD15在肺癌浸润和转移中的作用,是否能为临床肺癌的诊断和治疗提供一种新的,有效的手段。方法 通过免疫组化方法检测47例肺癌标本中MMP-2 MMP-9,TIMP-1,TIMP-2和CD15的表达情况。结果 腺癌中MMP-2,TIMP-1阻性表达率明显高于鳞癌（P〈0.01）,鳞癌中MMP-9的阳性表达率高于腺癌（P〈0.01）;低分化者MMP-9的阳性表达率高于高,中分化者（P〈0.05）;有淋巴结转移者MMP-2,MMP-9和CD15的阳性表达率高于无淋巴结转移者（P〈0.01）;无淋巴结转移者中TIMP-1的阳性表达率高于有淋巴结转移者。结论 肺癌组织中MMP-2,MMP-9,TIMP-1和CD15的阳性表达可能是肺癌恶性程度和预后判断的指标。     

基质金属蛋白酶及其抑制因子在胎儿皮肤内的表达特征及其意义

目的探讨基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、MMP-3、MMP-9及金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）、TIMP-2在不同发育时期胎儿皮肤中的表达特征及其可能的生物学意义。方法24例被测标本中包括不同胎龄（12～40周）的胎儿皮肤。用免疫组化方法和病理技术检测这5种蛋白在胎儿皮肤中定位和表达量的变化规律。结果MMP-2、MMP-3、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2在不同时期的胎儿皮肤内均有表达，它们主要分布于表皮细胞、成纤维细胞、毛囊和汗腺上皮细胞以及血管内皮细胞的胞浆中。在早期（胎龄12～18周）妊娠胎儿皮肤中，MMP-2、MMP-3、MMP-9蛋白呈强阳性表达，随着胎儿生长发育，这些蛋白的阳性率逐渐降低，在晚期（胎龄27～40周）妊娠胎儿皮肤中这些蛋白的阳性细胞率均明显低于早期妊娠胎儿（P均〈0．05）。TIMP-1和TIMP-2呈相反的变化规律，在早期妊娠胎儿皮肤中表达水平较低，而在晚期妊娠胎儿皮肤中这两种蛋白阳性细胞率增大，显著高于早期妊娠胎儿（P均〈0．05）。结论MMP-2、MMP-3、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2可能对皮肤的发生、结构功能的维持以及创伤后修复起重要作用。在早期妊娠胎儿皮肤中，MMP-2、MMP-3、MMP-9高表达以及TIMP-1和TIMP-2低表达可能与胎儿皮肤创面无瘢痕愈合密切相关。     

螺内酯对肝星状细胞表达基质金属蛋白酶及其抑制剂的影响

目的研究螺内酯干预肝星状细胞（HSCs）后基质金属蛋白酶2（MMP-2）、MMP-9、MMP-13和其组织抑制剂1（TIMP-1）的变化。探讨螺内酯对胶原代谢影响的机制。方法应用不同浓度螺内酯（1×10^-4）mol／L-（1×10^-7）mol／L干预HSCs 48小时,采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测MMP-2、MMP-9、MMP-13 mRNA和TIMP-1 mRNA的表达。结果①螺内酯组的MMP-13基因表达强度上调,螺内酯（1×10^-4）mol／L-（1×10^-5）mol／L浓度组MMP-13基因表达强度（0．91±0．13、0．80±0．01、0．67±0．15）均明显高于对照组（0．53±0．10）（P〈0．01）。1×10^-4mol／L浓度组MMP-13基因表达强度接近对照组的2倍。②螺内酯干预HSCs48小时后,TIMP-1基因表达减少,螺内酯（1×10^-4）mol／L-（1×10^-6）mol／L浓度组（0．15±0．05、0．28±0．15、0．37±0．03）明显低于对照组（0．47±0．04）（P〈0．01或〈0．05）。③螺内酯不同浓度干预HSCs 48小时后,HSCs MMP-2、MMP-9基因表达无明显变化（P〉0．05）。结论螺内酯可抑制HSCs TIMP-1基因的表达,增加间质胶原酶MMP-13 mRNA的含量。螺内酯可能通过对MMPs及TIMP-1影响而促进胶原降解。     

基质金属蛋白酶-9及组织抑制剂-1在大鼠肠粘连形成过程中的作用

目的:探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及组织抑制剂-1(TIMP-1)在术后肠粘连形成过程中的表达变化及其意义。方法:用干纱布擦伤回肠浆膜,制成大鼠肠粘连模型,采用免疫组化和图像分析方法,与对照组比较,观察术后2、7、14d时粘连肠组织中MMP-9及TIMP-1的表达变化。结果:与对照组比较,术后2d时模型组织中MMP-9的表达显著增加(P<0.05),而术后7、14d时粘连组织中MMP-9的表达较对照组均显著减少(P<0.01);术后各时相点时粘连肠组织中TIMP-1的表达均显著高于对照组(均P<0.05)。结论:MMP-9及TIMP-1在术后肠粘连的形成过程中发挥着重要的作用。     

大肠癌组织中基质金属蛋白酶-9及其抑制物的表达和临床意义

目的 探讨大肠癌组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其抑制物基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的表达和临床意义.方法 采用PowerVision二步法免疫组织化学染色检测42例大肠癌组织及其癌旁组织中MMP-9和TIMP-1表达情况并分析其与临床病理参数的关系.结果 MMP-9在大肠癌组织中表达率明显高于癌旁组织(69.1%与45.2%,P=0.009);TIMP-1在大肠癌组织中表达率明显高于癌旁组织(61.9%与40.5%,P=0.004).MMP-9的表达与Dukes分期、浸润深度、淋巴结转移正相关(rs=0.429,P=0.005;rs=0.372,P=0.015;rs=0.372,P=0.015);TIMP-1的表达与Dukes分期、浸润深度、淋巴结转移正相关(rs=0.394,P=0.010;rs=0.382,P=0.013;rs=0.382,P=0.013).MMP-9的表达与TIMP-1的表达呈正相关(rs=0.641,P<0.001).结论 MMP-9和TIMP-1在大肠癌发生发展中起重要作用,联合检测二者对大肠癌侵袭转移的预测、预后评估及指导合理的综合治疗等具有重要的临床意义.     

心肌肥厚大鼠细胞外基质重塑中基质金属蛋白酶的作用及氯沙坦干预的效果

背景细胞外基质中的纤维性胶原过度沉积是心肌肥厚发展过程中的重要特征.基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)及其生理性抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMPs)是调节细胞外基质的重要酶类,转化生长因子β1(transforming growthfactor-β, TGF-β1)能促进组织纤维化.目的探讨MMP-9及其生理性抑制剂TIMP-1和TGF-β1在心肌肥厚大鼠细胞外基质重塑中的作用及氯沙坦干预的效果.设计随机对照实验研究.地点、材料和干预南京医科大学动物实验中心雄性SD大鼠随机用随机数字表法分为3组对照组、去甲肾上腺素组[1.06 mg/(kg·d)×15 d]、去甲肾上腺素+氯沙坦组[10 mg/(kg.d)×15 d].去甲肾上腺素腹腔注射,2次/d,连续15d,建立心肌肥厚的模型.氯沙坦灌胃给药.主要观察指标腹腔注射生理盐水、去甲肾上腺素、氯沙坦灌胃给药大鼠超声心动图检查,病理检查,心肌胶原蛋白表达,MMP-9,TIMP-1和TGF-β1mRNA和蛋白表达情况的对比结果.结果大鼠腹腔注射去甲肾上腺素后发生左心室肥厚及纤维化,胶原的含量及MMP-9(82.9±18.3),TIMP-1(43.8±7.3)和TGF-β1(49.4±7.9),mRNA的表达显著高于健康对照组.氯沙坦能降低室间隔的厚度,减少左室心肌中总体胶原、Ⅰ型、Ⅲ型胶原的合成及MMP-9,TGF-β1的表达.结论MMP-9,TIMP-1和TGF-β1与去甲肾上腺素诱导的心肌细胞外基质重塑有关.氯沙坦能有效的防治心肌肥厚及细胞外基质重塑,这一效应与其降低心肌中高表达的MMP-9和TGF-β1有关.     

基质金属蛋白酶家族的表达对急性单核细胞白血病细胞体外侵袭力的影响

目的 研究基质金属蛋白酶家族(TIMP-2、MT1-MMP、MMP-2)的表达对急性单核细胞白血病细胞体外侵袭力的影响.方法 以急性单核细胞白血病细胞株SHI-1细胞为研究对象,用定量PCR、Western blot法分别检测TIMP-2、MT1-MMP、MMP-2 mRNA和蛋白表达,并以NB4、K562、THP-1等人类其他白血病细胞株细胞为对照,进行比较.构建TIMP-2逆转录病毒载体,转染SHI-1细胞,G418筛选,有限稀释法挑选出单克隆S1、S2、S3细胞.RNA干扰(RNAi)法干扰SHI-1细胞TIMP-2、MT1-MMP、MMP-2表达.明胶酶谱法测定不同细胞和骨髓基质细胞(BMSC)共培养24 h后上清中MMP-2的表达,细胞侵袭实验测定SHI-1细胞侵袭人工基质膜的能力.结果 SHI-1细胞的TIMP-2、MT1-MMP、MMP-2 mRNA表达和蛋白表达均显著高于其他细胞(P＜0.05).SHI-1细胞和BMSC共培养上清中的MMP-2酶原和活化的MMP-2含量及细胞体外侵袭率均高于其他细胞(P＜0.05).单克隆S1、S2、S3细胞TIMP-2 mRNA表达水平分别是SHI-1细胞的3.0倍、2.0倍和1.5倍(P＜0.05),蛋白表达水平分别上调2.6倍、1.5倍和1.3倍(P＜0.01),体外侵袭率增加1.5～2.5倍(P＜0.05),活化的MMP-2含量增加1.5～3.0倍(P＜0.01).RNA干扰基因沉默效率为85%～98%.SHI-1细胞TIMP-2、MMP-2、MT1-MMP表达沉默后,细胞侵袭率分别下降60%～70%、50%～60%、40%～50%(P＜0.05).RNA干扰后的细胞培养上清中检测不到活化的MMP-2.结论 SHI-1细胞在mRNA水平和蛋白水平均高表达TIMP-2、MT1-MMP、MMP-2 mRNA,SHI-1细胞和BMSC共培养后这些分子的高表达促进MMP-2的活化,增强细胞的体外侵袭力.TIMP-2表达增加1.5～2.5倍对SHI-1细胞MMP-2的活化和细胞的体外侵袭力发挥的是增强作用,而不是抑制作用.

Abstract：

Objective To study the effect of matrix metalloproteinase 2 ( MMP-2), membrane type 1 MMP (MT1-MMP) and tissue inhibitor of metalloproteinase 2 (TIMP-2) expressions on the in vitro invasive capacity of acute monocytic leukemia SHI-1 cells. Methods SHI-1, NB4, K562, M937 and THP-1 human leukemia cell lines were cultured in vitro. The mRNA and protein expressions of TIMP-2, MMP-2 and MT1-MMP in different cells were detected by quantitative RT-PCR and western blot. A retroviral vector carrying human TIMP-2 cDNA was constructed and transfected into SHI-1 cells. Three subclone cells (S1, S2 and S3) were screened by G418 and selected by limiting dilution. RNA interference (RNAi) was used to knock down the expression of MMP-2, MT1-MMP and TIMP-2. Cell invasion capacity was performed through a reconstituted human basement membrane assays. Zymography was used to analyze the expression of MMP-2 in the supernatant of co-culture. Results The expressions of MMP-2, MT1-MMP and TIMP-2 in SHI-1 cells were higher than that in other leukemic cells at both mRNA and protein levels (P ＜ 0. 05 ). The amount of proMMP-2 and activated MMP-2 in the conditioned media from SHI-1 cells co-cultured with bone marrow stromal cells (BMSCs) was more than that from other cells (P ＜ 0. 05 ). The in vitro invasive capacity of SHI-1 cells were higher than that of other cells( P ＜ 0.05 ). The mRNA levels of TIMP-2 were increased by about 3 fold, 2 fold and 1.5 fold in S1, S2 and S3 cells, respectively( P ＜ 0.05 ), while the protein levels were by about 2.6 fold, 1.5 fold and 1.3 fold than that of SHI-1 cells, respectively(P ＜ 0.01 ). The invasion rates of subclone cells demonstrated a 1.5 - 2.5 fold' elevation ( P ＜ 0.05 ) and activated MMP-2 from their supernatants increased by 1.5 -2.0 fold(P＜0.01 ). The knock-down efficiency of siRNA was 85% to 98%. The down-regulation of TIMP-2, MMP-2 and MT1-MMP decreased the invasion rates of SHI-1 cells by 60% -70%, 50% - 60% and 40% - 50%, respectively ( P ＜ 0. 05 ). No activated MMP-2 in the supernatants from any knock-down cells could be found. Conclusions SHI-1 cells constitutively overexpress MMP-2,MT1-MMP and TIMP-2 at both mRNA and protein levels. After co-cultured with BMSCs the SHI-1 cells increased MMP-2 activation and cell invasion. An increase of TIMP-2 expression in SHI-1 cells reflects an activating effect on cells invasion and MMP-2 activation.