再生障碍性贫血患者T淋巴细胞亚群的变化

本文应用T淋巴细胞单克隆抗体和间接免疫荧光技术检测了28例再生障碍性贫血患者和20名正常人外周血中T淋巴细胞及其亚群的变化。结果发现再障患者OKT3、OKT。正常，OKT8明显高于正常，OKT4／OKT8比值明显降低，其中5例(18%)再障患者OKT4/OKT8≤l。以上结果提示再障患者抑制性T细胞增高。这种免疫平衡失调而导致的造血抑制可能与再障发病密切相关。     

再生障碍性贫血外周血T淋巴细胞亚群分析

<正> 再生障碍性贫血(AA)是一组由不同发病机制介导的骨髓造血功能障碍综合征。近年发现约50％AA患者外周血CD_4/CD_8比值减低甚或倒置,不少体外研究表明激化的CD_8细胞抑制造血。AA发病与免疫异常联系密切。特别是重症再障,文献报告中40～50％是由免疫     

再生障碍性贫血T淋巴细胞功能异常

采用白细胞介素-2依赖细胞株MTT代谢法,甲基纤维素半固体培养法和间接免疫荧光法,测定并观察15例再生障碍性贫血(简称再障)患者外周血单个核细胞的白细胞介素-2(IL_2),T淋巴细胞集落(CFU-TL)和CD_3~+、CD_4~+、CD_8~+和CD_(2 5)~+引细胞。研究发现:患者外周血中CD_8~+和CD_(2 5)~+细胞增加、IL_2产生增加、CFU-TL数减少。患者CD_(2 5)~+细胞与自身的CFU-TL数呈负相关。提示患者T淋巴细胞功能异常,激活淋巴细胞的增加可能是体外CFU-TL生成低下和体内淋巴细胞减少的原因之一。     

抗T淋巴细胞单克隆抗体治疗苯中毒致再生障碍性贫血

为探讨免疫调节疗法对苯中毒所致再生障碍性贫血（ＡＡ）的疗效,采用抗人Ｔ淋巴细胞单克隆抗体（ＭｃＡｂＴ）ＳＭＵ３（抗ＣＤ３）和ＳＭＵ８（抗ＣＤ８）治疗８例苯中毒所致ＡＡ,基本治愈４例,缓解１例,明显进步３例。治疗前ＣＤ＋４／ＣＤ＋８比例倒置,淋巴细胞表面ＨＬＡＤＲ抗原表达增高;治疗后ＣＤ＋４／ＣＤ＋８比例及ＨＬＡＤＲ抗原表达恢复正常。无血清病及血细胞减少等严重毒副作用。证明苯中毒所致ＡＡ存在细胞免疫功能紊乱,ＭｃＡｂＴ免疫调节治疗具有显著疗效     

再生障碍性贫血患者T淋巴细胞亚群与红细胞免疫功能研究

再生障碍性贫血患者Ｔ淋巴细胞亚群与红细胞免疫功能研究王欣１张明珙１宋素芹１时庆２彭军１李杰１（山东医科大学附属医院１血液病研究室２低温医学研究室１材料与方法１．１研究对象再生障碍性贫血（ＡＡ）组２４例，男１５例，女９例，年龄１８～５２岁。根据１９８７...     

再生障碍性贫血患者T淋巴细胞亚群与免疫球蛋白的变化及其临床意义

目的　探讨再生障碍性贫血 (再障 )患者T淋巴细胞亚群与免疫球蛋白的变化及其临床意义。方法　对 2 2例再障患者 (再障组 )进行外周血T淋巴细胞亚群及其血清免疫球蛋白检测 ,并与 18例门诊健康体检者 (对照组 )进行比较。结果　再障组CD+ 4 、CD+ 4 /CD+ 8、IgG、IgA、IgM水平比对照组明显降低 (P均 <0 .0 1) ,但CD+ 8明显升高 (P <0 .0 1) ;大部分患者CD+ 3 正常。再障组治疗后 15例有效 ,其IgG、IgA、IgM、CD+ 4 、CD+ 4 /CD+ 8比值升高至正常或接近正常 ,CD+ 8明显降低至正常或接近正常 ,与治疗前相比差异有显著性 (P <0 .0 1或 0 .0 5 )。结论　再障患者发病与免疫功能异常密切相关 ,不仅存在细胞免疫功能的异常 ,也存在着体液免疫功能的异常。用免疫抑制剂治疗有效者 ,T淋巴细胞亚群、免疫球蛋白水平可恢复正常或接近正常     

再生障碍性贫血患者外周血淋巴细胞亚群和调节性T细胞的检测及临床意义

目的 研究再生障碍性贫血(AA)患者外周血淋巴细胞亚群和调节性T细胞水平的变化及临床意义.方法 采用流式细胞仪对40例AA患者(AA组)及40例正常人(正常对照组)外周血淋巴细胞亚群及调节性T细胞水平进行检测.结果 与正常对照组相比,AA组CD4+T淋巴细胞百分比、CD4+/CD8+比值及CD16+/56+自然杀伤(NK)细胞百分比明显降低(P＜0.05),CD8+T淋巴细胞百分比明显升高(P＜0.01),CD3+T淋巴细胞与CD19+B细胞百分比与正常对照组比较,无统计学差异(P＞0.05).AA患者外周血中CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25high调节性T细胞比例均明显低于正常对照组(P＜0.01).结论 AA患者细胞免疫功能明显异常,调节性T细胞减少可能与AA免疫发病机制有关.淋巴细胞亚群及调节性T细胞水平检测在评价AA疗效及判断预后方面具有一定的临床价值.     

再生障碍性贫血患者血清抑制CFU-MK的增殖及调控

目的:探讨再生障碍性贫血(再障)患者血小板减少的原因,建立模型并寻找治疗对策。方法:应用甲基纤维素半固体体外培养法建立CFU-MK培养体系;混合再障血清进行培养建立再障患者血小板减少的模型;使用不同的造血细胞生长因子进行组合观察模型中CFU-MK集落生成情况和集落中巨核祖细胞的含量。结果:经过14d的培养,模型组CFU-MK集落、集簇数量明显低于正常对照组,以TPO/IL-3/IL-11/FL细胞因子组合使模型组CFU-MK的数量恢复及巨核细胞的扩增效果最好。结论:本实验建立了CFU-MK体外培养体系及再障血小板减少的模型,体外试验表明治疗再障血小板减少以TPO/IL-3/IL-11/FL为最佳组合。     

环孢菌素A合用雄激素治疗再生障碍性贫血

目的探讨环孢菌素A(CsA)治疗再生障碍性贫血(再障)的疗效.方法用CsA或合用雄激素治疗56例再障患者,比较观察疗效.结果总有效率达78.6%,其中慢性再障(CAA)86.7%、重型再障Ⅰ型(SAA-Ⅰ)70%、重型再障Ⅱ型(SAA-Ⅱ)71.43%、纯红再障(PRCA)100%.治疗3个月后CD4+/CD8+比值增加(t=3.9778,P=0.0002).不良反应均为一过性,减量或停药后缓解.CAA和SAA-Ⅰ亚型合用康力龙者缓解率较高;再障亚型、CsA小剂量或大剂量及合用安雄对缓解率无影响(P＞0.05).诊断时血小板＜20×109/L者缓解率高(RR=10.9,P=0.017);CD4+/CD8+比值小于1者缓解率高(RR=5.6,P=0.043);HB和粒缺与缓解率无关(P＞0.05).用生存率分析法得知达到中位进步时间为3个月,中位缓解时间为12个月.结论CsA治疗再障安全、有效;对CAA和SAA-Ⅰ亚型CsA合用康力龙缓解率高;中位缓解时间为12个月.     

再生障碍性贫血患者共刺激信号系统的变化及意义

目的：探讨共刺激信号系统在再生障碍性贫血(AA)发病机制中的作用。方珐：应用流式细胞术检测22例重型再障(SAA)患者和12轻型再障(CAA)患者外周血T细胞共刺激信号分子CD28和B细胞CD28配体CD80和CD86的表达。同时体外培养SAA单个核细胞12h，检测培养前后T细胞表面CD28表达的变化。结果：SAA患者外周血CD4^ ／CD28^ 、CD8^ /CD28^-T细胞与正常对照比较明显升高。免疫抑制荆治疗有效者，CD8^ ／CD28^-T细胞表达降低；CAA患者外周血CD4^ ／CD28^-、CD8^ ／CD28-T细胞较正常对照升高；CAA较SAA患者CD8VCD28^-细胞明显升高。AA患者外周血B细胞共刺激信号配体CD80、CD86无明显变化。体外培养12h后CD8 ／CD28^-T细胞较培养前明显升高。结论：T细胞共刺激信号分子CD28的变化，导致某些T细胞亚群表达增加，与AA发病有关。     

再生障碍性贫血患者外周血T细胞亚群及Th1/Th2细胞分析

目的通过分析再生障碍性贫血(再障)患者外周血T细胞亚群及Th1和Th2细胞,进一步探讨再障的免疫发病机制。方法①流式细胞术检测再障患者外周血T细胞亚群和T细胞HLADR抗原的表达;②用流式细胞术检测经体外刺激后再障患者外周血单个核细胞(PBMNC)中Th1、Th2细胞。结果①再障患者CD3 CD4 细胞、CD3 CD8 细胞、CD8 HLADR 细胞百分率及CD4 /CD8 比值分别为(35.05±9.47)%,(36.29±6.81)%,(18.36±2.07)%,1.0±0.33;对照组为(52.84±4.03)%,(24.69±3.90)%,(11.13±1.14)%,2.14±0.24;再障患者CD3 CD4 细胞和CD4 /CD8 比值显著低于对照组(P<0.01);CD3 CD8 细胞、CD8 HLADR 细胞显著高于对照组(P<0.01);而CD3 细胞与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。②再障患者外周血中Th1细胞百分率和Th1/Th2比值分别为(20.62±2.98)%和14.63±4.81,均显著高于对照组(11.13±1.48)%和9.33±2.82(P<0.01);而Th2细胞百分率与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。③Th1细胞与CD3 CD8 细胞呈正相关(r为0.678,P<0.01),与网织红细胞相对值、中性粒细胞绝对值(ANC)呈负相关(r分别为-0.590和-0.503,P值均<0.05)。结论再障患者的T淋巴细胞亚群失衡,Th1细胞增多可能是导致再障造血衰竭的重要环节。     

骨髓增生异常综合征和再生障碍性贫血患者骨髓原始细胞免疫表型分析

目的检测骨髓增生异常综合征（MDS）和再生障碍性贫血（AA）患者骨髓原始细胞免疫表型特征,探讨其对二者发病机制、诊断、分型诊断及鉴别诊断的临床意义。方法选用多种单克隆抗体,应用直接免疫荧光法、流式细胞术和CD45/SSC设门,对MDS组23例、AA组14例、正常对照组9例的骨髓原始细胞各免疫标志的表达率进行检测。结果MDS组与正常对照组相比其造血干/祖细胞抗原CD34、HLA DR、髓系早期抗原CD13、CD33、单核系抗原CD14、T淋巴细胞抗原CD7的表达率增高,髓系成熟抗原CD15、B淋巴系抗原CD19、CD20的表达率降低,DI值增高（P＜0.05）;RAEB组与RA组相比CD34、HLA DR、CD13、CD33、CD14、CD7的表达率增高,CD15、CD3、CD19、CD20的表达率减低,DI值增高（P＜0.05）。AA组与正常对照组相比其CD34、CD13、CD33、CD15的表达率降低,CD3、CD7、CD25、CD22的表达率增高（P＜0.05）。MDS组与AA组相比其CD34、HLA DR、CD13、CD33、CD14的表达率增高,CD3、CD5、CD7、CD15、CD19、CD20、CD22、CD25的表达率显著降低（P＜0.05）。结论MDS和AA患者骨髓细胞免疫表型分析,有助于揭示二者的发病机制,为临床提供新的诊断、分型及鉴别诊断方法。     

苯中毒性再生障碍性贫血患者免疫细胞及免疫相关因子的检测

目的通过苯中毒性再生障碍性贫血患者免疫细胞及免疫相关因子的检测,探讨其发病机制。方法用ELISA方法对100例苯中毒性再生障碍性贫血患者血清中肿瘤坏死因子(TNF)、可溶性白介素(sIL-2、sIL-3)、白介素2受体(sIL-2R)含量进行检测,用流式细胞仪对患者外周血T细胞进行分群。结果苯中毒性再生障碍性贫血患者血清中TNF、sIL-2含量增高,sIL-3、sIL-2R含量降低;T细胞亚群比例异常。结论苯中毒性再生障碍性贫血患者存在免疫功能异常。     

再生障碍性贫血患者T细胞亚群及HLA-DR抗原表达的意义

目的 :检测再生障碍性贫血患者外周血T淋巴细胞亚群CD4 + 、CD8+ 及HLA DRT抗原的表达 ,探讨再生障碍性贫血发病的免疫机制 ,为再障的临床诊断和治疗提供理论依据。方法 :采用免疫组化斑点印迹技术进行检测 ,并用薄层扫描仪对所有班点印迹信号进行扫描。结果 :再障患者CD4 + 降低 ,CD8+ 升高 ,CD4 + /CD8+ 比值倒置 ,HLA DR表达增高。结论 :T淋巴细胞亚群比例失衡及HLA DR表达升高可能参与再障的发病过程     

重型再生障碍性贫血患者外周血自然杀伤细胞亚群百分比及功能变化

目的 分析重型再生障碍性贫血(SAA)患者免疫抑制治疗(IST)前、后外周血自然杀伤(NK)细胞亚群占淋巴细胞百分比、功能变化及其与造血功能相关性,探讨NK细胞在SAA发病机制中的作用.方法 用流式细胞术检测2010年4月至2010年12月天津医科大学总医院收治的12例初治(初治组)、30例IST后恢复(恢复组)的SAA患者的外周血NK细胞(CD3-CD56+/CD16+)及其亚群[CD3-CD56brightCD16-(CD56bright)、CD3-CD56dimCD16+(CD56dim)、CD3-CD56-CD16+]占淋巴细胞百分比、活化性受体(NKG2D和NKp46)、穿孔素、颗粒酶β表达,并与13名健康对照(对照组)比较;分析上述变化与外周血中性粒细胞比例(ANC%)、淋巴细胞比例、网织红细胞计数及骨髓造血功能(增生程度、粒系百分比、红系百分比、巨核细胞数量、淋系百分比)的相关性.结果 (1)初治组NK细胞、CD56bright细胞百分比(10.30%±6.08%、0.11%)均显著低于恢复组(16.47%±8.29%、0.68%,P＜0.05)和对照组(19.45%±6.88%、0.53%,均P＜0.05);初治组CD56dim细胞百分比(9.62%±6.04%)明显低于对照组(18.21%±7.16%,P＜0.05);恢复组CD3-CD56-CD16+细胞百分比(0.79%)显著高于初治组及对照组(0.37%、0.41%,均P＜0.05).(2)初治组与恢复组NK细胞NKp46、穿孔素表达[初治组(88.23%、64.97%±21.61%),恢复组(82.97%、66.14%±20.73%)]显著高于对照组(40.99%、42.11%±27.25%,均P＜0.05).(3)NK、CD56bright及CD3-CD56-CD16+细胞的百分比与SAA患者ANC%呈正相关(r分别为0.423、0.609、0.468,均P＜0.05),与骨髓粒系百分比呈正相关(r分别为0.357、0.517、0.434,均P＜0.05);NK、CD56bright、CD56dim和CD3-CD56-CD16+细胞的百分比与SAA患者骨髓增生程度呈正相关(r分别为0.455、0.412、0.404、0.451,均P＜0.05),与骨髓淋系百分比呈负相关(r分别为-0.522、-0.435、-0.411、-0.547,均P＜0.05);NK细胞NKG2D、NKp46、穿孔素、颗粒酶β表达与各造血指标无相关性(均P＞0.05).结论 SAA患者外周血NK细胞、CD56bright、CD56dim亚群占淋巴细胞百分比降低及穿孔素途径增强可能引起免疫耐受被破坏、T细胞功能亢进而导致造血功能衰竭.

Abstract：

Objective To analyze the percentage and functional changes of natural killer(NK)cell subsets in peripheral blood of severe aplastic anemia(SAA)patients before and after immunosuppressive therapy(IST)so as to evaluate the relationships between these changes and hematopoietic functions and explore the role of NK cells in the pathogenesis of SAA.Methods By flow cytometry,the percentages of NK cells(CD3-CD56+/CD16+)and its subsets[CD3-CD56brightCD16-(CD56bright),CD3-CD56dimCD16+(CD56dim),CD3-CD56-CD16+]in peripheral blood lymphocytes were detected in 12 untreated patients,30 recovered patients and 13 normal controls respectively from April 2010 to December 2010 in our hospital.NK cells activating receptors(NKG2D and NKp46),pofforin and granzyme-β of patients and normal controls were also detected.The correlation between these changes and hematopoietic functions,including the percentages of neutrophil granulocyte(ANC%),lymphocyte and reticulocyte absolute value in peripheral blood,and hyperplasia degree,percentage of granulocytes,erythrocytes,lymphocytes and megakaryocytes absolute value in bone marrow were evaluated.Results (1)The percentages of NK cells (10.30% ± 6.08%)and CD56 bright cells(0.11%)in untreated patients were significantly lower than those of recovered patients(16.47% ± 8.29%,0.68%,both P ＜0.05)or normal controls(19.45% ±6.88%,0.53%,both P ＜0.05).The percentage of CD56dim cells in untreated patients was significantly lower than that of normal controls(9.62% ±6.04% vs 18.21% ±7.16%,P ＜0.05).The percentage of CD3 CD56 CD16 + cells was significantly higher in recovered patients than that of untreated patients or normal controls(0.79% vs 0.37%,0.41%,both P＜0.05).(2)The expression of NKp46 and pefforin of NK cells in untreated(88.23%,64.97% ± 21.61%)and recovered patients(82.97%,66.14% ±20.73%)were significantly higher than those of healthy controls(40.99%,42.11% ±27.25%,all P ＜0.05).(3)The percentage of NK CD56bright and CD3-CD56-CD16+ cells of patients was positively correlated with ANC%(r=0.423,0.609,0.468 respectively,all P＜0.05)and the percentage of granulocytes in bone marrow(r=0.357,0.517,0.434 respectively,all P＜0.05).The percentages of NK,CD56bight,CD56dim and CD3-CD56-CD16+ cells were positively correlated with the hyperplasic degree of bone marrow(r=0.455,0.412,0.404,0.451 respectively,all P＜0.05),but they were negatively correlated with the percentage of lymphocytes in bone marrow(r =-0.522,-0.435,-0.411,-0.547 respectively,all P ＜0.05).The expression of NKG2D,NKp46,pefforin and granzyme-β of NK cells had no correlation with hematopoiesis(all P＞0.05).Conclusion The lowered percentage of NK CD56bright,CD56dim cells and a higher expression of pefforin may cause the over-function of T lymphocytes and thus lead to hematopoietic failure in SAA.     

异基因外周造血干细胞移植治疗儿童重型再生障碍性贫血

目的探讨异基因外周血造血干细胞移植(allo—PBSCT)对儿童重型再生障碍性贫血(SAA)的疗效。方法8例接受allo—PBSCT治疗的SAA 患儿均为血缘供体移植,男6例,女2例,7～14岁,中位年龄为11岁。4例患儿为急性SAA I型,其中2例移植前合并重型感染且未能完全控制;另4例患儿为SAA Ⅱ型,患儿移植前大多经包括环孢菌素A(CSA)在内的多种治疗无效。诊断至移植的时间为1～45个月,中位时间为13个月。预处理方案由低剂量环磷酰胺（CTX）和抗淋巴细胞球蛋白（ALG）或抗胸腺细胞球蛋白（ATG）组成,采用CsA+短程甲氨蝶呤(MTX)方案预防移植物抗宿主病(GVHD)。以DNA短串联重复序列多态性分析(STR PCR)检测学植入依据。结果患者移植后均获造血重建,中性粒细胞绝对值≥0.5×109／L和血小板计数≥20×109／L的中位时间分别为移植后+12.75d(+10～+15d)和+19.88d(+15～+32d)。8例患儿均为完全供体型植入,其中1例移植后10个月出现外周血白细胞、红细胞、血小板计数逐渐下降,STR PCR显示移植排斥,经ATG、CsA 等药物治疗逐渐恢复自身造血。1例患儿出现Ⅱ度急性GVHD,1例出现局限性慢性GVHD。随访15～50个月,中位数为29个月,8例SAA患儿均存活。结论采用以免疫抑制为主的ATG/ALG+CTX预处理方案进行allo—PBSCT能够有效治疗儿童SAA,移植相关并发症少,值得临床推广应用。     

获得性纯红再障患者外周血T细胞亚群分析

目的　本研究通过分析获得性纯红再障患者外周血T细胞亚群 ,进一步探讨该病的细胞免疫发病机制。方法　用抗人CD3、CD4、CD8、IFN γ及IL 4单抗结合人外周血单个核细胞 ,流式细胞术分析单个核细胞中CD3 +、CD4+、CD8+细胞数Th1、Th2、Tc1、Tc2细胞数以及CD4+/CD8+、Th1/Th2、Tc1/Tc2比值。结果　贫血组患者 ,外周血CD3 +细胞和CD8+细胞明显增加 (P <0 .0 1) ,CD4+/CD8+比例倒置 (P <0 .0 5 ) ;Tc2细胞明显增加 (P <0 .0 5 ) ,Tc1/Tc2比值降低(P <0 .0 5 ) ,治疗后血象恢复的患者各增高的亚群细胞均有所恢复 ,接近正常。结论　在获得性纯红再障患者T细胞明显增高 ,其中主要是CD8+细胞 ,而在CD8+细胞中 ,是Tc2细胞发挥了重要作用。经治疗有效的患者 ,其增高的T细胞亚群降低 ,提示以纠正病人细胞免疫异常为主的治疗方案有益于获得性纯红再障的治疗。