甲亢性低血钾型周期性麻痹家系基因突变的初步研究

目的筛查甲亢性低血钾型周期性麻痹家系的钙离子通道α1亚基和电压门控钠离子通道α亚基基因是否存在突变。方法总结甲亢性低血钾型周期性家系Ⅵ代患者的临床特点,并应用酶联免疫测定和测序技术筛查编码钙离子通道α1亚基的528位及1239位精氨酸和钠离子通道α亚基669位及672位精氨酸基因的突变点。结果钠离子通道α亚基基因2012位碱基序列发生错义突变（T→C）,671位苯丙氨酸变为丝氨酸,而其他3个已知突变点的碱基序列完全正常。结论华人甲亢性低血钾型周期性麻痹家系患者中存在突变,致使钠离子通道α亚基基因671位苯丙氨酸为丝氨酸替代,该位点国内外未见报道,是一个新的突变位点。     

家庭性低血钾型周期性麻痹CACNL1A3基因新的突变点528精氨酸被甘氨酸替代

目的筛查低血钾性周期性麻痹家系的骨骼肌二氢吡啶受体敏感的钙离子通道α1亚基和骨骼肌电压门控钠离子通道α亚基基因突变.方法总结低血钾型周期性麻痹家系Ⅵ代27例患者的临床特点,并应用聚合酶链反应和高液相变性技术筛查编码钙离子通道α1亚基的528位及1239位精氨酸和钠离子通道α亚基669位及672位精氨酸基因的突变点.结果钙离子通道α1亚基编码528位精氨酸的1582位碱基序列发生错义突变(C→G),编码的精氨酸变为甘氨酸,528位精氨酸被甘氨酸替代,而其他3个已知突变点的碱基序列完全正常.结论国人钙离子通道α1亚基存在528位精氨酸被甘氨酸替代突变,与国外报道的钙离子通道α1亚基528位精氨酸被组氨酸、1239精氨酸被组氨酸、1239精氨酸被甘氨酸和钠离子通道α亚基基因的669精氨酸被组氨酸替代,或672位的精氨酸被组氨酸、甘氨酸、色氨酸、半胱氨酸替代的突变不同,是一个新的突变类型.     

家庭性低血钾型周期性麻痹CACNLIA3基因新的突变点528精氨酸被甘氨酸替代

目的 筛查低血钾性周期性麻痹家系的骨骼肌二氢吡啶受体敏感的钙离子通道α1亚基和骨骼肌电压门控钠离子通道α亚基基因突变。方法 总结低血钾型周期性麻痹家系Ⅵ代27例患者的临床特点，并应用聚合酶链反应和高液相变性技术筛查编码钙离子通道α1亚基的528位及1239位精氨酸和钠离子通道α亚基669位及672位精氨酸基因的突变点。结果 钙离子通道α1亚基编码528位精氨酸的1582位碱基序列发生错义突变(C→G)，编码的精氨酸变为甘氨酸，528位精氨酸被甘氨酸替代，而其他3个已知突变点的碱基序列完全正常。结论 国人钙离子通道α1亚基存在528位精氨酸被甘氨酸替代突变，与国外报道的钙离子通道α1亚基528位精氨酸被组氨酸、1239精氨酸被组氨酸、1239精氨酸被甘氨酸和钠离子通道α亚基基因的669精氨酸被组氨酸替代，或672位的精氨酸被组氨酸、甘氨酸、色氨酸、半胱氨酸替代的突变不同，是一个新的突变类型。     

不同亚基组成的N型钙离子通道电学特性研究

目的:建立不同辅助亚基与功能亚基重组体瞬时表达的N型钙离子通道细胞模型,观察不同亚基组成的N型钙离子通道的电学特征,揭示不同辅助亚基对功能亚基的调节作用.方法:将N型钙离子通道亚基α1B/α2δ/β1b的cDNA分别体外转录为cRNA后,注射至去除滤泡膜的非洲爪蟾卵母细胞中,表达48 h后使用双电极电压钳技术记录其电流.结果:向注射N型钙通道cRNA的细胞以一系列去极化刺激可诱发90%的细胞记录到内向电流.其电流可被N型钙离子通道特异性拮抗剂ω-CTX MVⅡA (1 μmol/L)完全阻断.α1B单独表达时可形成功能性N型钙离子通道,通过记录到电流后而得出电流-电压曲线(I-V曲线),可知产生电流峰值的膜电压约为20 mV(21.17±1.44)mV(n=7);α1B/β1b共表达时I-V曲线方向为超极化,电流达到峰值的电压为(12.35±0.88) mV(n=7,P＜0.01);功能亚基与α2δ亚基共表达时,I-V曲线稍向正电位方向,电流达到峰值的电压为(23.25±1.25) mV(n=7,P＜0.01);在α1B/α2δ/β1b共表达时,尽管有α2δ亚基存在时,β1b亚基仍显著地使I-V曲线向超级化方向(17.08±1.86) mV(n=7).本实验也观察了不同重组体电流的稳态失活电压,其中α1B表达电流的半数失活电压为-12.0 mV,α1B/α2δ表达电流的半数失活电压为-13.5 mV,α1B/β1b表达电流的半数失活电压为-51.4 mV,而α1B/α2δ/β1b共表达时电流半数失活电压为-54.9 mV.结论:成功地建立不同亚基组成的N型钙离子通道在爪蟾卵母细胞的功能性表达,不同的辅助亚基与功能亚基组合体现了通道不同的动力学特性,表明N型钙通道在体内可能具有功能的多样性.这些结果为今后深入研究N型钙通道奠定了基础.     

吸烟对外周血单个核细胞表达烟碱乙酰胆碱受体的影响

目的研究健康男性外周血单个核细胞（PBMCs）烟碱型乙酰胆碱受体（nAchR）亚型的表达情况及吸烟对其表达量的影响。方法抽取92例健康男性吸烟者和36例不吸烟者的外周静脉血,通过半定量RT-PCR对其nAchR11种亚基（α2～α7、α9、α10、β2～β4）mRNA在PBMCs的中表达情况进行分析。结果11种nAchR亚基只有α2、α5、α6、α7四种亚基mRNA在吸烟者和不吸烟者PBMCs中有表达,吸烟者α5、α7亚基mRNA的表达量比不吸烟者低（均P〈0.01）,而两者α2亚基mRNA的表达无显著性差异（P〉0．05）。结论烟碱与外周血免疫细胞上nAchR的相互作用可能是吸烟导致机体免疫系统功能改变的因素之一。     

羊抑制素的研究进展

抑制素是二聚体糖蛋白激素,由α-亚基和β-亚基通过二硫键联接而成。通过连接α亚基和β亚基的二硫键发挥抑制FSH分泌的功能。由于抑制素具有免疫原性,外源卵泡抑制素通过免疫调节可以降低动物机体内卵泡抑制素的生物活性,导致机体循环中FSH浓度升高,促进卵泡发育,使排卵率和产仔数增加。因此利用抑制素免疫可提前动物的发情,提高动物的排卵率和精子的产量,从而提高动物的繁殖力。     

IL-8通过整合素调控肝癌HepG2细胞迁移

目的：研究IL-8对肝癌细胞HepG2增殖、迁移的影响,探讨整合素α亚基在调控HepG2细胞迁移中的作用。方法以不同浓度（0～125 ng／ml）的IL-8刺激HepG2细胞,分别采用MTT法检测IL-8对肝癌细胞的增殖作用;细胞划痕损伤模型测定不同处理组在0、4、8、12和24 h各时间点对HepG2细胞水平迁移的影响;Transwell法检测刺激24 h后HepG2细胞纵向迁移能力;免疫荧光检测0、125 ng／ml IL-8刺激HepG2细胞8 h后细胞骨架的变化;Western印迹测定整合素α亚基的表达变化规律。结果与对照组相比,IL-8促进HepG2细胞增殖,但各浓度间无明显差异;细胞划痕损伤实验和Transwell实验均表明IL-8可促进HepG2细胞迁移,且具有浓度依赖性; IL-8诱导HepG2细胞骨架重排,使丝状伪足样凸起数目增多;Western印迹结果显示,IL-8上调整合素α亚基的表达,但各亚基具有浓度性差异。结论 IL-8可通过上调整合素α亚基的表达促进HepG2细胞迁移,各α亚基调控作用可能具有差异性。     

cAMP依赖的蛋白激酶PKA RIα亚基在胃癌细胞中的表达及8-溴-环核苷酸对其表达及细胞增殖的影响

目的观察经位点选择性8-溴-环核苷酸(8-Br-cAMP)诱导前后,两株胃癌细胞SGC7901和MGC803PKARIα亚基mRNA的表达状况及癌细胞增殖动力学的变化.方法应用分子杂交技术测定8-Br-cAMP诱导前后两株胃癌细胞PKARIα亚基不同的表达状态;用MTT法和流式细胞仪FCM观察8-Br-cAMP诱导前后,细胞增殖动力学的变化.结果两株胃癌细胞均有PKARIα亚基的高表达状态,而且经8-Br-cAMP诱导后,PKARIα的表达水平明显减弱;此外,8-Br-cAMP对两株胃癌细胞系SGC7901和MGC803细胞有明显的抗增殖作用,其IC50值分别为40μmol/L和15μmol/L;流式细胞仪分析结果显示,经8-Br-cAMP诱导后,在正常的细胞倍体峰前出现一群凋亡的细胞峰型,可能和诱导后肿瘤细胞发生凋亡有关.结论胃癌细胞株存在PKARIα亚基的过表达状态,通过8-Br-cAMP作用,可抑制RIα亚基的过表达并可抑制癌细胞的恶性增殖.     

cAMP依赖的蛋白激酶PKA RIα亚基在胃癌细胞中的表达及8-溴-环核苷酸对其表达及细胞增殖的影响

目的　观察经位点选择性 8-溴 -环核苷酸 (8- Br- c AMP)诱导前后 ,两株胃癌细胞 SGC790 1 和 MGC80 3 PKA RIα亚基m RNA的表达状况及癌细胞增殖动力学的变化。　方法　应用分子杂交技术测定 8- Br- c AMP诱导前后两株胃癌细胞 PKARIα亚基不同的表达状态 ;用 MTT法和流式细胞仪 FCM观察 8- Br- c AMP诱导前后 ,细胞增殖动力学的变化。　结果　两株胃癌细胞均有 PKA RIα亚基的高表达状态 ,而且经 8- Br- c AMP诱导后 ,PKA RIα的表达水平明显减弱 ;此外 ,8- Br- c AMP对两株胃癌细胞系 SGC790 1 和 MGC80 3 细胞有明显的抗增殖作用 ,其 IC50 值分别为 40μmol/ L和 15μmol/ L ;流式细胞仪分析结果显示 ,经 8- Br- c AMP诱导后 ,在正常的细胞倍体峰前出现一群凋亡的细胞峰型 ,可能和诱导后肿瘤细胞发生凋亡有关。　结论　胃癌细胞株存在 PKA RIα亚基的过表达状态 ,通过 8- Br- c AMP作用 ,可抑制 RIα亚基的过表达并可抑制癌细胞的恶性增殖。     

人绒毛膜促性腺激素生物活性测定方法的比较研究

人绒毛膜促性腺激素生物活性测定方法的比较研究邓瑞春史燕燕＊焦有烈军事医学科学院毒物药物研究所北京１００８５０人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）是一种糖蛋白，它由两个亚基组成，即α和β亚基。其相对分子质量分别为１４５００和２２２００。一般怀孕妇女受孕１０～...     

神经元烟碱受体研究进展

神经元烟碱受体 (nAChR)是由乙酰胆碱控制开放的阳离子通道。该受体由多种亚基组成 ,结构复杂 ,因而具有不同的药理学和生物物理学性质。本文根据有关nAChR的文献 ,从不同方面综述其研究进展     

ATP敏感性钾通道的分子生物学与药理学研究进展

综述ATP敏感性钾通道（ATP－sensitive potassium channel,KATP）的结构功能相关性和调控机制、KATP与家族性高胰岛素血症的相关性及其在脑缺血中的调节作用。KATP是由调节亚基磺酰脲类受体（sulfonylureas,SUR)和通道形成亚基内向整流钾通道（inwardly rectified potassium channel,Kir)按1：1比例组成的异源性八聚体（SUR／Kir6.X)4。细胞内〔ATP〕i和〔ADP〕i变化调节KATP活性,KATP将心肌、血管平滑肌、骨骼肌、神经元和内分泌细胞的代谢和电活动偶联起来,并在这些组织发挥重要的生理学和病理学调节作用。Kir6.X亚基决定K^ 选择性内向整流作用和单位导电系数,但核苷敏感性和药理学特性取决于SUR。SUR和Kir6.X的多种业型导致了KATP亚型的多样性和功能调节的复杂性。SUR1或Kir6.2突变使胰腺β细胞KATP丧失,导致家族高胰岛素血症,KATP的开放可能是脑缺血缺氧的重要自身保护机制。     

一种不配对粘末端连接的新策略

整合素是粘附分子的一个家族 ,是由α和 β亚基通过非共价键连接而形成的一类异二聚体 ,目前已发现 2 0多种[1] 。α4 β7就是其中一种 ,它的主要功能是通过与配体粘膜地址素细胞粘附分子 1(ｍｕｃｏｓ ａｌａｄｄｒｅｓｓｉｎｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ 1,ＭＡｄＣＡＭ 1)的相互作用而介导淋巴细胞在粘膜部位的归巢和定居 ,并参与该部位的免疫应答。抗 β7的单抗 (ｍＡｂ)可有效阻断α4 β7介导的多种功能 ,已成功用于多种研究。我们将编码 β7亚基主要抗原表位的 1.8ｋｂｃＤＮＡ片段[2 ] ,亚克隆入原核融合表达载体ｐＧ…     

旋转刺激对大鼠内耳α-ENaC蛋白表达的影响

目的探讨旋转刺激对上皮钠通道α亚基(α-ENaC)蛋白在大鼠内耳不同部位表达分布的影响。方法以12只SD大鼠为实验对象, 按照实验设计分为对照组和实验组, 每组6只。对照组不作任何处理;实验组旋转刺激后采用免疫组化染色观察α-ENaC蛋白在其内耳不同部位的表达变化。结果旋转刺激后, 实验组α-ENaC蛋白在大鼠耳蜗血管纹、螺旋神经节神经元胞体、周围卫星细胞的表达较对照组有所增加, 在前庭部位的椭圆囊斑上皮和基质细胞及前庭神经节的神经元胞体中的表达也有所增加, 在半规管壶腹嵴上皮和基质细胞中的分布有所减少, 而在耳蜗螺旋韧带和赖斯纳氏膜、前庭部位的球囊斑上皮和基质细胞以及半规管上皮细胞中的分布基本不变。结论α-ENaC蛋白在大鼠内耳中广泛表达, 且旋转刺激后在不同部位的表达变化存在差异;ENaC可能通过对内耳内淋巴平衡和前庭觉的调控参与运动病的发生。     

力竭运动对大鼠窦房结ATP-敏感型钾离子通道的影响

目的:探讨两周力竭运动对大鼠窦房结ATP-敏感型钾离子通道(KATP通道)亚基Kir6.2mRNA表达及通道电流密度的影响。方法:健康雄性SD大鼠180只,8周龄,体重(220±8)g,共分9组,每组20只,包括安静对照组(C组)1组、一次力竭组(O组)4组、反复力竭组(R组)4组。安静对照组不进行任何运动。反复力竭组大鼠尾部负重3%体重,每天进行1次力竭游泳,每次约2小时,每周6天,共运动2周。一次力竭组大鼠在正常喂养2周后进行一次力竭游泳运动,运动方案同反复力竭组。运动组大鼠分别于运动后即刻、4小时、12小时、24小时不同时相取材,一次力竭运动各组大鼠分别以O-0h、O-4h、O-12h、O-24h命名,反复力竭运动各组大鼠分别以R-0h、R-4h、R-12h、R-24h命名,应用实时荧光定量PCR技术测定KATP通道亚基Kir6.2 mRNA表达变化,应用细胞急性分离及全细胞膜片钳技术测定通道电流密度变化,以观察力竭游泳运动对大鼠窦房结细胞膜上KATP通道的影响。结果:反复力竭运动各组Kir6.2 mRNA表达显著高于对照组(P<0.01)。反复力竭各时相组KATP通道IK,ATP电流密度显著高于对照组及一次力竭组(P<0.01)。结论:反复力竭运动可引起窦房结细胞膜KATP通道亚基Kir6.2 mRNA表达及IK,ATP电流密度增加,这可能引起窦房结细胞舒张期自动除极及自律活动减慢,提示反复力竭运动对于KATP通道的影响可能成为运动引发窦房结功能障碍及运动性心律失常的离子通道机制之一。     

海马神经元损伤后PTEN表达水平与AMPA受体亚基表达定位变化的研究

目的 探讨海马神经元损伤过程中第10染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)表达水平的变化与谷氨酸(Glu)的α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体亚基表达定位变化的关系.方法 选用新生SD大鼠原代培养海马神经元,建立神经元牵张损伤模型,采用Western blot和TUNEL染色检测神经元损伤各时相点PTEN表达的变化以及AMPA受体各亚基在细胞中的表达定位变化.结果 神经元牵张损伤后,PTEN的表达增加,细胞总蛋白中AMPA受体GluR1、GluR2、GluR3亚基的表达水平损伤前后差异无统计学意义,但细胞膜中的AMPA受体GluR2亚基在牵张损伤后明显降低.结论 海马神经元受到机械性牵张损伤后,细胞内PTEN水平与膜表面GluR2亚基表达变化相反.提示PTEN磷酸酶可能参与了AMPA受体中GluR2亚基的转运和再聚合过程.     

海马神经元损伤后PTEN表达水平与AMPA受体亚基表达定位变化的研究

目的 探讨海马神经元损伤过程中第10染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)表达水平的变化与谷氨酸(Glu)的α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体亚基表达定位变化的关系.方法 选用新生SD大鼠原代培养海马神经元,建立神经元牵张损伤模型,采用Western blot和TUNEL染色检测神经元损伤各时相点PTEN表达的变化以及AMPA受体各亚基在细胞中的表达定位变化.结果 神经元牵张损伤后,PTEN的表达增加,细胞总蛋白中AMPA受体GluR1、GluR2、GluR3亚基的表达水平损伤前后差异无统计学意义,但细胞膜中的AMPA受体GluR2亚基在牵张损伤后明显降低.结论 海马神经元受到机械性牵张损伤后,细胞内PTEN水平与膜表面GluR2亚基表达变化相反.提示PTEN磷酸酶可能参与了AMPA受体中GluR2亚基的转运和再聚合过程.     

海马神经元损伤后PTEN表达水平与AMPA受体亚基表达定位变化的研究

目的 探讨海马神经元损伤过程中第10染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)表达水平的变化与谷氨酸(Glu)的α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体亚基表达定位变化的关系.方法 选用新生SD大鼠原代培养海马神经元,建立神经元牵张损伤模型,采用Western blot和TUNEL染色检测神经元损伤各时相点PTEN表达的变化以及AMPA受体各亚基在细胞中的表达定位变化.结果 神经元牵张损伤后,PTEN的表达增加,细胞总蛋白中AMPA受体GluR1、GluR2、GluR3亚基的表达水平损伤前后差异无统计学意义,但细胞膜中的AMPA受体GluR2亚基在牵张损伤后明显降低.结论 海马神经元受到机械性牵张损伤后,细胞内PTEN水平与膜表面GluR2亚基表达变化相反.提示PTEN磷酸酶可能参与了AMPA受体中GluR2亚基的转运和再聚合过程.     

α-芋螺毒素Lt1.1的克隆、合成及靶点鉴定

目的 发现作用于神经元烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)的拮抗剂,为研制新型镇痛药和神经生物学工具奠定基础.方法 根据芋螺毒素A超家族DNA中保守的内含子及3′端非转录区(3′UTR)设计引物,从中国南海信号芋螺(Conus litteratus)中克隆获得新芋螺毒素Lt1.1序列.固相法合成Rink树脂肽,经裂解、空气氧化折叠、纯化后获得目的肽,利用两步氧化折叠法鉴定其二硫键连接方式.将神经元nAChR各亚基的cRNA在爪蟾卵母细胞中表达,利用双电极电压钳检测通道电流.结果 获得一种新α-芋螺毒素Lt1.1序列(GCCSHPACNVNNPDIC-NH2),其二硫键连接方式为"C1-C3、C2-C4",作用靶点为nAChR α3β2和α3β4亚型,IC50 分别为166.76和190.00 nmol/L.结论 Lt1.1是一种典型的4/7型α-芋螺毒素,其选择性抑制了nAChR α3β2和α3β4亚型.     

肌质网钙漏可诱发肌纤维降解（摘要）

目的本文以肌钙蛋白抑制亚基（troponin I subunit,TnI）作为肌节蛋白降解的分子标记,探讨舒张期肌纤维内Ca2＋浓度升高与肌原纤维降解的关系。方法采用在收缩期增加肌质（sarcoplasmicreticulum,SR）钙离子释放通道开放机率的caffeine,