炎症介质对HIF-1的表达调控

低氧诱导因子-1（HIF-1）是调节氧和能量稳态的核心转录因子，在机体的病理和生理过程中起着关键作用。它是由α和β亚基组成的异二聚体，其α亚基对氧不稳定，在常氧细胞中通过蛋白酶体系统降解。研究表明即使在正常氧条件下细胞因子IL-1,TNF-α和NO等对HIF-1α的表达也有上调作用。     

pcDNA3-HIF-1α真核表达质粒的构建及其在MCF-7细胞中的表达

目的构建低氧诱导因子1α(H IF-1α)真核表达质粒,并在MCF-7细胞中进行功能验证。方法利用RT-PCR扩增带有XbaⅠ和H indⅢ酶切位点的H IF-1α编码基因,插入T载体测序正确后,克隆入pcDNA3真核表达载体,然后将其转染MCF-7细胞。W estern b lot和双荧光素酶报告基因法分别检测H IF-1α表达及其DNA结合活性;实时定量PCR检测H IF-1α对低氧诱导基因C-METmRNA表达的影响;Caspase3/7活性检测来初步判断H IF-1α对低氧MCF-7细胞凋亡的影响。结果酶切及测序结果证明pcDNA3-H IF-1α表达质粒的DNA序列完全正确。将此质粒转染MCF-7细胞后,H IF-1α蛋白表达明显增加,它不仅增强了pGL3-EPO-HRE报告基因活性而且促进了C-METmRNA的表达,同时还降低了低氧MCF-7细胞中Caspase3/7的水平。结论pcDNA3-H IF-1α真核表达质粒构建成功,它不但具有很强的DNA结合和诱导活性,而且在细胞低氧过程中具有一定的抗凋亡作用。     

慢性肺动脉高压大鼠肺小动脉内HIF-1α的表达增强并与NO有关

慢性低氧引起肺血管收缩、肺血管重建而致肺血管阻力持续升高,最终可导致肺动脉高压和右心室肥大,其发病机制至今尚不十分清楚。低氧诱导因子-1α(H IF-1α)作为一种转录因子,是一种重要的肺动脉对低氧反应的中介物。本实验采用慢性低氧伴高二氧化碳性肺动脉高压大鼠模型,观察H     

低氧诱导因子-1研究进展

低氧诱导因子 1(HIF 1)是在低氧及模拟低氧条件下细胞产生的一种蛋白转录调控因子 ,由α和 β两种亚基组成 ,HIF 1α的磷酸化和非磷酸化状态作用不同。HIF 1涉及的信号转导通路复杂 ,广泛参与哺乳动物细胞低氧诱导性应答 ,在低氧诱导的基因表达调节中起着关键作用。本文就HIF 1的结构、作用、活性调节及在低氧信号转导中的作用等方面的研究进展作一综述     

HIF-1α和HIF-2α在胃癌中的表达及意义

目的 探讨胃癌中低氧诱导因子HIF-1α和HIF-2α的表达及其临床意义。方法 用免疫组化SP法检测组织中HIF-1α、HIF-2α及VEGF的表达;用Western blot法检测组织中HIF-1α、HIF-2α的表达。结果 胃癌中HIF-1α、HIF-2α和VEGF的阳性表达率分别为61.5%、36.5%和61.5%,均显著高于正常对照组的11.1％、0和0;HIF-1α表达与VEGF及胃癌的淋巴结转移密切相关。胃癌组织中HIF-1α和HIF-2α蛋白的表达显著高于癌旁正常胃黏膜组织。结论 低氧诱导因子的表达可能在胃癌的发生、发展中具有重要作用。     

siRNA沉默HIF-1α对大鼠心肌细胞CT-1表达的影响

目的 研究低氧诱导因子-1α(HIF-1 α)在心肌细胞适应低氧环境中作用机制.方法 合成针对HIF-1α的siRNA片段,转染大鼠心肌细胞系H9C2.Real-time PCR检测HIF-1α和心肌营养素(CT-1) mRNA水平,Westernblot检测HIF-1α和CT-1蛋白水平.结果 低氧环境下,转染针对HIF-1α siRNA片段后HIF-1α mRNA水平、HIF-1 α蛋白质水平、CT-1 mRNA水平和蛋白水平均明显减低(P＜0.05).不进行转染时,CT-1 mRNA水平、HIF-1α蛋白和CT-1蛋白水平在低氧下比常氧下明显增高(P＜0.05).CT-1蛋白由对照组的0.34 ±0.05增至0.55 ±0.05(P＜0.05).结论 低氧情况下CT-1基因的调控作用有可能是通过低氧激活HIF-1α而诱导产生的,HIF-1α在心肌细胞适应低氧环境中具有重要作用.     

HIF-1α介导低氧诱导的内皮细胞Brm表达上调的机制研究

目的:本研究拟探讨低氧诱导因子1α(HIF-1α)在低氧诱导的血管内皮细胞Brm表达上调中的作用及机制,为低氧性肺动脉高压的防治提供理论依据。方法:在内皮细胞中过表达或siRNA干扰HIF-1α的表达,并给予1%低氧处理24 h后,运用萤光素酶报告基因检测方法检测Brm启动子的转录活性,运用RT-qPCR检测Brm的mRNA表达水平,运用Western blot检测Brm的蛋白表达水平。运用ChIP技术检测低氧条件下HIF-1α与Brm启动子区域的结合变化情况。结果:过表达HIF-1α可显著上调Brm的启动子活性、mRNA及蛋白表达,而siRNA干扰HIF-1α可显著抑制Brm的启动子活性、mRNA及蛋白表达,ChIP实验揭示低氧可显著增强HIF-1α与Brm启动子的结合。结论:低氧上调内皮细胞中Brm的表达依赖HIF-1α的转录调控作用。     

pGL3-EPO-HRE报告基因质粒的构建及功能鉴定

目的构建串联低氧反应元件(HRE)报告质粒pGL3-EPO-HRE并进行功能验证。方法按照人促红细胞生成素(EPO)基因3′末端HRE增强子序列,人工设计合成首尾2段3′末端部分互补的单链DNA,然后通过退火及延伸合成两端带有M luⅠ和BglⅡ酶切位点的包含3个串联排布的HRE的双链DNA,克隆到T载体测序正确后,将其插入到pGL3-promoter报告载体。构建好的pGL3-EPO-HRE分别与pcDNA3-H IF-1α和pcDNA3共转染MCF-7细胞,经氯化钴(CoC l2)作用24h后测定报告基因的活性。结果质粒测序及酶切结果正确,瞬时转染实验显示,在常氧条件下,CoC l2及pcDNA3-H IF-1α可以使pGL3-EPO-HRE报告基因的活性增高约10倍(P<0.01),而且两者共同作用可以使报告基因的活性进一步增高约30倍(P<0.01)。结论pGL3-EPO-HRE可以与低氧诱导因子-1(H IF-1)结合并被激活,可以用来鉴定和检测细胞中H IF-1的表达及蛋白活性。     

HIF-2α诱导MSCs向内皮细胞分化的机制

缺氧诱导因子-2(hypoxia-inducible factor-2,HIF-2)是一种转录因子.其主要活性作用部位是HIF-2α亚基,与HIF-1α有高度同源性,但二者在基因调节中有不同的作用,HIF-2α能优先表达某些靶基因如EPO、IGF、VEGFR等,是近年来研究较热门的一种促血管新生因子.骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向内皮细胞分化、促进血管新生及管腔形成在很大程度上取决于HIF-2α的调节作用,此调节过程主要依赖于VEGF/VEGFR信号途径.     

子痫前期胎盘低氧诱导因子1α的表达及其与血清胎盘生长因子的相关性

目的检测正常晚期妊娠和子痫前期患者胎盘低氧诱导因子1α(H IF-1α)和血清胎盘生长因子(P lGF)的水平,探讨它们的相关性及与子痫前期发病的关系。方法免疫组织化学SP法检测40例子痫前期患者及20例正常晚期妊娠胎盘H IF-1α表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清P lGF的水平。结果轻度子痫前期组与重度子痫前期组胎盘H IF-1α表达高于正常晚期妊娠组,两组血清P lGF低于正常晚期妊娠组,差异均有显著性意义(P<0.05)。胎盘H IF-1α的表达与血清P lGF水平呈负相关关系。结论子痫前期患者血清P lGF水平依赖于胎盘H IF-1α表达,两者可能与子痫前期的发病有一定关系。     

HIF-1α/SDF-1信号轴在低氧诱导祖细胞迁移和黏附中的作用

目的: 分析低氧对大鼠肺动脉内皮细胞低氧诱导因子(HIF-1α)及间质细胞衍生因子(SDF-1)表达的影响,探讨二者的相互关系(即是否存在HIF-1α/SDF-1信号轴)及其在低氧诱导祖细胞迁移和黏附中的作用。方法: 免疫磁珠分离纯化SD大鼠外周血CD34/CXCR4阳性祖细胞,免疫荧光、Western blotting及ELISA法检测不同低氧时间HIF-1α和SDF-1在大鼠肺动脉内皮细胞的表达,迁移和黏附实验检测常氧组、低氧组、HIF-1α抑制剂2-甲氧雌二醇(2ME2)组、SDF-1中和抗体组及同时加2ME2和SDF-1中和抗体组祖细胞的迁移指数和黏附率。结果: HIF-1α和SDF-1的表达与低氧时间有关,低氧12 h时二者表达到峰值(均P<0.01),应用2ME2可使SDF-1表达下调(P<0.05),应用2ME2或SDF-1中和抗体后均下调祖细胞的迁移指数和黏附率(P<0.05)。结论: 低氧可诱导肺动脉内皮细胞HIF-1α及受其调控的下游因子SDF-1的表达,提示HIF-1α与SDF-1存在信号调节关系。HIF-1α/SDF-1信号轴在介导祖细胞迁移和黏附至肺动脉内皮细胞的过程中起重要作用。     

缺氧诱导因子-1α在高原低氧脑损伤中的研究进展

缺氧诱导因子-1(HIF-1)是一种调节人体对缺氧反应的关键因子.HIF-1α是HIF-1的活性亚基,为细胞缺氧信号转导通路中的核心因子.缺氧条件下HIF-1α显著增高,调控细胞增殖、凋亡、红细胞及血管生成等重要过程.低压、低氧是高原环境的主要特点,近年来越来越多的平原居民前往高海拔地区工作、旅游,急进高原暴露有发展成...     

HIF-1α的非氧依赖调控通路及其在肿瘤中的作用

<正>低氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)是1992年由Semenza和Wang[1]发现的一种氧依赖转录激活因子,其调控的下游基因涉及血管生成、红细胞生成、能量代谢、细胞凋亡和增殖等多方面,在机体的生理、病理反应中至关重要。后续的研究发现HIF-1α可受氧依赖及非氧     

HIF-1α和VEGF在类风湿关节炎中的作用

类风湿关节炎(RA)是一种常见的自身性免疫疾病,其主要病理特征为滑膜组织大量增生,从而促使炎症因子聚集以及骨侵蚀发生,在此过程中滑膜中血管翳形成扮有重要角色,其中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)能够促使RA的血管翳生成,两者是导致RA患者关节炎症和关节破坏以及滑膜组织肿瘤样增生的主要因素。而HIF-1α能够促使RA患者炎症因子和基质金属蛋白的分泌,VEGF则能够直接促使血管翳形成,最终两者能导致病情进一步发展。HIF-1α,VEGF在RA患者滑膜中高表达,可作为今后治疗RA提供新的靶点。     

转基因小鼠技术与HIF-1α功能的研究

HIF 1α是介导机体低氧反应的主要基因之一 ,在多种细胞、组织低氧反应中有重要作用。已有许多有关HIF 1α结构、功能的分子、细胞水平的研究 ,但在整体动物水平用转基因小鼠技术等研究HIF 1α功能的工作近年来才逐渐开始。简要介绍HIF 1α的结构特点和与HIF 1α有关的转基因、基因敲除小鼠的研究进展     

低氧诱导因子-1与恶性血液病的研究进展

低氧诱导因子-1作为调控生物体内氧平衡重要的转录因子,已引起人们的广泛重视,近年来较多研究开始探讨其与恶性血液病之间的关系。最近研究发现H IF-1通过作用于粒细胞趋化因子C/EBPalpha诱导急性髓系白血病细胞分化,具有重要的临床意义,为急性髓系白血病的治疗提供了新途径。     

低氧诱导因子家族研究进展

低氧能诱导编码促红细胞生成素基因的转录,过程的具体分子机理一直不清.低氧诱导因子家族的克隆及其调控许多目的基因表达的发现,丰富了我们对机体氧感受的分子机理的认识.同时低氧诱导因子家族中各因子的表达差异,及其之间的相互调控,低氧诱导因子在低氧条件下的作用机理,对目的基因的调控及相互之间差异的阐明,对理解许多与组织缺氧有关的重要疾病如心血管疾病、中风、慢性阻塞性肺疾病,特别是肿瘤的病理生理过程有重要意义.     

低氧促进神经干细胞增殖分化过程中低氧诱导因子-1α表达的变化

目的:观察小鼠胎脑皮质神经干细胞(NSCs)在体外低氧条件下细胞增殖与分化以及低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达情况,分析HIF-1α对NSCs增殖与分化的作用。方法:体外低氧条件下(3%O2)培养扩增胚鼠皮质来源的细胞,实验分低氧1、2、3、4d组,常氧组为对照。免疫细胞化学染色法鉴定神经干细胞及其子代细胞,RT-PCR检测实验组细胞HIF-1α mRNA的表达。结果:低氧4d组细胞呈HIF-1α阳性,其余HIF-1α为阴性。实验组神经元特异性烯醇酶(NSE)平均灰度值进行性增加。各实验组HIF-1α mRNA与对照组相比具有显著性差异。结论:在低氧能促进NSCs的增殖与分化过程中,HIF-1α表达变化可能在其中发挥了重要作用。     

乏氧对肺癌细胞系HIF家族成员HIF-1α、HIF-2α和HIF-β表达的影响及其相关性

目的 探讨乏氧对不同类型肺癌细胞乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)、乏氧诱导因子-2α(HIF-2α)和乏氧诱导因子-β(HIF-β)基因表达的影响及其相关性. 方法 以0.5%低氧培养箱模拟细胞低氧环境,采用定最RT-PCR和Western blotting方法 分别检测乏氧处理4～24h人肺癌细胞系SPCA1、A549、H446、SH77、H520和95D中HIF-1α、HIF-2α和HIF-βmRNA和蛋白水平的表达. 结果 1.常氧下不同肺癌细胞系HIF-1α、HIF-2α mRNA表达水平较低,短期乏氧HIF-1α mRNA降低而HIF-2α mRNA增加,随乏氧时间延长两者mRNA表达逐渐增加.2.HIF-1α和HIF-2α蛋白在常氧下表达均较低,乏氧下两者表达增强但变化趋势不一致,HIF-1α蛋白在所有细胞中均有表达,HIF-2α蛋白仅在某些细胞有表达.3.HIF-β mRNA和蛋白在常氧或乏氧下表达无明显变化.4.相关性分析表明,乏氧下HIF-2α mRNA与蛋白表达呈正相关(r=0.989,P=0.011);而HIF-1α和HIF-β mRNA与蛋白无相关性. 结论 肺癌细胞中HIF-1α、HIF-2α和HIF-β对乏氧刺激表现出不同的应答方式且具有细胞特异性,乏氧对HIF-1α和HIF-2α的调控可能分别发牛在翻译和转录水平,而对HIF-β无明显的调控作用.     

缺氧诱导因子1α蛋白质水平及活性调节

缺氧诱导因子 1α不仅对于机体在缺氧条件下维持正常的生理功能具有特别重要的意义 ,还在肿瘤的生长以及神经细胞凋亡等病理过程中起关键作用。缺氧诱导因子 1α能调节许多下游基因的表达水平 ,但人们对其自身的蛋白质水平和转录活性调节机制尚知之不多。最新的研究发现缺氧诱导因子 1α的蛋白质水平和转录活性调节机制涉及多个信号通路 ;在缺氧诱导因子 1α的蛋白质水平和转录活性调节机制中 ,羟基化调节和蛋白磷酸化调节起主导作用